3S-吲哚甲基-6R-极性氨基酸修饰的哌嗪-2,5-二酮，其合成，活性和应用的制作方法

本发明涉及(3s,6r)-3-(aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮。涉及它们的制备方法、涉及它们的抗肿瘤转移活性，以及涉及它们的抗炎活性活性，因而本发明涉及它们在制备抗肿瘤转移药物和抗炎药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术

肿瘤严重威胁人类的健康。除了自身对肿瘤患者的预后恶劣之外，肿瘤并发的转移进一步恶化患者的预后。例如，超过90％以上肿瘤患者都是死于转移。由于现有抗肿瘤药物没有抗肿瘤转移作用，所以肿瘤化疗的临床疗效不理想。发明抗肿瘤转移的药物是临床的迫切需求。此前，发明人曾公开s,s-,r,r-,r,s-和s,r-四种构型的的二酮哌嗪在0.5μm浓度可抑制hcclm3(高转移人肝癌细胞)迁移和侵袭。后来发明人又公开r,r-构型的二酮哌嗪在5μmol/kg剂量下可抑制c57bl/6小鼠的肿瘤向肺转移。可是最低有效剂量为5μmol/kg。为了降低最低有效剂量，发明人对r,s-构型的二酮哌嗪的丁氨基展开了各种修饰。经过3年探索，发现用极性氨基酸(l-ser、l-arg、l-asn、和l-thr)酰化的氨基正己酸酰化r,s-构型的二酮哌嗪的丁氨基不仅可使抗肿瘤转移的最低有效剂量降至0.5μmol/kg，而且可使抗炎的最低有效剂量都降至0.5μmol/kg。因为药物的毒副作用都可以随剂量降低而消失，所以有效剂量降低10倍表明了这种结构修饰有突出的技术效果。根据这些发现，发明人提出了本发明。

技术实现要素：

本发明的第一个内容是提供下式的(3s,6r)-3-(aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(式中aa为l-ser残基、l-arg残基、l-asn残基、l-gln残基和l-thr残基)。

本发明的第二个内容是提供(3s,6r)-3-(aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(aa为l-ser残基、l-arg残基、l-asn残基、l-gln残基和l-thr残基)的合成方法，该方法包括：

(1)l-boc-lys(cbz)与d-trp-obzl缩合得boc-lys(cbz)-d-trp-obzl；

(2)boc-lys(cbz)-d-trp-obzl在氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱boc得lys(cbz)-d-trp-obzl；

(3)lys(cbz)-d-trp-obzl在5％碳酸氢钠水溶液饱和的乙酸乙酯溶液中环合生成(3s,6r)-3-(苄氧羰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(1)；

(4)化合物1氢解脱苄氧羰基得到(3s,6r)-3-氨基正丁基-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(2)；

(5)化合物2与boc-氨基正己酸缩合得(3s,6r)-3-(boc-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(3)；

(6)化合物3在氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱boc得到(3s,6r)-3-(氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(4)；

(7)化合物4与boc-aa(aa为l-ser残基、l-arg残基、l-asn残基和l-thr残基)缩合得(3s,6r)-3-(boc-aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5a-e)。

(8)化合物5a-e在氯化氢的乙酸乙酯溶液中脱boc得到(3s,6r)-3-(aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(6a-e)(aa为l-ser残基、l-arg残基、l-asn残基、l-gln残基和l-thr残基)。

本发明的第三个内容是评价(3s,6r)-3-(aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(aa为l-ser残基、l-arg残基、l-asn残基、l-gln残基和l-thr残基)抑制c57bl/6小鼠抗肺癌转移活性。

本发明的第四个内容是评价(3s,6r)-3-(aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(aa为l-ser残基、l-arg残基、l-asn残基、l-gln残基和l-thr残基)对icr小鼠炎症的抑制作用。

附图说明

图1(3s,6r)-3-(aa-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(6a-d)的合成路线.5a和6b中aa为l-ser残基；5b和6b中aa为l-arg残基；5c和6c中aa为l-asn残基；5d和6d中aa为l-gln残基；5e和6e中aa为l-thr残基；i)二环己基碳二亚胺(dcc),1-羟基苯并三唑(hobt),n-甲基吗啉(nmm),四氢呋喃(thf)；ii)氯化氢的乙酸乙酯溶液；iii)乙酸乙酯,5％碳酸氢钠；iv)二甲基甲酰胺(dmf),pd/c,h2。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备boc-lys(cbz)-d-trp-obzl

将4.56g(10mmol)l-boc-lys(cbz)混悬于100ml无水四氢呋喃(thf)中，在冰浴下依次往悬浮液中加1.35g(10mmol)1-羟基苯并三氮唑(hobt)及2.47g(12mmol)二环己基碳二亚胺(dcc)，然后搅拌30min。之后，加3.31g(10mmol)d-trp-obzl。反应化合物逐滴加入n-甲基吗啉(nmm)调节ph至9。反应混合物先在冰浴下搅拌1h，再室温搅拌12h。反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残留物用150ml乙酸乙酯溶液溶解。得到的乙酸乙酯溶液依次用5％khso4水溶液洗3次，饱和nacl水溶液洗3次。乙酸乙酯层用无水na2so4干燥12h，过滤，滤液减压浓缩至干。得到的黄色糖浆物经硅胶柱层析纯化(ch2cl2/ch3oh,100:1)得到4.95g(87％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/e):657[m+h]⁺。

实施例2制备lys(cbz)-d-trp-obzl

在冰浴与搅拌下3.28g(5mmol)boc-lys(cbz)-d-trp-obzl与52ml氯化氢的乙酸乙酯溶液缓慢混合。得到的溶液在冰浴中搅拌5h。之后，反应混合物减压浓缩。残留物用50ml无水乙酸乙酯溶解，得到的溶液减压浓缩。该操作重复三次。残留物用无水乙醚充分洗，得到2.36g(85％)标题化合物，为无色粉末。esi-ms(m/e):557[m+h]⁺。

实施例3制备(3s,6r)-3-(苄氧羰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(1)

将2.22g(4mmol)l-lys(cbz)-d-trp-obzl用100ml乙酸乙酯溶解，用三乙胺调ph至9，80℃搅拌100小时。滤出无色固体。滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(ch2cl2/ch3oh,100/1)。共得1.32g(65％)标题化合物。esi-ms(m/e):449[m+h]⁺。

实施例4制备(3s,6r)-3-氨基正丁基-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(2)

往1.30g(2.9mmol)(3s,6r)-3-(苄氧羰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(1)与20ml无水n,n-二甲基甲酰胺(dmf)的溶液中加200mgpd/c，室温通h248h。滤去pd/c，滤液减压浓缩得0.51g(56％)标题化合物，为无色粉末。esi-ms(m/e)：315[m+h]⁺。

实施例5制备boc-氨基正己酸

往1.311g(10mmol)氨基正己酸与30ml蒸馏水的溶液中加2.83g(boc)2o与30ml二氧六环的溶液，得到的反应液用浓度为2n的naoh水溶液调节ph至9。室温搅拌24h，期间不断减压抽气。反应混合物用khso4水溶液调节ph至7，减压浓缩。残留的溶液继续用khso4调节ph至2再用100ml乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用无水naso4干燥8h。过滤，滤液减压浓缩，得到2.18g(94％)标题化合物。esi-ms(m/e):232[m+h]⁺。

实施例6制备(3s,6r)-3-(boc-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(3)

采用实施例1的方法从0.97g(4.2mmol)boc-氨基正己酸和1.9g(3.5mmol)(3s,6r)-3-氨基正丁基-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(2)得到2.21g(71％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/z)：528[m+h]⁺.¹h-nmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.878(s,1h),8.044(s,1h),7.848(s,1h),7.681(m,1h),7.564(d,j＝7.8hz,1h),7.313(d,j＝7.8hz,1h),7.056(m,2h),6.943(m,1h),6.766(m,1h),4.063(m,1h),3.251(m,1h),2.969(m,6h),1.993(t,j＝7.5hz,2h),1.291(m,21h)。

实施例7制备(3s,6r)-3-(氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(4)

采用实施例2的方法从0.3g(0.5mmol)(3s,6r)-3-(boc-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(3)得到0.14g(58％)标题化合物，为无色粉末。esi-ms(m/z)：428[m+h]⁺；mp:129-131℃；(c＝0.1,ch3oh)；ir(cm^-1):3213,3054,2928，2861,1660,1547,1455,1324,1259,1099,743；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.887(s,1h),8.007(s,1h),7.820(s,1h),7.681(t,j＝3.6hz,1h),7.560(d,j＝7.8hz,1h),7.312(d,j＝7.8hz,1h),7.036(m,2h),6.942(t,j1＝4.5hz,1h),4.065(m,1h),3.040(m,2h),3.002(m,1h),2.939(m,1h),2.012(t,j＝4.5hz,2h),1.474(m,7h),1.263(m,7h)。

实施例8制备(3s,6r)-3-(boc-ser-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5a)

采用实施例1的方法从0.408g(1.9mmol)boc-ser和0.770g(1.6mmol)(3s,6r)-3-(氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(4)得到0.356g(35％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/z)：637[m+na]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.885(s,1h),7.998(s,1h),7.825(s,1h),7.673(m,2h),7.569(d,j＝7.8hz,1h),7.317(d,j＝8.1hz,1h),7.052(m,2h),6.946(t,j＝6.9hz,1h),6.510(d,j＝8.1hz,1h),4.904(m,1h),4.073(m,1h),4.067(m,1h),3.790(m,1h),2.952(m,7h),2.000(t,j＝7.2hz,1h),1.250(m,21h)。

实施例9制备(3s,6r)-3-(boc-arg-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5b)

采用实施例1的方法从2.480g(9mmol)boc-arg和3.500g(7.5mmol)(3s,6r)-3-(氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(4)得到1.523g(30％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/z)，684[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.943(s,1h),8.050(s,1h),7.860(m,2h),7.766(m,2h),7.572(d,j＝7.8hz,1h),7.322(d,j＝8.1hz,1h),7.042(m,2h),6.946(t,j＝7.2hz,1h),6.801(d,j＝7.8hz,2h),4.074(m,1h),3.869(m,1h),3.281(dd,j1＝24hz,j2＝3.6h,1h),3.175(s,1h),3.001(m,7h),2.014(t,j＝7.2hz,1h),1.456(m,9h),1.380(m,9h),1.086(m,7h)。

实施例10制备(3s,6r)-3-(boc-asn-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5c)

采用实施例1的方法从0.139g(0.6mmol)boc-asn和0.236g(0.5mmol)(3s,6r)-3-(氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(4)得到0.715g(46％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/z)：642[m+h]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.887(s,1h),8.030(s,1h),7.846(s,1h),7.669(m,1h),7.575(d,j＝7.8hz,1h),7.322(d,j＝7.8hz,1h),7.257(s,1h),7.044(m,2h),6.951(t,j＝7.8hz,2h),6.869(s,1h),6.805(d,j＝8.1hz,2h),4.178(m,1h),4.081(s,1h),3.261(m,1h),3.002(m,6h),2.364(m,2h),2.003(t,j＝7.2hz,2h),1473(m,15h),1.090(m,6h)。

实施例11制备(3s,6r)-3-(boc-gln-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5d)

采用实施例1的方法从0.472g(2.0mmol)boc-gln和0.741g(1.6mmol)(3s,6r)-3-(氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(4)得到0.398g(38％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/z)：678[m+na]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.926(s,1h),8.078(s,1h),7.878(s,1h),7.774(m,1h),7.720(m,1h),7.566(d,j＝8.1hz,1h),7.315(d,j＝8.1hz,1h),7.302(s,1h),7.059(m,2h),6.944(t,j＝6.9hz,1h),6.812(m,2h),4.070(m,1h),3.900(m,1h),3.231(m,1h),3.169(d,j＝5.1hz),2.297(m,6h),2.012(m,4h),1774(m,2h),1.473(m,4h),1.374(m,10h),1.192(m,7h)。

实施例12制备(3s,6r)-3-(boc-thr-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5e)

采用实施例1的方法从0.454g(2.0mmol)boc-thr和0.800g(1.7mmol)(3s,6r)-3-(氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(4)得到0.652g(60％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/z)：651[m+na]⁺；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.927(s,1h),8.071(s,1h),7.869(s,1h),7.730(m,2h),7.565(d,j＝7.8hz,1h),7.313(d,j＝8.1hz,1h),7.037(m,2h),6.943(t,j＝7.2hz,1h),6.292(d,j＝8.7hz,1h),4.763(m,1h),4.067(m,1h),3.863(m,1h),3.776(m,1h),3.548(m,1h),3.229(m,1h),3.009(m,5h),1.994(t,j＝7.2hz,2h),1.469(m,15h),1.195(m,6h),1.056(m,3h)。

实施例13制备(3s,6r)-3-(ser-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(6a)

按照实施例2的方法从0.963g(1.5mmol)(3s,6r)-3-(boc-ser-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5a)得到0.323mg(40％)标题化合物，为无色固体。esi-ms(m/z)：515[m+h]⁺；mp143-146℃；(c＝0.1,ch3oh)；ir(cm^-1):3221,3077,2928,2859,1657,1556,1455,1323,1260,1096,742；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.962(s,1h),8.848(m,1h),8.185(s,3h),8.059(m,1h),7.857(s,1h),7.765(m,1h),7.569(d,j＝7.8hz,1h),7.322(d,j＝7.8hz,1h),7.041(m,2h),6.941(t,j＝7.2hz,1h),4.073(m,1h),3.690(m,3h),3.270(dd,j1＝14.4hz,j2＝7.5hz,1h),3.102(m,2h),2.975(m,4h),2.020(t,j＝7.5hz,2h),1.466(m,6h),1.137(m,6h)。

实施例14制备(3s,6r)-3-(arg-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(6b)

按照实施例2的方法从1.028g(1.7mmol)(3s,6r)-3-(boc-arg-氨氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5b)得到0.474gg(54％)标题化合物，为无色粉末。esi-ms(m/z)：584[m+h]⁺；mp160-163℃；(c＝0.1,ch3oh)；ir(cm^-1):3184,3076,2932,2861,1650,1551,1454,1324,1257,1097,743；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.965(s,1h),8.715(m,1h),8.327(s,3h),8.068(s,1h),7.957(m,1h),7.866(s,1h),7.819(m,1h),7.569(d,j＝7.8hz,1h),7.322(d,j＝8.1hz,2h),7.042(m,2h),6.940(t,j＝6.9hz,1h),4.074(m,1h),3.792(m,1h),3.037(m,9h),2.033(t,j＝7.5hz,2h),1.752(m,2h),1.432(m,8h),1.114(m,6h)。

实施例15制备(3s,6r)-3-(asn-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(6c)

按照实施例2的方法从0.641g(1mmol)(3s,6r)-3-(boc-asn-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5c)得到0.444g(82％)标题化合物，为无色粉末。esi-ms(m/z)：542[m+h]⁺；mp152-155℃；(c＝0.1,ch3oh)；ir(cm^-1):3274,2928,2862,1650,1536,1434,1324,1228,1100,742；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.898(s,1h),8.051(s,1h),7.858(s,2h),7.689(s,1h),7.572(d,j＝7.8hz,1h),7.380(s,1h),7.321(d,j＝7.8hz,1h),7.045(m,2h),6.950(t,j＝7.5hz,2h),6.835(s,1h),4.077(m,1h),3.436(m,1h),3.259(dd,j1＝14.1hz,j2＝3.3hz,1h),2.954(m,6h),2.395(dd,j1＝14.7hz,j2＝3.9hz,1h),2.151(m,1h),2.009(t,j＝7.2hz,2h),1.434(m,6h),1.200(m,6h)。

实施例16制备(3s,6r)-3-(gln-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(6d)

按照实施例2的方法从1.028g(1.7mmol)(3s,6r)-3-(boc-gln-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5d)得到0.474g(54％)标题化合物，为无色粉末。esi-ms(m/z)：584[m+h]⁺；mp160-163℃；(c＝0.1,ch3oh)；ir(kbr,cm^-1):3184,3076,2932,2861,1650,1551,1454,1324,1257,1097,743；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.956(s,1h),8.556(s,1h),8.296(s,3h),8.065(s,1h),7.863(s,1h),7.771(m,1h),7.586(d,j＝7.8hz,1h),7.513(s,1h),7.321(d,j＝7.8hz,1h),7.041(m,2h),6.942(m,2h),4.073(m,1h),3.748(m,1h),3.254(dd,j1＝14.4hz,j2＝4.2hz,1h),3.089(m,6h),2.162(m,2h),2.027(t,j1＝7.2hz,2h),1.925(m,2h),1.450(m,6h),1.159(m,6h)。

实施例17制备(3s,6r)-3-(thr-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(6e)

按照实施例2的方法从0.839g(1.7mmol)(3s,6r)-3-(boc-thr-氨基正己酰基氨基正丁基)-6-(吲哚-3-甲基)-哌嗪-2,5-二酮(5e)得到0.336g(48％)标题化合物，为无色粉末。esi-ms(m/z)：529[m+h]⁺；mp153-158℃；(c＝0.1,ch3oh)；ir(kbr,cm^-1):3231,3078,2929,2860,1655,1549,1454,1323,1254,1098,742；¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ/ppm＝10.964(s,1h),8.574(m,1h),8.150(m,3h),8.062(s,1h),7.859(s,1h),7.770(m,1h),7.569(d,j＝7.8hz,1h),7.322(d,j＝7.8hz,1h),7.043(m,2h),6.944(t,j＝6.9hz,1h),4.069(m,1h),3.614(m,2h),3.254(dd,j1＝14.4hz,j2＝4.2hz,1h),3.064(m,1h),2.021(t,j＝7.2hz,2h),1.494(m,6h),1.238(m,6h),1.060(d,j＝15.3hz,3h)。

实施例18测定化合物6a-e的抗肿瘤转移活性

本测定模型用lewis小鼠肺癌细胞(llc,购自atcc)接种,选用dmem培养基(含10％经灭活的胎牛血清,1×10⁵u/l青霉素和100mg/l链霉素),按照贴壁细胞培养方法每两天传代一次，富集细胞。待细胞生长状态良好并处于对数生长期时消化细胞，用生理盐水调整细胞密度至1×10⁷个/ml。胎盘蓝染色，使活细胞计数>95％。取近交系c57bl/6雄性小鼠(spf级,体重20±2g)，左手固定小鼠。用75％乙醇对小鼠右前肢腋窝皮肤消毒。右手持1ml无菌注射器往小鼠腋部皮下注射llc肿瘤细胞悬液，每只小鼠注射0.2ml。小鼠接种10天后，长出直径约4-5mm的肿瘤即为瘤源。接种10天的lewis肺癌荷瘤小鼠乙醚麻醉，脱颈椎处死。用75％乙醇浸泡10min，消毒，在超净工作台上剥离瘤体。选择生长良好的肿瘤组织在无菌平皿中剪碎，置于玻璃制造的组织匀浆器内。按瘤块重比生理盐水体积为1比3(g比ml)的比例加温度为4℃的生理盐水，轻轻研磨制成细胞悬液。细胞悬液过200目细胞筛制单细胞悬液。用生理盐水调单细胞悬液的细胞密度至1.5×10⁷个/ml。胎盘蓝染色，使活细胞计数>95％。左手固定近交系c57bl/6雄性小鼠，用75％的乙醇对小鼠右前肢腋窝皮肤消毒。右手持1ml无菌注射器于小鼠腋部皮下注射瘤细胞悬液，每只注射0.2ml。接种10天后小鼠长出直径4-5mm的肿瘤，按测得的肿瘤体积将接种小鼠随机分组。每组12只小鼠。接种肿瘤的第11天小鼠或口服公认的抗肿瘤转移肽rgds的生理盐水溶液(剂量为20μmol/kg/天)或口服化合物6a-e的生理盐水溶液(剂量为0.5μmol/kg/天)或口服化合物4的生理盐水溶液(剂量为5μmol/kg/天)或口服生理盐水(剂量为10ml/kg/天)，每天给1次药，连续给药12天，每隔两天测量并记录肿瘤体积。最后一次给药的次日测量瘤体积，乙醚麻醉脱颈椎处死，取小鼠的肿瘤称重，取小鼠的肺并计算肿瘤肺部转移的瘤节数。用t检验对数据进行统计分析。结果见表1。在0.5μmol/kg剂量下化合物6a-e不仅有效地抑制肿瘤肺转移，而且活性与剂量比它们高40倍的rgds及剂量比它们高10倍的化合物4没有显著性差异。这些数据表明，本发明有显著的技术效果。

表1化合物6a-e的抗肿瘤转移活性

a)与生理盐水比p<0.01,与rgds及化合物4比p>0.05；n＝12

实施例19测定化合物6a-e的抗炎活性

因为二甲苯引起的小鼠耳肿胀被公认为急性炎症模型，所以本发明在二甲苯引起的小鼠耳肿胀模型上测定化合物6a-e的治疗作用。因为阿司匹林是治疗急性炎症的阳性药，所以本发明选择阿司匹林为阳性对照药。icr雄性小鼠(体重42±3g)在温度为22℃的环境静息2天,自由饮水和进食。之后，随机分为生理盐水组(剂量为0.2ml/只)，阿司匹林组(剂量为1.11mmol/kg)，化合物4组(剂量为5μmol/kg)及化合物6a-e组(剂量为0.5μmol/kg)，每组12只小鼠。测定时小鼠按所在组或口服生理盐水，或口服阿司匹林，或口服化合物4，或口服化合物6a-e。给药30min后,往小鼠的左耳廓均匀涂抹30μl二甲苯,2h后小鼠接受乙醚麻醉，断颈处死,剪下左右两耳,用7mm的打孔器在两耳的相同位置取圆形耳片,称重,求出两耳肿胀差值作为肿胀度。即肿胀度＝左耳圆片重量–右耳圆片重量。结果见表2。在0.5μmol/kg剂量下化合物6a-e不仅有效地抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀，而且活性与剂量比它们高2220倍的rgds和剂量比它们高10倍的化合物4没有显著性差异。这些数据表明，本发明有显著的技术效果。

表2化合物6a-e对二甲苯引起的小鼠耳肿胀的影响

a)与生理盐水比p<0.01,与rgds及化合物4比p>0.05；n＝12。