本发明属药物化学和医药技术领域，具体涉及新的噻唑烷酮类衍生物及其制备方法和用途。
背景技术：
据资料显示，20世纪五六十年代，全世界每年死于感染性疾病的人数约为700万，而到了本世纪初上升到2000万，其中死于败血症的人数上升了89%。美国nih的调查结果显示：80%以上的细菌性感染与生物膜有关。细菌生物膜不但可以抵挡宿主的免疫杀伤，而且对大多数抗生素耐药，其耐药性比浮游菌高达1000倍。更严重的是生物膜内的细菌可持续从生物膜中脱落进入体液和血液循环，从而引起病人心血管、耳鼻咽喉等部位慢性反复性感染，甚至发生败血症而死亡，死亡率高达8.9%。目前表皮葡萄球菌因生物膜感染已上升为医院临床细菌感染的前4位，由表皮葡萄球菌引起的静脉留置导管相关血液感染的治疗费用仅在美国每年就高达20亿美元；彻底清除感染灶的唯一方法是将植入的医疗器械取出或更换，而更换一个细菌生物膜感染的人工关节或人工瓣膜费用高达数万元。所以研究如何有效治疗和控制细菌生物膜感染是当今世界范围内生物医药领域亟待解决的重大课题，具有十分重要的理论意义和临床应用价值。
现存的大多数抗生素都不能有效地穿透生物膜，或者因对材料表面附着和代谢率低的细菌杀伤作用有限而不能有效地治疗生物膜相关感染。达托霉素和利奈唑胺是目前临床治疗葡萄球菌引起的生物膜相关感染的药物，但研究表明它们均无法杀死生物膜中的细菌。万古霉素是治疗mrsa,mrse和其它多重耐药的革兰氏阳性菌的最后一道防线，但是它也不能对生物膜中的细菌进行有效的杀伤。利福平虽然可以渗透进入生物膜和有效防止生物膜的形成，但其副作用非常严重，包括肝脏损害，流感综合征，肾脏损害，和皮肤综合征。近年来文献报道具有抑制细菌生物膜的活性化合物主要有胺基咪唑类，抗菌肽类，多酚类天然产物等，但研究进展缓慢，至今尚未有抗细菌生物膜的新药上市。
技术实现要素：
本发明的目的是提供新型噻唑烷酮类衍生物。
本发明的另一个目的是提供该新型噻唑烷酮类衍生物的制备方法和用途。
本发明提供了如下式（1）所示的新型噻唑烷酮类衍生物：
（1）
式中，r1代表取代或非取代的吡啶基，r2代表氢或取代或非取代的烷基、烷氧基、羟基、卤素、胺基、硝基、氰基、氨基甲酰基、氨基磺酰基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基、羧基或酯基；x代表氧、硫或nh。或者以上衍生物在药学上可接受的盐、酯、立体异构体或前药。
本发明还提供了上述噻唑烷酮类衍生物的制备方法，其具体步骤如下：
步骤a：胺基吡啶类化合物（2）在碱的催化下，在没有溶剂条件下或在溶剂中与氯乙酰氯反应生成氯乙酰氨基吡啶类化合物（3）；
步骤b：氯乙酰氨基吡啶类化合物（3）在碱的催化下，在没有溶剂条件下或在溶剂中与异硫氰酸苯酯类化合物（4）反应成环生成2-苯亚氨基-3-吡啶-噻唑-4-酮类化合物（5）；
步骤c：2-苯亚氨基-3-吡啶-噻唑-4-酮类化合物（5）与苯甲酸类化合物（6）在催化剂存在的条件下，在溶剂中回流进行缩合反应，生成相应的噻唑烷酮类化合物（1）。
所述步骤a中所述的碱可以是有机碱，如三乙胺、吡啶、n,n-二异丙基乙胺、4-二甲氨基吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯和1,2,2,6,6-五甲基哌啶等，也可以是无机碱，如碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾等；在该制备方法中所使用的溶剂可以是任何一种溶剂，只要该溶剂本身在反应中是惰性的，且不会抑制反应；所述的溶剂包括卤代烃溶剂，如二氯甲烷，氯仿，1,2-二氯乙烷等；芳族烃类溶剂，如苯和甲苯等；非质子传递性溶剂，如丙酮、乙腈，n,n-二甲基甲酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基亚砜、环丁砜、环丁亚砜和六亚甲基磷酰三胺等；酯类溶剂，如乙酸乙酯和乙酸甲酯等；醚类溶剂，如四氢呋喃、乙醚和1,4-二噁烷等；有机碱溶剂，如吡啶、甲基吡啶等；或这些溶剂的混合物；反应温度可在-30℃至50℃之间，优选采用0℃至室温；原料摩尔比可以为任意，优选使用1：1。
所述步骤b中所述的碱可以是有机碱，如三乙胺、吡啶、n,n-二异丙基乙胺、4-二甲氨基吡啶、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯和1,2,2,6,6-五甲基哌啶等，也可以是无机碱，如碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾等；在该制备方法中所使用的溶剂可以是任何一种溶剂，只要该溶剂本身在反应中是惰性的，且不会抑制反应。所述的溶剂包括卤代烃溶剂，如二氯甲烷，氯仿，1,2-二氯乙烷等；芳族烃类溶剂，如苯和甲苯等；非质子传递性溶剂，如丙酮、乙腈，n,n-二甲基甲酰胺、n-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基亚砜、环丁砜、环丁亚砜和六亚甲基磷酰三胺等；酯类溶剂，如乙酸乙酯和乙酸甲酯等；醚类溶剂，如四氢呋喃、乙醚和1,4-二噁烷等；有机碱溶剂，如吡啶、甲基吡啶等；或这些溶剂的混合物；反应温度可在-30℃至50℃之间，优选采用0℃至室温；原料摩尔比可以为任意，优选使用1：1；
所述步骤c中所述的催化剂可以是哌啶，所述的溶剂可以是乙醇，甲醇，冰醋酸。
本发明的噻唑烷酮类化合物可用于制备药物，尤其是抗菌药物。
本发明中，对通式（1）所示的化合物进行体外抑菌实验，结果表明，所述的化合物的抑菌活性显著高于阳性对照药物，因而可用于制备以所述的噻唑烷酮类化合物作为有效成分的药物。
本发明的新的噻唑烷酮类化合物可制成包含安全有效量新的噻唑烷酮类化合物及药用载体的药物组合物及各种制剂。
本发明中，“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。安全有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等来确定。
“药用载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质,它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。
“相容性”指的是组合物中各组份能与本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低所述化合物的药效。
药学上可以接受的载体部分例子有糖，如葡萄糖、蔗糖、乳糖等；淀粉，如玉米淀粉、马铃薯淀粉等；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等；明胶，滑石，固体润滑剂，如硬脂酸、硬脂酸镁；硫酸钙，植物油，如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等；多元醇，如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等；乳化剂，如吐温®；润湿剂，如十二烷基硫酸钠；着色剂，调味剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水等。
为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
具体实施方式
实施例1：合成氯乙酰氨基吡啶类化合物（3a-e）
取代氨基吡啶（2a-e,20mmol）加入100ml反应瓶中，取20ml干燥二氯甲烷作为溶剂，加入氯乙酰氯（24mmol）完全溶解后，将三乙胺（24mmol）缓慢滴入反应瓶中，tlc(ch2cl2:ch3oh=30:1)检测反应，常温下搅拌5h终止反应。反应结束后，减压蒸馏除去二氯甲烷，加水和乙酸乙酯多次萃取，有机相无水na2so4干燥除水，残余物通过快速柱层析纯化，得到以下目标物3a-e。
3a：白色固体；产率78%；1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.99(s,1h),8.32(d,j=4.0hz,1h),8.22(d,j=8.3hz,1h),7.77(t,j=7.1hz,1h),7.18–7.03(m,1h),4.21(s,2h)。
3b：白色固体；产率75%；1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.62(s,1h),8.26(s,1h),7.53(t,j=8.8hz,1h),7.22(s,1h),4.36(s,2h)。
3c：白色固体；产率81%；1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.97(s,1h),8.25(dd,j=9.0,3.9hz,1h),8.18(d,j=2.8hz,1h),7.56–7.41(m,1h),4.21(s,2h)。
3d：白色固体；产率76%；1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.70(s,1h),8.07(d,j=7.8hz,1h),7.83(q,j=8.1hz,1h),6.73(dd,j=8.0,2.4hz,1h),4.20(s,2h)。
3e：白色固体；产率72%；1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.93(s,1h),8.73(dd,j=8.1,1.4hz,1h),8.26–8.02(m,1h),7.30(dd,j=8.1,4.7hz,1h),4.25(s,2h)。
实施例2：合成2-苯亚氨基-3-吡啶-噻唑-4-酮类化合物（5a-g）
氯乙酰氨基吡啶（3a-e,5mmol），异硫氰酸苯酯或对卤异硫氰酸苯酯（6mmol），碳酸钾（7.5mmol）并使用乙腈作为溶剂，tlc(pe:ea=2:1)检测反应进程，常温下过夜得到目标物。反应结束后，减压蒸馏除去乙腈，乙酸乙酯/水萃取，有机层用无水na2so4干燥除水，除去乙酸乙酯后残余物通过快速柱层析纯化，得到目标物5a-g。
5a：白色固体，产率80%，1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.70(d,j=3.3hz,1h),7.90(t,j=6.7hz,1h),7.42(d,j=7.2hz,2h),7.27(s,1h),7.00(t,j=8.6hz,1h),6.87(dd,j=13.1,6.9hz,2h),4.01(d,j=1.6hz,2h)。
5b：白色固体，产率72%，1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.71(d,j=3.4hz,1h),7.93(t,j=6.8hz,1h),7.43(d,j=7.3hz,2h),7.28(s,1h),7.00(t,j=8.7hz,1h),6.89(dd,j=13.0,6.8hz,2h),4.02(d,j=1.5hz,2h)。
5c：白色固体，产率75%，1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.51(d,j=4.1hz,1h),7.65(t,j=7.8hz,1h),7.49(dt,j=8.4,4.3hz,1h),7.27(d,j=8.7hz,2h),6.87(d,j=8.6hz,2h),4.05(s,2h).
5d：白色固体，产率73%，1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.65(d,j=3.4hz,1h),7.90(t,j=6.8hz,1h),7.40(d,j=7.3hz,2h),7.26(s,1h),7.01(t,j=8.7hz,1h),6.87(dd,j=13.0,6.8hz,2h),4.00(d,j=1.5hz,2h)。
5e：白色固体，产率69%，1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.54(d,j=2.8hz,1h),7.62(td,j=8.6,2.9hz,1h),7.46(dd,j=8.7,3.9hz,1h),7.32(t,j=7.7hz,2h),7.12(t,j=7.4hz,1h),6.92(d,j=7.4hz,2h),4.00(s,2h)。
5f：白色固体，产率78%，1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ7.99(dd,j=15.7,7.9hz,1h),7.32(dd,j=14.6,7.2hz,3h),7.12(t,j=7.4hz,1h),7.05(dd,j=8.1,2.1hz,1h),6.92(d,j=7.4hz,2h),3.98(s,2h)。
5g：白色固体，产率82%，1hnmr(400mhz,cdcl3)：δ8.57–8.38(m,1h),7.78(dd,j=7.7,1.5hz,1h),7.43(dd,j=7.7,4.8hz,1h),7.33(t,j=7.7hz,2h),7.13(t,j=7.4hz,1h),6.92(d,j=7.4hz,2h),4.05(q,j=17.2hz,2h)。
实施例3：合成目标化合物（1a-i）
2-苯亚氨基-3-吡啶-噻唑-4-酮类化合物（5a-g）（1mmol），苯丙酸类化合物（6,1mmol），β-丙氨酸（1mmol），并使用冰醋酸（5ml）做溶剂，100℃回流，tlc（ch2cl2:ch3oh=15:1）检测反应，大约3h反应结束，反应结束后反应液冷却后加入大量水，过滤析出的固体，滤饼通过快速柱层析纯化，得到目标物1a-i。
3-{5-[2-(4-氟苯亚氨基)-3-(吡啶-2-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]呋喃-2-基}苯甲酸(1a)：淡黄色固体，产率93.1%；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.23(s,1h),8.67(s,1h),8.27(s,1h),8.08(t,j=7.5hz,1h),7.91(dd,j=17.4,7.7hz,2h),7.71(d,j=6.3hz,2h),7.56(dt,j=15.4,7.6hz,2h),7.39(d,j=3.4hz,1h),7.25(dd,j=17.7,6.3hz,3h),7.06(s,2h)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.75,165.04,155.50,149.68,149.58,148.33,143.84,139.18,131.89,129.49,129.24,128.05,124.83,124.52,124.30,122.84,122.75,120.55,118.20,117.18,116.31,116.09,110.58；esi-msm/z486.0[m+h]+.
3-{5-[2-(4-氯苯亚氨基)-3-(吡啶-2-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]呋喃-2-基}苯甲酸(1b)：淡黄色固体，产率92.2%；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.24(s,1h),8.68(s,1h),8.29(s,1h),8.09(t,j=7.4hz,1h),7.90(m,2h),7.71(s,2h),7.62–7.45(m,4h),7.39(d,j=3.5hz,1h),7.23(s,1h),7.05(d,j=7.9hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.74,164.98,155.48,151.53,149.69,149.53,148.24,146.39,139.20,131.90,129.43,129.24,129.16,127.96,124.87,124.68,124.29,122.95,120.54,118.13,117.34,110.60;esi-msm/z502.0[m+h]+.
3-{5-[2-(4-氯苯亚氨基)-3-(3-氟吡啶-2-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]呋喃-2-基}苯甲酸(1c)：淡黄色固体，产率89.6%；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.43–13.09(m,1h),8.56(s,1h),8.29(s,1h),8.11(s,1h),7.94(d,j=7.6hz,1h),7.88(d,j=7.1hz,1h),7.78(s,2h),7.52(dd,j=23.2,8.1hz,3h),7.41(d,j=3.5hz,1h),7.27(d,j=3.6hz,1h),7.06(d,j=8.6hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.76,164.26,155.90,153.36,150.15,149.34,145.80,136.03,135.90,133.27,131.97,130.67,129.65,129.55,129.15,128.99,128.07,127.93,126.45,126.27,124.77,122.95,121.39,118.50,116.78,110.74;esi-msm/z520.0[m+h]+.
3-{5-[2-(苯亚氨基)-3-(3-氟吡啶-2-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]呋喃-2-基}苯甲酸(1d)：淡黄色固体，产率76.9%；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.23(s,1h),8.58(d,j=3.8hz,1h),8.25(s,1h),8.12(t,j=8.6hz,1h),7.90(dd,j=22.3,7.4hz,2h),7.76(s,2h),7.53(t,j=7.9hz,2h),7.48–7.37(m,3h),7.30–7.20(m,2h),7.03(d,j=7.4hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.77,164.35,155.85,149.43,146.95,145.80,136.18,131.92,129.60,129.46,129.16,128.10,127.85,126.39,126.21,125.36,124.58,121.26,120.95,118.15,117.05,110.70;esi-msm/z486.2[m+h]+.
3-{5-[2-(苯亚氨基)-3-(5-氟吡啶-2-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]呋喃-2-基}苯甲酸(1e)：淡黄色固体，产率73.1%；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.22(s,1h),8.70(d,j=2.6hz,1h),8.24(s,1h),8.05(dd,j=8.3,5.6hz,1h),7.91(d,j=7.7hz,1h),7.85(d,j=8.3hz,2h),7.69(s,1h),7.51(dd,j=14.0,6.3hz,1h),7.47–7.34(m,3h),7.21(t,j=5.8hz,2h),7.02(d,j=7.5hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.78,165.00,160.47,157.93,155.50,150.73,149.59,147.40,144.37,137.88,137.62,131.89,129.49,129.22,127.97,126.14,125.98,125.93,125.08,124.50,120.99,120.52,118.21,117.13,110.56;esi-msm/z486.2[m+h]+.
3-{5-[2-(苯亚氨基)-3-(5-氟吡啶-2-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]噻吩-2-基}苯甲酸(1f)：黄色固体，产率77.4%；1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ13.23(s,1h),8.61(s,1h),8.25(s,1h),8.05(s,2h),7.95(d,j=7.4hz,1h),7.82(s,1h),7.75(s,2h),7.61(s,1h),7.54(d,j=6.2hz,2h),7.49(s,2h),7.08(s,1h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.86,165.04,158.00,157.43,153.53,152.48,152.00,148.29,137.38,135.85,133.10,132.06,129.95,129.77,129.40,129.01,128.67,127.79,127.68,127.56,126.20,126.08,124.53,122.60,122.39;esi-msm/z502.0[m+h]+.
3-{5-[2-(苯亚氨基)-3-(6-氟吡啶-2-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]呋喃-2-基}苯甲酸(1g)：淡黄色固体，产率75.3%；1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ13.20(s,1h),8.34–8.26(m,1h),8.24(s,1h),7.91(d,j=7.6hz,1h),7.85(d,j=7.6hz,1h),7.77–7.67(m,2h),7.52(t,j=7.6hz,1h),7.47–7.35(m,4h),7.22(d,j=3.6hz,2h),7.01(t,j=12.3hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6):δ166.77,164.75,160.92,155.57,150.41,149.56,147.28,145.85,145.72,144.72,144.65,131.90,129.50,129.20,127.99,125.16,124.51,122.42,121.00,120.67,118.01,117.31,110.60;esi-msm/z486.2[m+h]+.
3-{5-[2-(苯亚氨基)-3-(2-氟吡啶-3-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]呋喃-2-基}苯甲酸(1h)：
淡黄色固体，产率75.8%；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.23(s,1h),8.59(s,1h),8.26(s,2h),7.82(d,j=67.7hz,4h),7.43(s,4h),7.22(s,2h),7.01(s,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ166.78,164.33,155.71,150.62,149.75,149.45,148.98,147.09,140.94,131.90,129.86,129.55,129.46,129.18,128.04,125.25,124.52,124.43,120.95,117.75,117.64,110.63;esi-msm/z502.2[m+h]+.
3-{5-[2-(苯亚氨基)-3-(2-氟吡啶-3-基)-噻唑-4-酮-5-亚基甲基]噻吩-2-基}苯甲酸(1i)：
淡黄色固体，产率79.7%；1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ13.23(s,1h),8.59(s,1h),8.17(s,2h),7.97(d,j=7.5hz,1h),7.90(d,j=8.0hz,2h),7.80(s,1h),7.75(s,1h),7.56(s,4h),7.41(d,j=7.5hz,2h),6.97(d,j=7.5hz,1h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ165.86,163.42,154.79,149.70,148.83,148.54,148.07,146.17,140.02,130.99,128.95,128.64,128.54,128.26,127.12,124.33,123.61,123.50,120.03,116.83,116.73,109.71;esi-msm/z518.0[m+h]+.
实施例4：体外抑菌活性测试
1）化合物的最小抑菌浓度的测定
参照美国临床和实验室标准研究所clsi（clinicalandlaboratorystandardsinstitute）推荐的操作规范，采用肉汤稀释方法（brothmicro-dilution）进行最小抑菌浓度（minimalinhibitoryconcentration，mic）检测；以表皮葡萄球菌atcc35984株和表皮葡萄球菌atcc12228株为测试菌株；
（1）用无菌接种环沾取少许细菌菌种，在tsb平皿（表面分区划线，37℃孵育过夜；
（2）从平皿上挑取单个菌落，接种至3～5mlmh液体培养基中，37℃，220rpm振荡培养至对数生长中期（约需4h）；
（3）菌液准备：将处于对数生长中期的菌液用生理盐水调节浊度至0.5麦氏比浊标准（相当于0.5×108cfu/ml），再用mh肉汤1:200稀释，使细菌的终浓度约为105cfu/ml；
（4）将化合物进行连续倍比稀释，药物浓度范围根据clsi推荐采用合适的浓度梯度，每个试管中加入稀释好药物溶液的量为2ml，因为在加入等体积的接种菌液时，药物将被1:2稀释，所以各管中抗菌药物的浓度应是所需最终浓度的2倍；
（5）菌液接种：用微量移液器分别取2ml稀释好的菌液依次接种至装有2ml含从低浓度到高浓度药物mh培养基的试管中，将每只试管混匀，试管内的药物均被1:2稀释，菌液的最终浓度约为105cfu/ml；同时设立不加药物的生长质控管和不加细菌的空白对照管；
（6）培养和结果判断：将菌液置于37℃，220rpm振荡培养16～20h，肉眼观察有无细菌的生长；mic为肉眼观察试管中的细菌生长完全被抑制时的最小药物浓度。
2）化合物对细菌的最小杀菌浓度（mbc）的测定
在最小抑菌浓度的实验中，从mic浓度以上的试管（包括mic浓度肉眼观察细菌生长完全被抑制）中每管取100μl，均匀涂布于mh平板上，每个浓度涂6块平板，37℃培养24小时，每板单克隆数≤5个时的最小浓度定为最小杀菌浓度。
3）化合物的细胞毒性和溶血性检测
化合物对vero细胞的细胞毒性采用cellproliferationkiti(mtt)(roche,indianapolis,usa)检测，操作流程按照试剂盒提供的方法进行。其中1％dmso经检测对vero细胞的细胞毒性很小，可以忽略不计，最后将结果转换成细胞毒性的百分数（以1％dmso处理组的结果为本底进行计算）；cc50代表对50％vero细胞产生毒性的化合物浓度，通过origin8.0软件计算获得，每个样本设六复孔，实验重复三次；
化合物对健康人红细胞的溶血作用按照以下方法检测，首先将红细胞用无菌生理盐水洗涤三次，然后稀释至5％浓度。然后将含有浓度为200μm化合物的红细胞悬液加入96孔板，每孔200μl，于37℃静置1小时，同时以不含化合物处理的红细胞悬液和1%triton-100处理的红细胞悬液作为阴性（0%溶血）和阳性（100％溶血）对照，然后将处理过的红细胞悬液在1000×g离心10分钟，100μl上清转移到另一块96孔板于570nm处读数，1%dmso处理对红细胞无溶血作用，整个实验重复三次；
试验结果显示：实施例所示的部分化合物具有与阳性对照药相同或更好的抗菌活性，且具有一定的杀菌活性，浓度在200μm时对vero细胞未产生毒性，且没有溶血作用。
表1.化合物生物活性1a-i
amic代表化合物对表皮葡萄球菌atcc35984和atcc12228的最小抑制浓度；bmbc代表化合物对表皮葡萄球菌atcc35984最小杀菌浓度；ccc50代表化合物对vero细胞产生50%细胞毒性的浓度；dhemolytic代表在200μm浓度下化合物对人类健康的红细胞溶血作用,“—”：代表化合物在200μm浓度下没有溶血作用。