用于红假单胞菌属光合细菌附着生长的培养基及培养方法与流程

文档序号:14044342阅读:566来源:国知局

本发明属于微生物技术领域,涉及微生物培养基和培养方法,具体涉及用于红假单胞菌属光合细菌附着生长的培养基及培养方法。



背景技术:

光合细菌尤其是红假单胞菌属光合细菌目前在有机废水处理(如大豆加工废水、家禽排泄物、牛粪污水、猪粪废水、餐饮废水等)、治理重金属废水、水产养殖、畜禽养殖等领域应用较多,其具有多种功能,如将氨态氮、硫化氢和其他有害物质吸收而净化水质、作为培养浮游动物的饵料、以及作为饲料添加剂、生产生物辅酶等;并且光合细菌能产生氢气,从而在新能源研究方面很有意义。目前广泛利用的红假单胞菌属光合细菌的液体培养基主要成分是乙酸钠、酵母膏、硫酸镁、氯化铵、磷酸二氢钾和水等,其固体培养基主要成分是牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂和水等,这些培养基为红假单胞菌的大量生长提供充分的碳、氮、磷等基本元素以及其他的营养因子。

红假单胞菌属光合细菌用于处理有机废水的原因和机理也有大量的研究。以往的研究表明,高分子的有机物被异养细菌降解后产生的低分子有机酸、氨基酸、糖类等物质可以被红假单胞菌利用;无论是在好氧还是厌氧条件下,很多光合细菌都能耐受相当高的有机物浓度,并能在有机物降解后形成的酸性环境中进一步降解有机物,实现对有机物的处理和菌体自身的生长。但是以往的研究基本以浮游态生长的红假单胞菌为主,虽然有些文献资料中报道红假单胞菌的贴壁生长(即附着生长),但是没有研究如何实现红假单胞菌的大量附着生长。

由于红假单胞菌具有多种功能,市场上有大量红假单胞菌可购买,但是这些红假单胞菌均是含大量水的液态存在形式,而不是像枯草芽孢杆菌菌体一样与相关物质一起做成固态菌剂,红假单胞菌的这种液态存在形式导致其中细菌的浓度不能达到更高,也限制其保存环境、保存条件以及如何方便地大量运输等。虽然通过离心或者其他的浓缩技术可以在一定程度上浓缩红假单胞菌,但是其需要消耗大量的能量和时间,经济附加值不高;且市售的用于快速大量培养红假单胞菌的培养基也只能培养出浮游态生长的红假单胞菌,而不能大量培养附着态生长的红假单胞菌。那么,如果能直接获得非液态形式存在或者泥浆状的红假单胞菌,则能极大地提高红假单胞菌的浓度,也能够为红假单胞菌的运输及进一步利用提供便利。



技术实现要素:

为克服现有技术的上述缺陷,本发明的目的在于提供用于红假单胞菌属光合细菌附着生长的培养基,另一方面,本发明的目的还在于提供上述用于红假单胞菌属光合细菌附着生长的培养基的培养方法,进一步地,本发明的目的还在于提供有上述培养方法制备得到的红假单胞菌属光合细菌。

发明人在前期研究基础上已经发现红假单胞菌的多种规模化培养方法,如利用餐饮垃圾或者配合饲料为基础原料大量培养红假单胞菌,其中是以浮游态生长的菌体为主,同时也会出现附着态生长的红假单胞菌;发明人继续研究发现通过培养基可获得附着生长的泥浆状红假单胞菌属光合细菌,菌体细胞浓度远高于浮游态生长,培养成本低,且培养方法稳定可靠、原料易得、便于实施,便于实现红假单胞菌进一步资源化利用。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:

用于红假单胞菌属光合细菌附着生长的培养基,由无水乙醇、ca(h2po4)2·h2o、mgso4·7h2o、柠檬酸三铵、kh2po4、粉末状碳酸钙、酵母膏、谷氨酸、有机物腐烂液和纯水混合而成;其中,

所述无水乙醇的添加量为50~100ml/l,

所述ca(h2po4)2·h2o的添加量为1.4~2.8g/l,

所述mgso4·7h2o的添加量为0.4~1.0g/l,

所述柠檬酸三铵的添加量为5~20g/l,

所述kh2po4的添加量为0.7~3.5g/l,

所述粉末状碳酸钙的添加量为1~5g/l,

所述酵母膏的添加量为2~5g/l,

所述谷氨酸的添加量为1~3g/l,

所述有机物腐烂液的添加量为80~100ml/l,

余量为纯水;且通过h3po4调节所述培养基的初始ph值为5.5~6.5。

所述有机物腐烂液包括餐饮垃圾、动物排泄物、浮游藻类水华、粮食作物、动物配合饲料、大豆加工废物中的一种或几种,与水混合后经过40~60天腐烂发酵至水体散发臭味,且控制其中非沉底物的液态部分的总氮含量为1000~2500mg/l。

用于红假单胞菌属光合细菌附着生长的培养基的培养方法,包括以下步骤:

s1、将上述配置好的培养基在不灭菌的条件下,直接放置在开口透明容器中,并将上述容器放置在玻璃温室中,保证白天的光照强度在5000~60000lx;

s2、将步骤s1中容器内的培养基进行曝气,将部分空气输入到培养基中,形成局部有氧环境;

s3、向步骤s2中曝气后的培养基接种红假单胞菌属光合细菌,接种母液的量为50~100ml/l,且接种后培养基中瞬时红假单胞菌属光合细菌的细胞浓度为5.0×1011~2.0×1012cells/l;

s4、将步骤s3中接种后的培养基培养35天以下,容器内壁上析出盐类晶体,随着盐类晶体在容器内壁上析出、附着,红假单胞菌在内壁析出的晶体上逐渐生长,所述晶体颜色逐渐由无色变为暗红色;附着生长的红假单胞菌达到高峰时,内壁上附着的厚度为1~3mm,呈泥浆状,同时培养基水体中也生长有浮游态的红假单胞菌属光合细菌;最后将所述泥浆状的附着物刮取下来即得红假单胞菌属光合细菌。

步骤s1中所述的开口透明容器中温度为22~42℃。

步骤s2中所述的曝气方式为利用气石进行局部曝气,且在开始培养时即开始曝气,在培养到20~25天时停止曝气。

进一步地,步骤s4中所述的盐类晶体包括氧、氢、磷、镁、碳、氮元素。

更进一步地,步骤s4中所述的析出盐类晶体为mg(hco3)2和(nh4)2hpo4的混合物。

进一步地,步骤s4中所述培养基培养1天后,容器内壁上即析出微小盐类晶体使内壁变粗糙。

进一步地,步骤s4中所述泥浆状的红假单胞菌属光合细菌刮取下来后,继续添加步骤s1所述配置好的培养基,且不超过步骤s1中所述的添加量,容器内壁上会持续生长附着态的红假单胞菌属光合细菌群。

培养基的组分和添加量说明:无水乙醇的作用除了为红假单胞菌属光合细菌的生长提供有机碳源外,最关键的是利用多种无机盐微溶于或者不溶于乙醇的特性,有利于无机盐间发生反应生成的新的无机盐并以晶体形式析出在容器内壁上;ca(h2po4)2·h2o提供钙、磷元素;mgso4·7h2o提供镁、硫元素;柠檬酸三铵是为在酸性条件下提供无机氮;kh2po4提供钾、磷元素;粉末状碳酸钙提供有储备性质的钙元素和无机碳;酵母膏和谷氨酸提供微量元素及氨基酸等生长因子;有机物腐烂液不仅可以提供有利于光合细菌生长需要的微量元素、低分子有机酸及氨基酸等生长因子,而且还含有一定的微生物,但是这些微生物以分解高分子有机物的异养细菌为主,在本培养基中已经不能与红假单胞菌形成有效的竞争,而是逐渐出现红假单胞菌优势。上述组分的添加量范围主要从培养效果、维持培养基ph值<7、以及控制培养基成本等多个角度出发,添加量偏少时,不能有效促进无机盐晶体的析出;添加量过大时,其中有些盐类相互反应而直接生成不溶于水的盐类沉淀,不能被光合细菌有效利用。

在本发明中,容器内壁上盐类晶体的析出是关键步骤。利用有些无机盐类不能溶于或者微溶于乙醇的特性,有利于无机盐类晶体的析出、附着。培养基中的无机盐成分间会发生一些相互反应,生成的一些盐类在含乙醇的水溶液中析出晶体而附着在容器内壁上,通过检测分析该盐类晶体含有氧、氢、磷、镁、碳、氮等元素,且含有铵根离子和磷酸根离子,具体形式为mg(hco3)2和(nh4)2hpo4的混合物;同时容器中培养基液体里还有含有微量元素和营养因子,容器内壁上具备红假单胞菌极高浓度生长的光照、温度、营养物质条件,从而实现红假单胞菌属光合细菌大量附着生长为高密度附着态菌群。容器内壁上盐类晶体逐渐变成粉红色或者浅暗红色,是因为红假单胞菌属光合细菌在附着的盐类晶体上生长的结果,最终红假单胞菌属光合细菌在容器内壁上形成一层暗红色物质,在培养早期用手指刮取时可以明显感觉其中有粗糙颗粒物,即为析出的盐类晶体。

在符合本领域常识的基础上,上述各优选条件可以任意组合即得本发明各较佳实例;另外本发明所用的原料和试剂除有特殊说明外,均市售可得或为常规选择。

与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:

1、本发明提供的用于红假单胞菌属光合细菌的培养基稳定可靠,培养过程简单,培养条件易于获得且便于实施,经济效益大。

2、本发明的培育方法中,红假单胞菌属光合细菌附着生长于容器内壁上,呈泥浆状,可直接刮取下来而无需浓缩,其中红假单胞菌的浓度远高于浮游态生长的红假单胞菌培养体系,大大方便光合细菌的收获和进一步资源化利用。

附图说明

图1为实施例1中玻璃缸内壁附着光合细菌用手刮取后的照片;

图2中左边玻璃缸为实施例2中红假单胞菌大量附着生长时的照片;

图3中暗红色广口玻璃瓶为实施例3中红假单胞菌大量附着生长时的照片;

图4为实施例4中广口玻璃瓶内壁光合细菌附着生长时的照片;

图5中暗红色锥形瓶为实施例5中红假单胞菌大量附着生长时的照片。

具体实施方式

以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明,但不以任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。

实施例1

配置50l由无水乙醇、ca(h2po4)2·h2o、mgso4·7h2o、柠檬酸三铵、kh2po4、粉末状碳酸钙、酵母膏、谷氨酸、有机物腐烂液和纯水组成的培养基;其中,该培养基中无水乙醇添加量为100ml/l、ca(h2po4)2·h2o添加量为2.8g/l、mgso4·7h2o添加量为1g/l、柠檬酸三铵添加量为20g/l、kh2po4添加量为3.5g/l、粉末状碳酸钙的添加量为5g/l、酵母膏添加量为5g/l、谷氨酸添加量为3g/l、有机物腐烂液添加量为100ml/l,余量为纯水;并通过h3po4调节初始ph值为6.5;其中,有机物腐烂液为由浮游藻类水华、发霉面粉和大豆加工废物与水混合后经过2个月腐烂发酵而成,水体散发出较重臭味,水色为褐色,并且控制其中的非沉底物的液态部分的总氮含量在2500mg/l。

于7~8月份,对上述配置好的培养基不灭菌后直接放置在总体积为70l无色透明玻璃缸中,将玻璃缸放置在玻璃温室中,以保证白天的光照强度在5000~60000lx,培养期间容器中水温在25~42℃。在玻璃缸中放置2个长4cm、直径2cm的气石进行空气曝气,将部分空气输入到培养基中,保证培养基中不是全部的厌氧环境,形成局部的有氧环境;然后对培养基中接种市售的红假单胞菌属光合细菌,接种母液的量为100ml/l,并保证接种后培养基中瞬时红假单胞菌的细胞浓度为2.0×1012cells/l。

培养1天后即可见无色玻璃缸内壁上出现微小盐类晶体析出,使得容器内壁变得比较粗糙;随着时间的延续,内壁上附着的盐类晶体增多。刮取容器内壁上析出的盐类晶体进行x射线荧光光谱检测分析,可知其是由氧、磷、镁、碳、氮等元素组成的混合物,并且得到各元素的质量比例组成;将析出的盐类晶体溶于纯水后进行营养盐成分分析,可得其中含有铵根离子和磷酸根离子;而将该晶体放置在空气中一段时间后晶体会由无色固体变成白色固体,而且该白色固体是不溶于水的,进一步判断出容器内壁上附着生长的盐类晶体为mg(hco3)2和(nh4)2hpo4的混合物。

培养5天时,容器内壁上盐类晶体附着的面积增大,附着的盐类晶体逐渐变成粉红色;培养11天时,容器内壁上附着物越来越多,颜色逐渐变成暗红色,且暗红色物质逐渐扩散到液面以下的全部容器内壁上,利用高通量的miseq平台对暗红色物质进行微生物分析确定生成的暗红色微生物为红假单胞菌属光合细菌。

培养至第25天时,停止曝气;培养35天时,上述附着生长的红假单胞菌属光合细菌会继续在容器内壁上生长到高峰,局部附着红假单胞菌群的厚度达3mm;且容器中水体的颜色也变成棕褐色,即培养基水体中也大量生长浮游态的红假单胞菌;最后将附着生长的红假单胞菌群刮取下来即得泥浆状的附着态红假单胞菌。

附着生长的红假单胞菌群被刮取下来后,继续适量添加步骤s1中的培养基组分,添加的量为步骤s1中的一半,继续获得持续生长的附着态红假单胞菌。

实施例2

配置50l由无水乙醇、ca(h2po4)2·h2o、mgso4·7h2o、柠檬酸三铵、kh2po4、粉末状碳酸钙、酵母膏、谷氨酸、有机物腐烂液和纯水组成的培养基;其中,该培养基中无水乙醇添加量为80ml/l、ca(h2po4)2·h2o添加量为2.3g/l、mgso4·7h2o添加量为0.8g/l、柠檬酸三铵添加量为10g/l、kh2po4添加量为2.1g/l、粉末状碳酸钙的添加量为3g/l、酵母膏添加量为3g/l、谷氨酸添加量为2g/l、有机物腐烂液添加量为100ml/l,余量为纯水;并通过h3po4调节初始ph值为6.0;其中,有机物腐烂液为由浮游藻类水华、发霉面粉和大豆加工废物与水混合后经过40天腐烂发酵而成,水体散发出较重臭味,水色为暗褐色,并且控制其中非沉底物的液体中的总氮含量在1800mg/l。

于8~9月份,对上述配置好的培养基不灭菌后直接放置在总体积70l无色透明玻璃缸中,将玻璃缸放置在玻璃温室中,以保证白天的光照强度在5000~60000lx,培养期间容器中水温在25~42℃。对玻璃缸中放置1个长4cm、直径2cm的气石进行空气曝气,将部分空气输入到培养基中,保证培养基中不是全部的厌氧环境,而是形成局部的有氧环境;然后对培养基中接种市售的红假单胞菌属光合细菌,接种母液的量为100ml/l,并保证接种后培养基中瞬时红假单胞菌的细胞浓度为1.0×1012cells/l。

培养1天后即可见玻璃缸内壁上出现微小盐类晶体析出,使得容器内壁变得比较粗糙;随着时间的延续,内壁上附着的盐类晶体增多。刮取容器内壁上析出的盐类晶体进行x射线荧光光谱检测分析,可知其是由氧、磷、镁、碳、氮等元素组成的混合物,并且得到各元素的质量比例组成;将析出的盐类晶体溶于纯水后进行营养盐成分分析,可得其中含有铵根离子和磷酸根离子;而将该晶体放置在空气中一段时间后晶体会由无色固体变成白色固体,而且该白色固体是不溶于水的,进一步判断出容器内壁上附着生长的盐类晶体为mg(hco3)2和(nh4)2hpo4的混合物。

培养7天时,容器内壁上盐类晶体附着的面积增大,附着的盐类晶体逐渐变成浅暗红色;培养11天时,容器内壁上附着物越来越多,颜色逐渐变成暗红色,且暗红色物质逐渐扩散到液面以下的全部容器内壁上,利用高通量的miseq平台对暗红色物质进行微生物分析确定生成的暗红色微生物为红假单胞菌属光合细菌。

培养至第20天时,停止曝气;培养35天时,上述附着生长的红假单胞菌属光合细菌会继续在容器内壁上生长到高峰,局部的附着红假单胞菌群的厚度达3mm;且容器中混合物的颜色也变成暗红色,即培养基水体中也大量生长浮游态的红假单胞菌;最后将附着生长的红假单胞菌群刮取下来即得泥浆状的附着态红假单胞菌。

附着生长的红假单胞菌群被刮取下来后,继续适量添加步骤s1中的培养基组分,添加的量为步骤s1中的一半,继续获得持续生长的附着态红假单胞菌。

实施例3

配置10l由无水乙醇、ca(h2po4)2·h2o、mgso4·7h2o、柠檬酸三铵、kh2po4、粉末状碳酸钙、酵母膏、谷氨酸、有机物腐烂液和纯水组成的培养基;其中,该培养基中无水乙醇添加量为70ml/l、ca(h2po4)2·h2o添加量为2g/l、mgso4·7h2o添加量为1g/l、柠檬酸三铵添加量为10g/l、kh2po4添加量为2g/l、粉末状碳酸钙的添加量为3g/l、酵母膏添加量为3g/l、谷氨酸添加量为2g/l、有机物腐烂液添加量为100ml/l,余量为纯水;并通过h3po4调节初始ph值为6.0;其中,有机物腐烂液为由餐饮垃圾、动物排泄物和动物配合饲料与水混合后经过40天腐烂发酵而成,水体散发出较重臭味,水色为黄褐色,并且控制其中的非沉底物的液体的总氮含量在2000mg/l。

对上述配置好的培养基不灭菌后直接放置在10l无色广口玻璃瓶中,于5月份将玻璃瓶放置在玻璃温室中,以保证白天的光照强度在5000~60000lx,培养期间容器中水温在22~33℃。对玻璃瓶中放置1个长4cm、直径2cm的气石进行空气曝气,将部分空气输入到培养基中,保证培养基中不是全部的厌氧环境,形成局部的有氧环境;然后对培养基中接种市售的红假单胞菌属光合细菌,接种母液的量为80ml/l,并保证接种后培养基中瞬时红假单胞菌的细胞浓度为6.3×1011cells/l。

培养1天后即可见无色玻璃缸内壁上出现微小盐类晶体析出,使得容器内壁变得比较粗糙;培养5天后内壁上附着的盐类晶体增多。刮取容器内壁上析出的盐类晶体进行x射线荧光光谱检测分析,可知其是由氧、磷、镁、碳、氮等元素组成的混合物,并且得到各元素的质量比例组成;将析出的盐类晶体溶于纯水后进行营养盐成分分析,可得其中含有铵根离子和磷酸根离子;而将该晶体放置在空气中一段时间后晶体会由无色固体变成白色固体,而且该白色固体是不溶于水的,进一步判断出容器内壁上附着生长的盐类晶体为mg(hco3)2和(nh4)2hpo4的混合物。

培养11天时,容器内壁上盐类晶体附着的面积增大,附着的盐类晶体逐渐变成浅暗红色;培养至第20天时,停止曝气;培养22天时,容器内壁上附着物越来越多,颜色逐渐变成暗红色,且暗红色物质逐渐扩散到液面以下的全部容器内壁上,利用高通量的miseq平台对暗红色物质进行微生物分析确定生成的暗红色微生物为红假单胞菌属光合细菌。

培养35天时,局部的附着红假单胞菌群的厚度达2mm;且容器中混合物的颜色也变成暗红色,即培养基水体中也大量生长浮游态的红假单胞菌;最后将附着生长的红假单胞菌群刮取下来即得泥浆状的附着态红假单胞菌。

附着生长的红假单胞菌群被刮取下来后,继续适量添加步骤s1中的培养基组分,添加的量为步骤s1中的一半,继续获得持续生长的附着态红假单胞菌。

实施例4

配置10l由无水乙醇、ca(h2po4)2·h2o、mgso4·7h2o、柠檬酸三铵、kh2po4、粉末状碳酸钙、酵母膏、谷氨酸、有机物腐烂液和纯水组成的培养基;其中,该培养基中无水乙醇添加量为50ml/l、ca(h2po4)2·h2o添加量为1.4g/l、mgso4·7h2o添加量为0.4g/l、柠檬酸三铵添加量为5g/l、kh2po4添加量为0.7g/l、粉末状碳酸钙的添加量为1g/l、酵母膏添加量为2g/l、谷氨酸添加量为1g/l、有机物腐烂液添加量为80ml/l,余量为纯水;并通过h3po4调节初始ph值为5.5;其中,有机物腐烂液为由餐饮垃圾、动物排泄物和动物配合饲料与水混合后经过50天腐烂发酵而成,水体散发出较重臭味,水色为褐色,并且控制其中的非沉底物的液体的总氮含量在1000mg/l。

对上述配置好的培养基不灭菌后直接放置在10l无色广口玻璃瓶中,于10月份将广口玻璃瓶放置在玻璃温室中,以保证白天的光照强度在5000~60000lx,培养期间容器中水温在22~38℃。对玻璃瓶中放置1个长4cm、直径2cm的气石进行空气曝气,将部分空气输入到培养基中,保证培养基中不是全部的厌氧环境,形成局部的有氧环境;然后对培养基中接种市售的红假单胞菌属光合细菌,接种母液的量为50ml/l,并保证接种后培养基中瞬时红假单胞菌的细胞浓度为5.0×1011cells/l。

培养1天后即可见无色玻璃瓶内壁上出现微小盐类晶体析出,使得容器内壁变得比较粗糙;培养10天后内壁上附着的盐类晶体增多。刮取容器内壁上析出的盐类晶体进行x射线荧光光谱检测分析,可知其是由氧、磷、镁、碳、氮等元素组成的混合物,并且得到各元素的质量比例组成;将析出的盐类晶体溶于纯水后进行营养盐成分分析,可得其中含有铵根离子和磷酸根离子;而将该晶体放置在空气中一段时间后晶体会由无色固体变成白色固体,而且该白色固体是不溶于水的,进一步判断出容器内壁上附着生长的盐类晶体为mg(hco3)2和(nh4)2hpo4的混合物。

培养11天时,容器内壁上盐类晶体附着的面积增大,附着的盐类晶体中逐渐变成粉红色;培养至第20天时,停止曝气;培养22天时,容器内壁上附着物越来越多,颜色逐渐变成暗红色,且暗红色物质逐渐扩散到液面以下全部容器内壁上,利用高通量的miseq平台对暗红色物质进行微生物分析确定生成的暗红色微生物为红假单胞菌属光合细菌。

培养30天时,上述附着生长的红假单胞菌属光合细菌会继续在容器内壁上生长,最厚处的厚度达1mm;且容器中混合物的颜色也变成暗红色,即培养基水体中也大量生长浮游态的红假单胞菌;最后将附着生长的红假单胞菌群刮取下来即得泥浆状的附着态红假单胞菌。

附着生长的红假单胞菌群被刮取下来后,继续适量添加步骤s1中的培养基组分,添加的量为步骤s1中的一半,继续获得持续生长的附着态红假单胞菌。

实施例5

配置6l由无水乙醇、ca(h2po4)2·h2o、mgso4·7h2o、柠檬酸三铵、kh2po4、粉末状碳酸钙、酵母膏、谷氨酸、有机物腐烂液和纯水组成的培养基;其中,该培养基中无水乙醇添加量为60ml/l、ca(h2po4)2·h2o添加量为1.8g/l、mgso4·7h2o添加量为0.5g/l、柠檬酸三铵添加量为10g/l、kh2po4添加量为2g/l、粉末状碳酸钙的添加量为2g/l、酵母膏添加量为4g/l、谷氨酸添加量为2g/l、有机物腐烂液添加量为90ml/l,余量为纯水;并通过h3po4调节初始ph值为5.8;其中,有机物腐烂液为由餐饮垃圾、动物排泄物和动物配合饲料与水混合后经过50天腐烂发酵而成,水体散发出较重臭味,水色为暗褐色,并且控制其中的非沉底物的液体的总氮含量在1500mg/l。

对上述配置好的培养基不灭菌后直接放置在总体积6.5l的无色透明玻璃锥形瓶中,于8月份将锥形瓶放置在玻璃温室中,以保证白天的光照强度在5000~60000lx,培养期间容器中水温在22~42℃。对锥形瓶中放置1个长4cm、直径2cm的气石进行空气曝气,将部分空气输入到培养基中,保证培养基中不是全部的厌氧环境,形成局部的有氧环境;然后对培养基中接种市售的红假单胞菌属光合细菌,接种母液的量为60ml/l,并保证接种后培养基中瞬时红假单胞菌的细胞浓度为1.0×1012cells/l。

培养1天后即可见无色锥形瓶内壁上出现微小盐类晶体析出,使得容器内壁变得比较粗糙;培养8天后内壁上附着的盐类晶体增多。刮取容器内壁上析出的盐类晶体进行x射线荧光光谱检测分析,可知其是由氧、磷、镁、碳、氮等元素组成的混合物,并且得到各元素的质量比例组成;将析出的盐类晶体溶于纯水后进行营养盐成分分析,可得其中含有铵根离子和磷酸根离子;而将该晶体放置在空气中一段时间后晶体会由无色固体变成白色固体,而且该白色固体是不溶于水的,进一步判断出容器内壁上附着生长的盐类晶体为mg(hco3)2和(nh4)2hpo4的混合物。

培养11天时,容器内壁上盐类晶体附着的面积增大,附着的盐类晶体中逐渐变成浅暗红色;培养20天时,停止曝气,容器内壁上附着物越来越多,颜色逐渐变成暗红色,且暗红色物质逐渐扩散到液面以下全部容器内壁上,利用高通量的miseq平台对暗红色物质进行微生物分析得到,生成的暗红色微生物为红假单胞菌属光合细菌。

培养30天时,上述附着生长的红假单胞菌属光合细菌会继续在容器内壁上生长,最厚处的厚度达1.5mm;且容器中混合物的颜色也变成暗红色,即培养基水体中也大量生长浮游态的红假单胞菌;最后将附着生长的红假单胞菌群刮取下来即得泥浆状的附着态红假单胞菌。

附着生长的红假单胞菌群被刮取下来后,继续适量添加步骤s1中的培养基组分,添加的量为步骤s1中的一半,继续获得持续生长的附着态红假单胞菌。

以上所述为本发明的较佳实施例而已,但本发明不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改,都落入本发明保护的范围。

当前第1页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1