本发明属于药物合成领域，具体涉及一种bcl-2抑制剂venetoclax的合成方法。
背景技术：
bcl-2蛋白在30年前即1986年首次被发现，由bcl-2基因表达。bcl-2基因是一种原癌基因，其表达的蛋白称为bcl-2家族蛋白。bcl-2家族蛋白是细胞凋亡途径中的一种重要蛋白，在肿瘤的发生及转移中起关键作用。通过与bax形成二聚体以及自身二聚，bcl-2蛋白在细胞凋亡的调控中发挥重要作用：当bcl-2蛋白被抑制时，它与bax形成二聚体减少，从而导致细胞的凋亡；当bcl-2蛋白过度表达时，它与bax形成的杂二聚体增多，细胞凋亡被抑制。bcl-2和bax蛋白在细胞死亡信号检查点之间的平衡，决定了细胞的生存或凋亡。由于在癌细胞中高度表达，bcl-2家族蛋白抑制剂可以选择性地在肿瘤细胞中发挥抗肿瘤作用。目前，bcl-2家族蛋白已成为抗癌药物研发的重要靶点之一。
venetoclax(abt-199)是abbvie公司和genentech公司合作研发的一个选择性的bcl-2抑制剂，用于治疗慢性淋巴细胞白血病，非霍奇金淋巴瘤，小淋巴细胞淋巴瘤，弥漫性大b细胞淋巴瘤，多发性骨髓瘤等。在2011年进入临床试验，i期试验(nct01328626)入组了84例复发性/难治性cll/sll患者和44例复发型/难治型非霍奇金淋巴瘤患者。venetoclax治疗cll/sll的应答率为79％(完全应答率为22％)，中位持续应答时间为20.5个月；venetoclax治疗非霍奇金淋巴瘤的应答率为48％(完全应答率为7.5％)。截至目前，共获得fda授予的3个突破性治疗药物资格：2015年4月，fda授予venetoclax单药治疗携带17p删除突变的复发性/难治性慢性淋巴细胞白血病(cll)的突破性药物资格；2016年1月，fda授予venetoclax联合抗癌药利妥昔单抗(rituximab，美罗华)治疗复发性/难治性慢性淋巴细胞白血病的突破性药物资格；此后不久，fda又授予venetoclax与去甲基化药物(hmas)合并用药突变性治疗药物资格，用于不宜接受标准诱导治疗的既往未治疗的急性髓性白血病患者。此外，2016年1月初，fda授予venetoclax单药治疗既往已接受至少一种疗法的cll(包括17p缺失cll)的新药申请(nda)优先审查资格。2016年4月11日美国fda批准venetoclax用于治疗慢性淋巴细胞白血病，成为全球第一个bcl-2抑制剂。
venetoclax别名abt-199，cas号：1257044-40-8；分子量：868.44；分子式：c45h50cln7o7s。化合物结构如下：
专利wo2012058392、wo2012071336、wo2010138588等公开了venetoclax的合成方法，以5-溴-7-氮杂吲哚为原料经三异丙基硅基保护、羟基化得到化合物3，再与2,4-二氟苯甲酸甲酯反应得到ven-16，与化合物4反应、水解得到化合物6，化合物6与ven-21缩合得到venetocla，具体路线如下：
上述专利用该方法制备ven-16时，由于2,4-二氟苯甲酸甲酯有两个f都可以参加反应，导致纯化困难，需柱层析纯化；化合物5专利中也没有精制方法，同样是通过柱层析纯化，因此放大比较困难。
专利cn201410582048以2-氟-4-硝基苯甲酸甲酯为原料，与5-羟基-7-氮杂吲哚反应生成化合物8，硝基还原得到化合物9，用双(2-氯乙基)胺成哌嗪环合成化合物10、经柱层析纯化，三步总收率57.4％；化合物10和ven-7缩合、水解生成化合物12，再与ven-21缩合生成ven-0。
上述专利所用原料2-氟-4-硝基苯甲酸甲酯相对2,4-二氟苯甲酸甲酯价格较贵，而且没有商业化大量供应；而且该合成路线所有化合物纯化均通过柱层析纯化，很难进行放大反应，因此无法工业化生产。
技术实现要素：
本发明提供了一种bcl-2抑制剂venetoclax的合成方法，新的合成方法，能够克服之前路线的缺陷，产率高，操作简便，完全避免了不适合工业化生产的柱层析纯化操作，而且合成成本低，适合工业化生产放大。
一种bcl-2抑制剂venetoclax的合成方法，包括以下步骤：
(1)5-羟基-7-氮杂吲哚与2,4-二氟苯甲酸甲酯在碱的作用下发生醚化反应，反应结束后经过后处理得到ven-16；
(2)ven-16与n-boc-哌嗪在碱的作用下发生胺化反应得到ven-17；
(3)将ven-17进行水解反应得到ven-18；
(4)ven-18和ven-21在缩合剂的作用下发生缩合反应，反应结束后经过后处理得到ven-19；
(5)ven-19在酸性条件下发生脱boc反应，得到ven-20；
(6)ven-20与ven-7在碱的作用下发生取代反应，反应结束后经过后处理得到所述的venetoclax；
反应式如下：
步骤(1)中，使用价格较为低廉的2,4-二氟苯甲酸甲酯为原料，与5-羟基-7-氮杂吲哚缩合反应得到ven-16，通过控制反应条件可以有效地抑制4-位取代异构体和其它杂质的产生，作为优选，所述的碱为碳酸钾，碳酸钠，碳酸铯，磷酸钾等无机碱，所述的醚化反应在甲基叔丁基醚，二氧六环，乙二醇二甲醚，二乙二醇二甲醚等醚类溶剂中进行。
作为进一步的优选，所述的后处理包括：除去反应溶剂，用乙酸乙酯溶解、洗涤、干燥、浓缩得到粗品，然后粗品用乙酸乙酯和石油醚重结晶，得到ven-16。通过该后处理操作，可以进一步降低产物中4-位取代异构体和其它杂质的量。
步骤(2)得到的反应液经过乙酸乙酯萃取、洗涤、浓缩至干后直接进入步骤(3)进行反应，避免了柱层析的操作。
步骤(3)中，所述的水解反应在四氢呋喃，甲醇，乙醇等有机溶剂和氢氧化钠，氢氧化钾等无极碱水溶液的作用下进行。
步骤(4)中，所述的缩合剂由edci，edc等缩合试剂和三乙胺，二异丙基乙基胺，dmap等有机碱组成，所述的缩合反应在乙酸乙酯，四氢呋喃，二氯甲烷等有机溶剂中进行。
步骤(4)中，所述的后处理包括：反应液依次用乙酸水溶液、碳酸氢钠水溶液、水、食盐水洗涤，再经过干燥，浓缩至干得到粗品，然后用乙腈重结晶得到ven-19，通过该后处理操作避免了柱层析的使用，便于工业化生产。
步骤(6)中，所述的碱为碳酸钠，碳酸铯，磷酸钾，碳酸钾等无机碱，所述的取代反应在四氢呋喃，nmp，丙酮，乙腈和dmf等有机溶剂中进行。
步骤(6)中，所述的后处理包括：向反应液中加水析出粗产物，粗产品采用乙腈重结晶得到所述的venetoclax纯品，通过采用重结晶操作，避免了柱层析操作，且产物的纯度高，便于工业化生产。
同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
(1)本发明采用价廉易得的2,4-二氟苯甲酸甲酯和关键中间体5-羟基-7-氮杂吲哚作为起始原料进行反应，通过控制反应条件和寻找纯化方法，完全除去了4-位异构体，使后续反应变得简单。
(2)本发明的后处理操作避免了现有技术中采用的柱层析纯化，通过控制中间体的纯度和寻找venetoclax重结晶方法，使产品hplc纯度达到99.5％，单杂小于0.1％，具有重要的工业应用价值。
具体实施方式
实施例1ven-16合成：
向三口瓶中加入100g5-羟基-7-氮杂吲哚(746mmol)、141g2,4-二氟苯甲酸甲酯(821mmol)、237g磷酸钾(1.12mol)和500ml二乙二醇二甲醚，110℃反应24h(hplc监测5-羟基-7-氮杂吲哚反应完全)。反应液浓缩至干，加入2l乙酸乙酯和2l水搅拌，分出有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩至干得粗品。粗品用1260ml乙酸乙酯加热至回流溶清，缓慢滴加1260ml石油醚，1h滴完，滴毕，继续回流状态搅拌1h，缓慢降温至25℃，过滤，烘干，得到浅白色固体163g，收率76.5％。hplc纯度98％。
反应式如下：
实施例2ven-17合成：
向反应瓶中加入30gven-16(104.9mmol)、600mldmso、23.4g(125.9mmol)n-boc-哌嗪和35.9g(157.4mmol)磷酸氢二钾，升温至120℃反应24h(tlc监测ven-16反应完全)，加入900ml乙酸乙酯和900ml水搅拌30min后分液，有机相用2×900ml水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩至干得淡黄色固体66g。直接投入下步反应。
反应式如下：
实施例3ven-18合成：
反应瓶中加入40gven-17(88mmol)和400ml四氢呋喃，滴加10％氢氧化钠水溶液500ml，加热升温至65℃反应24h，tlc监测原料反应完全，冷却至室温，加入400ml甲基叔丁基醚搅拌，分出甲基叔丁基醚相，用10％盐酸溶液调节ph至4-5，有固体析出，继续搅拌1h，过滤，于45℃烘干得39g白色粉末状固体，收率100％。
反应式如下：
实施例4ven-19合成：
反应瓶中加入35gven-18(80mmol)和1000ml二氯甲烷，加入22.8gven-21(80mmol)、17.7gdmap(160mmol)和27.8g(160mmol)edci，30℃反应约24h，tlc监测原料反应完全，依次用900ml10％乙酸水溶液，900ml饱和碳酸氢钠水溶液，900ml水，900ml饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩至干得黄色粉末状固体粗品56g。粗品用1000ml乙腈重结晶，抽滤，滤饼200ml乙腈洗，烘干得黄色粉末状固体47g，收率80％。hplc纯度：99％。
实施例5ven-20合成：
反应瓶中加入15gven-19(20mmol)和75ml二氯甲烷，加入75ml三氟乙酸25℃反应5h，tlc监测原料反应完全，滴加600ml甲基叔丁基醚，析出固体，过滤，用200ml甲基叔丁基醚洗，45℃烘干得黄色粉末状固体19.2g。hplc纯度：99％。
实施例6venetoclax合成：
反应瓶中加入56gven-20(88mmol)和600mldmf，加入34gven-7(176mmo)和120g碳酸钾(176mmo)，升温至80℃反应24h，tlc监测ven-20反应完全。加入6l水搅拌析出黄色固体，过滤，滤饼依次用3l水、3l乙醇洗，得粗品。粗品加入2l乙腈重结晶，抽滤，500ml乙腈洗，50℃烘干得黄色粉末状固体61g，收率80％。hplc纯度：99.5％，保留时间与标准品一致，最大的单一杂质含量0.08％。
反应式如下：