标签GST的一种不可逆亲和标记试剂及应用的制作方法

技术特征：

1.N-(对甲氧基苯氧乙基)-(N-对位取代酰胺基苯甲酰基)甘氨酸类标签GST的单价不可逆亲和标记试剂，其与标记活性对应的显著结构特点是包括至少四种功能基，其对应作用在于：

(1)引导亲和标记试剂进入活性位点疏水腔的对甲氧基苯氧乙基，也称为疏水定位基；

(2)与活性中心附近巯基、胺基发生亲核取代反应的修饰基团，包括但不限于1-卤代乙酰基、丙烯酰基、N-烷基马来酰亚胺基、乙烯磺酰基；

(3)将亲和标记试剂偶联到微纳米材料表面的偶联功能基，包括但不限于甘氨酸、β-氨基丙酸，γ-氨基丁酸、6-氨基戊酸，以其羧基与材料表面氨基偶联；

(4)疏水定位、修饰功能基及偶联功能基之间的连接骨架功能基，包括但不限于对氨基苯甲酰基、6-氨基己酰基、γ-谷氨酰基、及对氨基苯甲酰基的氨基与所述氨基酸形成的酰胺衍生物，以其氨基与修饰基团相连而酰基与偶联基团的氨基相连。

2.据权利要求1所述(N-对甲氧基苯氧乙基)-(N-对位取代酰胺基苯甲酰基)甘氨酸类标签GST单价不可逆亲和标记试剂，其应用特征在于经微纳米材料表面氨基与单价标记试剂偶联功能基中羧基成酰胺键偶联后用于亲和标记固定化GST融合蛋白，使亲和标记试剂疏水定位基进入GST活性位点疏水腔，借助连接基团的柔韧性，使修饰基团能对活性中心附近巯基或氨基能实现共价修饰，从而实现对GST不可逆亲和标记。

3.据权利要求1所述(N-对甲氧基苯氧乙基)-(N-对位取代酰胺基苯甲酰基)甘氨酸类标签GST的单价不可逆亲和标记试剂，其特征在于：所述单价不可逆亲和标记试剂，通过偶联功能基中羧基与二乙基三胺或二丙基三胺的末端伯氨基缩水成双酰胺，转变成能同时结合到GST两个活性中心的二价不可逆亲和标记试剂，以其亚氨基为偶联基团或该亚胺基与丁二酸酐或戊二酸酐反应所得羧基为偶联基团对应与材料表面羧基或氨基偶联。

4.据权利要求1所述(N-对甲氧基苯氧乙基)-(N-对位取代酰胺基苯甲酰基)甘氨酸类标签GST的单价不可逆亲和标记试剂，及其衍生的二价不可逆亲和标记试剂，与微纳米材料偶联过程有如下特征：非蛋白类微纳米材料与相对于表面可反应基团过量的标记试剂在包括但不限于N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙腈中经脱水缩合成酰胺偶联得亲和标记试剂偶联微纳米材料；对蛋白类微纳米材料，先将亲和标记试剂在所述溶剂中用水溶性活化剂包括但不限于1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺加N-羟基琥珀酰亚胺活化，再加蛋白微纳米材料偶联。

5.据权利要求1所述(N-对甲氧基苯氧乙基)-(N-对位取代酰胺基苯甲酰基)甘氨酸类标签GST的单价不可逆亲和标记试剂，及其衍生的二价不可逆亲和标记试剂，与微纳米材料偶联后，对GST或其融合蛋白的固定化及封闭过程有如下特征：在缓冲液中加入相对于亲和标记试剂偶联微纳米材料表面反应官能团过量的GST或其融合蛋白进行不可逆亲和标记；再用过量单价标记试剂封闭固定化GST中的未修饰活性中心；最后用过量半胱氨酸、谷胱甘肽、巯基乙醇、巯基乙酸、巯基乙磺酸之一或其混合物，将偶联在微纳米材料表面的剩余亲和标记试剂转变成亲水基团；以避免功能化材料对疏水小分子的结合。