本发明属于微生物
技术领域：
，具体涉及一株产香放线菌及其对诺邓火腿增香的应用。
背景技术：
：诺邓火腿是云南省云龙县诺邓村的特产，与宣威火腿、鹤庆的圆腿并称为云南三大名腿。诺邓火腿传承着用盐泥敷腌火腿的千年工艺，生产出的火腿香味浓郁、色泽红润、入口美不胜收、满口余香，相传南诏时期即是宫廷贡品，千百年来已成为远近闻名的地方名优土特产品。腌制诺邓火腿的盐，是本地自产自销的诺盐，再加上诺邓特殊的气候条件，造就了诺邓火腿优良的品质。本发明提供的产香放线菌分离自诺盐盐矿。经鉴定，该放线菌为耐盐高温双歧菌（thermobifidahalotolerans），具有独特的产香功能。该耐盐高温双歧菌是云南大学微生物研究所2008年发现的高温双歧菌属的一个新种，目前对它的研究主要集中在酶学方面（产高温纤维素酶和木聚糖酶等），对其挥发性产物的研究未见报道。本发明将耐盐高温双歧菌作为发酵剂，在诺邓火腿的腌制阶段进行接种，火腿成品挥发性成分的总类数显著增加，增香效果明显。技术实现要素：本发明的目的之一在于提供一株产香放线菌菌株。本发明的另一目的在于提供上述菌株在诺邓火腿腌制阶段，使火腿增香的应用。菌株及其特性：本发明提供的产香放线菌菌株为耐盐高温双歧菌（thermobifidahalotolerans），已于2017年04月18日保藏于云南省微生物研究所，菌株保藏号为yimyu1701。该菌株的特性如下。好氧，革兰氏阳性，在isp培养基2、pda和营养琼脂培养基中生长良好，在isp培养基3、4和5中生长缓慢，在查氏培养基中不生长。基内菌丝体发达，气生菌丝体仅在营养琼脂培养基上形成。孢子光滑、单个着生于气生菌丝上，气生菌丝呈二叉分枝状不断延伸。其最适生长条件为：温度45℃，ph7.0-8.0。硝酸盐还原试验呈阳性，能产生纤维素酶、淀粉酶以及木聚糖酶等，明胶液化阴性，牛奶胨化和凝固阴性，h2s试验和脲酶试验阴性，不产生黑色素。对上述菌株进行16srdna序列分析，结果显示，它与耐盐高温双歧菌模式菌株yim90462t相似度达到100%。菌株对诺邓火腿增香应用：先将上述菌株进行安全性检测，包括溶血性试验和动物试验，确定其为无毒型菌株。然后将其作为发酵剂，在诺邓火腿的腌制阶段进行接种，待火腿成熟后利用固相微萃取技术提取挥发性成分，利用气相色谱-质谱(gc-ms)联用技术分析其组成。附图说明图1表示的是菌株对于诺邓火腿的发酵工艺。具体实施方式以下实施例可以对本发明作进一步说明：1.菌株的安全性检测1.1溶血性试验：以普通营养琼脂培养基为基础，加入羊血混匀，趁热倾注平皿，冷却保藏，将被检菌划线接种于血琼脂平板中，经37℃倒置培养48h后，观察其菌落周围是否产生溶血圈。1.2动物试验：将所要检验的菌株活化两代，用生理盐水调节菌体浓度为106cfu/ml。用无菌注射器吸取菌液1ml注射于小鼠腹腔，观察小鼠饮欲、食欲、活动及死亡情况，试验期为两周。2.菌株的安全性检测结果经溶血性试验，菌落周围未产生溶血圈。在动物试验期间，小鼠生长良好，进食正常，未见死亡。由此可推断其为无毒型菌株。接种：将上述菌株作为发酵剂，在诺邓火腿的腌制阶段进行接种。3.香气成分提取及gc-ms分析以不接种菌的诺邓火腿为对照组，利用固相微萃取技术对火腿成品进行香气成分的提取，利用气相色谱-质谱（gc-ms）联用技术分析其组成。4.1香气成分提取：将固相微萃取头在气相色谱进样口250℃老化2h。火腿样品冷冻24h后切成细粒，取4g放入15ml样品瓶中，萃取头插入样品瓶并推出吸附纤维头，60℃恒温吸附40min，随后插入气相色谱仪进样口250℃解吸2min。4.2香气物质的鉴定：采用hp6890型气相色谱/5973型质谱联用仪对香味成分进行分析和鉴定。spme纤维头上所吸附的挥发性化合物被解吸下来，挥发性化合物在hp-5ms色谱柱上完成分离（以n2为载气，流速是1.0ml/min）。5.香气成分（挥发性成分）统计分析用质谱检索化合物时，由于化合物总数太多，所以只对相对百分含量≥0.01%的化合物进行检索。风味是火腿最重要的质量指标，而在火腿腌制过程中，脂肪、蛋白质等风味前体物质在各种因素的作用下发生了酶促或非酶变化，形成了醛类、酸类、酯类等挥发性成分，是火腿风味香气的重要来源。由表1可知，相对于不接菌的对照组，接种耐盐高温双歧菌的诺邓火腿其挥发性成分的总类数显著增加。这表明耐盐高温双歧菌对诺邓火腿的增香效果明显。表1不同处理的诺邓火腿挥发性成分的种类比较处理醛类酸类醇类烃类酯类酮类其他总计接菌131145751964不接菌12865531049当前第1页12