本发明属于化学提取分离
技术领域：
，具体涉及一种白毛夏枯草有效物质提取方法。
背景技术：
：白毛夏枯草，又名金疮小草、筋骨草，是唇形科植物筋骨草的全株。药味苦甘，药性偏寒，具有止咳化痰、清热、凉血、消肿、解毒等作用，能够治疗气管炎、吐血、赤痢、淋病、咽喉肿痛、疔疮、痈肿等。生长于路旁、河岸、山脚下、荒地上，分布几遍全国，是一种常见的中草药。白毛夏枯草含有新克罗烷又萜类、黄酮类和甾体类等化学成分，从中能够提取出木犀草素、克罗烷二萜和杯苋甾酮等有效成分，但由于缺乏高效的提取、纯化方法，这种资源丰富的中药材一直没有得到充分的利用。技术实现要素：本发明的目的是提供一种高效的白毛夏枯草有效物质提取方法。为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳；抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出；切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为7％～9％。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4～6cm，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎。溶剂提取：在提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠，将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡40～50min；对药材和溶剂进行超声处理后，加热回流并减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏。分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、醋酸丁酯和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为2～4：1，用醋酸丁酯和石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1；然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，得到高纯度克罗烷二萜；将醋酸丁酯部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化得到木犀草素；将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，经高效液相色谱柱纯化得到杯苋甾酮。优选的：所述的微波灭菌的微波频率为2000～2500MHz，时间为40～60s。优选的：所述的低温粉碎的温度为-50～-80℃，粉碎粒度为100～200目。优选的：所述的提取溶剂为体积分数为55％～65％的乙醇，提取溶剂与药材的质量比为5～8:1。优选的：所述的提取溶剂中，十二烷基磺酸钠的质量百分数为0.9％～1.2％。优选的：所述的超声功率为400～500W，时间为120s～180s。优选的：所述的加热回流选用体积分数为60％的乙醇，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间2～2.5h。优选的：所述的丁酮部分洗脱过柱洗脱剂比例为乙酸乙酯：正己烷＝7:5。优选的：所述的大孔树脂选用AB-8，用无水乙醇溶解醋酸丁酯部分浓缩物上样，吸附条件为5～14℃，PH保持在6，解吸条件为25～33℃，解吸剂体积分数为70％的乙醇。优选的：所述的色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合相色谱柱，流动相乙腈：水比例为22:78，流速：1ml/min。本发明具有以下有益效果：成本低廉、效率高，能够充分提取白毛夏枯草中的多种有效成分。具体来说，本发明通过研究白毛夏枯草中的多种有效成分的物理化学性质，结合微波灭菌等方法，既能够彻底清洁药材，又能破碎植物细胞壁，提高了提取效率，低温粉碎技术能够地保留白毛夏枯草中的有效成分，避免其变质。且白毛夏枯草经过微波灭菌、低温粉碎和加热回流，其有效成分在加热回流的升温过程中快速溶出，使提取效率更高。同时，本发明根据多种有效成分的极性、溶解度等不同分别采用不同的萃取剂进行萃取分离和纯化，从而顺利提取出木犀草素、克罗烷二萜和杯苋甾酮。由于白毛夏枯草资源丰富，能够有效降低提取成本，且本发明选用的溶剂均为常用溶剂，提取溶剂在提取液浓缩后可回收再利用，提高溶剂的利用率，进一步降低了生产成本。具体实施方式下面具体提供优选的实施例，以使本领域技术人员更加清楚本发明的技术方案和效果。实施例一一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草6kg，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳。抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出，这样可以避免药材中的有效成分溶解在水中而随水流失。切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为8％，以便于后续加工。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4～6cm，在微波频率为2200MHz下灭菌时间为50s，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎，在温度为-50～-80℃的条件下，将药材粉碎为粒度100～200目的颗粒。溶剂提取：用体积分数为60％的乙醇作为提取溶剂，在41L的提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠360g，混合均匀。将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡45min，然后对药材和溶剂进行超声处理，超声功率为450W，时间为150s。再用体积分数为60％的乙醇对其加热回流，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间135min，对提取液减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏，浓缩过程中回收的溶剂通过调节浓度后可再次使用。分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、水饱和的正丁醇和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为3：1，由于丁酮溶解于4倍的水，因此要使丁酮的用量在水的2倍以上。用水饱和的正丁醇对水溶液进行萃取的体积比例为2:1，用石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1。然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，洗脱剂比例为乙酸乙酯：正己烷＝7:5，得到纯度为85％的克罗烷二萜93g。将正丁醇部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化，大孔树脂选用AB-8，用无水乙醇溶解正丁醇部分浓缩物上样，吸附条件为5～14℃，PH保持在6，解吸条件为25～33℃，解吸剂体积分数为70％的乙醇，得到木犀草素74g。将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，用高效液相色谱法纯化，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合相色谱柱，流动相乙腈：水比例为22:78，流速：1ml/min，收集245nm时的流出液，浓缩得到杯苋甾酮112g。实施例二一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草5kg，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳。抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出。切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为7％，以便于后续加工。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为4cm，在微波频率为2000MHz下灭菌时间为40s，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎，在温度为-50～-80℃的条件下，将药材粉碎为粒度100～200目的颗粒。溶剂提取：用体积分数为55％的乙醇作为提取溶剂，在28L的提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠225g，混合均匀。将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡40min，然后对药材和溶剂进行超声处理，超声功率为400W，时间为120s。再用体积分数为60％的乙醇对其加热回流，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间120min，对提取液减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏。分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、醋酸丁酯和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为2：1。用醋酸丁酯和石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1。然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，洗脱剂比例为乙酸乙酯：正己烷＝7:5，得到纯度为82％克罗烷二萜62g。将醋酸丁酯部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化，大孔树脂选用AB-8，用无水乙醇溶解醋酸丁酯部分浓缩物上样，吸附条件为5～14℃，PH保持在6，解吸条件为25～33℃，解吸剂体积分数为70％的乙醇，得到木犀草素62.5g。将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，用高效液相色谱法纯化，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合相色谱柱，流动相乙腈：水比例为22:78，流速：1ml/min，收集245nm时的流出液，浓缩得到杯苋甾酮71g。实施例三一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草8kg，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳。抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出。切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为9％，以便于后续加工。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为5cm，在微波频率为2400MHz下灭菌时间为50s，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎，在温度为-50～-80℃的条件下，将药材粉碎为粒度100～200目的颗粒。溶剂提取：用体积分数为60％的乙醇作为提取溶剂，在45.5L的提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠440g，混合均匀。将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡45min，然后对药材和溶剂进行超声处理，超声功率为400W，时间为150s。再用体积分数为60％的乙醇对其加热回流，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间150min，对提取液减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏。分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、醋酸丁酯和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为3：1。用醋酸丁酯和石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1。然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，洗脱剂比例为乙酸乙酯：正己烷＝7:5，得到纯度为84％克罗烷二萜120g。将醋酸丁酯部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化，大孔树脂选用AB-8，用无水乙醇溶解醋酸丁酯部分浓缩物上样，吸附条件为5～14℃，PH保持在6，解吸条件为25～33℃，解吸剂体积分数为70％的乙醇，得到木犀草素159g。将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，用高效液相色谱法纯化，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合相色谱柱，流动相乙腈：水比例为22:78，流速：1ml/min，收集245nm时的流出液，浓缩得到杯苋甾酮135g。实施例四一种白毛夏枯草有效物质提取方法，包括白毛夏枯草的预处理、微波灭菌、溶剂提取、分离纯化，其具体步骤如下：预处理：挑选9～10月采收的新鲜白毛夏枯草9kg，以茎细、质柔韧且四棱明显者为佳。抢水洗：将白毛夏枯草投入清水，经快速洗涤后立即取出。切段：将清洗完成的白毛夏枯草切为0.6～0.9cm的小段，晒至含水量为8％，以便于后续加工。微波灭菌：放入微波灭菌机中，摊放厚度为6cm，在微波频率为2500MHz下灭菌时间为60s，灭菌完成后使之自然冷却，待温度降至室温后进行低温粉碎，在温度为-50～-80℃的条件下，将药材粉碎为粒度100～200目的颗粒。溶剂提取：用体积分数为65％的乙醇作为提取溶剂，在82L的提取溶剂中加入十二烷基磺酸钠864g，混合均匀。将粉碎后的药材在提取溶剂中浸泡50min，然后对药材和溶剂进行超声处理，超声功率为500W，时间为180s。再用体积分数为60％的乙醇对其加热回流，在温度65～80℃条件下回流3次，每次时间150min，对提取液减压抽滤，滤液浓缩得到提取浸膏。分离纯化：用水溶解提取浸膏，先后用丁酮、醋酸丁酯和石油醚进行萃取，用丁酮对水溶液进行萃取的体积比为4：1。用醋酸丁酯和石油醚对水溶液进行萃取的体积比例为1:1。然后将丁酮部分萃取物浓缩，过300～400目硅胶柱，用乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂进行洗脱，洗脱剂比例为乙酸乙酯：正己烷＝7:5，得到纯度为84％克罗烷二萜127.5g。将醋酸丁酯部分萃取物浓缩后过大孔树脂吸附纯化，大孔树脂选用AB-8，用无水乙醇溶解醋酸丁酯部分浓缩物上样，吸附条件为5～14℃，PH保持在6，解吸条件为25～33℃，解吸剂体积分数为70％的乙醇，得到木犀草素185g。将萃取后的水溶液浓缩干燥后用甲醇溶解，用高效液相色谱法纯化，色谱条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合相色谱柱，流动相乙腈：水比例为22:78，流速：1ml/min，收集245nm时的流出液，浓缩得到杯苋甾酮147g。有效成分得率为验证本发明的有益效果，现对各个实施例的有效成分得率进行计算和统计，计算方法如下：木犀草素的得率＝木犀草素产品质量/药材质量*100％克罗烷二萜＝克罗烷二萜产品质量/药材质量*100％杯苋甾酮＝杯苋甾酮产品质量/药材质量*100％计算结果如下表所示：表1各实施例的产品得率得率(％)木犀草素克罗烷二萜杯苋甾酮实施例一1.23％1.32％1.87％实施例二1.25％1.01％1.42％实施例三1.98％1.26％1.69％实施例四2.05％1.19％1.63％当前第1页1 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