对TNF-α、IL-17A和IL-17F具有特异性的多特异性抗体分子的制作方法

本公开涉及对人tnf-α、人il-17a和人il-17f具有特异性的多特异性抗体分子。本发明还涉及该抗体分子的治疗用途及其生产方法。发明背景tnfa作为类风湿性关节炎(ra)患者疾病的关键驱动因素的作用已得到很好的确立。实际上，抗-tnfα抗体已经改变了患者护理。然而，尽管取得了这样的成功，但由于许多患者没有达到临床缓解，因此仍然存在显著的未满足的医疗需求。因此，治疗ra的下一个临床目标在于解决这种未满足的临床需求并提供显著改善实现临床缓解的患者比例的治疗。最近的研究强调，ra患者中th17/il-17生物途径出现增强。已经表明，与健康志愿者相比，ra患者外周血中th17细胞的百分比增加，并且在用抗-tnfα治疗后，其进一步得到增加(alzabin等人,2012；chen等人,2011；aerts等人,2010)。这种针对抗tnfα治疗后的互补生物途径的增强可以部分解释为何许多患者仅对治疗有部分响应或者为何一些患者尽管最初对治疗反应但仍复发。现在有大量文献提供了il-17在ra发病机制中的作用的证据。il-17细胞因子家族由基于结构相似性的6个成员组成，其中分子量为23-36kda和具有二聚体结构。基础成员il-17a(通常在文献中仍简称为il-17)与其他成员il-17b，il-17c，il-17d，il-17e(也称为il-25)和il-17f共有16％-50％的氨基酸序列同一性。il-17a和il-17f具有最大的同源性(50％)并且与相同的受体复合物结合，因此在这两种细胞因子之间已经注意到共有生物学活性。另外，il-17a和il-17f不仅作为同二聚体存在，而且作为il-17a/f异二聚体存在。il-17e(il-25)与il-17a的相似性最小。与il-17a和il-17f的生物活性具有重要意义和相关性的方面在于，发现它们共有相同的il-17ra/il-17rc受体复合物，其中il-17a对il-17ra具有最大的亲和力，而il-17f与il-17rc的结合更为紧密。利用il-17ra的另一个家族成员是il-17e，其通过il-17ra/il-17rb受体复合物进行信号传导。il-17a和il-17f由cd4+t细胞的th17亚群产生。此外，其他t细胞亚群产生il-17a和il-17f，包括细胞毒性cd8+t细胞(tc17)、gdt细胞和nkt细胞。报道分泌il-17a的其他细胞群包括中性粒细胞、单核细胞、nk细胞、淋巴组织诱导物-样(lti-样)细胞、肠帕内特细胞和甚至b细胞和肥大细胞。此外，据报道上皮细胞分泌il-17f。不同受体的表达反映响应il-17细胞因子的细胞类型。il-17ra遍在表达，在造血组织中具有特别高的水平，而il-17rc在关节、肝、肾、甲状腺和前列腺的非免疫细胞中更高表达。这种差异表达可以解释il-17a和il-17f生物活性的差异，因为表达高水平il-17rc的细胞可能对il-17f更具有响应性，而il17-ra表达高于il-17rc的细胞可能更容易响应于il-17a。对il-17a和f有响应的特定细胞类型包括成纤维细胞、上皮细胞、角质形成细胞、滑膜细胞和内皮细胞，其中据报道il-17a也作用于t和b细胞和巨噬细胞。il-17a和il-17f是来自成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞的促炎细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶(包括il-6、il-8和mmp-13)的诱导物。经常报道il-17f活性低于il-17a，但注意到当il-17f与tnfα组合时，生物响应增加(zrioual等人，2009)。注意到il-17a和il-17f与tnfα的加和或协同生物活性并且可能是由于mrna稳定性增加。已经证实ra患者中il-17a和il-17f的表达均有增加(zrioual等人，2009)，t细胞和il-17在ra发病机制中的贡献现已在文献中得到充分公开(hot&miossec2011；truchetet等人,2013)。使用人滑膜和骨外植体已证明il-17a可增加软骨和骨质降解(chabaud等人，2001)。对小鼠胶原诱导关节炎(cia)模型的进一步研究也表明il-17a的过度表达诱导滑膜炎症和关节破坏，并且已在il-17缺陷小鼠中显示cia被il-17a的阻断所抑制(lubberts2001&2004；nakae2003)。因此，tnfα和il-17生物途径同时被阻断的治疗具有显著改善响应率并解决ra患者现有的未满足需求以及治疗由tnf-α和il-17a和/或il-17f介导的其它病理性病症的潜能。wo2014/044758(covagenag)公开了一种能够抑制糖基化il-17a和结合tnf-α的融合构建体。wo2013/063110(abbvieinc.)公开了能够结合tnf和il-17的多价dvd-ig结合蛋白。wo2014/137961(elilillyandcompany)公开了抗-tnf和抗-il-17a双特异性抗体。然而，这些分子由于il-17f未被中和而仅可以实现有限的效能，并且如上所述，il-17f赋予il-17a相似的生物学活性，因此只能通过这些治疗性分子实现il-17生物途径的部分抑制。抑制il-17a和il-17f与抑制tnf-α组合可以提供比tnf-α和仅il-17a阻断剂更好的效能。本发明人已经研发了能够抑制tnf-α、il-17a和il-17f的新型多特异性抗体，这为患者提供了新的治疗选择。本公开的概述本发明提供能够结合tnf-α、il-17a和il-17f的多特异性抗体分子，特别地，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域和对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域，其中该抗体分子能够中和人tnf-α、人il-17a和人il-17f的生物活性。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子是三特异性的并且进一步包含对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域。发明详述如本文所用的“抗原结合位点”或“结合位点”是指包含特异性地与靶抗原发生相互作用的一个或多个可变结构域的部分或整体、例如可变结构域对的部分或整体的分子部分。如本文所用的“结合结构域”是指包含特异性地与靶抗原发生相互作用的一个或多个可变结构域、例如可变结构域vh和vl对和任选的一个或多个恒定结构域、例如ch1结构域和/或cl结构域κ或λ的分子部分。结合结构域抗原可包含单一结构域抗体。在一个实施方案中，结合结构域各自是单价的。优选地，结合结构域各自包含不超过一个vh和一个vl。如本文所用的“特异性地”旨在是指仅识别它所特异性针对的抗原结合位点或结合结构域或它所特异性针对的抗原比它所非特异性针对的抗原具有明显更高的结合亲和力例如5、6、7、8、9、10倍以上的结合亲和力的结合位点或结合结构域。如本文所用的“多特异性抗体”是指如本文所述的具有两个或多个结合结构域、例如两个或三个结合结构域的抗体分子。在一个实施方案中，构建体是双特异性抗体。如本文所用的“双特异性抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体，其中一个结合位点结合人tnf-α，而另一个结合位点结合人il-17a和人il-17f。在一个实施方案中，抗体构建体是三特异性抗体。如本文所用的“三特异性抗体”是指具有三个抗原结合位点的抗体分子。在本发明的一个实施方案中，提供能够结合人tnf-α、人il-17a和人il-17f的多特异性抗体分子，其中该抗体分子能够中和人tnf-α、人il-17a和人il-17f的生物活性。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子包含对人tnf-α具有特异性的第一结合结构域、对人il-17a具有特异性的第二结合结构域和对人il-17f具有特异性的第三结合结构域。在备选的实施方案中，所述多特异性抗体分子包含对人tnf-α具有特异性的第一结合结构域和对人il-17a和人il-17f二者具有特异性的第二结合结构域。在一个实施方案中，抗体分子包含三个结合结构域，且两个结合结构域结合同一抗原，包括结合同一抗原上的同一表位或不同表位，并且第三结合结构域结合不同(独特)抗原。在一个实例中，多特异性抗体分子结合抗原人tnf-α、人il-17a和人il-17f，其中两个结合结构域结合人tnf-α，并且第三结合结构域结合人il-17a和人il-17f。在另一个实例中，多特异性抗体分子结合抗原人tnf-α、人il-17a和人il-17f，其中两个结合结构域各自能够结合人il-17a和人il-17f，且第三结合结构域结合人tnf-α。在根据一个实施方案中本发明的抗体分子包含不超过一个对人tnf-α具有特异性的结合结构域和不超过一个对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域。因此，在该实施方案中，该抗体分子对于结合人tnf-α是单价的，并且对于结合人il-17a和人il-17f是单价的。在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体分子包含三个结合结构域，其独立结合三个不同抗原。在一个实施方案中，多特异性抗体分子结合抗原人tnf-α、人il-17a和人il-17f，其中第一结合结构域结合人tnf-α，第二结合结构域结合人il-17a，且第三结合结构域结合人il-17f。在另一个实施方案中，多特异性抗体分子结合抗原人tnf-α、人il-17a、人il-17f和人血清白蛋白，其中第一结合结构域结合人il-17a和人il-17f，第二结合结构域结合人tnf-α，且第三结合结构域结合能够延长该抗体分子半衰期的抗原。能够结合延长抗体分子半衰期的抗原的第三结合结构域可以结合人血清载体蛋白、循环免疫球蛋白分子或cd35/cr1。如本文所用，“血清载体蛋白”包括甲状腺素结合蛋白、甲状腺素视黄质运载蛋白、α1-酸性糖蛋白、运铁蛋白、血纤蛋白原和白蛋白或其任意片段。如本文所用，“循环免疫球蛋白分子”包括igg1、igg2、igg3、igg4、siga、igm和igd或其任意片段。cd35/cr1是存在于具有36天半衰期的红细胞上的蛋白质(28-47天的正常范围；lanaro等人,1971,cancer,28(3):658-661)。在具体的实施方案中，多特异性抗体分子包含三个结合结构域或由其组成，其中第一结合结构域对人tnf-α具有特异性，第二结合结构域对人il-17a和人il-17f具有特异性，且第三结合结构域对人血清白蛋白具有特异性。在根据一个实施方案中本发明的抗体分子包含不超过一个对人tnf-α具有特异性的结合结构域、不超过一个对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和不超过一个对人血清载体蛋白具有特异性的结合结构域。因此，在该实施方案中，该抗体分子对于结合人tnf-α是单价的、对于结合人il-17a和人il-17f是单价的和对于结合人血清载体蛋白例如人血清白蛋白是单价的。包含针对同一靶抗原的多个结合结构域的抗体分子更有可能在体内形成大的抗体和抗原复合物，其中所述靶抗原是同型多聚体，例如，人tnf-α三聚体或人il-17二聚体。在本发明的该实施方案中，其中抗体分子包含不超过一个针对每个靶抗原的结合结构域，该抗体可以有利地具有低于包含针对同一靶抗原的结合结构域的那些抗体分子的在体内形成大的抗体和抗原复合物的倾向。本发明提供能够以高亲和力结合il-17a和il-17f的改进的多特异性抗体。特别地，本发明的多特异性抗体能够特异性结合il-17a和il-17f二者。特异性结合是指抗体对il-17a和il-17f多肽(包括il-17a/il-17f异二聚体)具有比对另外的多肽具有更大的亲和力，并且在一个实施方案中，抗体不结合il-17的其它同种型。本发明的多特异性抗体能够特异性结合il-17a同二聚体和il-17f同二聚体。优选地，本发明的多特异性抗体还结合il-17a/il-17f异二聚体。优选地，本发明的多特异性抗体中和il-17a和il-17f的活性。在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体还中和il-17a/il-17f异二聚体的活性。因此，本发明的多特异性抗体具有有利的特性，即它们能够抑制il-17a和il-17f二者的生物活性。如本文所用，术语“中和抗体”描述能够例如通过阻断il-17a和il-17f结合一个或多个其受体和通过阻断il-17a/il-17f异二聚体结合一个或多个其受体中和il-17a和il-17f二者的生物信号传导活性的抗体。可以理解，如本文所用，术语“中和”是指可以是部分或完全的生物信号传导活性的降低。还可以理解，抗体对il-17a和il-17f活性的中和程度可以是相同或不同的。在一个实施方案中，il-17a/il-17f异二聚体活性的中和程度可以与il-17a或il-17f活性的中和程度相同或不同。用于测定中和的适合的测定法是本领域已知的，并且这类测定法的某些在本文的实施例中提供。优选地，il-17a和il-17f多肽是人的。在一个实施方案中，抗体还结合食蟹猴il-17a和il-17f。多特异性抗体还有利地能够以高亲和力结合tnf-α。特别地，本发明的多特异性抗体能够特异性结合tnf-α。优选地，本发明的多特异性抗体例如通过阻断tnf-α结合一个或多个tnf-α受体而中和tnf-α的活性。可以理解，如本文所用，术语“中和”是指可以是部分或完全的生物信号传导活性的降低。优选地，tnf-α多肽是人的。在一个实施方案中，抗体还结合食蟹猴tnf-α。用于测定中和的适合的测定法是本领域已知的，并且这类测定法的某些在本文的实施例中提供。因此，本发明还提供这类抗体在治疗和/或预防由tnf-α和il-17a和/或il-17f介导的疾病中的用途，例如自身免疫性或炎性疾病或癌症。通过标准测定法测定结合亲和力(kd)，例如，表面等离子体共振，例如biacore。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人tnf-α具有200pm或以下的结合亲和力，例如，100pm或更好，50pm或更好，20pm或更好，15pm或更好或者12pm或更好。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人tnf-α具有50pm至1pm、20pm至1pm、15pm至1pm或12pm至1pm的结合亲和力。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对tnf-α具有15pm至5pm或12pm至11pm的结合亲和力。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人il-17a具有200pm或以下的结合亲和力，例如，100pm或更好，50pm或更好，20pm或更好，10pm或更好，8pm或更好，5pm或更好或者2pm或更好。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人il-17a具有50pm至1pm、20pm至1pm、10pm至1pm、8pm至1pm、5pm至1pm或2pm至1pm的结合亲和力。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人il-17f具有200pm或以下的结合亲和力，例如，100pm或更好，50pm或更好，20pm或更好，15pm或更好或者10pm或更好。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人il-17f具有50pm至1pm、20pm至1pm、15pm至1pm或10pm至1pm的结合亲和力。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人il-17f具有10pm至5pm或8pm至7pm的结合亲和力。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子対人血清白蛋白具有3nm或更好，2nm或更好，1.9nm或更好或者1.8nm或更好的结合亲和力。在一个实施方案中，所述多特异性抗体分子对人血清白蛋白具有3nm至1pm、2nm至1nm、2nm至1.5nm或1.8nm至1.7nm的结合亲和力。在本发明的一个方面，结合结构域各自包含两个抗体可变结构域，优选vh/vl对。在一个方面，结合结构域各自包含不超过两个抗体可变结构域。本发明的多特异性抗体分子可以具有任意适合的抗体形式，其能够结合如上所述的两种或多种抗原，例如，三种抗原。在一个方面，所述抗体分子形式选自双抗体、scdiabody、三抗体、串联scfv、fabfv、fab’fv、fabdsfv、fab-scfv、fab-dsscfv、fab-(dsscfv)2、fabfvfv、fabfvfc、双fab、双fab’、三体、串联scfv-fc、scfv-fc-scfv、scdiabody-fc、scdiabody-ch3、ig-scfv、scfv-ig、v-ig、ig-v、duobody和dvd-ig。在一个实例中，所述抗体分子具有图8中示例为2xdsscfv并且描述在wo2015/197772中的形式。在一个实施方案中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域和对il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域独立选自fab、scfv、fv、dsfv和dsscfv。在本发明的一个实施方案中，抗体分子不包含ch2结构域和/或ch3结构域。缺乏ch2结构域和/或ch3结构域的抗体分子(也称作fc结构域)是有利的，其中无需归因于fc结构域的功能特性，例如补体结合。在抗体治疗剂中存在fc结构域，特别是活性fc结构域，例如igg1同种型fc，能够导致体内与促炎蛋白例如fcgr和补体的相互作用。因此，在该实施方案中，其中本发明的抗体分子不包含fc结构域，与含有fc结构域的抗体分子相比较，该抗体与促炎蛋白例如fcgr和补体在体内几乎没有相互作用。抗体包含针对同一靶抗原的多个结合结构域，其中所述靶抗原是同型多聚体，并且fc结构域可以与多个活性fc结构域合并形成大的抗体:抗原复合物的倾向，以形成大的免疫复合物。大的免疫复合物可能在体内不适当地沉积，导致免疫系统激活。在本发明的实施方案中，其中抗体包含不超过一个针对每个靶抗原的结合结构域并且不包含fc结构域，该抗体可能具有降低的形成大的免疫复合物的能力并在体内具有较低的不适当沉积和免疫激活的可能性。在本发明的一个方面，将所述多特异性抗体分子提供为二聚体，其包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示重链可变结构域；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示键或接头；y表示键或接头；v1表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv；vl1表示轻链可变结构域；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv。在一个实施方案中，vh1和vl1一起形成对选自人tnf-α、人il-17a和人il-17f的第一抗原具有特异性的结合结构域。在一个实施方案中，vh1和vl1一起形成对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域。在一个实施方案中，v1包含对选自人tnf-α、人il-17a和人il-17f的第二抗原具有特异性的结合结构域。在一个实施方案中，v1包含对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域。在一个实施方案中，v2包含对选自人tnf-α、人il-17a和人il-17f的第二或第三抗原具有特异性的结合结构域。在一个实施方案中，v2包含对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域。在一个实施方案中，vh1和vl1包含对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域，且v1和/或v2包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域。在该实施方案中，其中v1和v2包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域，v1和v2可抗原结合人tnf-α的相同或不同表位。在一个实施方案中，vh1和vl1包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域和v1和/或v2包含对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域。在该实施方案中，其中v1和v2包含对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域，v1和v2可抗原结合人il-17a和人il-17f的相同或不同表位。在一个实施方案中，抗体分子包含如式(i)和式(ii)中定义的多肽链或由其组成，并且包含不超过一个对人tnf-α具有特异性的结合结构域和不超过一个对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域。在本发明的一个方面，所述多特异性抗体分子能够结合另一种抗原并且包含对血清载体蛋白、循环免疫球蛋白分子或cd35/cr1具有特异性的结合结构域、循环免疫球蛋白分子或cd35/cr1，例如，用于提供对抗体分子延长的半衰期。在一个实施方案中，vh1/vl1对其具有特异性的目标抗原是血清载体蛋白，例如人血清载体，例如人血清白蛋白。在一个实施方案中，v1对其具有特异性的目标抗原是血清载体蛋白，例如人血清载体，例如人血清白蛋白。在一个实施方案中，v2对其具有特异性的目标抗原是血清载体蛋白，例如人血清载体，例如人血清白蛋白。在一个实施方案中，vh1/vl1、v1或v2中仅一个对血清载体蛋白、例如人血清载体、例如人血清白蛋白具有特异性。因此，在一个实施方案中，抗体分子包含如上述式(i)和式(ii)中定义的多肽或由其组成，其中：a.vh1和vl1包含对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域；且b.v1包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域，且v2包含对血清载体蛋白、例如人血清白蛋白具有特异性的结合结构域；或v2包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域和v1包含对血清载体蛋白、例如人血清白蛋白具有特异性的结合结构域。在一个实施方案中，抗体分子包含如式(i)和式(ii)中定义的多肽或由其组成，并且包含不超过一个对人tnf-α具有特异性的结合结构域、不超过一个对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和不超过一个对血清载体蛋白例如人血清白蛋白具有特异性的结合结构域。vh1-ch1部分与vl-cl部分一起形成功能性fab或fab’片段。vh1表示可变结构域，例如，重链可变结构域。在一个实施方案中，vh1表示重链可变结构域。在一个实施方案中，vh1是嵌合可变结构域，换言之，它包含衍生自至少两个物种的成分，例如，人框架和非-人cdr。在一个实施方案中，vh1是人源化的。在一个实施方案中，vh1是人的。vl1表示可变结构域，例如，轻链可变结构域。在一个实施方案中，vl1表示轻链可变结构域。在一个实施方案中，vl1是嵌合可变结构域，换言之，它包含衍生自至少两个物种的成分，例如，人框架和非-人cdr。在一个实施方案中，vl1是人源化的。在一个实施方案中，vl1是人源化的。在一个实施方案中，vl是人的。通常，vh1和vl1其形成抗原结合结构域。在一个实施方案中，vh1和vl1形成同源对。如本文所用的“同源对”是指来自在体内生成的单一抗体的可变结构域对，即分离自宿主的可变结构域的天然存在的配对。因此，同源对是vh和vl对。在一个实例中，同源对共同协作地结合抗原。如本文所用的“可变区”是指包含cdr和框架、特别是适合的框架的抗体链中的区域。用于本公开的可变区通常衍生自可以通过本领域公知的任意方法生成的抗体。如本文所用的“衍生自”是指如下事实：使用的序列或高度类似于使用的序列的序列得自原始遗传材料，例如抗体的轻链或重链。如本文所用的“高度类似”旨在是指在其全长内95％类似或以上例如96、97、98或99％类似的氨基酸序列。如上述对vh1和vl1所述的用于本发明的可变区可以来自任意适合的来源并且可以是例如完整的人的或人源化的。在一个实施方案中，ch1结构域是来自抗体重链或其衍生物的天然存在的结构域1。在一个实施方案中，轻链中的cl片段是恒定κ序列或恒定λ序列或其衍生物。如本文所用的天然存在的结构域衍生物旨在是指其中天然存在的序列中的1、2、3、4或5个氨基酸被替代或缺失，例如以便优化结构域特性，例如通过消除不期望的特性，但其中结构域的特征性特征被保留。在一个实施方案中，一个或多个天然或改造的链间(即轻链和重链间)二硫键存在于功能性fab或fab’片段中。在一个实施方案中，“天然”二硫键存在于式(i)和(ii)的多肽链中的ch1与cl之间。当cl结构域衍生自κ或λ时，形成键的半胱氨酸的天然位置是人cκ和cλ中的214位(kabat编号，第4版，1987)。ch1中形成二硫键的半胱氨酸的确切位置取决于实际使用的特定结构。因此，例如，在人γ-1中，二硫键的天然位置位于第233位(kabat编号，第4版，1987)。形成用于其它人同种型例如γ2、3、4、igm和igd的键的半胱氨酸的位置是已知的，例如，人igm、ige、igg2、igg3、igg4的第127位和人igd和iga2b的重链的第128位。任选地，在式i和ii的多肽的vh与vl之间可以存在二硫键。在一个实施方案中，根据本公开的多特异性抗体在等同于或相当于ch1与cl之间天然存在的位置上存在二硫键。在一个实施方案中，包含ch1的恒定区和恒定区例如cl具有位于非天然存在的位置上的二硫键。这可以通过在所需位置上将半胱氨酸导入氨基酸链改造成分子。这种非天然二硫键是存在于ch1与cl之间天然二硫键的之外的或者是其可替代选择。天然位置上的半胱氨酸可以被氨基酸例如不可能形成二硫键的丝氨酸替代。可以使用本领域公知的任意方法导入改造的半胱氨酸。这些方法包括、但不限于pcr延伸重叠诱变、位点定向诱变或盒式诱变(通常参见sambrook等人,molecularcloning,alaboratorymanual,coldspringharbourlaboratorypress,coldspringharbour,ny,1989；ausbel等人,currentprotocolsinmolecularbiology,greenepublishing&wiley-interscience,ny,1993)。位点定向诱变试剂盒是商购可得的，例如位点定向诱变试剂盒(stratagene,lajolla,ca)。可以基于wells等人,1985,gene,34:315-323进行盒式诱变。或者，可以经重叠寡核苷酸退火、连接和pcr扩增和克隆通过全基因合成来制备突变体。在一个实施方案中，ch1与cl之间的二硫键完全不存在，例如，链间半胱氨酸可以被另一个氨基酸例如丝氨酸替代。因此，在一个实施方案中，在分子的功能性fab片段中不存在链间二硫键。公开例如wo2005/003170描述了如何提供无链间二硫键的fab片段，该文献通过引用并入本文。在一个实施方案中，如上述所定义的包含如式(i)和式(ii)中定义的多肽链或由其组成的抗体分子不包含ch2结构域和/或ch3结构域。v1表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv，例如，dsfv、scfv或dsscfv。v2表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv，例如，dsfv、scfv或dsscfv。如本文所用的“单链可变片段”或“scfv”是指包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)或由其组成的单链可变片段，其通过vh与vl可变结构域之间的肽接头稳定。vh和vl可变结构域可以是任意适合的取向，例如，vh的c-末端可以连接至vl的n-末端或vl的c-末端可以连接至vh的n-末端。如本文所用的“二硫键稳定的单链可变片段”或“dsscfv”是指通过vh与vl可变结构域之间的肽接头稳定并且还包括vh与vl之间的结构域间二硫键的单链可变片段。如本文所用的“二硫键稳定的可变片段”或“dsfv”是指不包括vh与vl可变结构域之间的肽接头而是由vh与vl之间的链间结构域二硫键稳定的单链可变片段。如本文所用的“单结构域抗体”或“sdab”是指由单体可变抗体结构域例如vh或vl或vhh组成的抗体片段。在一个实施方案中，v1和v2均为dsfv。当v1和v2均为dsfv时，vh或vl可变结构域对于v1和v2是相同的。在一个实施方案中，v1和v2具有相同的vh可变结构域。在另一个实施方案中，v1和v2具有相同的vl可变结构域。在一个实施方案中，vh和vl可变结构域对于v1和v2是相同的。后者允许对于一些靶标可能是期望的交联。在一个实施方案中，v1是dsfv，且v2是scfv。在一个实施方案中，v1是scfv，且v2是dsfv。在一个实施方案中，v1是dsscfv，且v2是dsfv。在一个实施方案中，v1是dsfv，且v2是dsscfv。在一个实施方案中，v1是dsscfv，且v2是scfv。在一个实施方案中，v1是scfv，且v2是dsscfv。在一个实施方案中，v1不是scfv。在一个实施方案中，v2不是scfv。在一个实施方案中，v1和v2均不为scfv。在该实施方案中，其中v1和/或v2是dsfv或dsscfv，v1的轻链和重链可变区和/或v2的轻链和重链可变区通过两个改造的半胱氨酸残基之间的二硫键连接。v1和/或v2的可变结构域vh与vl之间的二硫键位于如下所列的残基中的两个之间(除非上下文中表示另外的kabat编号在如下列表中使用)。无论是否参考kabat编号，相关文献是kabat等人,1987,于sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,usdepartmentofhealthandhumanservices,nih,usa。在一个实施方案中，二硫键位于选自包含如下的组的位置：·vh37+vl95，参见例如，proteinscience6,781-788zhu等人(1997)；·vh44+vl100，参见例如；biochemistry335451-5459reiter等人(1994)；或journalofbiologicalchemistryvol.269no.28pp.18327-18331reiter等人(1994)；或proteinengineering,vol.10no.12pp.1453-1459rajagopal等人(1997)；·vh44+vl105，参见例如，jbiochem.118,825-831luo等人(1995)；·vh45+vl87，参见例如，proteinscience6,781-788zhu等人(1997)；·vh55+vl101，参见例如，febsletters377135-139young等人(1995)；·vh100+vl50，参见例如，biochemistry291362-1367glockshuber等人(1990)；·vh100b+vl49；·vh98+vl46，参见例如，proteinscience6,781-788zhu等人(1997)；·vh101+vl46；·vh105+vl43，参见例如；proc.natl.acad.sci.usavol.90pp.7538-7542brinkmann等人(1993)；或proteins19,35-47jung等人(1994),·vh106+vl57，参见例如，febsletters377135-139young等人(1995)其中vh和vl值独立地在指定v1或v2内选择。上面列出的氨基酸对处于有利于被半胱氨酸替代的位置，从而可以形成二硫键。可以通过已知技术将半胱氨酸改造成这些期望的位置。因此，在一个实施方案中，根据本公开的改造的半胱氨酸是指在给定氨基酸位置处天然存在的残基被半胱氨酸替代的情况。可以使用本领域已知的任意方法导入半胱氨酸残基。这些方法包括但不限于pcr延伸重叠诱变、位点定向诱变或盒式诱变(通常参见sambrook等人,molecularcloning,alaboratorymanual,coldspringharbourlaboratorypress,coldspringharbour,ny,1989；ausbel等人,currentprotocolsinmolecularbiology,greenepublishing&wiley-interscience,ny,1993)。位点定向诱变试剂盒是商购可得的，例如位点定向诱变试剂盒(stratagen,lajolla,ca)。可以基于wells等人,1985,gene,34:315-323进行盒式诱变。或者，可以经重叠寡核苷酸退火、连接和pcr扩增和克隆通过全基因合成来制备突变体。因此，在一个实施方案中，当v1和/或v2是dsfv或dsscfv时，v1的可变结构域vh和vl和/或v2的可变结构域vh和vl可以通过两个半胱氨酸残基之间的二硫键连接，其中半胱氨酸残基对的位置选自：vh37和vl95，vh44和vl100，vh44和vl105，vh45和vl87，vh100和vl50，vh100b和vl49，vh98和vl46，vh101和vl46，vh105和vl43以及vh106和vl57。在一个实施方案中，当v1和/或v2是dsfv或dsscfv时，v1的可变结构域vh和vl和/或v2的可变结构域vh和vl可以通过位于cdr外的vh中的一个和vl中的一个的两个半胱氨酸残基之间的二硫键连接，其中半胱氨酸残基对的位置选自vh37和vl95、vh44和vl100、vh44和vl105、vh45和vl87、vh100和vl50、vh98和vl46、vh105和vl43以及vh106和vl57。在一个实施方案中，当v1是dsfv或dsscfv时，v1的可变结构域vh和vl通过两个改造的半胱氨酸残基之间的二硫键连接，一个位于vh44位，而另一个位于vl100位。在一个实施方案中，当v2是dsfv或dsscfv时，v2的可变结构域vh和vl通过两个改造的半胱氨酸残基之间的二硫键连接，一个位于vh44位，而另一个位于vl100位。在一个实施方案中，当v1和v2是dsfv或dsscfv时，v1和v2的可变结构域vh和vl通过两个改造的半胱氨酸残基之间的二硫键连接，一个位于vh44位，而另一个位于vl100位。在一个实施方案中，当v1和v2均为dsscfv时，v1和v2的可变结构域vh和vl通过两个改造的半胱氨酸残基之间的二硫键连接，一个位于vh44位，而另一个位于vl100位。在一个实施方案中，当v1是dsfv、dsscfv或scfv时，v1的vh结构域如通过肽键连接至x。在一个实施方案中，当v1是dsfv、dsscfv或scfv时，v1的vl结构域例如通过肽键连接至x。在一个实施方案中，当v2是dsfv、dsscfv或scfv时，v2的vh结构域例如通过肽键连接至y。在一个实施方案中，当v2是dsfv、dsscfv或scfv时，v2的vl结构域例如通过肽键连接至y。本领域技术人员可以理解，当v1和/或v2表示dsfv时，多特异性抗体包含第三多肽，其编码相应的不连接至x或y的游离vh或vl结构域。当v1和v2均为dsfv时，“游离可变结构域”(即通过二硫键连接至多肽其余部分的结构域)对两条链而言是共同的。因此，通过x或y融合或连接至多肽的实际可变结构域可以在每条多肽链中是不同的，与其配对的游离可变结构域通常彼此相同。在一个实施方案中，x是键。在一个实施方案中，y是键。在一个实施方案中，x和y均为键。在一个实施方案中，x是接头，优选地，肽接头，例如，用于连接部分ch1和v1的适合的肽。在一个实施方案中，y是接头，优选地，肽接头，例如，用于连接部分cl和v2的适合的肽。在一个实施方案中，x和y均为接头。在一个实施方案中，x和y均为肽接头。如本文所用，术语“肽接头”是指由氨基酸组成的肽。适合的肽接头的范围是本领域技术人员已知的。在一个实施方案中，x和/或y肽接头为50个氨基酸长度或以下，例如，20个氨基酸或以下，例如约15个氨基酸或以下，例如9、10、11、12、13或14个氨基酸长度。在一个实施方案中，x和/或y接头选自序列1-67中所示的序列。在一个实施方案中，x和/或y接头选自seqidno:1或seqidno:2中所示的序列。在一个实施方案中，x具有序列sggggtggggs(seqidno:1)。在一个实施方案中，y具有序列sggggtggggs(seqidno:1)。在一个实施方案中，x具有序列sggggsggggs(seqidno:2)。在一个实施方案中，y具有序列sggggsggggs(seqidno:2)。在一个实施方案中，x具有seqidno:1中指定的序列，且y具有seqidno:2中指定的序列。在一个实施方案中，x具有seqidno:2中指定的序列，且y具有中seqidno:1指定的序列。在一个实施方案中，x具有seqidno:2中指定的序列，且y具有中seqidno:2指定的序列。在一个实施方案中，x具有seqidno:69或70中指定的序列。在一个实施方案中，y具有seqidno:69或70中指定的序列。在一个实施方案中，x具有seqidno:69中指定的序列和y具有seqidno:70中指定的序列。x和/或y的适合的接头序列还提供在下表1和2中。表1.铰链接头序列seqidno:序列3dkthtcaa4dkthtcppcpa5dkthtcppcpatcppcpa6dkthtcppcpatcppcpatcppcpa7dkthtcppcpagkptlynslvmsdtagtcy8dkthtcppcpagkpthvnvsvvmaevdgtcy9dkthtccvecppcpa10dkthtcprcpepkscdtpppcprcpa11dkthtcpscpa表2.柔性接头序列在序列14-18中(s)是任选的。刚性接头的实例包括肽序列gapapaapapa(seqidno:52)、pppp(seqidno:53)和ppp。在一个实施方案中，肽接头是白蛋白结合肽。白蛋白结合肽的实例提供在wo2007/106120中且包括：表3有利地，白蛋白结合肽作为接头的用途可以增加多特异性抗体分子的半衰期。在一个实施方案中，v1和v2的至少一个是scfv或dsscfv。例如，v1是scfv或dsscfv，且v2是scfv或dsscfv。在一个实施方案中，v1是dsscfv，且v2是dsscfv。在实施方案中，其中v1是scfv或dsscfv，v1包含如下的多肽链或由其组成：a.式(iii):vh2-z1-vl2和vh2例如通过肽键连接至x；或b.式(iv):vl2-z1-vh2和vl2例如通过肽键连接至x；其中vh2表示重链可变结构域，z1表示接头，例如，肽接头，且vl2表示轻链可变结构域。在实施方案中，其中v2是scfv或dsscfv，v2包含如下的多肽链或由其组成：a.式(v):vh3-z2-vl3和vh3例如通过肽键连接至y；或b.式(vi):vl3-z2-vh3和vl3例如通过肽键连接至y；其中vh3表示重链可变结构域，z2表示接头，例如，肽接头，且vl3表示轻链可变结构域。在一个实施方案中，scfv或dsscfv中的肽接头z1和/或z2在约12至25个氨基酸长度的范围，例如15至20个氨基酸。在一个实施方案中，当v1是scfv或dsscfv时，连接v1的可变结构域vh和vl的接头z1具有序列ggggsggggsggggsggggs(seqidno:68)。在一个实施方案中，当v2是scfv或dsscfv时，连接v2的可变结构域vh和vl的接头z2具有序列ggggsggggsggggsggggs(seqidno:68)。在一个实施方案中，当v1是scfv或dsscfv时，连接v1的可变结构域vh和vl的接头z1具有序列sggggsggggsggggs(seqidno:69)。在一个实施方案中，当v2是scfv或dsscfv时，连接v2的可变结构域vh和vl的接头z2具有序列sggggsggggsggggs(seqidno:69)。在一个实施方案中，当v1是scfv或dsscfv时，连接v1的可变结构域vh和vl的接头z1具有序列sggggsggggtggggs(seqidno:70)。在一个实施方案中，当v2是scfv或dsscfv时，连接v2的可变结构域vh和vl的接头z2具有序列sggggsggggtggggsseqidno:70)。因此，在一个方面，提供了多特异性抗体分子，其包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示重链可变结构域；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示具有seqidno:2中指定的序列的接头；y表示具有seqidno:2中指定的序列的接头；v1表示包含式(iii)的多肽链或由其组成的dsscfv：vh2-z1-vl2，其中vh2表示重链可变结构域，z1表示具有seqidno:68中指定的序列的接头，vl2表示轻链可变结构域，vh2例如通过肽键连接至x，且v1的可变结构域vh2和vl2通过一个位于vh44位而另一个位于vl100位的两个改造的半胱氨酸残基之间的二硫键连接；vl1表示轻链可变结构域；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示包含式(v)的多肽链或由其组成的dsscfv：vh3-z2-vl3，其中vh3表示重链可变结构域，z2表示具有seqidno:68中指定的序列的接头，vl3表示轻链可变结构域，vh3例如通过肽键连接至y，且v2的可变结构域vh3和vl3通过一个位于vh44位而另一个位于vl100位的两个改造的半胱氨酸残基之间的二硫键连接；其中vh1和vl1包含对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域；且v1包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域，且v2包含对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域；或v2包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域，且v1包含对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含如下的至少一个：具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列的cdr、具有seqidno:86中对cdrh2指定的序列的cdr和具有seqidno:87中对cdrh3指定的序列的cdr。在一个实施方案中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列。在一个实施方案中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含3个重链cdr，且cdrh1的序列与seqidno:85中指定的序列具有至少60％的同一性或相似性，cdrh2的序列与seqidno:86中指定的序列具有至少60％的同一性或相似性，且cdrh3的序列seqidno:87中指定的序列具有至少60％的同一性或相似性。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含具有seqidno:88或seqidno:136中对cdrl1指定的序列的cdr、具有seqidno:89、seqidno:137、seqidno:138或seqidno:139中对cdrl2指定的序列的cdr和具有seqidno:90中对cdrl3指定的序列的cdr的至少一个。在一个实施方案中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含3个轻链cdr，其具有seqidno:88或seqidno:136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89、seqidno:137、seqidno:138或seqidno:139中cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列。在一个实施方案中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含3个轻链cdr，并且cdrl1的序列与seqidno:88或seqidno:136中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，cdrl2的序列与seqidno:89、seqidno:137、seqidno:138或seqidno:139中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，且cdrl3的序列与seqidno:90中指定的序列具有至少60％同一性或相似性。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含：3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:88中对cdrl1指定的序列、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含：3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89、seqidno:137、seqidno:138或seqidno:139中对cdrl2指定洞悉了和seqidno:90中对cdrl3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含重链可变结构域，其包含seqidno:92或seqidno:96中指定的序列；与seqidno:92或seqidno:96中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:92或seqidno:96中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh2具有seqidno:85中指定的对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列。在一个实例中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域是人源化的。在本发明的人源化抗体中，受体重链和轻链不一定衍生自同一抗体，且如果期望，可以包含具有衍生自不同链的复合链框架区。在一个实例中，用于本发明tnf-α结合结构域的一种这样的适合的框架区衍生自人vh31-33-21jh4受体框架。因此，在一个实例中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含重链可变区，其包含一个或多个cdr，所述一个或多个cdr选自seqidno:85中对cdr-h1指定的序列、seqidno:86中对cdr-h2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列，其中重链框架区衍生自人受体框架vh31-33-21jh4。在本发明的人源化抗体中，框架区不一定具有与受体抗体的那些确切相同的序列。例如，可以将不常用的残基改变成对于该受体链类别或类型更频繁出现的残基。或者，可以改变受体框架区中选择的残基，使得它们相当于在供体抗体中同一位置上发现的残基(参见reichmann等人,1998,nature,332,323-324)。这类改变应当保持至恢复供体抗体亲和力所必需的最低限度。用于选择可能需要改变的受体框架区中的残基的方案在wo91/09967中举出。因此，在一个实施方案中，重链和/或轻链框架中的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个残基可以被可选的氨基酸残基替代。因此，在一个实例中，对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含重链可变区，其中重链可变结构域的第24、48、49、71、73、78和93位(kabat编号)上的残基的至少一个是供体残基，参见例如，seqidno:92或seqidno:96中指定的序列。在一个实施方案中，重链可变区的残基24被可选氨基酸替代，例如，苏氨酸。在一个实施方案中，重链可变区的残基48被可选氨基酸替代，例如，异亮氨酸。在一个实施方案中，重链可变区的残基49被可选氨基酸替代，例如，甘氨酸。在一个实施方案中，重链可变区的残基71被可选氨基酸替代，例如，缬氨酸。在一个实施方案中，重链可变区的残基73被可选氨基酸替代，例如，赖氨酸。在一个实施方案中，重链可变区的残基78被可选氨基酸替代，例如，丙氨酸。在一个实施方案中，重链可变区的残基93被可选氨基酸替代，例如，苏氨酸。在一个实施方案中，在本公开的人源化抗-tnfα重链可变结构域中，残基48是异亮氨酸，残基49是甘氨酸，71是缬氨酸，73是赖氨酸，78是丙氨酸，且残基93是苏氨酸。因此，在一个实例中，提供了人源化tnf-α结合结构域，其中重链可变结构域的第48、49、71、73、78和93位(kabat编号)的每一个上的至少一个残基是供体残基，参见例如，seqidno:92或seqidno:96中指定的序列。在一个实例中，提供了人源化tnf-α结合结构域，其中重链可变结构域的至少第24、48、49、71、73、78和93位(kabat编号)的每一个上的残基是供体残基。在一个实例中，用于本发明人源化tnf-α结合结构域轻链的适合的框架区衍生自人受体框架vk12-1(u)a20jk2。因此，在一个实例中，对tnf-α具有特异性的结合结构域包含轻链可变结构域，其包含seqidno:88或136中对cdr-l1指定的序列、seqidno:89、137、138或139中对cdr-l2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列，其中轻链框架区衍生自人受体框架vk12-1(u)a20jk2。在一个实例中，对tnf-α具有特异性的结合结构域包含人源化轻链可变结构域，其中轻链可变结构域的第65、71和87位(kabat编号)上的残基的一个或多个是供体残基，参见例如，seqidno:91或seqidno:95中指定的序列。在一个实例中，提供了人源化tnf-α结合结构域，其中至少轻链可变结构域的第65、71和87位(kabat编号)的每一个上的是供体残基，参见例如，中指定的序列seqidno:91或95。在一个实施方案中，轻链可变结构域的残基65被可选氨基酸替代，例如，苏氨酸。在一个实施方案中，轻链可变结构域的残基71被可选氨基酸替代，例如，酪氨酸。在一个实施方案中，轻链可变结构域的残基87被可选氨基酸替代，例如，苯丙氨酸。在一个实施方案中，在本公开的人源化抗-tnf-α轻链可变区中，残基65是苏氨酸，残基71是酪氨酸，且残基87是苯丙氨酸。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含轻链可变结构域，其包含seqidno:91或seqidno:95中指定的序列；与seqidno:91或seqidno:95中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:91或seqidno:95中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:88中对cdrl1中指定的、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含含有seqidno:91中指定的序列的轻链可变结构域和含有seqidno:92中指定的序列的重链可变结构域。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含含有seqidno:147中指定的序列的轻链可变结构域和含有seqidno:92中指定的序列的重链可变结构域。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人tnf-α具有特异性的结合结构域包含含有seqidno:95中指定的序列的轻链可变结构域和含有seqidno:96中指定的序列的重链可变结构域。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中该抗体包含对人tnf-α具有特异性的dsscfv，且dsscfv包含seqidno:101中指定的序列；与seqidno:101中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:101中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh3具有seqidno:85对cdrh1中指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列，且cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:88中对cdrl1指定的序列、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中该抗体包含对人tnf-α具有特异性的scfv，且scfv包含seqidno:99中指定的序列；与seqidno:99中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:99中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh3具有seqidno:85对cdrh1中指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列，且cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:88中对cdrl1指定的序列、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列。在本发明的该方面，其中所述抗体分子包含如上述所定义的式(i)和式(ii)的多肽链或由其组成，该抗体分子可以包含：3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:88或136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89或137或138或139中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列，所述重链cdr和所述轻链cdr位于该抗体分子的vh1/vl1位上。在一个实施方案中，具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:88或136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89或137或138或139中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v1位上。在一个实施方案中，具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:88或136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89或137或138或139中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v2位上。在一个实施方案中，具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:88或136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89或137或138或139中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v1和v2位上。在一个实施方案中，具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:88或136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89或137或138或139中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的vh1/vl1和v1位上。在一个实施方案中，具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:88或136中对cdrl1指定的序列、seqidno:89或137或138或139中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的vh1/vl1和v2位上。在一个实施方案中，包含本公开的式(i)和式(ii)的多肽链的抗体分子中的tnf-α结合位点包含选自seqidno:92和seqidno:96的重链可变结构域和选自seqidno:91和seqidno:95的轻链可变区，特别是重链和轻链分别为seqidno:92和91或seqidno:96和95。在一个实施方案中，这些结构域位于本公开构建体的vh1/vl1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v2位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v1和v2位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1和v1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1和v2位。当可变结构域位于本公开构建体中的2个位置上时，可变结构域的相同对可以各种就位，或可以使用可变结构域的2个不同对。在一个实施方案中，包含本公开的式(i)和式(ii)的多肽链的抗体分子中的tnf-α结合位点包含对人tnf-α具有特异性的dsscfv，且dsscfv包含seqidno:101中指定的序列。在一个实施方案中，包含seqidno:101中指定的序列的dsscfv位于v1和/或v2位。在一个实施方案中，包含seqidno:101中指定的序列的dsscfv位于v1位。在一个实施方案中，包含seqidno:101中指定的序列的dsscfv位于v2位。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含3个重链cdr，其具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列。在一个实施方案中，对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含3个重链cdr，且cdrh1的序列与seqidno:71中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，cdrh2的序列与seqidno:72中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，且cdrh3的序列与seqidno:73中指定的序列具有至少60％同一性或相似性。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含3个轻链cdr，其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列。在一个实施方案中，对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域还包含3个轻链cdr，且cdrl1的序列与seqidno:74中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，cdrl2的序列与seqidno:75中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，且cdrl3的序列与seqidno:76中指定的序列具有至少60％同一性或相似性。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含：3个重链cdr，其具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含重链可变结构域，其包含seqidno:78中指定的序列；与seqidno:78中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:78中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh3具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含轻链可变结构域，其包含seqidno:77中指定的序列；与seqidno:77中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:77中指定的序列具有至少80％同一性或相似性序列，其中cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含含有seqidno:78中指定的序列的重链可变区和含有seqidno:77中指定的序列的轻链可变区。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含含有重链可变结构域和重链恒定结构域的重链，其包含seqidno:82中指定的序列；与seqidno:82中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:82中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh3具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含含有轻链可变结构域和轻链恒定结构域的轻链，其包含seqidno:81中指定的序列；与seqidno:81中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:81中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域包含具有seqidno:82中指定的序列的重链和具有seqidno:81中指定的序列的轻链。在本发明的该方面，其中所述抗体分子包含如上述所定义的式(i)和式(ii)的多肽链或由其组成，该抗体分子可以包含：3个重链cdr，其具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列，所述重链cdr和轻链cdr位于抗体分子中的vh1/vl1位。在一个实施方案中，具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v1位。在一个实施方案中，具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v2位。在一个实施方案中，具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v1和v2位。在一个实施方案中，具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的vh1/vl1和v1位。在一个实施方案中，具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的vh1/vl1和v2位。在一个实施方案中，包含本公开式(i)和式(ii)的多肽链的抗体分子中的il-17a和il-17f结合位点包含seqidno:78中指定的重链可变结构域和seqidno:77中指定的轻链可变结构域。在一个实施方案中，这些可变结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v2位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v1和v2位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1和v1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1和v2位。在一个实施方案中，包含本公开式(i)和式(ii)的多肽链的抗体分子中的il-17a和il-17f结合位点包含具有vh1位上seqidno:82中指定的序列的重链和具有vl1位上seqidno:81中指定的序列的轻链。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中该抗体分子包含对包含3个重链cdr的人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，所述重链cdr具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列。在一个实施方案中，对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域包含3个重链cdr，且cdrh1的序列与seqidno:103中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，cdrh2的序列与seqidno:104中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，且cdrh3的序列与seqidno:105中指定的序列具有至少60％同一性或相似性。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中该抗体分子包含对包含3个轻链cdr的人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，所述轻链cdr具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。在一个实施方案中，对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域还包含3个轻链cdr，且cdrl1的序列与seqidno:106中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，cdrl2的序列与seqidno:107中指定的序列具有至少60％同一性或相似性，且cdrl3的序列与seqidno:108中指定的序列具有至少60％同一性或相似性。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中该抗体分子包含对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，其包含：3个重链cdr，其具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。本发明还提供如上述所定义的多特异性抗体结合分子，其中对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域包含重链可变结构域，其包含seqidno:110或seqidno:114中指定的序列；与seqidno:110或seqidno:114中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:110或seqidno:114中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh3具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列。本发明提供如上述所定义的多特异性抗体分子，其中对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域包含轻链可变结构域，其包含seqidno:109或seqidno:113中指定的序列；与seqidno:109或seqidno:113中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:109或seqidno:113中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:106中指定的对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。本发明还提供如上述所定义的多特异性抗体结合分子，其中对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域包含含有seqidno:110中指定的序列的重链可变结构域和含有seqidno:109中指定的序列的轻链可变结构域。本发明还提供如上述所定义的多特异性抗体结合分子，其中对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域包含含有seqidno:114中指定的序列的重链可变结构域和含有seqidno:113中指定的序列的轻链可变结构域。本发明还提供如上述所定义的多特异性抗体结合分子，其中该抗体包含对人血清白蛋白具有特异性的dsscfv，且dsscfv包含seqidno:119中指定的序列；与seqidno:119中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:119的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh3具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3的序列，且cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。本发明还提供如上述所定义的多特异性抗体结合分子，其中该抗体包含对人血清白蛋白具有特异性的scfv，且scfv包含seqidno:117中指定的序列；与seqidno:117中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或与seqidno:117的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中cdrh1、cdrh2和cdrh3具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3的序列，且cdrl1、cdrl2和cdrl3具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。在本发明的该方面，其中所述抗体分子包含如上述所定义的式(i)和式(ii)的多肽链或由其组成，该抗体分子可以包含：3个重链cdr，其具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列，所述重链cdr和轻链cdr位于抗体分子中的vh1/vl1位。在一个实施方案中，具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v1位。在一个实施方案中，具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v2位。在一个实施方案中，具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的v1和v2位。在一个实施方案中，具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的vh1/vl1和v1位。在一个实施方案中，具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列的3个重链cdr和具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列的3个轻链cdr位于本公开构建体中的vh1/vl1和v2位。在一个实施方案中，包含本公开的式(i)和式(ii)的多肽链的抗体分子中的人血清白蛋白结合位点包含选自seqidno:110和seqidno:114的重链可变结构域和选自seqidno:109和seqidno:113的轻链可变结构域，特别是重链和轻链分别为seqidno:110和109或seqidno:114和113。在一个实施方案中，这些结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v2位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于v1和v2位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1和v1位。在一个实施方案中，这些可变结构域位于本公开构建体中的vh1/vl1和v2位。当可变结构域位于本公开构建体中的2个位置上时，可变结构域的相同对可以在每一个位置上或可以使用可变结构域的2个不同对。在一个实施方案中，包含本公开的式(i)和式(ii)的多肽链的抗体分子中的人血清白蛋白结合位点包含对人血清白蛋白具有特异性的dsscfv，且dsscfv包含seqidno:119中指定的序列。在一个实施方案中，包含seqidno:119中指定的序列的dsscfv位于v1和/或v2位。在一个实施方案中，包含seqidno:119中指定的序列的dsscfv位于v1位。在一个实施方案中，包含seqidno:119中指定的序列的dsscfv位于v2位。在本发明的一个方面，将如上述所定义的多特异性抗体分子作为二聚体提供，其包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示重链可变结构域，其包含3个重链cdr，其具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示键或接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示键或接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv，其包含：3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:88中对cdrl1指定的序列、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列；vl1表示轻链可变结构域，其包含3个轻链cdr，其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv，其包含：3个重链cdr，其具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。在本发明的一个方面，将如上述所定义的多特异性抗体分子作为二聚体提供，其包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示重链可变结构域，其包含3个重链cdr，其具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示键或接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示键或接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv，其包含：3个重链cdr，其具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列；vl1表示轻链可变结构域，其包含3个轻链cdr，其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv，其包含：3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:88中对cdrl1指定的序列、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列。在一个方面，提供了多特异性抗体分子，包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示重链可变结构域，其具有seqidno:78中指定的序列；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示dsscfv，其包含具有seqidno:96中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:95中指定的序列的轻链可变结构域；vl1表示轻链可变结构域，其具有seqidno:77中指定的序列；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示dsscfv，其包含具有seqidno:114中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:113中指定的序列的轻链可变结构域。在一个方面，提供了多特异性抗体分子，包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示具有seqidno:78中指定的序列的重链可变结构域；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示dsscfv，其包含具有seqidno:114中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:113中指定的序列的轻链可变结构域；vl1表示具有seqidno:77中指定的序列的轻链可变结构域；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示dsscfv，其包含具有seqidno:96中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:95中指定的序列的轻链可变结构域。在一个方面，提供了多特异性抗体分子，包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1和ch1表示具有seqidno:82中指定的序列的重链可变结构域和重链恒定结构域；x表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示dsscfv，其包含具有seqidno:96中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:95中指定的序列的轻链可变结构域；vl1和cl表示具有seqidno:81中指定的序列的轻链可变结构域和轻链恒定结构域；v2表示dsscfv，其包含具有seqidno:114中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:113中指定的序列的轻链可变结构域。在一个方面，提供了多特异性抗体分子，包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1和ch1表示具有seqidno:82中指定的序列的重链可变结构域和重链恒定结构域；x表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示dsscfv包含，其具有seqidno:114中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:113中指定的序列的轻链可变结构域；vl1和cl表示具有seqidno:81中指定的序列的轻链可变结构域和轻链恒定结构域；v2表示dsscfv，其包含具有seqidno:96中指定的序列的重链可变结构域和具有seqidno:95中指定的序列的轻链可变结构域。在一个方面，提供了多特异性抗体分子，包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1和ch1表示具有seqidno:82中指定的序列的重链可变结构域和重链恒定结构域；x表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示dsscfv，其包含seqidno:101中指定的序列；vl1和cl表示具有seqidno:81中指定的序列的轻链可变结构域和轻链恒定结构域；v2表示包含seqidno:119中指定的序列的dsscfv。在一个方面，提供了多特异性抗体分子，包含或由如下组成：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1和ch1表示具有seqidno:82中指定的序列的重链可变结构域和重链恒定结构域；x表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；y表示接头，例如，其具有seqidno:2中指定的序列；v1表示包含seqidno:119中指定的序列的dsscfv；vl1和cl表示具有seqidno:81中指定的序列的轻链可变结构域和轻链恒定结构域；v2表示包含seqidno:101中指定的序列的dsscfv。本发明提供三特异性抗体分子，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域、对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，其中该抗体分子包含或由如下组成：a)包含或由如下组成的第一多肽：i.seqidno:125中指定的序列；ii.与seqidno:125中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或iii.与seqidno:125中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中该序列包含：3个重链cdr，其具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列；3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:88中对cdrl1指定的序列、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列；和b)包含或由如下组成的第二多肽：i.seqidno:131中指定的序列；ii.与seqidno:131中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或iii.seqidno:131中指定的序列具有至少80％与同一性或相似性的序列，其中该序列包含：3个轻链cdr，其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列；3个重链cdr，其具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。在一个实施方案中，所述抗体分子包含或由如下组成：具有seqidno:125中指定的序列的第一多肽；和具有seqidno:131中指定的序列的第二多肽。本发明还提供三特异性抗体分子，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域、对人il-17a和人il-17f具有特异性的和结合结构域对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，并且该三特异性抗体分子包含或由如下组成：a)第一多肽，包含或由如下组成：i.seqidno:127中指定的序列；ii.与seqidno:127中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或iii.与seqidno:127中指定的序列同具有至少80％一性或相似性的序列，其中该序列包含：3个重链cdr，其具有seqidno:71中对cdrh1指定的序列、seqidno:72中对cdrh2指定的序列和seqidno:73中对cdrh3指定的序列；3个重链cdr，其具有seqidno:85中对cdrh1指定的序列、seqidno:86中对cdrh2指定的序列和seqidno:87中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:88中对cdrl1指定的序列、seqidno:89中对cdrl2指定的序列和seqidno:90中对cdrl3指定的序列；和b)第二多肽，包含或由如下组成：i.seqidno:131中指定的序列；ii.与seqidno:131中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列；或iii.与seqidno:131中指定的序列具有至少80％同一性或相似性的序列，其中该序列包含：3个轻链cdr，其具有seqidno:74中对cdrl1指定的序列、seqidno:75中对cdrl2指定的序列和seqidno:76中对cdrl3指定的序列；3个重链cdr，其具有seqidno:103中对cdrh1指定的序列、seqidno:104中对cdrh2指定的序列和seqidno:105中对cdrh3指定的序列；和3个轻链cdr，其具有seqidno:106中对cdrl1指定的序列、seqidno:107中对cdrl2指定的序列和seqidno:108中对cdrl3指定的序列。在一个实施方案中，所述抗体分子包含具有seqidno:127中指定的序列的第一多肽和具有seqidno:131中指定的序列的第二多肽或由它们组成。本发明还提供三特异性抗体分子，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域、对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，并且该抗体分子包含具有seqidno:121中指定的序列的第一多肽和具有seqidno:129中指定的序列的第二多肽或由它们组成。本发明还提供三特异性抗体分子，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域、对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，并且该抗体分子包含具有seqidno:123中指定的序列的第一多肽和具有seqidno:129中指定的序列的第二多肽或由它们组成。本发明还提供三特异性抗体分子，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域、对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，并且该抗体分子包含具有seqidno:126中指定的序列的第一多肽和具有seqidno:132中指定的序列的第二多肽或由它们组成。本发明还提供三特异性抗体分子，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域、对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，并且该抗体分子包含具有seqidno:144中指定的序列的第一多肽和具有seqidno:146中指定的序列的第二多肽或由它们组成。本发明还提供三特异性抗体分子，其包含对人tnf-α具有特异性的结合结构域、对人il-17a和人il-17f具有特异性的结合结构域和对人血清白蛋白具有特异性的结合结构域，并且该抗体分子包含具有seqidno:143中指定的序列的第一多肽和具有seqidno:145中指定的序列的第二多肽或由它们组成。在一个实施方案中，根据本发明的三特异性抗体分子包含由选自seqidno:132、seqidno:146或seqidno:145的多核苷酸序列编码的第一多肽和由选自seqidno:126、seqidno:144或seqidno:143的多核苷酸序列编码的第二多肽或由它们组成。如上述所定义的三特异性抗体分子优选地能够中和人tnf-α、人il-17a和人il-17f的生物活性。本公开还提供与本文公开的序列80％、90％、91％、92％、93％94％、95％、96％、97％、98％或99％相似的序列。如本文所用的“同一性”表示比对序列中的任意特定位置上的氨基酸残基在所述序列之间是相同的。如本文所用的“相似性”表示在比对序列的任意特定位置上的氨基酸残基在所述序列之间具有相似的类型。例如，亮氨酸可以取代异亮氨酸或缬氨酸。通常可以彼此取代的另外的氨基酸包括但不限于：-苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香侧链的氨基酸)；-赖氨酸、精氨酸和组氨酸(具有碱性侧链的氨基酸)；-天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性侧链的氨基酸)；-天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺侧链的氨基酸)；和-半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫侧链的氨基酸)。可以方便地计算同一性和相似性的程度(computationalmolecularbiology,lesk,a.m.,ed.,oxforduniversitypress,newyork,1988；biocomputing.informatics和genomeprojects,smith,d.w.,ed.,academicpress,newyork,1993；computeranalysisofsequencedata,part1,griffin,a.m.,和griffin,h.g.,eds.,humanapress,newjersey,1994；sequenceanalysisinmolecularbiology,vonheinje,g.,academicpress,1987,sequenceanalysisprimer,gribskov,m.和devereux,j.,eds.,mstocktonpress,newyork,1991,theblasttmsoftwareavailablefromncbi(altschul,s.f.等人,1990,j.mol.biol.215:403-410；gish,w.&states,d.j.1993,naturegenet.3:266-272.madden,t.l.等人,1996,meth.enzymol.266:131-141；altschul,s.f.等人,1997,nucleicacidsres.25:3389-3402；zhang,j.&madden,t.l.1997,genomeres.7:649-656)。用于本发明多特异性构建体的抗体可以通过本领域任意适合的已知方法生成。可以得到针对抗原多肽生成的抗体，其中通过使用众所周知和常规的方案对动物、优选非人的动物施用所述多肽对动物免疫接种是必要的，参见例如，handbookofexperimentalimmunology,d.m.weir(ed.),vol4,blackwellscientificpublishers,oxford,england,1986)。可以对许多温血动物进行免疫接种，例如家兔、小鼠、大鼠、绵羊、牛、骆驼或猪。然而，小鼠、家兔、猪和大鼠通常是最适合的。可以通过本领域已知的任意方法制备单克隆抗体，例如杂交瘤技术(kohler&milstein,1975,nature,256:495-497)，三源杂交瘤，人b-细胞杂交瘤技术(kozbor等人1983,immunologytoday,4:72)和ebv-杂交瘤技术(cole等人,monoclonalantibodiesandcancertherapy,pp77-96,alanrliss,inc.,1985)。还可以使用单一淋巴细胞抗体方法，通过克隆和表达由为产生特异性抗体选择的单一淋巴细胞生成的免疫球蛋白可变区cdna生成抗体，例如由babcook,j.等人1996,proc.natl.acad.sci.usa93(15):7843-7848l；wo92/02551；wo2004/051268和wo2004/106377所述的方法。还可以使用本领域已知的各种噬菌体展示方法生成用于本公开的抗体，且包括如下文献中公开的那些：brinkman等人(j.immunol.methods,1995,182:41-50),ames等人(j.immunol.methods,1995,184:177-186),kettleborough等人(eur.j.immunol.1994,24:952-958),persic等人(gene,19971879-18),burton等人(advancesinimmunology,1994,57:191-280)和wo90/02809；wo91/10737；wo92/01047；wo92/18619；wo93/11236；wo95/15982；wo95/20401；和us5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5,733,743；5,969,108,和wo20011/30305。在一个实施方案中，根据本公开的多特异性分子是人源化的。如本文所用的人源化(包括cdr-移植抗体)是指具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(cdr)和来自人免疫球蛋白分子的框架区的分子(参见例如us5,585,089；wo91/09967)。可以理解，唯一有必要的是转移cdr的特异性决定残基而不是完整cdr(参见例如kashmiri等人,2005,methods,36,25-34)。人源化抗体可以任选地还包含衍生自衍生cdr的非人物种的一个或多个框架残基。如本文所用，术语“人源化抗体分子”是指这样的抗体分子，其中重链和/或轻链含有来自移植入受体抗体(例如人抗体)的重链和/或轻链可变区框架的供体抗体(例如鼠单克隆抗体)的一个或多个cdr(如果期望，包括一个或多个修饰的cdr)。有关综述，参见vaughan等人,naturebiotechnology,16,535-539,1998。在一个实施方案中，并非转移完整的cdr，而仅是将来自本文所述cdr的任意一种的特异性决定残基的一个或多个转移至人抗体框架(参见例如kashmiri等人,2005,methods,36,25-34)。在一个实施方案中，仅将来自上文所述cdr的一个或多个的特异性决定残基转移至人抗体框架。在另一个实施方案中，仅将来自上文所述cdr各自的特异性决定残基转移至人抗体框架。当移植cdr或特异性决定残基时，在衍生cdr的供体抗体类别/类型方面，可以使用任意适合的受体可变区框架，包括小鼠、灵长类和人框架区，以及本文提供的cdr的一个或多个。合适地，根据本发明的人源化抗体具有包含人受体框架区以及本文提供的一个或多个cdr的可变结构域。可以用于本公开的人框架的实例是kol、newm、rei、eu、tur、tei、lay和pom(kabat等人，同上)。例如，kol和newm可以用于重链，rei可以用于轻链，且eu、lay和pom可以用于重链和轻链。或者，可以使用人种系序列；可在:http://www.imgt.org/或http://www2.mrc-lmb.cam.ac.uk/vbase/list2.php获得这些序列。在本公开的人源化抗体分子中，受体重链和轻链不一定衍生自同一抗体，且如果期望，可以包含具有衍生自不同链的框架区的复合链。框架区不一定具有与受体抗体的那些确切相同的序列。例如，可以将不常用的残基改变成对于该受体链类别或类型更频繁出现的残基。或者，可以改变受体框架区中选择的残基，使得它们相当于在供体抗体中相同位置上发现的残基(参见reichmann等人1998,nature,332,323-324)。这类改变应当保持至恢复供体抗体亲和力所必需的最低程度。用于选择必需改变的受体框架区中的残基的方案在wo91/09967中举出。框架的衍生物可以具有被可选的氨基酸例如被供体残基替代的1、2、3或4个氨基酸。供体残基是来自供体抗体的残基，即最初从其衍生cdr的抗体。供体残基可以被衍生自人受体框架的适合的残基(受体残基)替代。在一个实施方案中，本公开的多特异性抗体是全人的，特别地，可变结构域的一个或多个是全人的。全人分子是这样的分子，其中重链和轻链的可变区和恒定区(如果存在)均衍生自人或基本上与人来源的序列相同，不一定来自相同抗体。全人抗体的实例可以包括，例如通过上述噬菌体展示方法产生的抗体和由小鼠产生的抗体，其中鼠免疫球蛋白可变区和任选的恒定区基因已经被其人对应物替代，例如通常在ep0546073、us5,545,806、us5,569,825、us5,625,126、us5,633,425、us5,661,016、us5,770,429、ep0438474和ep0463151中所述。在一个实施方案中，可以加工本公开的多特异性抗体分子，以便提供针对靶抗原的改善的亲和力。这类变体可以通过许多亲和力成熟方案得到，包括突变cdr(yang等人j.mol.biol.,254,392-403,1995)，链改组(marks等人,bio/technology,10,779-783,1992)，应用大肠杆菌(e.coli)的突变株(low等人,j.mol.biol.,250,359-368,1996)，dna改组(patten等人,curr.opin.biotechnol.,8,724-733,1997)，噬菌体展示(thompson等人,j.mol.biol.,256,77-88,1996)和有性pcr(crameri等人nature,391,288-291,1998)。vaughan等人(同上)讨论了这些亲和力成熟方法。在本文的上下文中使用的改善的亲和力是指超过起始分子的改善。如果期望，则用于本公开的多特异性抗体构建体可以缀合至一个或多个效应分子。可以理解，效应分子可以包含单一效应分子或如此连接以形成可以连接至本发明抗体的单一部分的两个或多个这类分子。如果期望得到连接至效应分子的抗体片段，则可以通过标准化学或重组dna方法进行制备，其中抗体片段直接或通过偶联剂连接至效应分子。用于将这类效应分子缀合至抗体的技术是本领域众所周知的(参见，hellstrom等人controlleddrugdelivery,2nded.,robinson等人编辑,1987,pp.623-53；thorpe等人1982,immunol.rev.,62:119-58和dubowchik等人1999,pharmacologyandtherapeutics,83,67-123)。特定的化学方法包括，例如wo93/06231、wo92/22583、wo89/00195、wo89/01476和wo03031581中公开的那些。或者，如果分子是蛋白质或多肽，则可以使用重组dna方法实现连接，例如，如wo86/01533和ep0392745中所述。在本文中所使用的术语“效应分子”包括例如在生物学上有活性的蛋白质，例如酶、其它抗体或抗体片段，合成的或天然存在的聚合物，核酸及其片段，例如dna、rna及其片段，放射性核素，特别是放射性碘化物，放射性同位素，经螯合的金属，纳米颗粒和报道基团，例如荧光化合物或可以通过nmr或esr光谱法来检测的化合物。其它效应分子可以包括经螯合的放射性核素例如111in和90y、lu177、铋213、锎252、铱192和钨188/铼188；或药物，例如但不限于，烷基磷酸胆碱、拓扑异构酶i抑制剂、紫杉烷类和苏拉明。其它效应分子包括蛋白质、肽和酶。目的酶包括但不限于蛋白质水解酶、水解酶、裂合酶、异构酶、转移酶。目的蛋白质、多肽和肽包括但不限于免疫球蛋白，毒素例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白a、假单胞菌外毒素或白喉毒素，蛋白质例如胰岛素、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子或组织纤溶酶原激活物，血栓形成剂或抗血管发生剂，例如血管抑素或内皮抑制素，或者生物应答调节物例如淋巴因子、白介素-1(il-1)、白介素-2(il-2)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、粒细胞集落刺激因子(g-csf)、神经生长因子(ngf)或其它生长因子和免疫球蛋白。其它效应分子可以包括例如在诊断中有用的可检测物质。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性核素、发射正电子的金属(用于正电子发射断层成像术)和非放射性顺磁性金属离子。关于可以与用于用作诊断剂的抗体相缀合的金属离子，通常参见us4,741,900。适合的酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；适合的辅基包括链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白和生物素；适合的荧光材料包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯和藻红蛋白；适合的发光材料包括鲁米诺；适合的生物发光材料包括萤光素酶、萤光素和水母蛋白；和适合的放射性核素包括125i、131i、111in和99tc。在另一个实施方案中，所述效应分子可以增加所述抗体的体内半衰期和/或降低所述抗体的免疫原性和/或增强抗体穿越上皮屏障向免疫系统的递送。该类型的适合的效应分子的实例包括聚合物、白蛋白、白蛋白结合蛋白或白蛋白结合化合物，例如在wo05/117984中所描述的那些。在所述效应分子为聚合物时，它通常可以为合成的或天然存在的聚合物，例如任选地经取代的直链或支链聚亚烷基、聚亚烯基或聚氧亚烷基聚合物，或者支化或非支化的多糖，例如同多糖或异多糖。可以存在于上述举出的合成聚合物上的具体任选的取代基包括一个或多个羟基、甲基或甲氧基。合成聚合物的具体实例包括任选取代的直链或支链聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、聚(乙烯醇)或其衍生物，尤其是任选取代的聚(乙二醇)，例如甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物。具体的天然存在的聚合物包括乳糖、直链淀粉、葡聚糖、糖原或其衍生物。在本文中所使用的“衍生物”意欲包括反应性衍生物，例如巯基选择性的反应性基团例如马来酰亚胺等。所述反应性基团可以直接地或通过接头段连接至聚合物。可以理解，此类基团的残基在某些情况下将会作为抗体片段和聚合物之间的连接基团而形成产物的一部分。聚合物的大小可以按所希望的进行变化，但通常将会在500da至50000da，例如5000至40000da，例如20000至40000da的平均分子量范围内。特别地，基于所述产物的所想要的用途，例如定位至某些组织例如肿瘤的能力或延长循环半衰期的能力，来选择聚合物大小(综述可参见chapman,2002,advanceddrugdeliveryreviews,54,531-545)。因此，例如，在想要产物离开循环并穿透入组织(例如用于在肿瘤治疗中使用)时，那么使用小分子量聚合物(例如具有大约5000da的分子量)可以是有利的。对于其中产物保留在循环中的应用，使用较高分子量聚合物(例如具有在20000da至40000da范围内的分子量)可以是有利的。适合的聚合物包括聚亚烷基聚合物，例如聚(乙二醇)或尤其是甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物，并且尤其具有在大约15000da至大约40000da范围内的分子量。在一个实施方案中，将用于在本公开中使用的抗体连接至聚乙二醇(peg)部分。在一个具体实例中，可以通过任何位于抗体片段中的可用的氨基酸侧链或末端氨基酸官能团(例如任何游离的氨基、亚氨基、巯基、羟基或羧基基团)来连接peg分子。此类氨基酸可以天然地存在于抗体片段中，或者可以通过使用重组dna方法来改造入片段中(参见例如，us5,219,996；us5,667,425；wo98/25971；wo2008/038024)。在一个实施方案中，本发明的抗体分子为经修饰的fab片段，其中所述修饰为向其重链的c-末端添加一个或多个氨基酸以允许连接效应分子。适合地，额外的氨基酸形成修饰的铰链区，其包含一个或多个可以连接效应分子的半胱氨酸残基。可以使用多个位点来连接两个或更多个peg分子。适合地，通过位于抗体片段中的至少一个半胱氨酸残基的巯基来共价连接peg分子。每个连接至经修饰的抗体片段的聚合物分子可以共价连接至位于该片段中的半胱氨酸残基的硫原子。所述共价连接通常将会是二硫键，或特别地硫-碳键。在使用巯基作为经适当地活化的效应分子的连接点时，可以使用例如巯基选择性的衍生物例如马来酰亚胺和半胱氨酸衍生物。在上面所描述的经聚合物修饰的抗体片段的制备中，可以使用经活化的聚合物作为起始材料。经活化的聚合物可以为任何包含巯基反应性基团的聚合物，例如α-卤代羧酸或α-卤代羧酸酯，例如碘乙酰胺，亚胺，例如马来酰亚胺，乙烯基砜，或二硫化物。此类起始材料可以商购获得(例如从nektar(以前的shearwaterpolymersinc.),huntsville,al,usa)或者可以通过使用常规化学程序从商购可得的起始材料来制备。特别的peg分子包括20k甲氧基-peg-胺(可获得自nektar(以前的shearwater)；rapppolymere；和sunbio)和m-peg-spa(可获得自nektar(以前的shearwater))。在一个实施方案中，例如，根据ep0948544或ep1090037中公开的方法使分子中的f(ab’)2、fab或fab’聚乙二醇化，即具有与之连接的peg(聚(乙二醇))[还参见"poly(ethyleneglycol)chemistry,biotechnicalandbiomedicalapplications",1992,j.miltonharris(ed),plenumpress,newyork,"poly(ethyleneglycol)chemistry和biologicalapplications",1997,j.miltonharris和s.zalipsky(eds),americanchemicalsociety,washingtondc和"bioconjugationproteincouplingtechniquesforthebiomedicalsciences",1998,m.aslam和a.dent,grovepublishers,newyork；chapman,a.2002,advanceddrugdeliveryreviews2002,54:531-545]。在一个实施方案中，peg连接至铰链区中的半胱氨酸。在一个实例中，peg修饰的fab片段具有共价连接至修饰的铰链区中的单一巯基的马来酰亚胺基。赖氨酸残基可以共价连接至马来酰亚胺基，且赖氨酸残基上的胺基各自可以连接具约20,000da分子量的甲氧基聚(乙二醇)聚合物。连接至fab片段的peg的总分子量由此可以约为40,000da。特定的peg分子包括n,n’-双(甲氧基聚(乙二醇)mw20,000)修饰的赖氨酸的2-[3-(n-马来酰亚氨基)丙酰氨基]乙基酰胺，也称作peg2mal40k(得自nektar(以前的shearwater))。peg连接基的可选来源包括提供gl2-400ma2(其中如下结构中的m为5)和gl2-400ma(其中m为2)且n约为450的nof：m为2或5换言之，peg各自约为20,000da。如下类型的另外可选的peg效应分子：可获得自drreddy、nof和jenkem。在一个实施方案中，提供了这样的抗体分子，其被聚乙二醇化(例如，用本文所述的peg)，通过在或约链上226位氨基酸上的半胱氨酸氨基酸残基例如重链226位氨基酸连接(通过顺序编号)。在一个实施方案中，提供了编码本公开分子的多核苷酸序列，例如dna序列。在一个实施方案中，提供了编码本公开分子的一个或多个例如两个或更多个或三个或更多个多肽成分的多核苷酸序列，例如：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；和b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示重链可变结构域；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示键或接头；y表示键或接头；v1表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv；vl1表示轻链可变结构域；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv。在一个实施方案中，所述多核苷酸、例如dna包含的载体中。本领域技术人员可以理解，当v1和/或v2表示dsfv时，多特异性抗体包含第三多肽，其编码不连接至x或y的相应游离vh或vl结构域。因此，本发明的多特异性蛋白质可以由一个或多个、两个或更多个或三个或更多个多核苷酸编码，并且它们可以被并入一种或多种载体。可以构建载体的一般方法、转染方法和培养方法是本领域技术人员众所周知的。在该方面，参考“currentprotocolsinmolecularbiology”,1999,f.m.ausubel(ed),wileyinterscience,newyork和由coldspringharborpublishing产生的maniatismanual。还提供了包含一种或多种克隆或表达载体的宿主细胞，所述载体包含编码本发明多特异性蛋白质的一个或多个dna序列。任意适合的宿主细胞/载体系统可以用于表达编码本发明抗体分子的dna序列。可以使用细菌，例如大肠杆菌和其它微生物系统，或还可以使用真核生物(例如，哺乳动物)宿主细胞表达系统。适合的哺乳动物宿主细胞包括cho、骨髓瘤、nso骨髓瘤细胞和sp2细胞、cos细胞或杂交瘤细胞。本公开还提供用于生产本公开多特异性蛋白质的方法，包括在适合于导致表达来自编码本发明多特异性蛋白质的dna的蛋白质的条件下培养含有本发明载体的宿主细胞，并且分离所述多特异性蛋白质。为了生产包含重链和轻链的产物，可以用两种载体转染细胞系，第一载体编码轻链多肽，且第二载体编码重链多肽。或者，可以使用单一载体，该载体包括编码轻链和重链的序列。在一个实例中，可以用两种载体转染细胞系，所述载体各自编码本发明抗体分子的多肽链。如果v1和/或v2是dsfv，则用三种载体转染细胞系，所述载体各自编码本发明多特异性蛋白质的多肽链。在一个实施方案中，用两种载体转染细胞系，每一种编码选自如下的不同多肽：a)式(i)的多肽链:vh1-ch1-x-v1；b)式(ii)的多肽链:vl1-cl-y-v2；其中：vh1表示重链可变结构域；ch1表示重链恒定区结构域，例如，其结构域1；x表示键或接头；y表示键或接头；v1表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv；vl1表示轻链可变结构域；cl表示来自轻链恒定区的结构域，例如cκ；v2表示dsfv、sdab、scfv或dsscfv。在一个实施方案中，当v1是dsfv且v1的vh结构域连接至x时，可以用编码v1的vl结构域的第三载体转染细胞系。在一个实施方案中，当v1是dsfv且v1的vl结构域连接至x时，可以用编码v1的vh结构域的第三载体转染细胞系。在一个实施方案中，当v2是dsfv且v2的vh结构域连接至y时，可以用编码v2的vl结构域的第三载体转染细胞系。在一个实施方案中，当v2是dsfv且v2的vl结构域连接至y时，可以用编码v2的vh结构域的第三载体转染细胞系。在一个实施方案中，当v1和v2均为dsfv，且v2的vl结构域连接至y，且v1的vl结构域连接至x时，可以用编码v1和v2的共同的vh结构域的第三载体转染细胞系。在一个实施方案中，当v1和v2均为dsfv，且v2的vh结构域连接至y，且v1的vh结构域连接至x时，可以用编码v1和v2的共同的vl结构域的第三载体转染细胞系。可以理解，可以改变转染入宿主细胞的每种载体的比例，以便优化表达多特异性抗体产物。在一个实施方案中，如果使用两种载体，则载体之比可以为1:1。在一个实施方案中，如果使用三种载体，则载体之比可以为1:1:1。可以理解，本领域技术人员能够通过在转染后通过常规测试蛋白质表达水平找到最佳比例。或者或此外，可以通过相同或不同启动子控制来自每种载体的多特异性构建体的每条多肽链的表达水平。可以理解，多肽成分中的两种或更多种或如果存在、三种成分可以由单一载体中的多核苷酸编码。还可以理解，如果多肽成分中的两种或更多种、特别是三种或更多种成分由单一载体中的多核苷酸编码，则可以通过使用针对编码本公开多肽成分的每种多核苷酸的不同启动子改变每种多肽成分的相对表达。在一个实施方案中，载体包含在单一启动子控制下编码两种或如果存在三种本发明多特异性抗体分子的多肽链的单一多核苷酸序列。在一个实施方案中，载体包含编码两种或如果存在三种本公开的多特异性抗体分子的多肽链的单一多核苷酸序列，其中编码每种多肽链的每种多核苷酸序列在不同启动子控制下。本公开的多特异性蛋白质从宿主细胞以良好水平被表达。因此，抗体和/或片段的特性显然被优化并且有助于商业化加工。有利地，本公开的多特异性抗体分子将纯化后观察到的聚集量减少到最低限度，并且在药物浓度上使构建体制剂中单体的量最大化，例如，单体可以作为总蛋白质的50％、60％、70％或75％或以上，例如80或90％或以上，例如91、92、93、94、95、96、97、98或99％或以上存在。在一个实例中，本公开的多特异性抗体分子的纯化样品在4℃下储存28天后保留98％或99％以上的单体。在一个实例中，溶于磷酸缓冲盐水(pbs)中的5mg/ml的本公开的多特异性抗体分子的纯化样品在4℃下储存28天后保留98％以上的单体。本公开的抗体分子和包含它们的组合物用于治疗，例如，用于治疗和/或预防病理病况。本公开还提供药物或诊断组合物，其包含本公开的抗体分子与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体中的一种或多种的组合。因此，提供了本公开的抗体在治疗特别是用于本文公开的适应症中和在制备特别是用于本文公开的适应症的药物中的用途。该组合物通常作为通常包括药学上可接受的载体的无菌药物组合物的一部分提供。本公开的药物组合物还可以包含药学上可接受的佐剂。本公开还提供用于制备药物或诊断组合物的方法，包括添加和混合本公开的抗体分子与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体中的一种或多种。抗体分子可以是药物或诊断组合物中唯一的活性成分，或可以伴随其它活性成分，包括其它抗体成分，例如，抗-il-1β、抗-t细胞、抗-ifnγ或抗-lps抗体或非抗体成分，例如黄嘌呤。其它适合的活性成分包括那个诱导耐受性的抗体，例如抗-cd3或抗-cd4抗体。在另一个实施方案中，本公开的抗体、片段或组合物与另一种药物活性剂联用。药物组合物适当地包含治疗有效量的本发明的抗体分子。如本文所用，术语“治疗有效量”是指治疗、改善或预防靶向的疾病或病况或展示出可检测到的治疗或预防作用所需的治疗剂的量。对于任意的抗体，最初可以在细胞培养测定或动物模型、通常为啮齿类、家兔、狗、猪或灵长类中评估治疗有效量。动物模型也可以用于确定适合的浓度范围和施用途径。这类信息然后可以用于确定用于人中施用的有用的剂量和途径。用于人受试者的精确治疗有效量取决于疾病状态的严重程度、受试者的一般健康状况、受试者年龄、体重和性别、膳食、施用时间和频率、药物组合、反应敏感性和对疗法的耐受性/响应。该量可以通过常规实验测定，并且在临床医生的判断范围内。通常，治疗有效量为0.01mg/kg至50mg/kg，例如，0.1mg/kg至20mg/kg。或者，该剂量可以为1至500mg/天，例如10至100、200、300或400mg/天。药物组合物可以便利地以含有预定量本发明活性剂的单位剂型呈现。可以将组合物单独施用于患者或以与另外的药剂、药物或激素组合的方式施用(例如同时、依次或分开)。施用本公开抗体分子时的剂量取决于待治疗病况的性质、存在的炎症程度和抗体分子是以预防方式使用还是以治疗现存病况的形式使用。给药频率取决于抗体分子的半衰期及其作用持续时间。如果抗体分子具有短半衰期(例如2至10小时)，则有必要给予每天一次或多次剂量。或者，如果抗体分子具有长半衰期(例如2至15天)，则仅有必要给予每天1次、每周1次乃至每1或2个月1次的剂量。药学上可接受的载体自身不应当诱导产生对接受组合物的个体有害的抗体，并且不应当是毒性的。适合的载体可以为大的缓慢代谢的大分子，例如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和无活性的病毒颗粒。可以使用药学上可接受的盐，例如，无机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐，或有机酸盐，例如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐和苯酸盐。治疗组合物中药学上可接受的载体还可以含有液体，例如水、盐水、甘油和乙醇。另外，辅助物质例如湿润剂或乳化剂或ph缓冲物质可以存在于这类组合物中。这类载体使得能够将药物组合物配制成片剂、丸剂、锭剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆剂和混悬剂，用于患者摄取。用于施用的适合的形式包括适合于胃肠外施用的形式，例如通过注射或输注，例如，通过快速团注或连续输注。如果产物用于注射或输注，则可以采取在油或水性媒介物中的混悬剂、溶液或乳剂的形式，并且可以包含配制剂，例如助悬剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂。或者，抗体分子可以为干燥形式，用于在使用前用适合的无菌液体重构。一旦配制，则可以将本发明的组合物直接施用于受试者。待治疗的受试者可以是动物。然而，在一个或多个实施方案中，组合物适合于对人受试者施用。在一个实施方案中，在本公开的制剂中，最终制剂的ph并不类似于抗体或片段的等电点值，因为如果制剂的ph为7，则pi为8-9或以上可能是适合的。尽管不希望受到理论约束，但是认为这最终可以提供具有改善的稳定性的最终制剂，例如抗体或片段保留在溶液中。本公开的药物组合物可以通过许多途径施用，包括但不限于口服，静脉内，肌内，动脉内，髓内，鞘内，心室内，透皮，经皮(例如，参见wo98/20734)，皮下，腹膜内，鼻内，肠内，局部，舌下，阴道内或直肠途径。皮下注射器也可用于施用本发明的药物组合物。典型地，可以将治疗组合物制备成注射剂，可以是液体溶液或混悬剂。也可以制备用于在注射之前溶解或悬浮于液体媒介物中的固体形式。优选地，本发明的抗体分子通过皮下、吸入或局部施用。组合物的直接递送通常通过注射、皮下、腹膜内、静脉内或肌内进行或递送至组织的组织间隙。还可以将组合物施用到目标特定组织中。剂量治疗可以是单剂量方案或多剂量方案。应当理解，组合物中的活性成分将是抗体分子。照此，它倾向于在胃肠道中降解。因此，如果通过使用胃肠道的途径施用组合物，则组合物将需要含有保护抗体免于降解但在抗体从胃肠道吸收后释放抗体的药剂。药学上可接受的载体的详细讨论可获得自remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingcompany,n.j.1991)。在一个实施方案中，将制剂提供为用于局部施用包括吸入的制剂。适合的可吸入制剂包括可吸入粉末，含有推进剂气体的计量气雾剂或不含推进剂气体的可吸入溶液(例如可雾化溶液或悬浮剂)。含有活性物质的本公开的可吸入粉末可以仅由上述活性物质或上述活性物质与生理学上可接受的赋形剂的混合物组成。这些可吸入粉末可包括单糖(例如葡萄糖或阿拉伯糖)，二糖(例如乳糖，蔗糖，麦芽糖)，寡糖和多糖(例如葡聚糖)，多元醇(例如山梨醇，甘露醇，木糖醇)，盐(例如氯化钠，碳酸钙)或这些彼此的混合物。适合使用单糖或二糖，使用乳糖或葡萄糖，特别是但不限于其水合物形式。用于沉积在肺中的颗粒需要小于10微米粒径，例如1-9微米，例如，0.1至5μm，特别是1至5μm。活性剂(例如抗体或抗体片段)的粒径非常重要。可用于制备可吸入气雾剂的推进剂气体在本领域中是已知的。适合的推进剂气体选自烃类，例如正丙烷，正丁烷或异丁烷和卤代烃，例如甲烷，乙烷，丙烷，丁烷，环丙烷或环丁烷的氯化和/或氟化衍生物。上述推进剂气体可以单独使用或以其混合物使用。特别适合的推进剂气体是卤代烷衍生物，其选自tg11、tg12、tg134a和tg227。在上述举出的卤代烃中，tg134a(1,1,1,2-四氟乙烷)和tg227(1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)及其混合物是特别适合的。包含推进剂气体的可溶吸入气雾剂还可以包含另外的成分，例如共溶剂、稳定剂、表面-活性剂(表面活性剂)、抗氧化剂、润滑剂，以及用于调整ph的工具。全部这些成分均是本领域已知的。本发明的包含推进剂气体的可吸入气雾剂可以含有至多5％重量的活性物质。本发明的气雾剂含有例如0.002至5％重量，0.01至3％重量，0.015至2％重量，0.1至2％重量，0.5至2％重量或0.5至1％重量的活性物质。或者，还可以通过施用液体溶液或混悬剂制剂进行局部施用，例如，使用装置，例如喷雾器，例如连接至压缩器的喷雾器(例如由parirespiratoryequipment,inc.,richmond,va.制造的连接至parimaster(r)压缩器的parilc-jetplus(r))。在一个实施方案中，将制剂提供为包含通过雾化递送的单位剂量的分散安瓿。在一个实施方案中，将抗体提供为冻干形式，用于重构，或者，作为混悬剂制剂。可以将本公开的抗体以分散于溶剂中的形式递送，例如溶液或混悬剂形式。可以将其混悬于适合的生理溶液中，例如生理盐水、药理学上可接受的溶剂或缓冲溶液。本领域已知的缓冲溶液可以包含0.05mg至0.15mg依地酸二钠、8.0mg至9.0mgnacl、0.15mg至0.25mg聚山梨醇酯、0.25mg至0.30mg无水柠檬酸和0.45mg至0.55mg柠檬酸钠/1ml水，以便实现ph约为4.0至5.0。如上所述，例如，可以由冻干抗体制备混悬剂。治疗性混悬剂或溶液制剂还可含有一种或多种赋形剂。赋形剂在本领域中是众所周知的并且包括缓冲剂(例如柠檬酸盐缓冲剂，磷酸盐缓冲剂，乙酸盐缓冲剂和碳酸氢盐缓冲剂)，氨基酸，脲，醇，抗坏血酸，磷脂，蛋白质(例如血清白蛋白)，edta，氯化钠，脂质体，甘露醇，山梨醇和甘油。溶液或混悬剂可以被包封在脂质体或可生物降解的微球中。制剂通常使用无菌制造方法以基本上无菌的形式提供。这可以包括通过过滤用于制剂的缓冲溶剂溶液，抗体在无菌缓冲溶剂溶液中的无菌悬浮，以及通过本领域普通技术人员熟悉的方法将制剂分配到无菌容器中的生产和灭菌。本公开的可雾化制剂可以例如作为包装在箔包封物中的单剂量单位(例如密封的塑料容器或小瓶)提供。每个小瓶含有按体积计例如2ml溶剂/溶液缓冲液的单位剂量。据认为本公开的抗体适合于通过雾化递送。可以预期，本发明的抗体通过使用基因疗法施用。为了实现这一目的，将在适合的dna成分控制下的编码抗体分子重链和轻链的dna序列导入患者，使得抗体链由dna序列表达并且在原位组装。本发明还提供如上述所定义的用于疗法的多特异性抗体分子。本发明还提供如上述所定义的用于控制炎性疾病的多特异性抗体分子。优选地，所述多特异性抗体分子可以用于缩短炎症性过程或预防炎症性过程。本发明还提供用于治疗或预防病理性病症的本发明的多特异性抗体分子，该病理性病症由tnf-α和il-17a和/或il-17f介导或与tnf-α和il-17a和/或il-17f水平增加相关。优选地，上述病理性病况选自感染(病毒、细菌、真菌和寄生虫)，与感染相关的内毒素性休克，关节炎，类风湿性关节炎，银屑病关节炎，全身性发作性幼年特发性关节炎(jia)，系统性红斑狼疮(sle)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病(coad)，慢性阻塞性肺病(copd)，急性肺损伤，盆腔炎，阿尔茨海默病，克罗恩病，炎症性肠病，肠易激综合征，溃疡性结肠炎，castleman病，强直性脊柱炎及其它脊柱关节病，皮肌炎，心肌炎，葡萄膜炎，眼球突出，自身免疫性甲状腺炎，peyronie病，乳糜泻，胆囊疾病，藏毛病，腹膜炎，银屑病，特应性皮炎，血管炎，手术粘连，中风，自身免疫性糖尿病，i型糖尿病，莱姆关节炎，脑膜脑炎，免疫介导的中枢和周围神经系统炎症性疾病例如多发性硬化和吉兰-巴雷综合征，其它自身免疫性疾病，胰腺炎，创伤(手术)，移植物抗宿主病，移植排斥，纤维化疾病，包括肺纤维化，肝纤维化，肾纤维化，硬皮病或系统性硬化症，癌症(实体瘤如黑色素瘤，肝母细胞瘤，肉瘤，鳞状细胞癌，移行细胞癌，卵巢癌和血液系统恶性肿瘤，尤其是急性髓细胞性白血病，慢性髓细胞性白血病，慢性淋巴细胞白血病，胃癌和结肠癌)，心脏病包括缺血性疾病，如心肌梗塞以及动脉粥样硬化，血管内凝血，骨吸收，骨质疏松症，牙周炎和胃酸过少。在一个实施方案中，本发明的抗体用于治疗或预防病理性病症，其选自关节炎，类风湿性关节炎，银屑病，银屑病关节炎，全身性发作性幼年特发性关节炎(jia)，系统性红斑狼疮(sle)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病，慢性阻塞性肺病，特应性皮炎，硬皮病，系统性硬化症，肺纤维化，炎症性肠病，强直性脊柱炎和其它脊柱关节病和癌症。在一个实施方案中，本发明的抗体用于治疗或预防病理性病症，其选自关节炎，类风湿性关节炎，银屑病，银屑病关节炎，全身性发作性幼年特发性关节炎(jia)，系统性红斑狼疮(sle)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病，慢性阻塞性肺病，特应性皮炎，硬皮病，系统性硬化症，肺纤维化，克罗恩病，溃疡性结肠炎，强直性脊柱炎和其它脊柱关节病和癌症。在一个实施方案中，本发明的抗体用于治疗或预防病理性病症，其选自关节炎，类风湿性关节炎，银屑病，银屑病关节炎，全身性发作性幼年特发性关节炎(jia)，系统性红斑狼疮(sle)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病，慢性阻塞性肺病，特应性皮炎，硬皮病，系统性硬化症，肺纤维化，克罗恩病，溃疡性结肠炎，强直性脊柱炎和其它脊柱关节病。在一个实施方案中，本发明的抗体用于治疗或预防病理性病症，其选自关节炎，银屑病关节炎，全身性发作性幼年特发性关节炎(jia)，克罗恩病，炎症性肠病，溃疡性结肠炎，强直性脊柱炎和其它脊柱关节病，银屑病，化脓性汗腺炎，白塞病，类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮(sle)，哮喘，心肌炎，葡萄膜炎，特应性皮炎，血管炎，免疫介导的中枢和周围神经系统炎症性疾病例如多发性硬化和吉兰-巴雷综合征，其它自身免疫性疾病，骨质疏松症，骨吸收，痛风，结节病，干燥综合征和坏疽性脓皮病。在一个实施方案中，所述病理性病症是类风湿性关节炎。在一个实施方案中，所述病理性病症是克罗恩病。在一个实施方案中，所述病理性病症是溃疡性结肠炎。在一个实施方案中，所述病理性病症是葡萄膜炎。在一个实例中，本发明的抗体用于治疗炎性或免疫相关疾病。在一个实例中，所述炎性或免疫相关疾病选自类风湿性关节炎、克罗恩病和溃疡性结肠炎。本发明还提供用于治疗或预防疼痛、特别是与炎症相关的疼痛的本发明的抗体。本发明进一步提供了本发明的抗体分子在制备用于治疗或预防由tnf-α和il-17a和/或il-17f介导或与il-17a和/或il-17f水平增加相关的病理性病症的药物中的用途。优选地，所述病理性病症是上文所述的医学适应症之一。本发明进一步提供了本发明的抗体分子在制备用于治疗或预防疼痛、特别是与炎症相关的疼痛的药物中的用途。本发明的抗体分子可用于任何疗法中，其中期望降低人体或动物体内tnf-α和il-17a和/或il-17f的作用。tnf-α和il-17a和/或il-17f可以在体内循环，或者可以以位于体内的特定部位、例如炎症部位的不期望的高水平存在。本发明的抗体分子优选地用于控制炎性疾病、自身免疫疾病或癌症。本发明还提供治疗人或动物受试者的方法，所述人或动物患有由tnf-α和il-17a和/或il-17f介导的病症或处于该病症的风险中，该方法包括向所述受试者施用有效量的本发明的抗体分子。本发明的抗体分子还可以用于诊断，例如在体内诊断和对牵涉tnf-α和il-17a和/或il-17f的疾病状态的成像中。因此，提供了本公开的多特异性抗体，其用于治疗和使用它们治疗的方法中。在一个实施方案中，提供了用于纯化多特异性抗体(特别是本发明的抗体或片段)的方法。在一个实施方案中，提供了用于纯化多特异性抗体(特别是本发明的抗体或片段)的方法，包括下列步骤：以非结合模式进行阴离子交换色谱，使得杂质保留在柱上，且将抗体维持在未结合的级分中。例如，该步骤可以在ph约为6-8下进行。该方法还可以包含最初的捕获步骤，其使用例如在ph约为4-5下进行的阳离子交换色谱。该方法还可以由额外的色谱步骤组成，以确保将产物和方法相关杂质从产物流中适当拆分。纯化方法还可以由一个或多个超滤步骤组成，例如浓缩和渗滤步骤。预期如上述使用的纯化形式是指至少90％纯度，例如91、92、93、94、95、96、97、98、99％w/w或以上纯的。基本上不含内毒素通常是指内毒素含量为1eu/mg抗体产物或以下，例如0.5或0.1eu/mg产物。如果适合，基本上不含宿主细胞蛋白质或dna一般旨在是指宿主蛋白质和/或dna含量为400μg/mg抗体产物或以下，例如100μg/mg或以下，特别是20μg/mg。本发明的抗体分子还可以用于诊断，例如，在体内诊断和疾病状态的成像中。在一个实施方案中，提供了选择本发明多特异性蛋白质构建体的方法，包括：a)当v1或v2是对于指定的可变区对的dsscfv时，测定单体多特异性蛋白质的收率；b)当在(a)中测试的v1或v2无论哪一个是对于同样的可变区对的dsfv时，测定单体多特异性蛋白质的收率；和c)比较(a)和(b)中得到的单体收率并且选择具有最高单体收率的多特异性蛋白质。典型地，该方法步骤(a)和(b)中的“可变区对”是vh和vl对。通常，vh和vl一起形成抗原结合结构域v1或v2。因此，该方法允许待测试的vh和vl对作为本发明构建体中的dsscfv和dsfv，并且最多的单体构建体在步骤(c)中选择。典型地，在该方法的步骤(a)和(b)中，在纯化后、例如在亲和色谱后测定收率。单体收率抗原使用任意适合的方法、例如大小排阻色谱法测定。在本说明书上下文中的“包含”旨在是指包括。如果在技术上适合，则可以组合本发明的实施方案。实施方案在本文中被描述为包含某些特征/要素。本公开还扩展至由所述特征/要素组成或基本上由其组成的分开的实施方案。技术参考文献例如专利和申请通过引用并入本文。本文特别和明确引述的任意实施方案可以单独地或与一个或多个另外的实施方案组合形成放弃的基础。本公开进一步参考附图通过如下实施例中进行描述，其仅为示例性描述，其中：附图简述图1-7显示根据本发明抗体分子的氨基酸和核酸序列图8显示fab-2xdsscfv和fab-dsscfv-dsfv形式图9显示ca2109小鼠fab(fwk18fab)igg1(fwk18igg)的滴定曲线图10a显示用放线菌素-d/和人tnf-α和trybe18b或对照化合物enbrel处理的l929细胞的有代表性的细胞存活曲线。图10b显示用放线菌素-d/和食蟹猴tnf-α和trybe18b或对照化合物enbrel处理的l929细胞的有代表性的细胞存活曲线。图11显示trybe18b抑制小鼠中人tnf-α诱导的中性粒细胞增多。图12显示trybe18b抑制小鼠中合并的人tnf-α和人il-17a-诱导的中性粒细胞增多。图13显示不同批次的trybe18b的sdspage分析。图14显示trybe18b抑制体外中性粒细胞迁移。图15显示给予食蟹猴iv推注剂量的trybe18b后trybe18b的血清浓度。实施例实施例1:中和抗-人tnf-α可变区的分离：进行如下免疫接种以生成用于b细胞培养和抗体筛选的材料：用与小分子苯并咪唑化合物即化合物1预复合的人tnf-α的3次注射(shot)免疫接种5只spraguedawley大鼠(如wo2013/186229和pct/ep2015/074527中所述)。产生血清并在elisa中测试其与人tnf-α的结合。可测定滴度超过100,000稀释度，因此被认为可接受用于b细胞培养。使用类似于zubler等人(1985)和lightwood等人(2013)所述的方法制备b细胞培养物。简言之，将含有b细胞的脾细胞以每孔约5000个细胞的密度在带条形码的96孔组织培养板中在37℃、在5％co2气氛中培养7天，其中200μl/孔rpmi1640培养基(gibcobrl)，所述培养基补充有10％fcs(paalaboratoriesltd)，2％hepes(sigmaaldrich)，1％l-谷氨酰胺(gibcobrl)，1％青霉素/链霉素溶液(gibcobrl)，0.1％β-巯基乙醇(gibcobrl)，2-5％活化的脾细胞培养上清液和γ射线照射的鼠胸腺瘤细胞(5x104/孔)。在该项目期间筛选了超过7000万个b细胞。使用包被有作为靶抗原来源的生物素化的人tnf的10微米超级抗生物素蛋白(superavidin)聚合物珠(bangslaboratories)，使用基于均匀荧光的结合测定法测定b细胞培养物上清液中人tnf特异性抗体的存在。使用matrixplatemate液体处理器将10μl上清液从带条形码的96孔组织培养板转移到带条形码的384孔黑壁测定板中，所述测定板含有5000个包被的珠。用山羊-抗大鼠或小鼠iggfcγ-特异性cy-5缀合物(jackson)显示结合。在appliedbiosystems8200细胞检测系统上读板。或者，使用elisa测定鉴定阳性孔。用2μg/mltnf包被384孔elisa板，然后将10μlb细胞培养上清液加入到封闭的平板中。孵育1小时后，洗涤平板并用山羊抗-大鼠fc特异性hrp缀合物(jackson)显示结合。初步筛选后，使用avisoonyx命中-拾取机器人将阳性上清液固结(consolidated)到96孔带条形码的主板上，并在-80℃冷冻细胞培养板中的b细胞。然后在biacore测定中筛选主板以鉴定含有高亲和力抗体的孔。为了鉴定能够中和tnfα的生物活性的抗体，我们使用主板中的b细胞培养上清液进行基于细胞的tnfα报道分子测定。该测定使用hek-293-cd40-blue细胞(invivogen)，其被改造成响应于通过nfkb途径(包括人tnfα)操作的许多刺激而分泌碱性磷酸酶。含有抗体的上清液在该测定中以1:2.5的单一稀释度直接使用。选择含有高亲和力阻断抗体(在biacore中亚100pm并且在报道分子测定中显示>90％抑制)的孔用于进一步进展。为了从目标孔的选区中回收抗体可变区基因，必须进行去卷积(deconvolution)步骤以使得能够鉴定含有异质b细胞群的给定孔中的抗原特异性b细胞。这是使用荧光聚焦方法实现的。简言之，将来自阳性孔的分泌免疫球蛋白的b细胞与包被有生物素化的人tnf的链霉抗生物素蛋白珠(newenglandbiolabs)和1:1200最终稀释的山羊-抗大鼠fcγ片段特异性fitc缀合物(jackson)混合。在37℃静置孵育1小时后，由于b细胞周围存在荧光晕，可以鉴定抗原特异性b细胞。然后用eppendorf显微操作器挑选使用olympus显微镜鉴定的这些个体b细胞并将其沉积到pcr管中。通过使用重链和轻链可变区特异性引物的逆转录(rt)-pcr从单细胞中回收称为2102、2101、2109和2111的四种不同抗体的抗体可变区基因。在avisoonyx液体处理机器人上进行两轮pcr，嵌套2°pcr在3'和5'末端掺入限制性位点，允许将大鼠可变区克隆到小鼠γ1igg或fab(vh)或小鼠κ(vl)哺乳动物表达载体。使用fectin293(invitrogen)将重链和轻链构建体共转染到hek-293细胞中并且在48孔板中以1ml体积表达重组抗体。表达5-7天后，收获上清液并且使抗体进行进一步筛选。在hek-293-cd40-blue报道分析中以多种浓度筛选重组大鼠/小鼠嵌合体igg和fab分子，以使得能够计算ec50值并确定最大抑制百分比。测试fab片段以确保抗体在单价时是活性的。还在biacore实验中分析igg以确定对人tnf的结合亲和力。biacore实验的测定形式是通过固定的抗小鼠igg-fc捕获小鼠igg，然后在捕获的表面上滴定人tnf。使用biacoret200(gehealthcare)进行bia(双分子相互作用分析)。将fc片段特异性的affinipuref(ab')2片段山羊抗-小鼠igg(jacksonimmunoresearch)通过胺偶联化学固定在cm5传感器芯片上至～5000响应单位(ru)的水平。使用hbs-ep缓冲液(10mmhepesph7.4，0.15mnacl，3mmedta，0.05％表面活性剂p20，gehealthcare)作为运行缓冲液，流速为10μl/min。使用10μl的0.5μg/ml的小鼠igg注射用于通过固定化的抗小鼠igg-fc进行捕获。将人tnf以20nm两次注射到捕获的小鼠igg上，流速为30μl/min。通过以10μl/min的流速2×10μl注射40mmhcl并穿插5μl5mm注射naoh再生表面。使用t200评估软件(版本1.0)按照标准程序分析背景扣除的结合曲线。表4:抗体ec50(ng/ml)％抑制ka(1/ms)kd(1/s)kd(pm)ca2109igg0.311004.70e+061.19e-0425ca2109fab3.8100ndndnd使用hek-293-cd40-blue报道分析(invivogen)测定中和。显示ec50和％中和。进行biacore分析以确定结合动力学。显示结合速率(ka)、解离速率(kd)和亲和力常数(kd)。图9显示ca2109大鼠/小鼠fab(fwk18fab)igg1(fwk18igg)的滴定曲线。使用hek-293-cd40-blue报道测定(invivogen)测定的数据如上所述。如下表4a中所示，就人tnf(htnf)和食蟹猴tnf(ctnf)筛选如上所述分离的所有四种抗体(2101、2109、2111和2102)为大鼠/人嵌合fab的食蟹猴和人tnf交叉反应性。biacore实验的测定形式是通过固定的抗人f(ab')捕获大鼠/人嵌合fab，然后在捕获的表面上滴定人或食蟹猴tnf。使用biacoret200(gehealthcare)进行bia(双分子相互作用分析)。将山羊抗-人igg-f(ab')2片段特异性affinipuref(ab')2片段(jacksonimmunoresearch)通过胺偶联化学固定在cm5传感器芯片上至～5000响应单位(ru)的水平。使用hbs-ep缓冲液(10mmhepesph7.4，0.15mnacl，3mmedta，0.05％表面活性剂p20，gehealthcare)作为运行缓冲液，流速为10μl/min。使用10μl的0.5μg/ml大鼠/人嵌合体注射用于通过固定化的人igg-f(ab')2进行捕获。将人或食蟹猴tnf以30μl/min的流速注射到捕获的大鼠/人嵌合fab上(分别为5nm或3.125nm)。通过以10μl/min的流速2×10μl注射50mmhcl并穿插5μl5mm注射naoh再生表面。使用t200评估软件(版本1.0)按照标准程序分析背景扣除的结合曲线。表4a发现抗体2102对食蟹猴tnf具有低得多的亲和力。该抗体在人源化期间也丧失了亲和力，因此没有进一步发展该抗体。基于这项工作，由于其食蟹猴/人交叉反应性、高亲和力(表4)和强有力的中和活性(图9和表4)，ca2109被选为先导候选者。基于这些特性选择该抗体用于人源化。选择具有相似亲和力和中和特性的另外两种抗体用于与ca2109平行的人源化，这些抗体是2101和2111。然而，2101在人源化后未能保留对tnf的亲和力，因此没有进一步发展该抗体。抗体2109和抗体2111均成功进行了人源化，然后转化为scfv形式，并在l929tnf抑制测定(下文实施例6中描述的测定)中筛选以证实中和活性(表4b)。表4b正如从表4b中可以看出的，抗体2111在该测定中没有作为scfv保留活性，因此该抗体不适用于多特异性trybe抗体分子。仅抗体2109作为人源化scfv保留了食蟹猴-人交叉反应性、高亲和力和中和能力以及热稳定性。抗体ca2109的人源化在下文中更详细地描述。实施例2：抗-tnf-α抗体ca2109的人源化通过将互补决定区(cdr)移植到人种系框架上使抗体ca2109人源化。大鼠抗体(供体)序列与人种系(受体)框架与设计的人源化序列的比对如图6和7中所示。所选择的轻链种系受体序列是人vk12-1(u)a20v区+jk2j-区(vbase，http：//vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)。所选择的重链种系受体序列是人vh31-33-21v区+jh4j-区(vbase，http：//vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)。从供体移植到受体序列的cdr如kabat(kabat等人1987)所定义，但cdr-h1除外，其中使用组合的chothia/kabat定义。设计编码初始v-区序列的基因并通过entelechongmbh的自动合成方法构建，并通过寡核苷酸定向诱变进行修饰以产生移植形式gl1、gl18、gh1和gh2。将gl18基因序列亚克隆到ucbcelltech人轻链表达载体pmhckδ中，其含有编码人c-κ恒定区(km3同种异型)的dna。将gh2序列亚克隆到ucbcelltech表达载体pmhg1fab中，其含有编码人重链γ-1ch1恒定区的dna。为了保留完全活性和维持高热稳定性，保留了人源化重链的位于第48位(异亮氨酸)，第49位(甘氨酸)，第71位(缬氨酸)，第73位(赖氨酸)，第78位(丙氨酸)和第93位(苏氨酸)的供体残基(kabat编号)。类似地，保留了人源化轻链的第65位(苏氨酸)，第71位(酪氨酸)和第87位(苯丙氨酸)的供体残基(kabat编号)。此外，通过将第31位、第50位和第52位处的天冬酰胺残基分别突变为丝氨酸、天冬氨酸和丝氨酸来除去轻链中的3个脱酰胺位点。最终选择的可变移植物序列gl18和gh2显示在图6和7以及seqidno：91和92中。在以下实施例中，对抗体2109的任何提及是指这些人源化序列而不是原始的大鼠亲本序列。实施例3:fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645质粒的构建和在哺乳动物细胞中的表达先前已在wo2008/047134和wo2012/095662中描述了针对人il-17a和人il-17f的抗体ca028_00496.g3(在本文中也称为抗体496.g3)的产生。该抗体以pm亲和力结合人il-17a、il-17f和il-17a/f异二聚体。抗体496.g3的fab形式的cdr、重链和轻链可变区的氨基酸和编码dna序列示于图1中。496.g3(il-17a/f结合)fab恒定区包含人c-κ恒定区(k1m3同种异型)和人γ-1ch1恒定区和铰链(g1m17同种异型)。先前已在wo2013/068571中描述了抗-人白蛋白抗体645的产生。抗体645的cdr、重链和轻链可变区、scfv和dsscfv形式的氨基酸和编码dna序列示于图3中。抗-tnf抗体2109的产生如上所述并且抗体2109的cdr、重链和轻链可变区、scfv和dsscfv形式的氨基酸和编码dna序列示于图2中。抗体2109和抗体645的dsscfv各自包含使用kabat编号系统的残基44(重链)与100(轻链)之间稳定的二硫键。抗体645hl的dsscfv通过11个氨基酸的轻链接头(sggggsggggs)与抗体496.g3的fabcκ片段连接，且抗体ca2109hl的dsscfv通过11个氨基酸的重链接头sggggtggggs[在本文中也称为s，2xg4s](seqidno：2)或sggggtggggs[在本文中也称为s，g4t，g4s](seqidno：1)与抗体496.g3的fabch1片段连接。产生的抗体形式在图8中示例为2xdsscfv并且在本文中称为trybe。瞬时表达用于表达fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：127)(具有连接fabhc和dsscfv2109的接头sggggtggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc和dsscfv645的接头sggggsggggs)。编码整个轻链和重链fab片段的基因从质粒中进行限制性克隆，所述质粒先前在密码子水平上优化以用于在大肠杆菌中表达。从ptrybehc#1切下编码645dshlscfv的agei-ecori基因片段并克隆到ped489中以在ucb内部表达载体pnafh(dhami,2012)中产生“轻链单基因载体”496.g3lc-645dshlscfv。编码2109dshlscfv的dna(bspei-ecori片段)通过dna2.0合成并克隆到ptrybehc#1(dhami，2012)中以在ucb表达载体pnafl(dhami,2012)中产生“重链单基因载体”496.g3fab-2109dshlscfv。在hek293细胞中瞬时共表达两种单基因载体后，从细胞培养上清液纯化包含具有重链接头sggggtggggs的fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645的trybe蛋白。纯化的trybe显示出高水平的单体(89％)和高的热稳定性(tm71℃)，且由此将其发展用于稳定细胞系的产生。稳定表达用于从生产量水平约为1g/l和约70％单体的哺乳动物cho细胞系表达fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：125)(具有连接fabhc至dsscfv2109的接头sggggsggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc至dsscfv645的接头sggggsggggs)，其在本文中也称为抗体分子trybe18b。进行下游纯化过程以产生纯化的trybe18b。实施例4fab496.g3-(hc)dshlscfv2109(lc)dshlscfv645(trybe18b)的抗原靶标的biacore亲和力和同时结合按照下述方法测试包含fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：125)(具有连接fabhc至dsscfv2109的接头sggggsggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc至dsscfv645的接头sggggsggggs)的抗体分子对人tnf-α、人il-17a、il-17f和人血清白蛋白的亲和力，该抗体分子在本文中也称为抗体分子trybe18b，其根据实施例3中的方法制备：测定形式是通过固定的抗人igg-f(ab')2捕获trybe18b，然后在捕获的表面上滴定人tnf，人il-17a，人il-17f和人血清白蛋白。使用biacoret200(gehealthcare)进行bia(双分子相互作用分析)。将f(ab')2片段特异性affinipuref(ab')2片段山羊抗-人igg(jacksonimmunoresearch)通过胺偶联化学固定在cm5传感器芯片上至～5000响应单位(ru)的捕获水平。使用hbs-ep缓冲液(10mmhepesph7.4，0.15mnacl，3mmedta，0.05％表面活性剂p20，gehealthcare)作为运行缓冲液，流速为10μl/min。使用10μl的0.5μg/ml的trybe18b注射用于通过固定的抗人igg-f(ab')2捕获。以不同浓度(分别为5nm-0.15625nm，5nm-0.15625nm，10nm-0.3125nm和100nm-3.125nm)将人tnf，人il-17a，人il-17f和has对捕获的trybe18b进行滴定，流速为30μl/min。通过以10μl/min的流速2×10μl注射50mmhcl并穿插5μl5mm注射naoh再生表面。使用t200评估软件(版本1.0)按照标准程序分析背景扣除结合曲线。从拟合算法确定动力学参数。结果如表5所示。表5进行进一步的测定以测定抗体分子trybe18b对食蟹猴tnf、食蟹猴il-17a、食蟹猴il-17f和食蟹猴白蛋白的结合。测定形式是通过固定的抗-人igg-f(ab')2捕获trybe18b，然后在捕获的表面上滴定食蟹猴tnf、il-17a、il-17f和白蛋白。使用biacoret200(gehealthcare)进行bia(双分子相互作用分析)。将f(ab')2片段特异性的affinipuref(ab')2片段山羊抗-人igg(jacksonimmunoresearch)通过胺偶联化学固定在cm5传感器芯片上至～5000响应单位(ru)的捕获水平。使用hbs-ep缓冲液(10mmhepesph7.4，0.15mnacl，3mmedta，0.05％表面活性剂p20，gehealthcare)作为运行缓冲液，流速为10μl/min。使用10μl的0.5μg/ml的t1ybe18b注射用于通过固定的抗人igg-f(ab')2捕获。对捕获的trybe18b以不同浓度(分别为5nm-0.15625nm，10nm-0.3125nm，40nm-1.25nm和100nm-3.125nm)滴定食蟹猴tnf、il-17a、il-17f和白蛋白，流速为30μl/min。通过以10μl/min的流速2×10μl注射50mmhcl并穿插5μl5mm注射naoh再生表面。使用t200评估软件(版本1.0)按照标准程序分析背景扣除的结合曲线。从拟合算法确定动力学参数。结果如表6所示。表6评估人il-17a、人tnf和人血清白蛋白与trybe18b的同时结合。将trybe18b构建体通过固定的抗-人igg-f(ab')2捕获到传感器芯片，然后将仅hil-17a，仅htnf，仅hsa或hil-17a、htnf和hsa的混合溶液分别对捕获的trybe18b滴定。使用biacoret200(gehealthcare)进行bia(双分子相互作用分析)。如上述对结合人tnf、il-17a、il-17f和hsa的trybe18b的biacore动力学的方法中所述，将trybe18b构建体捕获至传感器芯片表面。对捕获的trybe18b分别滴定100nmhsa，20nmhil-17a，20nmhtnf或具有终浓度为100nmhsa，20nmhil-17a，20nmhtnf的混合溶液。合并的hil-17a/htnf/hsa溶液的结合响应等于独立注射的响应之和，如表7所示。这证实了trybe18b能够同时结合人il-17a、人tnf和hsa。表7进行进一步的测定以测定食蟹猴il-17a、tnf和白蛋白与trybe18b的同时结合。通过固定的抗-人igg-f(ab')2将trybe18b构建体捕获到传感器芯片，然后将仅食蟹猴il-17a、仅食蟹猴tnf、仅食蟹猴hsa或食蟹猴il-17a、tnf和白蛋白的混合溶液分别对捕获的trybe18b进行滴定。使用biacoret200(gehealthcare)进行bia(双分子相互作用分析)。如上述对结合食蟹猴tnf、il-17a、il-17f的trybe18b的biacore动力学的方法中所述，将trybe18b构建体捕获至传感器芯片表面。对捕获的trybe18b分别滴定100nmcsa、20nm食蟹猴il-17a、20nm食蟹猴tnf或具有终浓度为100nmhas、20nm食蟹猴il-17a、20nm食蟹猴tnf的混合溶液。如表8所示，合并的食蟹猴il-17a/食蟹猴tnf/csa溶液的结合响应等于独立注射的响应之和。这证实了trybe18b能够同时结合食蟹猴il-17a、食蟹猴tnf和csa。表8实施例6fab496.g3-(hc)dshlscfv2109(lc)dshlscfv645(trybe18b)对tnf(人和食蟹猴)的体外基于细胞的活性在体外细胞测定中测试包含fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：125)(具有连接fabhc至dsscfv2109的接头sggggsggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc至dsscfv645的接头sggggsggggs)的抗体分子对人tnf-α的活性，所述抗体分子在本文中也称为抗体分子trybe18b，其根据实施例3中的方法产生。l929细胞系是鼠纤维肉瘤细胞系，其对tnf-α的细胞毒性作用敏感。tnf通过结合人、食蟹猴或鼠tnf-α的tnf受体刺激以诱导细胞凋亡。用增加对tnf-α杀伤的易感性的放线菌素d共同处理细胞。用放线菌素d/tnf-α和trybe18b处理后l929细胞的活力通过荧光素酶反应(celltiter-glo，promega)检测atp水平(随生存力降低而降低)来确定。在1小时的预孵育后，在384孔平底板中30μl终体积中，在trybe18b(浓度范围8.12e-9m至1.23e-13m)或对照化合物enbrel(浓度范围1.3e-9m至2e-14m)的存在下，用2.35μg/ml放线菌素d和以100pg/ml的人tnfα处理l929细胞。在37℃、5％co2下24小时后，通过celltiter-glo(promegaltd)测定细胞生存力。图10a显示用放线菌素d/和人tnf-α和trybe18b或对照化合物enbrel处理的l929细胞的有代表性的细胞存活曲线。在1小时的预孵育后，在384孔平底板中30μl终体积中，在trybe18b(浓度范围8.12e-9m至1.23e-13m)或对照化合物enbrel(浓度范围1.3e-9m至2e-14m)存在下，也用2.35μg/ml放线菌素d和20pg/ml的食蟹猴tnfα处理l929细胞。在37℃、5％co2下24小时后，通过celltiter-glo(promegaltd)测定细胞存活力。图10b显示用放线菌素d/和食蟹猴tnf-α和trybe18b或对照化合物enbrel处理的l929细胞的有代表性的细胞存活曲线。当用人或食蟹猴tnf-α刺激时，trybe18b能够以剂量依赖的方式完全抑制tnf-α的杀伤作用；平均ec505.87pm(人，n＝3)和平均ec504.97pm(食蟹猴，n＝2)。trybe18b不与小鼠tnf交叉反应，且因此不抑制鼠tnf-α的杀伤作用(n＝3)。实施例7fab496.g3-(hc)dshlscfv2109(lc)dshlscfv645(trybe18b)对il-17a和il-17f的体外基于细胞的活性在体外细胞测定中测试包含fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：125)(具有连接所述fabhc至dsscfv2109的接头sggggsggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc至dsscfv645的接头sggggsggggs)的抗体分子对人和食蟹猴il-17a和f的活性，所述抗体分子在本文中也称作抗体分子trybe18b，其根据实施例3中的方法产生。il-17a和il-17f与il-1β组合诱导鼠成纤维细胞系nih3t3释放il-6。这形成了测定系统的基础，其中测试抗-il-17a和抗-il-17f分子的中和能力。将wo2012/095662中描述的trybe18b或抗-il17a/f抗体ca028_00496.g3(浓度范围5000ng/ml至19.5ng/ml)与重组人il-17a(30ng/ml)和重组人il-1β(50pg/ml)一起在37℃预孵育4hr。然后将trybe/抗体蛋白复合物转移到96孔平底板中的nih-3t3细胞中。在37℃、5％co2、100％湿度下孵育3天后，收集无细胞上清液，并通过msd测定il-6的水平。将trybe18b或抗il17a/f抗体ca028_00496.g3(浓度范围5000ng/ml至19.5ng/ml)与重组人il-17f(300ng/ml)和重组人il-1β(50pg/ml)一起在37℃下预孵育4小时。然后将trybe/抗体蛋白复合物转移到96孔平底板中的nih-3t3细胞中。在37℃、5％co2、100％湿度下孵育3天后，收集无细胞上清液，并通过msd测定il-6的水平。将trybe18b或抗-il-17a/f抗体ca028_00496.g3(浓度范围5000ng/ml至19.5ng/ml)与重组食蟹猴il-17a(30ng/ml)的和重组人il-1β(50pg/ml)一起在37℃下孵育4小时。然后将trybe/抗体蛋白复合物转移到96孔平底板中的nih-3t3细胞中。在37℃、5％co2、100％湿度下孵育3天后，收集无细胞上清液，并通过msd测定il-6的水平。将trybe18b或抗-il17a/f抗体ca028_00496.g3(浓度范围5000ng/ml至19.5ng/ml)与重组cynoil-17f(300ng/ml)和重组人il-1β(50pg/ml)一起在37℃预孵育4小时。然后将三体/抗体蛋白质复合物转移到96孔平底板中的nih-3t3细胞中。在37℃、5％co2、100％湿度下孵育3天后，收集无细胞上清液，并通过msd测定il-6的水平。将trybe18b或抗-il17a/f抗体ca028_00496.g3(浓度范围5000ng/ml至19.5ng/ml)与重组cynoil-17f(300ng/ml)和重组人il-1β(50pg/ml)一起在37℃预孵育4小时。然后将三体/抗体蛋白质复合物转移到96孔平底板中的nih-3t3细胞中。在37℃、5％co2、100％湿度下孵育3天后，收集无细胞上清液，并通过msd测定il-6的水平。在nih3t3生物测定中，trybe18b以浓度依赖性方式抑制人和食蟹猴(cyno)il-17a和il-17f诱导的il-6释放(数据未显示)。trybe18b具有与对照抗体ca028_00496.g3相当的效能(数据未显示)。实施例8fab496.g3-(hc)dshlscfv2109(lc)dshlscfv645(trybe18b)对tnf-α的体内活性在体内测定中测试包含fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：125)(具有连接fabhc至dsscfv2109的接头sggggsggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc至dsscfv645的接头sggggsggggs)的抗体分子以测试tnf-α的抑制，所述抗体分子在本文中也称为抗体分子trybe18b，其根据实施例3中的方法制备。在小鼠中腹膜内施用外源性人tnfα引起与中性粒细胞增多相关的局部炎症反应。这种反应很大程度上是通过激活小鼠tnf受体i(tnfri)和随后nf-κb介导的转录后中性粒细胞趋化因子的释放引起的。这种人tnfα诱导的中性粒细胞增多的模型能够用于确定trybe18b在独立于人il-17a/f的生理系统中对人tnfα的体内功效和效能。由于人tnfα是该模型中唯一的炎症刺激物，因此推定用trybe18b预防性治疗会抑制人tnfα诱导的腹膜中性粒细胞增多。用pbs或递增浓度的trybe18b(0.1、1或10mg/kg)静脉内处理balb/c小鼠。pbs或trybe18b处理后1小时，用pbs或人tnfα(0.3μg/kg)腹膜内攻击小鼠。4小时后，人道处死小鼠并收集腹膜灌洗液用于通过流式细胞术评估中性粒细胞增多。结果是n＝8/组的平均值(+/-sem)。使用单向anova和dunnett’spost检验计算统计学比较(****＝p≤0.0001)。图11显示trybe18b能够以剂量依赖性方式抑制人tnfα诱导的中性粒细胞增多，其在1和10mg/kg几乎完全消除了反应(分别为96％和100％抑制)。由于在该系统中没有人il-17a/f，所以这表明trybe18b的抗人tnfαdsscfv在体内是有效的和强有力的。实施例9fab496.g3-(hc)dshlscfv2109(lc)dshlscfv645(trybe18b)对tnf-α和il-17a的体内活性在体内测定中测试包含fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：125)(具有连接fabhc至dsscfv2109的接头sggggsggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc至dsscfv645的接头sggggsggggs)的抗体分子以测试tnf-α和il-17a的抑制，所述抗体分子在本文中也称为抗体分子trybe18b，其根据实施例3中的方法制备，。重要的是显示trybe18b抗体能够抑制由同时存在的两种细胞因子引起的生物反应。先前的研究已经表明，人tnfα和il-17a的组合在体内产生的协同中性粒细胞反应大于单独刺激的总和。因此，针对人tnfα与人il-17a组合测试trybe18b的体内功效和效能。为了进一步区分人tnfα和人il-17a在该模型中的协同作用，使用针对人tnfα(101.4)和人il-17a/f(抗体ca028_00496.g3)的单特异性抗体。用pbs、抗体ca028_00496.g3(30mg/kg)，101.4(30mg/kg)或递增浓度的trybe18b(0.1、1或10mg/kg)静脉内处理balb/c小鼠。抗体施用后1小时，用pbs、人il-17a(10μg/kg)、人tnfα(0.3μg/kg)或人il-17a(10μg/kg)与人tnfα(0.3μg/kg)的组合腹膜内攻击小鼠。4小时后，人道处死小鼠并收集腹膜灌洗液用于通过流式细胞术评估中性粒细胞增多。结果是n＝8/组的平均值(+/-sem)。使用单向anova和dunnett’spost检验计算统计学比较(*＝p≤0.05,**＝p≤0.01＝***＝p≤0.001＝****＝p≤0.0001)。图12显示人il-17a与人tnfα组合的腹膜内施用诱导比单独施用的任一刺激的总和大得多的局部中性粒细胞反应。此外，在该模型中抑制人tnfα(使用过量的抗-tnfα抗体101.4)将合并的il-17a/tnfα诱导的反应降低至与单独施用il-17a后观察到的相似的水平。类似地，人il-17a/f的抑制(使用过量的抗体ca028_00496.g3)仅能抑制合并的il-17a/tnfα诱导的反应至单独tnfα施用后观察到的相同水平。相反，trybe18b能够以剂量依赖性方式抑制il-17a/tnfα诱导的中性粒细胞增多，达到低于抗体ca028_00496.g3或101.4所实现的水平(10mg/kgtrybe18b时96％抑制vs.30mg/kg101.4和抗体ca028_00496.g3分别为81％和67％抑制)。总之，该数据表明trybe18b能够在体内模型中同时抑制人tnfα和人il-17a。实施例10fab496.g3-(hc)dshlscfv2109(lc)dshlscfv645(trybe18b)的生物物理学表征在生物物理学表征实验中测试包含fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：125)(具有连接fabhc至dsscfv2109的有接头sggggsggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc至dsscfv645的接头sggggsggggs)的抗体分子(其在本文中也称为抗体分子trybe18b，其根据实施例3中的方法产生)和包含fab496.g3-(hc)dsscfv(hl)2109(seqidno：127)(具有连接fabhc和dsscfv2109的接头sggggtggggs)和fab496.g3-(lc)dsscfv(hl)645(seqidno：131)(具有连接fablc和dsscfv645的接头sggggsggggs)的抗体分子(其在本文中也称为抗体分子trybe18t，其根据实施例3中的方法产生)。分析了三批抗体分子(参见表9)。本研究导致确定了trybe18b分子的整体生化和生物物理学特征。另外，分析从亲本trybe18b分子差异洗脱的稳定批次2的纯化的级分(a3)以确认身份并因此能够解释trybe18b分子的预料不到的杂质和/或生物物理学特征。表9用于生物物理学表征的trybe18b的批次样品浓度(mg/ml)瞬时批次trybet(瞬时)4.6稳定批次1trybe18b(小库lp10)2.64稳定批次2trybe18b(小库mp77)14.18通过大小排阻hplc(sechplc)(数据未显示)和sdspage(在非还原和还原条件下)图13确定批次的纯度。正如通过sechplc判断的，所有样品在相同的保留时间洗脱，具有低于2.2％的高分子量物质(瞬时批次：0.56％；稳定批次1：0.59％；稳定批次2：2.2％)。瞬时样品含有如通过晚于主峰洗脱的宽峰所示的低分子量污染物。图13显示使用sdspage4-20％novextris/甘氨酸(invitrogen)对不同批次的trybe18b的sdspage分析。在(a)非还原(+n-乙基马来酰亚胺(nem)和(b)还原条件下的分析。泳道1＝看到blueinvitrogenmarkers；泳道2＝a3(来自稳定批次2的纯化级分)；泳道3＝瞬时批次；泳道4＝稳定批次1；泳道5＝稳定批次2。所有三个批次通过sdspage显示相似的纯度水平，其中条带在～130kda(在非还原条件下)(其归因于完全组装的二硫化物配对抗体分子)和在～50kda的双峰(在还原条件下)(其与相应还原的重链和轻链一致)。在非还原条件下，存在一个～50kda的带，其相当于用a3(泳道2)观察到的带。通过完整的质谱分析(50.8kda)和n末端测序(主要是轻链)证实a3是被半胱氨酸封端的轻链。目标样品在50kda(非还原凝胶)的带被认为是轻链，因为质谱分析没有分辨出任何重链。随后通过从ponseaus染色的印迹中切下的条带的n末端测序分析证实了这一点；仅分辨出轻链n末端(aiqltqspss.)。pi测量：方法1：30μl1mg/ml蛋白质样品，0.35％甲基纤维素，4％ph3-10两性电解质(pharmalyte)，1μl每种合成pi标志物(4.65和9.77)和hplc级水以构成最终体积至100μl。然后使用ice3ief分析仪(proteinsimple)，在1500v下预聚焦1分钟，然后在3000v下聚焦5分钟分析混合物。然后使用empower软件(来自waters)整合校准的电泳图。方法2：30μl2mg/ml蛋白质样品，105μl1％甲基纤维素，12μlph3-8两性电解质(pharmalyte)，1.5μl每种合成pi标志物(4.65和9.77)和hplc级水以构成最终体积至300μl。然后使用如方法1的ice3分析混合物。所有批次的trybet和18b的实验pi都很高(范围9.2-9.4)并且因此在预期的制剂ph(～ph5)下不太可能具有近似零的总分子电荷(此时存在增加的聚集风险)。发现级分a3的pi主要是8.31(48.6％)。分子稳定性：通过解链温度(tm)(解折叠的测量值)和搅拌效果(通过物理应力然后聚集而解折叠)测量分子稳定性。通过差示扫描量热法(dsc)对所有批次的trybet和18b进行tm分析可以区分两个主要结构域。较低的解折叠事件归因于2109scfv。缓冲剂种类和ph显然不影响解链温度。尽管不容易区分不同的结构并，thermofluor测定产生tm值(其中观察到的)，其类似于衍生自dsc分析得到的值。对于稳定批次1和稳定批次2，只有较高的解折叠结构域是明显的。有可能辨别出瞬时批次的更早的解折叠转变(48-50℃)，这可能归因于存在过量的轻链。表10通过差示扫描量热法(dsc)和thermofluor测定法推导tm：所有trybe18b分子显示出比igg4分子更低的初始解折叠事件(～68℃)nd表示未进行分析(归因于材料的可用性)总之，从上述分析可以明显看出，三个批次的trybet和18b之间没有显著性差异。trybe18b具有高pi，但与常规形式(igg和fab'分子)相比表现出适度低的tm，其显然由分子的2109scfv成分的cdr控制。所有批次都含有过量的轻链，这可能导致观察到的异质性/不稳定性，然而，这可以通过纯化除去。实施例11fab496.g3-(hc)dshlscfv2109(lc)dshlscfv645(trybe18b)对il-17a和il-17f的体外基于细胞的活性除il-17a和il-17f同种型之外，tnfα也是th17细胞产生的关键细胞因子，并且已知间接地通过激活非造血组织例如关节的滑膜细胞诱导中性粒细胞的募集。在本研究中，将trybe18b在中性粒细胞迁移的复杂体外模型中的功效与组合的靶向il-17af的个体抗体和靶向tnfα的enbrel进行比较。ra滑膜细胞的活化：第1天：将培养的ra滑膜细胞(第6代)以每孔104个细胞接种在24孔transwell板的下室中，并在37℃下孵育24小时。第2天：在接下来的一天，用il-17a(抗体497，如wo2008/001063中所述)或il-17f或il-17af(抗体ca028_00496.g3)特异性抗体与或不与另外的抗-tnfα中和enbrel预先封闭(1小时室温)的th17细胞(ewbe-037388)衍生的上清液(1:10稀释)活化滑膜细胞。还将th17与阴性对照a33igg或trybe18b预孵育以中和il-17a+f和tnfα。在总体积为0.5ml的对照或刺激培养基中进行培养。测试的所有抗体均过量(10μg/ml)，以完全中和th17上清液中存在的靶细胞因子。然后在迁移测定之前将刺激的成纤维细胞再孵育24小时。中性粒细胞迁移测定：第3天：为了从人全血中分离人白血细胞(白细胞)，将40mlack裂解缓冲液与10ml人血在室温下混合10分钟以有效裂解rbc。然后将白细胞以400g旋转10分钟，并进一步在20mlpbs中洗涤两次，然后以106个细胞/ml重悬于普通rpmi培养基(gibco)中进行计数。将5x105个白细胞(0.5ml)接种到transwell的上室并在37℃下孵育6小时。将通过3.0μm可渗透膜迁移到下室中的白细胞分离并用抗-人cd18特异性抗体(ebioscience)标记30分钟(冰上2μl/测试)以鉴定中性粒细胞。然后将抗体染色的样品在磷酸盐缓冲盐水(pbs)ph7.4中洗涤一次，之后在bdlsriifortessax20细胞计数分析仪上进行facs采集。将所有样品重悬于200μl掺有sigma参比珠的pbs中。使用具有dunnetpost检验的单向anova，使用igg(-抗-tnfα)作为比较物进行统计学分析。使用trybe18b或il-17同种型特异性和tnfα阻断抗体，能够确定il-17和tnfα在复杂的临床前体外测定中调节人中性粒细胞迁移的个体和集体影响。使用来自th17细胞的上清液激活的ra滑膜细胞显著增加中性粒细胞的趋化反应(图14)。相对于同种型匹配的阴性对照，特异性il-17a阻断显著抑制中性粒细胞迁移。仅在ra滑膜细胞活化之前在th17上清液中中和il-17f不改变中性粒细胞迁移能力。相反，双重抑制il-17a和il-17f比仅抑制il-17a更大程度地抑制中性粒细胞迁移。使用enbrel预阻断tnfα也对中性粒细胞趋化性具有显著影响，其进一步受到另外的il-17同种型特异性中和抗体的抑制。重要的是，使用trybe18b对il-17a、il-17f和tnf的三重特异性阻断表现出与使用分开的抗体中和这些细胞因子相似的中性粒细胞迁移抑制。在本研究中，我们证明，无论是利用单独的阻断(抗-il-17af+enbrel)或是通过使用trybe18b的三重特异性阻断，通过中和il-17af和tnfα实现了中性粒细胞迁移的最佳抑制。实施例12trybe18b体内药代动力学(pk)分析给4只雄性食蟹猴施用10mg/kg静脉内(iv)推注剂量的trybe18b并且在选定间隔收集血清样品28天。使用免疫测定分析样品的trybe18b浓度，证实il17a/f和tnf结合区的存在。进行两个区室pk分析。trybe18b的血清浓度与大分子量蛋白质一致，具有与fcrn结合并被其再循环的能力(图15)。此属性由其白蛋白结合域赋予trybe18b。trybe18biv给药后的初始浓度与具有与血浆体积相似的中央区室体积的分子一致。浓度以双指数方式下降，终末(β)半衰期约为5.6天(表11)。终末半衰期缓慢与trybe18b的相对缓慢的清除一致；与fcrn的结合和被其再循环一致。缓慢清除还表明trybe在体内的稳定性，因为分子的任何结合成分的显著切割将表现为表观清除率增加。表11.给食蟹猴iv剂量后trybe18b的估计的pk参数。cl＝清除率cmax＝最大血清浓度sd＝标准偏差。序列表<110>ucb生物制药私人有限公司<120>对tnf-α、il-17a和il-17f具有特异性的多特异性抗体分子<130>pf0054-wo<150>gb1522391.0<151>2015-12-18<160>147<170>patentinversion3.5<210>1<211>11<212>prt<213>artificialsequence<220><223>peptidelinker<400>1serglyglyglyglythrglyglyglyglyser1510<210>2<211>11<212>prt<213>artificialsequence<220><223>peptidelinker<400>2serglyglyglyglyserglyglyglyglyser1510<210>3<211>8<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>3asplysthrhisthrcysalaala15<210>4<211>11<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>4asplysthrhisthrcysproprocysproala1510<210>5<211>18<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>5asplysthrhisthrcysproprocysproalathrcysproprocys151015proala<210>6<211>25<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>6asplysthrhisthrcysproprocysproalathrcysproprocys151015proalathrcysproprocysproala2025<210>7<211>30<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>7asplysthrhisthrcysproprocysproalaglylysprothrleu151015tyrasnserleuvalmetseraspthralaglythrcystyr202530<210>8<211>31<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>8asplysthrhisthrcysproprocysproalaglylysprothrhis151015valasnvalservalvalmetalagluvalaspglythrcystyr202530<210>9<211>15<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>9asplysthrhisthrcyscysvalglucysproprocysproala151015<210>10<211>26<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>10asplysthrhisthrcysproargcysprogluprolyssercysasp151015thrproproprocysproargcysproala2025<210>11<211>11<212>prt<213>artificialsequence<220><223>hingelinker<400>11asplysthrhisthrcysprosercysproala1510<210>12<211>7<212>prt<213>artificialsequence<220><223>flexiblelinker<400>12serglyglyglyglyserglu15<210>13<211>6<212>prt<213>artificialsequence<220><223>flexiblelinker<400>13asplysthrhisthrser15<210>14<211>6<212>prt<213>artificialsequence<220><223>flexiblelinker<400>14serglyglyglyglyser15<210>15<211>11<212>prt<213>artificialsequence<220><223>flexiblelinker<400>15serglyglyglyglyserglyglyglygl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