本发明属于药物合成领域，具体涉及一种青霉素钾盐对照品的制备方法。
背景技术：
：青霉素钾(penicillingpotassium；benzylpenicillinsotassium)又名青霉素g钾，青霉素钾盐，汴青霉素，卞青霉素g钾盐，其结构如式(ⅰ)所示。青霉素钾为白色晶体性粉末，无臭或微有特异性臭，有吸湿性。易溶于水，生理盐水，葡萄糖溶液。水溶液在室温放置易失效，遇酸，碱，氧化剂等迅速失效。青霉素对溶血性链球菌等链球菌属、肺炎链球菌和不产青霉素酶的葡萄球菌具有良好抗菌作用。对肠球菌有中度抗菌作用。淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽孢杆菌、牛型放线菌、念珠状链杆菌、李斯特菌、钩端螺旋体和梅毒螺旋体对本品敏感。本品对流感嗜血杆菌和百日咳鲍特氏菌亦具一定抗菌活性。青霉素通过抑制细菌细胞壁合成而发挥杀菌作用。现有制备青霉素钾对照品的方法一般采用丁醇共沸结晶的方法，能耗大，还有待改进。技术实现要素：本发明的目的是为了制备一种纯度高、含量高、透光度高、晶型好、方便称取的青霉素钾盐对照品。一种高纯度青霉素钾对照品的制备方法，其特征在于：步骤如下：(1)将青霉素钾中间体溶于纯化水中，制得浓度为30～65wt％的青霉素钾水溶液；(2)加入15～25倍纯化水体积的有机溶剂，搅拌混匀制得混合青霉素钾溶液；(3)在搅拌状态下，流加50～60倍纯化水体积的有机溶剂，结晶，抽滤，洗涤，干燥，即得。进一步地，步骤(1)中，所述青霉素钾水溶液的浓度为40～50wt％。进一步地，步骤(2)和(3)中，所述有机溶剂分别独立地选自丙酮、正丁醇或醋酸乙酯。进一步地，：步骤(2)和(3)中，所述有机溶剂均为正丁醇。进一步地，步骤(1)～(3)所述的纯化水和有机溶剂的温度均为0～10℃。进一步地，步骤(1)～(3)所述的纯化水和有机溶剂的温度均为5±1℃。进一步地，步骤(3)中，所述的流加速度为3～6升/小时，优选为4升/小时。进一步地，所述洗涤是指分别用正丁醇和乙酸乙酯洗涤1～3次。本发明的优点在于：(1)以青霉素钾中间体为原料，原料价格低。(2)制备方法简单。(3)制备装置简单。(4)制备过程控制在低温，产品纯度高，质量优。纯度高、含量高、透光度高、晶型好。本方法在制备过程中，对废正丁醇返回溶媒回收系统进行回收，降低了对溶媒的消耗。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。具体实施方式以下实例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实例中涉及到的百分号“％”，是指质量百分比。本发明所用试剂均为市售常规试剂，本发明中青霉素发酵液和青霉素钾可以通过购买或以下方法制备得到。本发明青霉素发酵液的制备方法如下：冷冻管(25℃孢子培养7天)----斜面母瓶(25℃孢子培养7天)----小米孢子(26℃种子培养56小时)----一级种子培养液(27℃种子培养24小时)-----二级种子培养液(26.5℃发酵7天)——发酵液(110000u/ml)。本发明中，青霉素钾中间体的生产方法如下：青霉素发酵液经过滤，用浓度为10wt％的硫酸溶液、2wt％破乳剂溶液(200ml/十亿滤液)、醋酸丁酯(发酵液与醋酸丁酯体积比为3:1)调ph为1.8～2.2，离心分相，得一次醋酸丁酯提取液，将一次醋酸丁酯提取液中加入33％碳酸钾水溶液抽提，得80～90万u/ml青霉素钾水溶液，加入一定量的正丁醇，使成为水分20％～25％，效价30～40万的溶液，真空共沸结晶、过滤、洗涤、干燥得青霉素钾中间体，其400nm透光度大于90％、含量大于97％，纯度为大于1550u/mg。实施例1青霉素钾盐对照品的制备准备冷却至5℃左右的纯化水240ml和正丁醇20000ml。称取青霉素钾中间体220.0g于5000ml烧杯中，加入240ml冷却的纯化水，搅拌溶解得到400～500ml青霉素钾水溶液，再加入4000ml冷却至5℃的正丁醇，将该溶液倒入25l小试结晶罐中，制冷机循环冷却于5℃左右，搅拌，缓慢流加(4升/小时)冷却的正丁醇14000ml，结晶结束。过滤，用正丁醇洗涤两次(1000ml/次)、380ml乙酸乙酯顶洗2次，抽干，60℃真空干燥4小时，得177.8g青霉素钾对照品。实施例2青霉素钾盐对照品的制备准备冷却至5℃左右的纯化水240ml、正丁醇20000ml。称取青霉素钾中间体220.0g于10000ml烧杯中，加入240ml冷却的纯化水，搅拌溶解，再加入5000ml经冷却的正丁醇，将该溶液倒入25l小试结晶罐中，制冷机循环冷却于5℃左右，搅拌，缓慢流加(4升/小时)冷却的正丁醇13000ml，结晶结束。过滤，用正丁醇洗涤两次(1000ml/次)、380ml乙酸乙酯顶洗，抽干，60℃真空干燥4小时，得181.8g青霉素钾对照品。实施例3青霉素钾盐对照品的制备准备冷却至5℃左右的纯化水240ml、正丁醇20000ml。称取青霉素钾中间体220.0g于10000ml烧杯中，加入240ml冷却的纯化水，搅拌溶解，再加入5000ml经冷却的正丁醇，将该溶液倒入25l小试结晶罐中，制冷机循环冷却于5℃左右，搅拌，缓慢流加(4升/小时)冷却的剩余正丁醇13000ml，结晶结束。过滤，用正丁醇洗涤两次(1000ml/次)、380ml乙酸乙酯顶洗，抽干，60℃真空干燥4小时，得185.8g青霉素钾对照品。以下通过试验数据说明本发明的有益效果。1、高效液相色谱法检测青霉素钾对照品含量和纯度色谱条件：色谱柱(4.6×250mm，5μm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相：0.5mol/l，磷酸二氢钾溶液(用磷酸调ph至3.5)：甲醇：纯化水按体积比10:40:50比例混合均匀既得；流速为1.0ml/min；柱温35℃；波长为225nm；进样量：10μl。系统适用性试验：称取青霉素g钾盐对照品约50mg(即：45～55mg)两份，精密称定，分别于两个50ml容量瓶中，用纯化水溶解后定容作为对照溶液，分别随机编号为(1)和(2)。标准品溶液(1)进样5次，标准品溶液(2)进样1次，完成系统适用性实验。主峰与相邻峰的分离度应大于1.5，最小理论塔板数应不大于5000，拖尾因子应不得过2.5，且第一份标准品溶液连续5针峰面积的rsd不得过1.0％。两份对照溶液质量响应系数之间的相对偏差不得过1.0％。测定方法：称取本品约50mg(即：45～55mg)两份，精密称定，分别于两个50ml容量瓶中，用纯化水溶解后定容，作为供试品溶液。按照上述色谱条件进行分析，每样进1针，记录色谱图，以外标法计算。纯度则在记录色谱图中显示峰面积百分比直接读取。2、透光率测试称定本品1.0g(即：0.9900～1.0100g)于25ml比色管中，加纯化水溶解并定容至10ml刻度线，摇匀，以纯化水作空白，在400nm波长处测定透光率。精密度要求：两平行样之间的绝对差值不得过0.1％。3、鉴别按照含量测定项下，在记录色谱图中，产品主峰的保留时间应与青霉素g钾对照品主峰的保留时间一致。4、ph值(标准：本品ph值应为5.0～7.5)称取本品0.9g(即：0.86～0.94g)，用30ml新沸并放冷至室温的纯化水溶于50ml小烧杯中。用已校正的ph计测定样品溶液的ph值。5、溶液颜色(标准：本品溶液颜色不得深于2号标准比色液)称取本品0.5g(即：0.46～0.54g)于25ml纳氏比色管中，加水稀释至10ml，另取黄色或黄绿色0.5号、1号、2号标准比色液同置于白色背景上，自上向下观察或同置白色背景前平视观察，判定样品溶液颜色色号6、溶液澄清度(标准：本品溶液澄清度不得深于2号浊度标准比色液)称取本品0.25g(即：0.2460～0.2540g)置于50ml纳氏比色管中，加磷酸盐缓冲溶液(ph7.0)25ml，经超声振荡3min后，加入磷酸盐缓冲溶液(ph7.0)定容至刻线。另取0.5号、1号、2号浊度标准液同在暗室内垂直置于澄明度检测仪下，照度1000lx，从水平方向观察，判定样品溶液澄清度。测试结果如表1所示。表1.实施例1～3制备的青霉素钾对照品理化检测结果性状鉴别ph值溶液颜色溶液澄清度透光率含量纯度白色结晶性粉末符合规定6.2浅于0.5号浅于0.5号96.80％99.90％99.80％白色结晶性粉末符合规定6.2浅于0.5号浅于0.5号96.70％100.10％99.90％白色结晶性粉末符合规定6.2浅于0.5号浅于0.5号96.10％99.90％99.83％由表1结果可见，实施例1～3制备的青霉素钾对照品含量高、纯度高，透光度高。本发明提供了一种青霉素钾标准品的制备方法。本发明提供的制备方法原料价格低，制备工艺简单，制备出的青霉素钾标准品纯度高、含量高、透光度高、晶型好。当前第1页12