一种产油微生物菌种保存和使用方法与流程

文档序号:11687228阅读:360来源:国知局

本发明属于微生物能源技术领域,具体涉及一种产油微生物菌种保存和使用方法。



背景技术:

目前产油微生物菌种保存和使用方法可以分为:液态菌种保存和使用法、固态菌种保存和使用法。

液态种子保存和使用法主要指继代保存法,操作人员需要将微生物菌种保存在平板或斜面上,然后在使用的时候接种到摇瓶中扩培,最后再转接到生产或试验用的摇瓶、发酵罐中。该方法经过长期使用,已经证明行之有效,但中间环节较多,菌种保存后必须扩培才能确保接种量。菌种接种时必须在火焰保护下进行,因此接种量一般为5~10%,而正常摇瓶细胞数一般为1~2亿/ml,这就决定了在发酵初期发酵液中细胞数较少,微生物生长延迟期较长,导致生产效率低、易染菌。另外,液态种子在扩培时,种群优势弱易受杂菌污染,而且培养周期通常需要2~7d,扩培周期长、易染菌,影响了整个生产过程的组织管理。最后,液态种子保存和使用的最大缺陷在于不能长期保存,一般保存1个月就需要进行转接、复壮,对菌种工作人员是一个负担。

固态菌种保存和使用法主要指固定化保存法和浓缩保存法。固定化保存法,菌种在培养结束后,制备成固定化小球,然后在使用时直接投入到发酵液中接种,该方法是新兴的菌种保存方法,菌种使用过程中无扩培周期,使用效率高,方便整个生产过程的组织管理,但目前存在着固定化小球强度差、传质效果差的缺点,限制了其使用范围。浓缩保存法,菌种在培养结束后,需要先浓缩再进行保存或干燥保存,浓缩过程中非常容易染菌而且浪费能源。

专利申请号201610377040.7提供了一种小球藻浓缩液的保存方法,该方法在菌种液中添加絮凝剂收集藻细胞,然后再将菌种浓缩液进行低温保存。该方法初步解决了接种量低的问题,但是收集藻细胞的同时引入了絮凝剂,在后期有可能会对发酵过程产生不利影响,而且液态种子仍然存在着接种量小、接种操作难度大的问题。专利申请号201010222005.0提供了一种保藏微藻藻种的方法,该方法将菌种液进行浓缩,然后再真空冷冻干燥保藏,该方法初步实现了固态种子保存,但菌种液浓缩存在着能耗大、易染菌的问题。目前发酵罐种子的发酵水平已经达到120~200g/l,远远高于摇瓶种子发酵水平的10~12g/l,高浓度的种子液为直接进行干燥保藏提供了可能。

从目前公开资料来看,要解决产油微生物菌种的保存和使用问题,需要克服以下技术问题:无扩培周期,可以随时投入使用;可以大比例接种;从而达到高效率发酵的生产目标;不进行菌种浓缩,不浪费能源,不在菌种保存过程中因为反复操作的原因而引入杂菌。



技术实现要素:

为了解决产油微生物菌种的保存和使用问题,本发明的目的是为菌种的保存和使用提供一种新的思路,可以达到高效率微生物发酵的目的。

本发明采用如下的技术方案:

一种产油微生物菌种保存和使用方法,其方法是:产油微生物种子液使用脱水方法获得菌种,菌种复水恢复活性,菌种接种再使用。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的产油微生物是产油藻类、产油酵母等微生物中的任意一种。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的产油微生物种子液是指产油微生物摇瓶种子或处于对数生长期的产油微生物发酵液。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的脱水方法是指喷雾干燥法、冷冻干燥法等脱水方法中的任意一种。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的脱水方法是指产油微生物种子液直接进行脱水方法处理。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,在使用前可以进行复水恢复活性,复水恢复活性的方法是指使用生理盐水、培养基等溶液中的任意一种进行浸泡。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,菌种接种再使用是指菌种复水复活后在无菌条件下接入摇瓶或发酵罐中。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,在菌种复水恢复活性、菌种接种再使用的过程中可以加入大蒜素、霉立解等抑菌剂中的一种或几种。

和现有技术相比,本发明具有如下优点:

1)无菌种扩培周期,可以直接使用,工作效率高,方便企业组织生产管理,应对突发事件;

2)不进行菌种细胞浓缩,不浪费能源;

3)接种量大,接种以后产油微生物迅速占据种群优势,从而发酵周期短,生产效率高、染菌机率低;

4)产油微生物种子液保存和使用过程中受到杂菌污染的机率低,确保了产油微生物种子质量;

5)产油微生物种子液制成干粉以后保存时间长,不需要频繁转接、复壮。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,其方法是:产油微生物种子液使用脱水方法获得菌种,菌种复水恢复活性,菌种接种再使用。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的产油微生物是产油藻类、产油酵母等微生物中的任意一种。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的产油微生物种子液是指产油微生物摇瓶种子或处于对数生长期的产油微生物发酵液。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的脱水方法是指喷雾干燥法、冷冻干燥法等脱水方法中的任意一种。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,所使用的脱水方法是指产油微生物种子液直接进行脱水方法处理。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,在使用前可以进行复水恢复活性,复水恢复活性的方法是指使用生理盐水、培养基等溶液中的任意一种进行浸泡。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,菌种接种再使用是指菌种复水复活后在无菌条件下接入摇瓶或发酵罐中。

一种产油微生物菌种保存和使用方法,在菌种复水恢复活性、菌种接种再使用的过程中可以加入大蒜素、霉立解等抑菌剂中的一种或几种。

实施例1

取产油异养小球藻摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为12g/l,加入200ppm大蒜素,混合均匀后置于玻璃平板中,发酵液在平板中深度为2mm,使用真空冷冻干燥方法制成干粉并收集,然后取其中6g使用30ml0.8%生理盐水浸泡1h,制成200g/l菌种液,最后接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例2

取产油异养小球藻发酵罐发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为140g/l,置于玻璃平板中,发酵液在平板中深度为3mm,使用真空冷冻干燥方法制成干粉并收集,然后取其中150g使用500ml0.85%生理盐水浸泡2h,制成300g/l菌种液,最后接入发酵罐发酵液中进行发酵。

实施例3

取产油异养小球藻摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为10g/l,使用低温喷雾干燥方法制成干粉并收集,然后取其中75g使用300ml0.8%生理盐水浸泡1h,制成250g/l菌种液,最后接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例4

取产油异养小球藻摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为120g/l,加入1000ppm霉立解,混合均匀后使用中温喷雾干燥方法制成干粉并收集,然后取其中210g使用600ml0.9%生理盐水浸泡2h,制成350g/l菌种液,最后接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例5

取产油异养小球藻摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为11g/l,使用低温喷雾干燥方法制成干粉并收集,加入100ppm霉立解,然后直接取接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例6

取产油异养小球藻摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为110g/l,使用低温喷雾干燥方法制成干粉并收集,然后直接取接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例7

取产油酵母摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为12g/l,置于玻璃平板中,发酵液在平板中深度为2mm,使用真空冷冻干燥方法制成干粉并收集,然后取其中6g使用30ml0.8%生理盐水浸泡1h,制成200g/l菌种液,加入100ppm霉立解混合均匀,最后接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例8

取产油酵母发酵罐发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为140g/l,置于玻璃平板中,发酵液在平板中深度为3mm,使用真空冷冻干燥方法制成干粉并收集,然后取其中150g使用500ml0.85%生理盐水浸泡2h,制成300g/l菌种液,最后接入发酵罐发酵液中进行发酵。

实施例9

取产油酵母摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为10g/l,加入100ppm大蒜素混合均匀,使用低温喷雾干燥方法制成干粉并收集,然后取其中75g使用300ml0.8%生理盐水浸泡1h,制成250g/l菌种液,最后接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例10

取产油酵母摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为120g/l,使用中温喷雾干燥方法制成干粉并收集,然后取其中210g使用600ml0.9%生理盐水浸泡2h,制成350g/l菌种液,最后接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例11

取产油酵母摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为11g/l,使用低温喷雾干燥方法制成干粉并收集,然后直接取接入摇瓶发酵液中进行发酵。

实施例12

取产油酵母摇瓶发酵液,发酵液细胞质量体积浓度为110g/l,使用低温喷雾干燥方法制成干粉并收集,然后直接取接入摇瓶发酵液中进行发酵。

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