一种厌氧微生物分离的固体夹层培养皿的制作方法

本实用新型涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种厌氧微生物分离的固体夹层培养皿。

背景技术：

厌氧微生物绝大多数为细菌，很少数是放线菌，极少数是支原体，厌氧真菌尚见于个别的报道。厌氧菌是一类在无氧条件下生长的细菌，尤其是严格厌氧菌因缺乏超氧化物歧化酶等而极易受到氧气的毒害，即使短暂暴露于空气中也会引起损伤，甚至导致死亡，所以相比好氧菌，厌氧菌的分离培养较为困难。然而作为海洋微生物中的重要类群，厌氧微生物在海洋生态系统的物质循环、能量流动、海洋污染环境的生物修复、绿色能源开发乃至全球气候变化等过程中都发挥着关键作用。对厌氧微生物进行分离培养，有助于深入认识海洋微生物多样性、丰富微生物种质资源库等。

由于氧气对于厌氧微生物的生长有毒害作用，所以培养厌氧微生物需要特殊的方法与设备，目前比较普遍采用的方法包括使用厌氧培养基、厌氧培养罐、厌氧培养箱等。厌氧培养基是通过在培养基中加入具有还原作用的物质或者在液体培养基的上层浇入液体石蜡密封等方法，部分地去除或隔离氧气。直接加入在培养基中的还原剂可能会对某些厌氧微生物具有抑制作用，并且石蜡密封仅能够简易地隔绝外部的空气，两者均不能营造相对严格的厌氧环境，且在大批量分离纯化厌氧微生物时会大量的消耗培养皿盒培养及药品。厌氧培养罐和厌氧培养箱都是通过物理或化学的手段去除培养器材内部的氧，以实现对厌氧微生物的培养。虽然他们除氧效果好，但是这两种设备都因结构复杂，购置和维持运行成本高，携带不方便等原因无法广泛推广使用。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种厌氧微生物分离的固体夹层培养皿，以解决厌氧微生物培养过程中无氧环境的控制问题，并在此基础上能够减少微生物分离过程中平板及培养基原料的大量使用，简化实验操作。

其技术解决方案包括：

一种厌氧微生物分离的固体夹层培养皿，包括培养皿盒和培养皿盖，所述的培养皿盒包括一体式连接的下培养层、下除氧层、凹槽部，所述下培养层位于培养皿盒的中部由隔板分成若干区域，所述下除氧层位于所述培养层的外围呈环状，所述凹槽部位于所述的培养皿盒的中心位置呈圆柱状且内部中间位置有两处对称的圆形小孔；

所述的培养皿盖包括一体式连接的上培养层、上除氧层、凸起部，所述的上培养层、上除氧层分别与所述培养皿盒的下培养层、下除氧层结构相同且对应，所述的凸起部呈圆柱状位于所述的培养皿盖的中心位置并且中间位置有两处对称的圆形凸起。

上述方案中的上培养层和下培养层，是在普通固体培养皿的基础上添加N个隔板，N为正整数，可将培养皿划分为N+1个大小相等的区域，在划分好的区域内加入不同的培养基，便于比较不同微生物的群落形态且避免了培养皿和培养基原料使用的浪费；上述的培养皿盒和培养皿盖，通过培养皿中心的凸起部和凹槽部紧密结合在一起，中间形成无氧夹层，加之外围的除氧层，可有效控制无氧环境。

作为本实用新型的第一个优选方案， 所述的培养皿盒与培养皿盖的培养层中隔板数量相同，隔板位置相互对应。

上述方案中，培养层中的隔板数量相同、隔板位置相互对应，能够保证每种培养基上下两层相互对应，构成无氧夹层。

优选的，所述的培养皿盒与培养皿盖中培养层的隔板，均为连接培养皿中心与培养层边缘的矩形结构。

作为本实用新型的第二个优选方案，所述的除氧层为环状且位于所述培养层的外围，使用时内部装入还原剂溶液。

上述方案中，位于培养层外围的环状除氧层，内装有还原剂溶液，既有效避免外界氧气的进入，又不对培养基上生长的微生物造成毒害。所述的还原剂溶液主要成分为硫化钠和刃天青，起到检测和控制无氧环境的作用。

作为本实用新型的第三个优选方案，所述培养皿盒的凹槽部与所述培养皿盖的凸起部形状、大小相配，并且分别位于两者内部的圆形小孔和圆形凸起相互匹配。

通过凸起部和凹槽部的配合连接，可实现培养皿盒和培养皿盖的快速紧密套置。

优选的，所述培养皿盒和培养皿盖均为圆形或矩形或其他多边形器皿。

优选的，所述的厌氧微生物分离的夹层培养皿均由透明的聚丙烯塑料制成。

本实用新型的优点是，将普通培养皿加入隔板划分区域，并在其外围设计了环状除氧层，有效地减少了培养皿和培养基原料的使用量，且便于比较不同微生物的群落形态，还原剂的加入解决了厌氧微生物生长无氧环境的检测和控制问题。

本案一体化的装置制作简单，设备要求低，成本低廉，方便携带。

附图说明

下面结合附图对本实用新型做进一步说明：

图1为本实用新型厌氧微生物分离的固体夹层培养装置的俯视平面图；

图2为本实用新型厌氧微生物分离的固体夹层培养装置的A-A剖面图；

图中所示标号，1、培养层，2、隔板，3、除氧层，4、凸起部，5、凹槽部，6、圆形凸起，7.、圆形小孔8、培养皿盒，9、培养皿盖。

具体实施方式

本实用新型提出了一种厌氧微生物分离的固体夹层培养皿，为了使本实用新型的优点、技术方案更加清楚、明确，下面结合具体实施例对本实用新型做详细说明。

如图1～2中所示的厌氧微生物分离的固体夹层培养皿，它由培养皿盒8和培养皿盖9两部分组成，两部分均利用透明聚丙烯塑料材质制作。其中，培养层1被隔板2划分为若干区域，这些区域可倒入不同种类的琼脂培养基。培养皿盒8的培养层1中央有一凹槽部5，且凹槽部内有两处对称的圆形小孔7，培养皿盖9的培养层1中央有一凸起部4，凸起部4的中间部分有两处对称的圆形凸起。凹槽部5与凸起部4能够套置，圆形凸起6和圆形小孔7相互嵌和，使整个装置固定且密封。培养层1外围的环状凹槽为除氧层3，其中含有还原剂溶液，其组成为适宜浓度的硫化钠溶液，并添加厌氧处理过的刃天青作为指示剂。

上述厌氧微生物分离的固体夹层培养皿的使用方法，大体包括以下步骤：

实验开始前，组成厌氧微生物分离的固体夹层培养皿的培养皿盒和培养皿盖两部分是嵌合在一起的，且处于无菌的密封袋中。事先将使用的各种固体培养基灭菌，并配制好适宜浓度的硫化钠溶液，添加已厌氧处理的刃天青作为指示剂。

将稍冷却的不同种类的固体培养基分装到培养层1中由隔板2所划分的若干区域内，保证每个区域内都只包含一种培养基。该培养皿的培养皿盒和培养皿盖两部分的培养层划分区域都要倒入培养基，并且保证上下两部分中相对应的区域为同一培养基。待固体培养基凝固且表层干燥后，可用接种环划线分离微生物。划线结束后，在除氧层3内倒入约1/3培养皿盒8高度的还原剂溶液，立即将装置的上下两部分通过凸起部4与凹槽部5套置在一起，并用敷口膜将培养皿盒和培养皿盖之间的缝隙密封，静置在培养箱内。此操作应迅速，防止氧气大量进入，且应在厌氧箱内进行。

需要说明的是，上述培养层的隔板数、培养基的种类以及培养皿的形状并不限于上述的例举，本领域技术人员在本实用新型的启示下，得到的其它简单替换变形方式均应在本实用新型的保护范围之内。