本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物及其制备方法与应用。
背景技术：
多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)是当今癌症治疗的一个新靶点，其能够催化ADP-核糖单元从烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adeninedinucleotide，NAD+)转移至各种受体蛋白。PARP参与DNA修复和转录调控，不但在调节细胞存活和死亡过程中具有关键作用，同时也是肿瘤发展和炎症发生过程中的主要转录因子。
PARP-1是PARP家族中最早被发现，并且研究较清楚的成员。是由1014个氨基酸残基组成、相对分子质量为116ku的核酶，在DNA单链修复中发挥着主导作用。PARP-1作为DNA缺口感受器，在DNA损伤后被激活，识别并结合到DNA断裂部位，减少重组发生并避免受损DNA受核酸外切酶的作用。在与DNA缺口结合后催化活性随即提高10～500倍，通过自身糖基化并形成同型二聚体将NAD+催化分解为烟酰胺和ADP核糖。再以ADP核糖为底物，使核受体蛋白(主要是PARP自身)聚ADP核糖化形成线状或直链的PARP-1-ADP核糖多聚物。这些负电荷较多、位阻较大的多聚ADP核糖支链一方面可防止附近的DNA分子与损伤的DNA进行重组；另一方面能够降低PARP-1与DNA的亲和性，使PARP-1从DNA断裂处解离，然后引导DNA修复酶与DNA缺口结合，对损伤部位进行修复。从DNA上解离下的PARP-1-ADP核糖多聚物被聚ADP核糖水解酶[Poly(ADP-ribose)glycohydrolase，PARG]裂解，裂解后的ADP核糖可重新用于合成NAD+。而PRAP-1与ADP核糖多聚物脱离后，又重新被激活与DNA结合，如此反复循环进行DNA损伤的修复。然而，在肿瘤细胞中DNA修复酶过度表达的话，会激活自身的DNA损伤修复机制，进而在药物治疗和放疗过程中产生抗性。研究发现，PARP抑制剂可以阻断DNA修复通路，降低肿瘤细胞的自我修复能力，因此将PARP抑制剂与放化疗联合应用可以有效增强抗肿瘤效果。研究还发现，PARP抑制剂单药对BRCA1/2基因缺失或突变的乳腺癌及卵巢癌也有明显的抑制作用。
综上所述，PARP抑制剂在抗肿瘤方面具有广阔的研究和应用前景。如申请号为2015102677321的专利申请公开了一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物、其制备方法及其作为PARP抑制剂的应用，其中，氮杂菲那烯-3-酮衍生物的结构式为其中R为氢，甲基，乙基，异丙基，苄基或者3-甲基-3-丁烯基，具有很高的抑制PARP酶的活性，给发展氮杂菲那烯-3-酮化合物作为用于PARP抑制剂从而达到肿瘤治疗目的的新药研究提供了良好的基础，但是其化学制备过程困难，在合成方面存在产率低、后处理难、纯度低等特点，其次在合成路线中大量使用易致毒试剂如乙酸酐、三氯氧磷和硫酸等，并且可对接化合物少，成功率低，不利于进行后期大量药物对接筛选。因此本发明拟在前期研究的基础上，设计、合成一系列全新的基于酞嗪酮母核的氮杂非那烯-3-酮化合物衍生物，并对其活性进行筛选和初步研究，为研发出活性更好的抗肿瘤药物提供基础。
技术实现要素：
解决的技术问题：针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物及其制备方法与应用，本发明所述氮杂非那烯-3-酮衍生物制备过程简单，合成率高，后处理容易，并且纯度高，具有很高的抑制PARP酶的活性，为研发出活性更好的抗肿瘤药物提供基础。
技术方案：一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物，其结构如式(Ⅰ)所示：
其中R为氢，2-氟乙胺基，2,2,2-三氟乙胺基，二乙胺基，吡咯烷基，咪唑基，哌啶基，吗啡啉基，4-一甲氨基哌啶基，4-二甲氨基哌啶基，1-甲基-4-(甲氨基)哌啶基，1-苯基-4-甲氨基哌啶基，1-苄基-4-甲氨基哌啶基或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉基。
一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物的制备方法，所述制备方法步骤如下：
(1)将吡啶加入至2-氨基-6-甲氧基苯甲酸和乙腈的混合溶液，保持温度不超过30℃的情况下加入三光气，其中2-氨基-6-甲氧基苯甲酸，吡啶和三光气的摩尔比为1:2:0.3，溶剂乙腈与反应物总质量的比值为10mL：1g，加完后室温下反应5.5-8h，待反应完毕后，加水过滤，将滤饼烘干后制得化合物2
(2)将氢氧化钠分两批加入至化合物2和甲醇的混合溶液，其中化合物2和氢氧化钠的摩尔比为1:0.1，溶剂甲醇与反应物总质量的比值为10mL：1g，在50-70℃下反应1.5-3h，待反应完成后，旋干溶剂，加入水和乙酸乙酯萃取后分离有机层，将有机层干燥后旋干，经柱层析分离后得化合物3
(3)将2-溴-5甲基吡啶，碳酸铯，醋酸钯，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽加入至化合物3和二氧六环的混合溶液，其中化合物3，2-溴-5甲基吡啶，碳酸铯，醋酸钯，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽的摩尔比为1:1.1:1.5:0.1:0.3，溶剂二氧六环与反应物总质量的比值为10mL：1g，在氮气保护下50-75℃反应5.5-8h，反应完毕后，加入水和二氯甲烷萃取后分离有机层，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得化合物4
(4)将化合物4加到二氯甲烷中制成混合溶液，将三溴化硼用二氯甲烷稀释，保持温度不超过-20℃的情况下向化合物4和二氯甲烷的混合溶液中滴加三溴化硼稀释液，其中化合物4和三溴化硼的摩尔比为1:2.2，溶剂二氯甲烷与反应物总质量的比值为20mL：1g，将二氯甲烷平分成两份，一份与化合物4制成混合溶液，一份用来稀释三溴化硼，滴毕后升至-5～-15℃反应2.5-4h，反应完成后，保持温度不超过-10℃的情况下加水淬灭三溴化硼，待反应液升至室温后，用饱和碳酸钠溶液调pH至中性，加入水和二氯甲烷萃取后分离有机层，经干燥后旋干，即得化合物5
(5)将4-二甲氨基吡啶加入化合物5和二氯甲烷的混合溶液，将三氟甲磺酸酐用二氯甲烷稀释，保持温度不超过-5℃的情况下向4-二甲氨基吡啶、化合物5和二氯甲烷的混合溶液中滴加三氟甲磺酸酐稀释液，其中化合物5，三氟甲磺酸酐和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1.2:1.6，溶剂二氯甲烷与反应物总质量的比值为20mL：1g，将二氯甲烷平分成两份，一份与化合物5制成混合溶液，一份用来稀释三氟甲磺酸酐，滴毕后升至室温并搅拌，反应完毕后，用HCl将pH调至弱酸性，加入水和二氯甲烷萃取后分离有机层，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得化合物6
(6)将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和三乙胺加入至化合物6和甲醇/N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液，其中[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯为化合物6重量的10％；化合物6和三乙胺的摩尔比为1:3，溶剂甲醇/N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液与反应物总质量的比值为10mL：1g，其中甲醇：N，N-二甲基甲酰胺的体积比为4:1，反应体系用CO置换三次后在65-85℃和0.8MPa压力下反应7.5-10h，反应完毕后，旋干溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得化合物7
(7)当R为氢时，将水合肼加入至化合物7和乙醇的混合溶液，其中化合物7和水合肼的摩尔比为1:2，溶剂乙醇与反应物总质量的比值为10mL：1g，室温下反应5.5-8h，反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水充分搅拌打散不溶物后抽滤，滤饼烘干即得化合物8在化合物8中加入多聚磷酸，溶剂多聚磷酸与化合物8的比值为10mL：1g，在130-150℃下反应5.5-8h，将反应液倒入水中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下用氨水将pH调至弱碱，待不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得化合物9
一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物的制备方法，所述制备方法步骤如下：
(1)将吡啶加入至2-氨基-6-甲氧基苯甲酸和乙腈的混合溶液，保持温度不超过30℃的情况下加入三光气，其中2-氨基-6-甲氧基苯甲酸，吡啶和三光气的摩尔比为1:2:0.3，溶剂乙腈与反应物总质量的比值为10mL：1g，加完后室温下反应5.5-8h，待反应完毕后，加水过滤，将滤饼烘干后制得化合物2
(2)将氢氧化钠分两批加入至化合物2和甲醇的混合溶液，其中化合物2和氢氧化钠的摩尔比为1:0.1，溶剂甲醇与反应物总质量的比值为10mL：1g，在50-70℃下反应1.5-3h，待反应完成后，旋干溶剂，加入水和乙酸乙酯萃取后分离有机层，将有机层干燥后旋干，经柱层析分离后得化合物3
(3)将2-溴-5甲基吡啶，碳酸铯，醋酸钯，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽加入至化合物3和二氧六环的混合溶液，其中化合物3，2-溴-5甲基吡啶，碳酸铯，醋酸钯，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽的摩尔比为1:1.1:1.5:0.1:0.3，溶剂二氧六环与反应物总质量的比值为10mL：1g，在氮气保护下50-75℃反应5.5-8h，反应完毕后，加入水和二氯甲烷萃取后分离有机层，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得化合物4
(4)将化合物4加到二氯甲烷中制成混合溶液，将三溴化硼用二氯甲烷稀释，保持温度不超过-20℃的情况下向化合物4和二氯甲烷的混合溶液中滴加三溴化硼稀释液，其中化合物4和三溴化硼的摩尔比为1:2.2，溶剂二氯甲烷与反应物总质量的比值为20mL：1g，将二氯甲烷平分成两份，一份与化合物4制成混合溶液，一份用来稀释三溴化硼，滴毕后升至-5～-15℃反应2.5-4h，反应完成后，保持温度不超过-10℃的情况下加水淬灭三溴化硼，待反应液升至室温后，用饱和碳酸钠溶液调pH至中性，加入水和二氯甲烷萃取后分离有机层，经干燥后旋干，即得化合物5
(5)将4-二甲氨基吡啶加入化合物5和二氯甲烷的混合溶液，将三氟甲磺酸酐用二氯甲烷稀释，保持温度不超过-5℃的情况下向4-二甲氨基吡啶、化合物5和二氯甲烷的混合溶液中滴加三氟甲磺酸酐稀释液，其中化合物5，三氟甲磺酸酐和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1.2:1.6，溶剂二氯甲烷与反应物总质量的比值为20mL：1g，将二氯甲烷平分成两份，一份与化合物5制成混合溶液，一份用来稀释三氟甲磺酸酐，滴毕后升至室温并搅拌，反应完毕后，用HCl将pH调至弱酸性，加入水和二氯甲烷萃取后分离有机层，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得化合物6
(6)将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和三乙胺加入至化合物6和甲醇/N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液，其中[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯为10％化合物6的重量；化合物6和三乙胺的摩尔比为1:3，溶剂甲醇/N，N-二甲基甲酰胺的混合溶液与反应物总质量的比值为10mL：1g，其中甲醇：N，N-二甲基甲酰胺的体积比为4:1，反应体系用CO置换三次后在65-85℃和0.8MPa压力下反应7.5-10h，反应完毕后，旋干溶剂，加入水和二氯甲烷萃取，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得化合物7
(7)当R不为氢时，将N-溴代丁二酰亚胺和偶氮二异丁腈加入至化合物7和四氯化碳的混合溶液进行回流反应9.5-12h，其中化合物7，N-溴代丁二酰亚胺和偶氮二异丁腈的摩尔比为1:1.2:0.1，溶剂四氯化碳与反应物的总质量的比值为20mL：1g，反应完毕后，加入水和二氯甲烷萃取后分离有机层，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得化合物10将待接化合物和碳酸钾加入至化合物10和乙腈的混合溶液，其中化合物10，待接化合物和碳酸钾的摩尔比为1:1.1:4，溶剂乙腈与反应物的总质量的比值为10mL：1g，在35-55℃下反应5.5-8h，加入水和乙酸乙酯萃取后分离有机层，有机层经干燥后旋干，即得化合物11所述待接化合物为2-氟乙胺盐酸盐、2,2,2-三氟乙胺盐酸盐，二乙胺盐酸盐，吡咯烷，咪唑，哌啶，吗啡啉，4-叔丁氧羰基氨基哌啶、4-二甲氨基哌啶、1-甲基-4-甲氨基哌啶、1-苯基-4-甲氨基哌啶、1-苄基-4-甲氨基哌啶或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉中的一种，将水合肼加入至化合物11和乙醇的混合溶液，其中水合肼和化合物11的摩尔比为2:1，溶剂乙醇与反应物的总质量的比值为10mL：1g，在室温下反应5.5-8h，反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水充分搅拌打散不溶物后进行抽滤，滤饼烘干即得化合物12向化合物12中加入多聚磷酸，溶剂多聚磷酸与化合物8的比值为10mL：1g，130-150℃下反应5.5-8h，将反应液倒入水中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下加入氨水将pH调至弱碱性，待不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得化合物13
作为优选，通过薄层色谱监测反应完毕。
一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物作为PARP抑制剂的应用。
有益效果：1、通过对本发明所制备的氮杂非那烯-3-酮衍生物的活性进行筛选和初步研究，经过初步的官能团对接，活性测定发现，其对PARP酶的抑制活性达到nM级别(与临床试验的药物在同一水平)，为接下对接更多的官能团提供了基础与方向。
2、同现有技术相比，本申请一种氮杂非那烯-3-酮衍生物的结构中增加了共轭结构部分-吡啶环，产物更加稳定，并且采用的原料价格低廉，更容易得到，合成路线反应温和，对环境无污染。
3、对PARP酶具有明显的抑制作用，可用于制备PARP抑制剂。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
本申请所述氮杂非那烯-3-酮衍生物合成工艺如下：
实施例1
一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物，其结构如式(Ⅰ)所示：
其中R为氢，2-氟乙胺基，2,2,2-三氟乙胺基，二乙胺基，吡咯烷基，咪唑基，哌啶基，吗啡啉基，4-一甲氨基哌啶基，4-二甲氨基哌啶基，1-甲基-4-(甲氨基)哌啶基，1-苯基-4-甲氨基哌啶基，1-苄基-4-甲氨基哌啶基或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉基。
所述氮杂非那烯-3-酮衍生物具体制备方法如下：
(1)化合物2的合成
将吡啶(67.86g，857.84mmol)加入至2-氨基-6-甲氧基苯甲酸(71.7g，428.92mmol)和乙腈(720ml)的混合溶液，保持温度不超过30℃的情况下缓慢加入三光气(43.27g，145.83mmol)，加完后常温反应5.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入1L水过滤，将滤饼烘干后得到黄白色固体化合物2(70g，84％)；
(2)2-氨基-6-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物3)的合成
将氢氧化钠(1.45g，36.24mmol)分两批加入至化合物2(70g，362.40mmol)和甲醇(700mL)的混合溶液，50℃下反应1.5h，待反应结束后，旋干溶剂，加入500mL水和1L乙酸乙酯，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，经柱层析分离后棕红色固体化合物3(52.1g，79％)；
(3)化合物4的合成
将2-溴-5甲基吡啶(26.11g，151.77mmol)，碳酸铯(66.08g，202.81mmol)，醋酸钯(0.90g，4.00mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(2.68g，4.63mmol)加入至化合物3(25g，137.98mmol)和二氧六环(250mL)的混合溶液，在氮气保护下50℃反应5.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入500mL水和800mL二氯甲烷，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得淡黄色固体化合物4(24.6g，74％)；
(4)化合物5的合成
将化合物4(24.6g，102.39mmol)加到二氯甲烷(500mL)制成混合溶液，将三溴化硼(56.43g，225.25mmol)用110mL二氯甲烷稀释，保持温度不超过-20℃的情况下向化合物4和二氯甲烷的混合溶液中滴加三溴化硼稀释液，滴毕后升至-5℃反应2.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，保持温度不超过-10℃的情况下慢加150mL水淬灭三溴化硼。待反应液升至室温后，用饱和碳酸钠溶液调pH至7。加入500mL水和800mL二氯甲烷，萃取一次，分离有机层，经干燥后旋干，即得黄色固体化合物5(20g，86％)；
(5)化合物6的合成
将4-二甲氨基吡啶(42.34g，346.55mmol)加入化合物5(49g，216.59mmol)和二氯甲烷(1L)的混合溶液，将三氟甲磺酸酐(73.33g，259.91mmol)用150mL二氯甲烷稀释，保持温度不超过-5℃的情况下向混合溶液中滴加三氟甲磺酸酐稀释液，滴毕后缓慢升至室温，搅拌0.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(500mL)和二氯甲烷(500mL)，用1mol/L的HCl调pH至6，然后萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得棕黄色固体化合物6(68.9g，69％)；
(6)化合物7的合成
将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(7g，9.57mmol)和三乙胺(58.38g，576.90mmol)加入至化合物6(68.9g，192.30mmol)和甲醇/N，N-二甲基甲酰胺(体积比为4:1，700mL)的混合溶液。反应体系用CO置换三次后在65℃和0.8MPa压力下反应7.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，旋干溶剂，加入水(500mL)和二氯甲烷(800mL)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得黄棕色固体化合物7(45.6g，88％)；
(7)化合物8的合成
将水合肼(186.61mg，3.73mmol)加入至化合物7(500mg，1.86mmol)和乙醇(5mL)的混合溶液，常温下反应5.5h，待TLC监测反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水(20mL)充分搅拌打散不溶物后抽滤，滤饼烘干即得黄色固体产物化合物8(408mg，82％)。
(8)化合物9的合成
将上步产物化合物8加入5mL多聚磷酸后，在130℃下反应5.5h，将反应液倒入水(30mL)中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下慢加氨水，调节pH至8，待大量不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得浅黄色固体产物化合物9(280mg，74％)。
(9)化合物10的合成
将N-溴代丁二酰亚胺(19.79g，111.83mmol)和偶氮二异丁腈(1.53g，9.32mmol)加入至化合物7(25g，93.19mmol)和四氯化碳(250mL)的混合溶液，回流反应9.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(500mL)和二氯甲烷(1L)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得金黄色固体化合物10(20g，62％)。
(10)化合物14-26的合成(以14为例)
将2-氟乙胺盐酸盐(157.69mg，5.76mmol)和碳酸钾(796.18mg，5.76mmol)加入至化合物10(500mg，1.44mmol)和乙腈(5mL)的混合溶液，35℃下反应5.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，即得黄色油状物产物化合物11(380mg，80％)。
将水合肼(115.14mg，2.30mmol)加入至上述产物化合物11和乙醇(5mL)的混合溶液，常温下反应5.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水(50mL)充分搅拌打散不溶物后进行抽滤，滤饼烘干即得黄色固体产物化合物12(287mg，76％)。
向上述产物化合物12中加入多聚磷酸(5mL)，130℃下反应5.5h，将反应液倒入水(30mL)中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下加氨水将pH调至8，待大量不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得淡黄色固体产物化合物14(200mg，74％)。
将上述2-氟乙胺盐酸盐换成2,2,2-三氟乙胺盐酸盐，二乙胺盐酸盐，吡咯烷，咪唑，哌啶，吗啡啉，4-叔丁氧羰基氨基哌啶、4-二甲氨基哌啶、1-甲基-4-甲氨基哌啶、1-苯基-4-甲氨基哌啶、1-苄基-4-甲氨基哌啶或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉中的一种，其余条件相同，可合成淡黄色固体化合物15～26，需要注意的是，若待接化合物若不是盐酸盐状态，那么操作中碳酸钾的使用量应减少1当量。
实施例2
一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物，其结构如式(Ⅰ)所示：
其中R为氢，2-氟乙胺基，2,2,2-三氟乙胺基，二乙胺基，吡咯烷基，咪唑基，哌啶基，吗啡啉基，4-一甲氨基哌啶基，4-二甲氨基哌啶基，1-甲基-4-(甲氨基)哌啶基，1-苯基-4-甲氨基哌啶基，1-苄基-4-甲氨基哌啶基或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉基。
所述氮杂非那烯-3-酮衍生物具体制备方法如下：
(1)化合物2的合成
将吡啶(67.86g，857.84mmol)加入至2-氨基-6-甲氧基苯甲酸(71.7g，428.92mmol)和乙腈(720ml)的混合溶液，保持温度不超过30℃的情况下缓慢加入三光气(43.27g，145.83mmol)，加完后常温反应8h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入1L水过滤，将滤饼烘干后得到黄白色固体化合物2(70g，84％)；
(2)2-氨基-6-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物3)的合成
将氢氧化钠(1.45g，36.24mmol)分两批加入至化合物2(70g，362.40mmol)和甲醇(700mL)的混合溶液，70℃下反应3h，待反应结束后，旋干溶剂，加入500mL水和1L乙酸乙酯，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，经柱层析分离后棕红色固体化合物3(52.1g，79％)；
(3)化合物4的合成
将2-溴-5甲基吡啶(26.11g，151.77mmol)，碳酸铯(66.08g，202.81mmol)，醋酸钯(0.90g，4.00mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(2.68g，4.63mmol)加入至化合物3(25g，137.98mmol)和二氧六环(250mL)的混合溶液，在氮气保护下75℃反应8h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入500mL水和800mL二氯甲烷，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得淡黄色固体化合物4(24.6g，74％)；
(4)化合物5的合成
将化合物4(24.6g，102.39mmol)加到二氯甲烷(500mL)制成混合溶液，将三溴化硼(56.43g，225.25mmol)用110mL二氯甲烷稀释，保持温度不超过-20℃的情况下向化合物4和二氯甲烷的混合溶液中滴加三溴化硼稀释液，滴毕后升至-15℃反应4h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，保持温度不超过-10℃的情况下慢加150mL水淬灭三溴化硼。待反应液升至室温后，用饱和碳酸钠溶液调pH至7。加入500mL水和800mL二氯甲烷，萃取一次，分离有机层，经干燥后旋干，即得黄色固体化合物5(20g，86％)；
(5)化合物6的合成
将4-二甲氨基吡啶(42.34g，346.55mmol)加入化合物5(49g，216.59mmol)和二氯甲烷(1L)的混合溶液，将三氟甲磺酸酐(73.33g，259.91mmol)用150mL二氯甲烷稀释，保持温度不超过-5℃的情况下向混合溶液中滴加三氟甲磺酸酐稀释液，滴毕后缓慢升至室温，搅拌0.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(500mL)和二氯甲烷(500mL)，用1mol/L的HCl调pH至6，然后萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得棕黄色固体化合物6(68.9g，69％)；
(6)化合物7的合成
将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(7g，9.57mmol)和三乙胺(58.38g，576.90mmol)加入至化合物6(68.9g，192.30mmol)和甲醇/N，N-二甲基甲酰胺(体积比为4:1，700mL)的混合溶液。反应体系用CO置换三次后在85℃和0.8MPa压力下反应10h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，旋干溶剂，加入水(500mL)和二氯甲烷(800mL)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得黄棕色固体化合物7(45.6g，88％)；
(7)化合物8的合成
将水合肼(186.61mg，3.73mmol)加入至化合物7(500mg，1.86mmol)和乙醇(5mL)的混合溶液，常温下反应8h，待TLC监测反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水(20mL)充分搅拌打散不溶物后抽滤，滤饼烘干即得黄色固体产物化合物8(408mg，82％)。
(8)化合物9的合成
将上步产物化合物8加入5mL多聚磷酸后，在150℃下反应8h，将反应液倒入水(30mL)中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下慢加氨水，调节pH至8，待大量不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得浅黄色固体产物化合物9(280mg，74％)。
(9)化合物10的合成
将N-溴代丁二酰亚胺(19.79g，111.83mmol)和偶氮二异丁腈(1.53g，9.32mmol)加入至化合物7(25g，93.19mmol)和四氯化碳(250mL)的混合溶液，回流反应12h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(500mL)和二氯甲烷(1L)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得金黄色固体化合物10(20g，62％)。
(10)化合物14-26的合成(以14为例)
将2-氟乙胺盐酸盐(157.69mg，5.76mmol)和碳酸钾(796.18mg，5.76mmol)加入至化合物10(500mg，1.44mmol)和乙腈(5mL)的混合溶液，55℃下反应8h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，即得黄色油状物产物化合物11(380mg，80％)。
将水合肼(115.14mg，2.30mmol)加入至上述产物化合物11和乙醇(5mL)的混合溶液，常温下反应8h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水(50mL)充分搅拌打散不溶物后进行抽滤，滤饼烘干即得黄色固体产物化合物12(287mg，76％)。
向上述产物化合物12中加入多聚磷酸(5mL)，150℃下反应8h，将反应液倒入水(30mL)中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下加氨水将pH调至8，待大量不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得淡黄色固体产物化合物14(200mg，74％)。
将上述2-氟乙胺盐酸盐换成2,2,2-三氟乙胺盐酸盐，二乙胺盐酸盐，吡咯烷，咪唑，哌啶，吗啡啉，4-叔丁氧羰基氨基哌啶、4-二甲氨基哌啶、1-甲基-4-甲氨基哌啶、1-苯基-4-甲氨基哌啶、1-苄基-4-甲氨基哌啶或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉中的一种，其余条件相同，可合成淡黄色固体化合物15～26，需要注意的是，若待接化合物若不是盐酸盐状态，那么操作中碳酸钾的使用量应减少1当量。
实施例3
一种氮杂非那烯-3-酮的衍生物，其结构如式(Ⅰ)所示：
其中R为氢，2-氟乙胺基，2,2,2-三氟乙胺基，二乙胺基，吡咯烷基，咪唑基，哌啶基，吗啡啉基，4-一甲氨基哌啶基，4-二甲氨基哌啶基，1-甲基-4-(甲氨基)哌啶基，1-苯基-4-甲氨基哌啶基，1-苄基-4-甲氨基哌啶基或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉基。
所述氮杂非那烯-3-酮衍生物具体制备方法如下：
(1)化合物2的合成
将吡啶(67.86g，857.84mmol)加入至2-氨基-6-甲氧基苯甲酸(71.7g，428.92mmol)和乙腈(720ml)的混合溶液，保持温度不超过30℃的情况下缓慢加入三光气(43.27g，145.83mmol)，加完后常温反应6h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入1L水过滤，将滤饼烘干后得到黄白色固体化合物2(70g，84％)；
(2)2-氨基-6-甲氧基苯甲酸甲酯(化合物3)的合成
将氢氧化钠(1.45g，36.24mmol)分两批加入至化合物2(70g，362.40mmol)和甲醇(700mL)的混合溶液，60℃下反应2h，待反应结束后，旋干溶剂，加入500mL水和1L乙酸乙酯，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，经柱层析分离后棕红色固体化合物3(52.1g，79％)；
(3)化合物4的合成
将2-溴-5甲基吡啶(26.11g，151.77mmol)，碳酸铯(66.08g，202.81mmol)，醋酸钯(0.90g，4.00mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(2.68g，4.63mmol)加入至化合物3(25g，137.98mmol)和二氧六环(250mL)的混合溶液，在氮气保护下60℃反应6h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入500mL水和800mL二氯甲烷，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得淡黄色固体化合物4(24.6g，74％)；
(4)化合物5的合成
将化合物4(24.6g，102.39mmol)加到二氯甲烷(500mL)制成混合溶液，将三溴化硼(56.43g，225.25mmol)用110mL二氯甲烷稀释，保持温度不超过-20℃的情况下向化合物4和二氯甲烷的混合溶液中滴加三溴化硼稀释液，滴毕后升至-10℃反应3h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，保持温度不超过-10℃的情况下慢加150mL水淬灭三溴化硼。待反应液升至室温后，用饱和碳酸钠溶液调pH至7。加入500mL水和800mL二氯甲烷，萃取一次，分离有机层，经干燥后旋干，即得黄色固体化合物5(20g，86％)；
(5)化合物6的合成
将4-二甲氨基吡啶(42.34g，346.55mmol)加入化合物5(49g，216.59mmol)和二氯甲烷(1L)的混合溶液，将三氟甲磺酸酐(73.33g，259.91mmol)用150mL二氯甲烷稀释，保持温度不超过-5℃的情况下向混合溶液中滴加三氟甲磺酸酐稀释液，滴毕后缓慢升至室温，搅拌0.5h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(500mL)和二氯甲烷(500mL)，用1mol/L的HCl调pH至6，然后萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得棕黄色固体化合物6(68.9g，69％)；
(6)化合物7的合成
将[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(7g，9.57mmol)和三乙胺(58.38g，576.90mmol)加入至化合物6(68.9g，192.30mmol)和甲醇/N，N-二甲基甲酰胺(体积比为4:1，700mL)的混合溶液。反应体系用CO置换三次后在75℃和0.8MPa压力下反应8h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，旋干溶剂，加入水(500mL)和二氯甲烷(800mL)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得黄棕色固体化合物7(45.6g，88％)；
(7)化合物8的合成
将水合肼(186.61mg，3.73mmol)加入至化合物7(500mg，1.86mmol)和乙醇(5mL)的混合溶液，常温下反应6h，待TLC监测反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水(20mL)充分搅拌打散不溶物后抽滤，滤饼烘干即得黄色固体产物化合物8(408mg，82％)。
(8)化合物9的合成
将上步产物化合物8加入5mL多聚磷酸后，在140℃下反应6h，将反应液倒入水(30mL)中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下慢加氨水，调节pH至8，待大量不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得浅黄色固体产物化合物9(280mg，74％)。
(9)化合物10的合成
将N-溴代丁二酰亚胺(19.79g，111.83mmol)和偶氮二异丁腈(1.53g，9.32mmol)加入至化合物7(25g，93.19mmol)和四氯化碳(250mL)的混合溶液，回流反应10h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(500mL)和二氯甲烷(1L)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，柱层析分离得金黄色固体化合物10(20g，62％)。
(10)化合物14-26的合成(以14为例)
将2-氟乙胺盐酸盐(157.69mg，5.76mmol)和碳酸钾(796.18mg，5.76mmol)加入至化合物10(500mg，1.44mmol)和乙腈(5mL)的混合溶液，45℃下反应6h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，萃取两次，分离有机层后合并，有机层经干燥后旋干，即得黄色油状物产物化合物11(380mg，80％)。
将水合肼(115.14mg，2.30mmol)加入至上述产物化合物11和乙醇(5mL)的混合溶液，常温下反应6h，待薄层色谱(TLC)监测反应完毕后，旋干溶剂和水合肼，加水(50mL)充分搅拌打散不溶物后进行抽滤，滤饼烘干即得黄色固体产物化合物12(287mg，76％)。
向上述产物化合物12中加入多聚磷酸(5mL)，140℃下反应6h，将反应液倒入水(30mL)中淬灭多聚磷酸，保持温度不超过30℃的情况下加氨水将pH调至8，待大量不溶物析出后进行抽滤，滤饼烘干即得淡黄色固体产物化合物14(200mg，74％)。
将上述2-氟乙胺盐酸盐换成2,2,2-三氟乙胺盐酸盐，二乙胺盐酸盐，吡咯烷，咪唑，哌啶，吗啡啉，4-叔丁氧羰基氨基哌啶、4-二甲氨基哌啶、1-甲基-4-甲氨基哌啶、1-苯基-4-甲氨基哌啶、1-苄基-4-甲氨基哌啶或者7-氟-1,2,3,4-四氢异喹啉中的一种，其余条件相同，可合成淡黄色固体化合物15～26，需要注意的是，若待接化合物若不是盐酸盐状态，那么操作中碳酸钾的使用量应减少1当量。
化合物9：1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.05(s,1H),8.33(s,1H),7.87(t,J＝7.9,1H),7.70(d,J＝6.8,1H),7.57(dd,J＝8.1,0.9,1H),7.49(dd,J＝9.3,2.0,1H),7.17(d,J＝9.2,1H),2.28(d,J＝1.0,3H).
化合物14：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.25(s,1H),8.27(d,J＝9.5,1H),8.00-7.83(m,2H),7.61(dd,J＝15.2,8.6,2H),4.91-4.76(m,2H),4.45(s,2H),3.50(ddd,J＝18.9,11.9,5.7,2H).
化合物15：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.22(s,1H),8.27(d,J＝8.8,1H),8.02-7.86(m,2H),7.61(dd,J＝12.9,8.6,2H),4.43(s,2H),3.94(q,J＝8.9,2H),3.61-3.38(m,1H).
化合物16：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.26(t,J＝7.8,1H),8.27(dd,J＝9.3,1.9,1H),8.02–7.87(m,2H),7.63(t,J＝8.3,2H),4.47(s,2H),3.31–3.17(m,4H),1.29(t,J＝7.3,6H).
化合物17：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.31(s,1H),8.33(s,1H),7.98(dd,J＝21.0,7.3,2H),7.67(s,2H),4.56(s,2H),3.61(s,2H),3.24(s,2H),2.09(d,J＝69.8,4H).
化合物18：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.15(s,1H),8.93(s,1H),8.14(d,J＝9.4,1H),7.89(t,J＝8.0,1H),7.79(d,J＝7.8,1H),7.52(dd,J＝16.5,11.5,4H),5.55(d,J＝16.6,2H),3.58-3.40(m,1H).
化合物19：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.25(s,1H),8.27(dd,J＝9.3,1.6,1H),7.94(t,J＝8.0,1H),7.86(d,J＝7.9,1H),7.60(d,J＝8.4,2H),4.41(s,2H),3.55-3.46(m,2H),3.00(dd,J＝12.5,10.0,2H),1.89(d,J＝14.8,2H),1.79-1.58(m,3H),1.40(q,J＝12.7,1H).
化合物20：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.28(s,1H),8.27(d,J＝9.5,1H),8.04-7.85(m,2H),7.63(dd,J＝12.0,8.6,2H),4.52(s,2H),3.92(s,4H),3.45(dd,J＝17.9,12.4,4H).
化合物21：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.31(s,1H),8.30(d,J＝9.2,1H),8.06-7.86(m,2H),7.65(t,J＝9.2,2H),4.51(s,2H),3.71(d,J＝11.3,2H),3.60-3.49(m,1H),3.45(dd,J＝11.8,6.4,1H),3.23(t,J＝12.2,2H),2.67(s,3H),2.38(d,J＝12.4,2H),1.91(d,J＝11.8,2H).
化合物22：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.34(s,1H),8.36(s,1H),7.95(t,J＝17.6,2H),7.67(s,2H),4.56(s,2H),3.81(s,2H),3.58(dd,J＝14.3,7.1,2H),3.29(s,2H),2.87(s,6H),2.42(s,2H),2.08(s,2H),1.11(t,J＝7.0,1H).
化合物23：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.33(s,1H),8.29(s,1H),8.00(d,J＝9.8,2H),7.68(d,J＝7.1,2H),4.57(s,2H),3.84(s,1H),3.68(s,2H),3.56(s,1H),3.15(s,2H),2.82(d,J＝23.6,5H),2.41(d,J＝34.9,2H),2.15(s,2H).
化合物24：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.35(s,1H),8.33(d,J＝9.2,1H),7.99(dt,J＝15.6,7.8,2H),7.67(t,J＝7.8,2H),7.60-7.36(m,5H),4.64(s,2H),4.04(t,J＝11.9,1H),3.92(d,J＝12.9,2H),3.77(t,J＝12.0,2H),2.87(s,3H),2.59(d,J＝13.7,2H),2.50-2.30(m,2H).
化合物25：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.32(s,1H),8.29(d,J＝9.0,1H),8.09-7.90(m,2H),7.74-7.57(m,2H),7.44(s,5H),4.56(s,2H),4.30(s,1H),3.85(s,1H),3.69(d,J＝11.2,2H),3.60-3.50(m,1H),3.45(dd,J＝11.8,6.4,1H),3.17(t,J＝11.9,2H),2.78(s,2H),2.45(d,J＝12.3,2H),2.11(d,J＝12.1,2H).
化合物26：1H NMR(400MHz,D2O)δ＝9.25(s,1H),8.30(d,J＝9.5,1H),7.93(t,J＝8.1,1H),7.84(d,J＝8.0,1H),7.59(t,J＝7.9,2H),7.29-7.18(m,1H),7.03(dd,J＝8.6,6.6,1H),6.89(d,J＝9.5,1H),4.65(s,2H),4.46(s,2H),3.70(s,2H),3.60-3.53(m,1H),3.47(dd,J＝11.7,6.5,1H),3.17(s,2H).
实施例4
根据实施例3制备氮杂非那烯-3-酮衍生物，将制备的化合物14～26依次排序为A1～A13。
对氮杂非那烯-3-酮衍生物进行活性检测，具体实验方法如下：
PARP1抑制活性的测定
实验材料：通用PARP比色法分析试剂盒(Trevigen)：10U/μL PARP-HAS，20X PARPBuffer，10X PARP1cocktail，含组氨酸的96孔板，200mM 3-AB，10X Strep-Diluen，Strep-HRP，TACS-SapphireTM，10X Activated DNA；PBS溶液；PBS+0.1％Triton X-100；蒸馏水；0.02MHCl；自制PARP1小分子抑制剂：化合物9；A1～A13。
PARP1酶抑制活性测定方法
(1)每孔加入50μL的1X PARP Buffer，室温孵育30min，拍干。
(2)加入一系列浓度的PARP1抑制剂，对照品3-AB浓度为10μM；每孔加入0.5U的PARP-HAS，使孔内总体积为25μL，室温孵育10min。
(3)每孔加入1X PARP1cocktail 25μL，室温孵育60min。
(4)依次使用PBS+0.1％Triton X-100和PBS分别清洗两次，每次200μL，拍干除去残留溶液。加入1X Strep-HRP 50μL，室温孵育60min。再次按同上步骤清洗两次后，加入TACS-SapphireTM，室温避光孵育15min，加入50μL的0.2M HCl，终止反应，并在450nM波长下测量每孔OD值，所得数据用于计算IC50值(Logt-t法)。
(5)抑制率的计算公式为：PARP1酶抑制率％＝(活性组OD值-空白对照OD值)-(抑制组OD值-空白对照OD)/(活性组OD值-空白对照OD值)×100％；
表1化合物9对PARP酶抑制活性测定结果
a：无特殊说明均为500nM下的抑制率
表2 A1～A7对PARP酶抑制活性测定结果
a：无特殊说明均为500nM下的抑制率
ND：不能确定
表3 A8～A13对PARP酶抑制活性测定结果
a：无特殊说明均为500nM下的抑制率
ND：不能确定
本发明合成纯化了一系列氮杂非那烯-3-酮衍生物衍生物，通过核磁共振波谱仪(NMR)进行了结构鉴定，并进行PARP酶的活性测定。测试结果见表1、表2和表3，化合物9、14-26通过通用PARP比色法分析试剂盒进行活性初筛发现，化合物的IC50均在nM级别，与目前进入临床试验的PARP抑制剂在同一活性水平，说明这些化合物对PARP酶的抑制活性很好，同时也证明了设计的合理性。