具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖及其提取方法和应用
【专利摘要】本发明涉及中药制备技术领域，具体涉及一种具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖及其提取方法和应用。所述具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法，包括如下步骤：选用粉碎的干燥物料粒度为40?100目泽泻粉末，采用纤维素酶提取，酶浓度0.4％，酶解温度35?40度，酶解时间120?180min，pH4?4.5，料液质量体积比为1:20?1:30；升温灭活后得泽泻多糖提取液。本发明的有益效果在于：本发明的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法采用酶提法提取泽泻多糖，工艺简单，并且提高了泽泻多糖的得率，本发明方法泽泻多糖的提取率可高达18.89％。本发明的提取方法所得泽泻多糖具有明显的降血糖功能，为泽泻的精深加工开拓了新的途径。
【专利说明】
具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖及其提取方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及中药制备技术领域，具体涉及一种具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多 糖及其提取方法和应用。
【背景技术】
[0002] 胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)是指是指胰岛素作用的革E器官对胰岛素作 用的敏感性下降，表现为外周组织主要是肌肉和脂肪组织对葡萄糖的利用障碍。IR不仅是2 型糖尿病(T2DM)发生的关键环节和主要特征，也与其他并发症如高血压、动脉粥硬化、代谢 综合征、卵巢囊肿、阿尔茨海默症、肿瘤的发生有着密切相关。目前临床应用于改善和治疗 胰岛素抵抗的药物如胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类药物如比吡格列酮和罗格列酮，这类药物 引起的副作用有水肿以及体重增加;二甲双胍能引起血液中乳酸的堆积。同时这2类药物的 肝肾毒性比较大。因此对胰岛素抵抗防治研究显得非常重要。
[0003] 泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale(Samuels) Juzep ·的干燥块莖。近来的 研究表明其主要含有多糖、三萜、倍半萜等成分，其药效学研究表明，泽泻具有降血糖、利 尿、抗脂肪肝、降血脂、降血压、抗过敏以及调节免疫力等作用。多糖为泽泻水溶性成分是其 主要活性成分之一。多糖为天然产物，来源广泛，具有毒副作用小、无残留、不产生耐药性等 优点因而备受研究者的重视。目前随着对多糖的研究，发现其具有降血糖的功效，且来源广 泛且没有细胞毒，因此对中药多糖的研究具有很重大的意义，已成为医药界的热点研究领 域。
[0004] 多糖的提取方法主要有加热浸提法、酶解法、超声提取法等，这些提取方法各自都 有自己的优劣，现有泽泻多糖构成十分复杂，分离纯化各个物质比较困难，分离纯化多糖比 较难，改善胰岛素抵抗的单种糖类很难明确。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是:提供一种具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖及 其提取方法和应用。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供一种具有改善胰岛素抵 抗作用的泽泻多糖的提取方法，包括如下步骤:选用粉碎的干燥物料粒度为40-100目泽泻 粉末，采用纤维素酶提取，酶质量体积浓度为〇. 4-0.6%，酶解温度35-40度，酶解时间120_ 180min，pH4-4.5，料液质量体积比为1:20-1:30;升温灭活后得泽泻多糖提取液。
[0007] 优选的，上述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法中，所述升温具 体为:95-100度处理lOmin。
[0008] 优选的，上述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法中，还包括步骤： 将所得的泽泻多糖提取液再经浓缩、沉淀干燥得改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖粉末。
[0009] 优选的，上述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法中，所述浓缩具 体为:将所得的泽泻多糖提取液过滤，收集滤液，4000r/min离心15min，收集上清液，将上清 液浓缩至原来体积的1/3，得浓缩液。
[0010]优选的，上述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法中，所述"沉淀干 燥得具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖粉末具体为"：在浓缩液中加入4倍重量的乙醇， 取下层沉淀，4000r/min离心15min，收集沉淀，真空干燥得具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻 多糖粉末。
[0011]优选的，上述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法中，具体包括如 下步骤:取40目泽泻粉末，以料液质量体积比为1:20，加入pH为4.5的纤维素酶质量体积浓 度为0.4 %柠檬酸缓冲液得混合液，将混合液至于40度恒温水浴锅中加热酶解2h，之后在沸 水中灭活l〇min，得泽泻多糖提取液。
[0012] 本发明提供的另一技术方案为提供一种上述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻 多糖的提取方法所制备的泽泻多糖。
[0013] 本发明提供的又一技术方案为:提供一种上述的泽泻多糖在制备具有改善胰岛素 抵抗作用的药物中的作用。
[0014] 本发明提供的又一技术方案为:提供一种药物组合物，包括医药学上可接受的载 体和治疗有效量的上述的泽泻多糖。
[0015]优选的，上述的药物组合物中，所述药物组合物为颗粒、散剂、片剂、胶囊或口服 液。
[0016] 本发明的有益效果在于:本发明的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方 法采用酶提法提取泽泻多糖，工艺简单，并且提高了泽泻多糖的得率，本发明方法泽泻多糖 的提取率可高达18.89%。本发明的提取方法所得泽泻多糖具有明显的降血糖功能，为泽泻 的精深加工开拓了新的途径。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明实施例2中造模8周末正常与模型组葡萄糖耐量图；
[0018] 图2为泽泻多糖干预2周末葡萄糖耐量实验结果图；
[0019] 图3为泽泻多糖干预4周末丙酮酸耐量实验结果图。
【具体实施方式】
[0020] 为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附 图予以说明。
[0021] 本发明最关键的构思在于:本发明的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取 方法采用酶提法提取泽泻多糖，工艺简单，并且提高了泽泻多糖的得率。
[0022] 实施例1
[0023]取40目泽泻粉末，以料液质量体积比为1:20,加入pH为4.5的纤维素酶质量浓度为 0.6%柠檬酸缓冲液得混合液，将混合液至于40度恒温水浴锅中加热2h，之后再沸水中灭活 lOmin，得泽泻多糖提取液。
[0024]取100目泽泻粉末，以料液质量体积比为1:25,加入pH为4的纤维素酶质量体积浓 度为0.5 %柠檬酸缓冲液得混合液，将混合液至于40度恒温水浴锅中加热2h，之后再沸水中 灭活lOmin，得泽泻多糖提取液。将所得的泽泻多糖提取液过滤，收集滤液，4000r/min离心 15min，收集上清液，将上清液浓缩至原来体积的I /3，得浓缩液。在浓缩液中加入4倍重量的 乙醇，取下层沉淀，4000r/min离心15min，收集沉淀，真空干燥得具有改善胰岛素抵抗作用 的泽泻多糖粉末。
[0025] 精确称取80目泽泻粉末2.OOOg，以料液比1:20(g/mL)加入pH为4.5的纤维素酶浓 度为0.4 %的柠檬酸缓冲液;将上述混合的原料至于40度恒温水浴锅中加热2h，之后再沸水 中灭活lOmin，得提取液。将提取液用纱布过滤，收集滤液，4000r/min离心15min，收集上清 液，真空浓缩至原来体积的1/3,在浓缩液中加入4倍量的无水乙醇，乙醇混匀，得乙醇体积 分数为80%，密封后放置4度冰箱过夜，次日取出在4000r/min条件下离心15min，沉淀即为 泽泻多糖，将沉淀放置冷冻干燥机干燥，得泽泻多糖粉末。
[0026]实施例2本发明具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取分析 [0027](一)本发明泽泻多糖及其提取方法
[0028] 1、分别考察泽泻粉末的粒度（〈40、40-80、40-100、100-150、150-180、>180目），料 液比（1:1〇、1:20-1:30、1:30、1:40g/mL)，pH(4、4.5、5、5.5、6、6.5)，纤维素酶浓度(0、0.1、 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6%)，酶解温度（35、40、45、50、55、60度），酶解时间（30、60、90、120、 150、180min)对于泽泻多糖提取率的影响。得出最佳工艺，再用响应面法优化提取工艺得出 最佳的工艺条件。
[0029] 2、精确称取40-100目泽泻粉末2 .OOOg，以料液比1: 20(g/mL)加入pH为4.5的纤维 素酶浓度为〇. 4%柠檬酸缓冲液;将上述混合的原料至于40度恒温水浴锅中加热2h，之后再 沸水中灭活lOmin，得提取液。上述混合的原料至于40度恒温水浴锅中加热2h，之后再沸水 中灭活lOmin，得提取液。将提取液用纱布过滤，收集滤液，4000r/min离心15min，收集上清 液，真空浓缩至原来体积的1/3,在浓缩液中加入4倍量的无水乙醇，乙醇混匀，得乙醇体积 分数为80%，密封后放置4度冰箱过夜，次日取出在4000r/min条件下离心15min，沉淀即为 泽泻多糖，将沉淀放置冷冻干燥机干燥，得泽泻多糖粉末。
[0030] 3、响应面实验设计：利用软件Design-Expert. V8.0.6中的BOX-Behnken试验设计 原理，以料液比、酶浓度以及pH值为自变量，以多糖的提取率为响应值设计试验。
[0031] 4.响应面结果，如表1和表2所示。
[0032] 表1 Box-Behnken试验设计方案及结果
[0037] 综上所述在单因素基础上，通过Box-Behnken分析，建立回归方程，经响应面回归 分析得到优化组合条件为:料液比1: 20、酶浓度0.4 %、酶解温度40度、酶解时间120min、pH 为4.5。纤维素酶提取泽与多糖的提取率尚达18.89%。
[0038](二)本发明泽泻多糖的药效试验 [0039] 1.试验条件
[0040] 1.1样品:本发明制备的泽泻多糖。
[00411 1.2试验动物:C57BL/6J小鼠适，体重18-22g，SPF级，购自北京华阜康生物科技股 份有限公司；许可证号:SCXK (京)2009-0004。
[0042] 1.3造模、分组及处理 [0043] 1)造模
[0044]按体重将小鼠随机分设正常组和高脂组，正常组给予低脂饲料自由进食，高脂组 给予高脂饲料自由进食。自由饮水，饲养10周，通过体重差异及糖耐量实验结果判断造模成 功。
[0045] 糖耐量试验:各组随机选取5只小鼠，禁食12h。测定空腹血糖后，腹腔注射葡萄糖 溶液(2g/kg体重）。准确计时，于0、15、30、60、120min尾静脉取血测定血糖，绘制血糖-时间 曲线，比较各个时间点血糖值。
[0046] 丙酮酸耐量试验；
[0047] 2)分组
[0048]造模成功后，除正常组小鼠外，将高脂组小鼠随机分为5组，分别为模型组、阳性药 罗格列酮组、泽泻多糖低剂量组、泽泻多糖高剂量组。为防止模型自愈，在给药期间，正常组 小鼠继续用低脂饲料喂养，其余组小鼠继续用高脂饲料喂养。
[0049] 空白对照组:正常组小鼠每日
[0050] 模型组:胰岛素抵抗模型小鼠每日灌胃等量蒸馏水
[0051] 给予受试物组:低、高剂量组分别以0.15g · kg< · CfSOJg · kg] · Cf1泽泻多糖灌 胃胰岛素抵抗模型小鼠。
[0052]阳性药物组:罗格列酮浓度为lmg/mL。给药剂量为O.Olg kg"1 · cf1。
[0053] 1.4数据分析
[0054] 采用SPSS进行数据分析
[0055] 2、试验结果
[0056] 造模结果与泽泻多糖对试验动物糖耐量的影响如图1图2图3所示。
[0057] 图1 :造模8周末正常与模型组葡萄糖耐量（文士 S )，注a:与正常组比较：*P< 0.05，**Ρ<0.01。
[0058] 图2:泽泻多糖干预2周末葡萄糖耐量实验结果，注a:与模型组比较:*P<0.05，**P <0·01〇
[0059] 图3:泽泻多糖干预4周末丙酮酸耐量实验结果，注a:与模型组比较:*Ρ<0.05，**Ρ <0·01〇
[0060] 造模第8周时，葡萄糖耐量数据结果显示，高脂组在腹腔注射葡萄糖后30min， 60min和120min时间点的血糖值与正常组有显著差异。造模成功。
[0061] 给药2周时，葡萄糖耐量数据结果显示，罗格列酮阳性药组在腹腔注射葡萄糖后 15min，30min，60min和120min时间点的血糖值与模型组有显著差异，提示对于高脂饲料诱 导的小鼠胰岛素抵抗模型，阳性药罗格列酮能发挥其降糖作用。泽泻多糖低、高剂量组在 15min，30min，60min和120min时与模型组差异显著，给药4周时，丙酮酸耐量数据结果显不， 多糖高剂量组在腹腔注射丙酮酸后1511^11，3〇1^11，6〇1^11，12〇1^11血糖值与模型组有显著差 异提示泽泻多糖具有一定改善胰岛素抵抗效果且具有剂量相关性。
[0062] 综上所述，泽泻多糖0.15g · kg< · Cf1AJg · kg< · Cf1剂量组与模型对照组相比 较均可显著降低胰岛素抵抗模型小鼠空腹血糖水平。
[0063]以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发 明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括 在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1. 一种具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤： 选用粉碎的干燥物料粒度为40-100目泽泻粉末，采用纤维素酶提取，酶质量体积浓度为 0.4-0.6%，酶解温度35-40度，酶解时间120-180min，pH4-4.5，料液质量体积比为1:20-1: 30;升温灭活后得泽泻多糖提取液。2. 根据权利要求1所述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法，其特征在 于，所述升温具体为:95-100度处理lOmin。3. 根据权利要求1所述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法，其特征在 于，还包括步骤:将所得的泽泻多糖提取液再经浓缩、沉淀干燥得改善胰岛素抵抗作用的泽 泻多糖粉末。4. 根据权利要求3所述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法，其特征在 于:所述浓缩具体为:将所得的泽泻多糖提取液过滤，收集滤液，4000r/min离心15min，收集 上清液，将上清液浓缩至原来体积的1 /3，得浓缩液。5. 根据权利要求4所述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法，其特征在 于，所述"沉淀干燥得具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖粉末具体为"：在浓缩液中加入4 倍重量的乙醇，取下层沉淀，4000r/min离心15min，收集沉淀，真空干燥得具有改善胰岛素 抵抗作用的泽泻多糖粉末。6. 根据权利要求1所述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法，其特征在 于，具体包括如下步骤:取40目泽泻粉末，以料液质量体积比为1:20，加入pH为4.5的纤维素 酶质量体积浓度为0.4%柠檬酸缓冲液得混合液，将混合液至于40度恒温水浴锅中加热酶 解2h，之后在沸水中灭活lOmin，得泽泻多糖提取液。7. -种权利要求1-6任一项所述的具有改善胰岛素抵抗作用的泽泻多糖的提取方法所 制备的泽泻多糖。8. 权利要求7所述的泽泻多糖在制备具有改善胰岛素抵抗作用的药物中的作用。9. 一种药物组合物，其特征在于，包括医药学上可接受的载体和治疗有效量的权利要 求7所述的泽泻多糖。10. 根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为颗粒、散剂、片 剂、胶囊或口服液。
【文档编号】C08B37/00GK105859901SQ201610272958
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】吴水生, 许文, 黄小强, 张雪, 罗奋熔, 李小艳
【申请人】福建中医药大学