一种小檗碱纳米复合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药卫生领域，涉及小檗碱的新剂型，具体涉及一种小檗碱纳米复合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002]小檗碱卬6外641^381?，864)，是多种中草药如黄连、黄芩等有效成份之一。临床上用来治疗急慢性胃肠炎等胃肠疾病，历史悠久，疗效确切。近年来研究表明，小檗碱具有抗肿瘤、抗心律失常、降血脂、降血糖、改善胰岛素抵抗、预防血管狭窄、治疗阿尔茨海默病等作用，适用范围广，而且小檗碱是目前中药中为数不多的可以人工合成的小分子化合物。
[0003]但是小檗碱目前仍未广泛运用于临床，目前研究表明，小檗碱属于季铵型异喹啉类生物碱，呈强碱性，荷正电，由于其溶解度低，生物膜透过性差，口服吸收不佳，且易被胃肠道中的蛋白吸附而影响吸收，造成难于达到发挥药理作用的有效浓度，生物利用度极低，严重限制了小檗碱在临床重大疾病中的运用。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种小檗碱纳米复合物及其制备方法，通过将小檗碱与聚苯乙烯马来酸酐形成高分子纳米复合物，增加小檗碱的生物膜透过能力，提高小檗碱的生物利用度，具有广泛的应用前景。
[0005]本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是:
[0006]—种小檗碱纳米复合物的制备方法，室温下，将分子量为10000?25000的苯乙烯-马来酸酐交替共聚物溶于N，N_ 二甲基甲酰胺和三乙胺中，再加入小檗碱，搅拌过夜;加入碳酸氢钠的饱和水溶液，再次搅拌0.5?1.5h后；除去分子量在4000kD以下的物质，冷冻干燥或真空干燥，将干燥后的固体溶于水中制成9?I lmg/ml的溶液，超声处理35?45min，即得所述之小檗碱纳米复合物;所述苯乙烯-马来酸酐交替共聚物、N，N-二甲基甲酰胺、三乙胺、小檗碱、碳酸氢钠的饱和水溶液的配方比例为1.8?2.2g: 9?I Iml:0.9?1.1ml:480?520mg:4.8?5.2m10
[0007]—实施例中:所述苯乙烯-马来酸酐交替共聚物、N，N_ 二甲基甲酰胺、三乙胺、小檗碱、碳酸氢钠的饱和水溶液的配方比例为2g:1Oml: Iml:500mg:5mlo
[0008]—实施例中:所述苯乙烯-马来酸酐交替共聚物的分子量为20000。
[0009]一实施例中:采用透析袋除去分子量在3500kD以下的物质。
[0010]一实施例中:所述小檗碱纳米复合物为微束结构。
[0011 ] —实施例中:所述小檗碱纳米复合物可进入细胞，定位于细胞内溶酶体。
[0012]本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是:
[0013]上述的小檗碱纳米复合物的制备方法的制药用途。
[0014]本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是:
[0015]—种小檗碱纳米复合物，所述小檗碱纳米复合物为微束结构，可定位于细胞内溶酶体，该小檗碱纳米复合物由聚苯乙烯马来酸酐与小檗碱在N，N-二甲基甲酰胺和三乙胺中反应形成，且小檗碱包埋于苯乙烯-马来酸酐交替共聚物中。
[0016]本发明解决其技术问题所采用的技术方案之四是:
[0017]上述的小檗碱纳米复合物的制药用途。
[0018]本技术方案与【背景技术】相比，它具有如下优点:
[0019]本发明的要点在于各组分的摩尔比及制备方法，小檗碱属于异喹啉类生物碱，荷正电，聚苯乙烯马来酸酐的亲水部分荷负电，在结合中正负电荷因静电引力而相互结合；同时小檗碱和聚苯乙烯马来酸酐各自的亲水部分被疏水的基团取代，致使纳米复合的化合物的水溶性降低而析出沉淀，从而促使反应向生成复合物的方向进行，增加了反应转化率，且大量沉淀析出，易于清洗收集，干燥后即可得到小檗碱纳米复合物。该小檗碱纳米复合物可以增加小檗碱的生物膜透过能力，可提高小檗碱的生物利用度，扩展了小檗碱的临床应用范围，有望用于多种肿瘤、消化道、内分泌、心脑血管系统的急慢性疾病的治疗。
【附图说明】
[0020]下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
[0021]图1为dRB的分子结构式。
[0022]图2为小檗碱的分子结构式。
[0023]图3为本发明实验例2的小檗碱纳米复合物dRBOP-Berb的合成反应式示意图，其中五角星代表dRB，三角形代表小檗碱。
[0024]图4为实验例2的小檗碱纳米复合物dRBOP-Berb的紫外表征结果示意图，横坐标为波长，纵坐标为吸收度。
[0025]图5为实验例2的小檗碱纳米复合物dRB@P-Berb在pH值为7时的平均粒径示意图。
[0026]图6为实验例2的小檗碱纳米复合物dRB@P-Berb在pH值为7时的Zeta电势示意图。
[0027]图7为实验例2的小檗碱纳米复合物dRB@P-Berb在pH值为4时的平均粒径示意图。
[0028]图8为实验例2的小檗碱纳米复合物dRB@P-Berb在pH值为4时的Zeta电势示意图。
[0029]图9为对比例I的dRBOP在pH值为7时的平均粒径示意图。
[0030]图1O为对比例I的dRBOP在pH值为7时的Zeta电势示意图。
[0031 ] 图11为对比例I的dRBOP在pH值为4时的平均粒径示意图。
[0032]图12为对比例I的dRBOP在pH值为4时的Zeta电势示意图。
[0033]图13为实验例2的小檗碱纳米复合物dRBOP-Berb对B16F10细胞作用的荧光照片，图中第一行为dRBOP-Berb组，第二行为对照组；第一列为dRB显色照片，第二列为Lysotracker green显色照片，第三列为第一列与第二列的合成照，第四列为细胞的白光照片。其中，第一行左一图为dRBOP-Berb组的dRB显色照片，细胞内散在分布有红色荧光点，为罗丹明dRB显色，说明小檗碱纳米复合物dRB@P-Berb已进入B16F10细胞;第一行左二为dRB@P-Berb组的Lysotracker green显色照片，Lysotracker green为溶酶体特异性染料，细胞内绿色焚光即表不溶酶体;第一行右二为第一行左一与第一行左二的合成图，第一行左一的红色荧光与第一行左二的绿色荧光有部分叠加，显示出黄色荧光，表明小檗碱纳米复合物dRB@P-Berb可进入B16F10细胞，且可定位于溶酶体。第二行左一为对照组的dRB显色照片，未发现红色荧光点的存在。
[0034]图14为实验例2的小檗碱纳米复合物dRBOP-Berb对U87细胞作用的荧光照片，图中第一行为dRBOP-Berb组，第二行为对照组;第一列为dRB显色照片，第二列为Lysotrackergreen显色照片，第三列为第一列与第二列的合成照，第四列为细胞的白光照片。其中，第一行左一图SdRBOP-Berl^l的dRB显色照片，细胞内散在分布有红色荧光点，为罗丹明dRB显色，说明小檗碱纳米复合物dRBOP-Berb已进入U87细胞；第一行左二为dRBOP-Berb组的Lysotracker green显色照片，Lysotracker green为溶酶体特异性染料，细胞内绿色焚光即表示溶酶体;第一行右二为第一行左一与第一行左二的合成图，第一行左一的红色荧光与第一行左二的绿色荧光有部分叠加，显示出黄色荧光，表明小檗碱纳米复合物dRBOP-Berb可进入U87细胞，且可定位于