一种4‑羟基间苯二甲酸衍生物以及合成方法与流程

本发明属于有机化学领域，具体涉及的是4-羟基间苯二甲酸衍生物以及合成方法
背景技术：
：1956年，hunt等研究kolbe-schmitt法合成水杨酸过程时，发现4-羟基间苯二甲酸是反应过程的主要副产物，并分理出了4-羟基间苯二甲酸纯品(jchemsoc.1956,3099)。chesher等研究发现4-羟基间苯二甲酸具有退热功效(nature,1956,175：206)。anup等研究发现4-羟基间苯二甲酸能够对抗细胞内自由基的生成，具有保护细胞的抗氧化功能(foodchemistry,2012,132:1959)。haddadi等进一步研究发现，4-羟基间苯二甲酸在细胞内的抗氧化功能可以影响神经传递素酶的活性，可作为治疗神经退行性疾病的候选药物(neurochemistryinternational,2016,100：78)。selleri等研究了4-羟基间苯二甲酸衍生物的抗血小板聚集功效，并开发出了抗血小板聚集药物吡考他胺(式一)(us3973026)。nathan等以4-羟基间苯二甲酸为原料，合成了一种白三烯受体-2受体拮抗剂，生物活性研究表明该化合物具有良好的抗心肌缺血功效(式二)(thejournalofpharmacologyandexperimentaltherapeutics,2011,339:768)。gobert等以4-羟基间苯二甲酸为原料，合成了一种蛋白络氨酸磷酸酶抑制剂(式三)，生物活性研究表明该化合物对溃疡性结肠炎具有良好的治疗效果(thejournalofbiologicalchemistry,2009,284(17):11385)。式一吡考他胺化学结构式式二以4-羟基间苯二甲酸为原料合成的白三烯受体-2拮抗剂式三以4-羟基间苯二甲酸为原料合成的蛋白络氨酸磷酸酶抑制剂肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一。2015年中国有429.2万新发癌症病例和281.4万例死亡病例，相当于每天12000新患癌症、7500人死于癌症。化学药物治疗是癌症治疗的三大手段之一，抗肿瘤药物的开发一直是研究热点，研究开发新的抗肿瘤药物具有重要意义。为了进一步研究4-羟基间苯二甲酸衍生物的生物活性，发明人设计合成了一类4-羟基间苯二甲酸衍生物，并对其进行生物药效评价，推断这些化合物可能表现出抗肿瘤活性。进一步测试这些化合物的活性，发现其对胃癌细胞(mgc-803和sgc7901)和乳腺癌细胞(mda-mb-231)具有较强的抑制活性。技术实现要素：本发明的目的在于提供一类新型4-羟基间苯二甲酸衍生物以及它们的合成方法与用途。该合成方法以4-羟基间苯二甲酸为原料，经甲酯化、溴化、水解、酰胺化等步骤制得，制备方法简单，化合物结构新颖。生物活性测试表明，部分化合物具有较强的肿瘤细胞抑制活性。本发明的技术方案如下：一种4-羟基间苯二甲酸衍生物，其特征在于，结构通式为式中r为卤素、甲基、乙基、三氟甲基中的一种或它们的组合。一种4-羟基间苯二甲酸衍生物的合成方法，该方法是以4-羟基间苯二甲酸为原料，经过甲酯化、溴化、水解、酰氯化及与取代芳胺反应等步骤合成。一种4-羟基间苯二甲酸衍生物的合成方法，具体按照以下步骤合成：步骤1.制备4-羟基间苯二甲酸二甲酯(化合物a)：以4-羟基间苯二甲酸和氯化亚砜为原料，在甲醇中反应制得4-羟基间苯二甲酸二甲酯；每摩尔4-羟基间苯二甲酸加入甲醇的体积为2-5l，4-羟基间苯二甲酸与氯化亚砜的摩尔比为1:5-1:20。优选地，每摩尔4-羟基间苯二甲酸加入甲醇的体积为3l，4-羟基间苯二甲酸与氯化亚砜的摩尔比为1:10。步骤2.制备5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯(化合物b)：避光条件下，4-羟基间苯二甲酸二甲酯与n-溴代丁二酰亚胺在n,n-二甲基甲酰胺(dmf)中反应合成5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯；4-羟基间苯二甲酸二甲酯与n-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1:1-1:5，反应温度30-50℃。优选地，4-羟基间苯二甲酸二甲酯与n-溴代丁二酰亚胺的摩尔比为1:2，反应温度为30℃。步骤3.制备5-溴-4-羟基间苯二甲酸(化合物c)：(3)5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯在碱作用下水解制备5-溴-4-羟基间苯二甲酸；所述的碱试剂为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钡、氢氧化钙等，5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯与碱的摩尔比为1:3-1:5。优选地，所用的碱为氢氧化钠，5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯与碱的摩尔比为1:3。步骤4.制备5-溴-4-羟基间苯二甲酰氯(化合物d)：5-溴-4-羟基间苯二甲酸在少量dmf催化作用下与氯化亚砜反应制备5-溴-4-羟基间苯二甲酰氯；每摩尔5-硝基-4-羟基间苯二甲酸加入氯化亚砜的体积为1-4l，dmf为催化用量。优选地，每摩尔5-溴-4-羟基间苯二甲酸加入氯化亚砜的体积为3l。步骤5.制备目标化合物(化合物e)：在有机溶剂中，5-溴-4-羟基间苯二甲酰氯与取代苯胺在碱作用下反应生成结构式(ⅰ)目标化合物。所述的有机溶剂为甲苯、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷等；所述的取代苯胺为苯环上含有卤素、甲基、乙基、三氟甲基中的一种或它们的组合的苯胺；所述的碱为碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、三乙胺、吡啶、二异丙基乙胺或4-二甲氨基吡啶，其加入的量为催化量化学计量；5-溴-4-羟基间苯二甲酰氯与取代苯胺的摩尔比为1:2-1:4。优选地，所用有机溶剂为甲苯，所用的碱为三乙胺，5-溴-4-羟基间苯二甲酰氯与取代苯胺的摩尔比为1:3。本发明的部分优选化合物如下所示：本发明的合成方法是以4-羟基间苯二甲酸为原料，经过甲酯化、溴化、水解、芳酰胺化等步骤制备4-羟基间苯二甲酸衍生物。文献报道的5-溴-4-羟基间苯间苯二甲酸(化合物c)以4-羟基间苯二甲酸为原料，用溴单质直接溴化得到(jchemsoc.1956,3099)。由于苯环上含有两个羧基,导致4-羟基间苯二甲酸在溶剂中溶解度极差，苯环上两个羧基的定位效应导致4-羟基间苯二甲酸直接溴化取代反应时反应复杂，5-溴-4-羟基间苯二甲酸产品收率极低。为了克服4-羟基间苯二甲酸溶解度差及两个羧基在苯环上的定位效应，本发明首先将4-羟基间苯二甲酸甲酯化反应制备4-羟基间苯二甲酸二甲酯(化合物a)。4-羟基间苯二甲酸二甲酯在溶剂中溶解度较好，且两个酯基的取代基定位效应一致。溴单质的毒性较大，为了避免使用溴单质，本方法采用n-溴代丁二酰亚胺(nbs)为溴化试剂，在4-羟基间苯二甲酸甲酯苯环上引入溴取代基来制备5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯(化合物b)。通过选择合适的nbs溴化溶剂，本发明方法的溴化过程反应条件温和，后处理简单。5-溴-4-羟基间苯二甲酸甲酯碱性水解即可制备5-溴-4-羟基间苯二甲酸(化合物c)。5-溴-4-羟基间苯二甲酸在溶剂中溶解度较差，直接与芳胺反应时收率较低。为了克服5-溴-4-羟基间苯二甲酸反应活性差的问题，本发明将5-溴-4-羟基间苯二甲酸酰氯化(化合物d)，后与芳香胺反应制备产物(化合物e)，提高了产物收率。以人乳腺癌mda-mb-231细胞、人胃癌mgc-803细胞、人胃癌sgc-7901细胞为靶细胞，顺铂为阳性对照药，采用四甲基偶氮唑盐(mtt)比色法测试所合成的化合物对肿瘤细胞的体外抑制活性。经测试，本发明的化合物(ⅰ)具有抑制肿瘤细胞增殖的活性，其中部分化合物的活性优于阳性对照顺铂。有益效果本发明是以4-羟基间苯二甲酸为原料合成的一类新型的化合物5-溴-4-羟基间苯二甲酰芳胺化合物。该类化合物以4-羟基间苯二甲酸为原料，经过甲酯化、溴化、水解、酰芳胺化制备了5-溴-4-羟基间苯二甲酰芳胺化合物。4-羟基间苯二甲酸苯环上存在两个羧基，在强酸催化下与甲醇直接酯化反应时存在两种产物，且反应存在平衡，产品收率较低。本专利中4-羟基间苯二甲酸与甲醇在氯化亚砜中反应制备4-羟基间本二甲酸二甲酯，缩短了反应时间，提高了产品产品收率(86％)。本发明使用n-溴代丁二酰亚胺(nbs)对4-羟基间苯二甲酸二甲酯进行溴化，避免了使用毒性较大的溴单质。同时通过优化反应条件，选择合适的反应溶剂，降低了反应温度(30℃)，后处理过程简单，产品5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯直接过滤即可得到，且产品收率高(87％)。5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯水解制备5-溴-4-羟基间苯二甲酸，5-溴-4-羟基间苯二甲酸在有机溶剂中的溶解度较差，直接与芳胺反应时活性较差。本发明将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与氯化亚砜反应酰氯化，后与芳胺反应制备5-溴-4-羟基间苯二甲酰胺。该方法提高了5-溴-4-羟基间苯二甲酸反应的活性，提高了产品收率(60％左右)。通过对化合物生物活性测试，部分5-硝基-4-羟基间苯二甲酸酰芳胺化合物的肿瘤抑制活性强于顺铂，这表明本发明的化合物结构具有潜在的做为抗肿瘤药物的价值。附图说明图1化合物4‐羟基间苯二甲酸二甲酯的1hnmr图谱图2化合物5‐溴‐4‐羟基间苯二甲酸二甲酯的1hnmr图谱图3化合物5‐溴‐4‐羟基间苯二甲酸的1hnmr图谱图4化合物n1,n3‐二(4‐氟苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图5化合物n1,n3‐二(2‐氟苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图6化合物n1,n3‐二(2‐氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图7化合物n1,n3‐二(3‐氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图8化合物n1,n3‐二(4‐氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图9化合物n1,n3‐二(2‐氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图10化合物n1,n3‐二(3‐溴苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图11化合物n1,n3‐二(4‐溴苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图12化合物n1,n3‐二(2‐碘苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图13化合物n1,n3‐二(4‐碘苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图14化合物n1,n3‐二(2，4‐二氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图15化合物n1,n3‐二(2，4‐二氟苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图16化合物n1,n3‐二(4‐溴‐2‐甲基苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图17化合物n1,n3‐二(3,4‐二氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图18化合物n1,n3‐二(3‐氟‐4‐碘苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图19化合物n1,n3‐二(3‐氯‐4‐氟苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱)图20化合物n1,n3‐二(3，4‐二甲基苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图21化合物n1,n3‐二(3，4‐二氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图22化合物n1,n3‐二(2‐氟‐5‐溴苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱图23化合物n1,n3‐二(2,6‐二氯苯基)‐4‐羟基‐5‐溴间苯二甲酰胺的1hnmr图谱具体实施方式以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于本发明的范围。实施例1n1,n3-二(4-氟苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成1.14-羟基间苯二甲酸二甲酯的合成15g(82.4mmol)4-羟基间苯二甲酸加入150ml无水甲醇中。室温搅拌状态下，75g(630.5mmol)氯化亚砜缓慢的滴入上述溶液中，30分钟内滴完。滴毕，升温至溶液缓慢回流。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)监测反应，4小时后反应完全。冷却至室温后，有白色固体析出。过滤固体，滤饼用大量水洗后真空干燥。得到的固体溶于100ml乙酸乙酯中，乙酸乙酯溶液分别用80ml饱和碳酸氢钠溶液、50ml蒸馏水、50ml饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸得到14g白色固体(收率82％)。1hnmr(cdcl3):δ(ppm)3.29(s,3h,ch3),3.27(s,3h,ch3)，7.02(d,1h,ar),8.12(dd,1h,ar),8.58(d,1h,ar),11.19(s,1h,oh)。1.25-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯的合成避光条件下，10g(41.61mmol)4-羟基间苯二甲酸二甲酯加入100ml的n,n-二甲基甲酰胺中。室温搅拌条件下，11.11g(62.42mmol)n-溴代丁二酰亚胺加入到上述溶液中。加毕，反应液升温至35℃。继续反应5小时后，停止加热，冷却至室温。搅拌状态下，在反应液中加入80ml蒸馏水，有白色固体析出。继续搅拌30分钟，过滤，滤饼用冷乙醇洗涤。收集滤饼，真空干燥，得到11.52g白色固体(收率82％)。1hnmr(cdcl3):δ(ppm)3.93(s,3h,ch3),4.03(s,3h,ch3)，7.27(d,1h,ar),8.45(dd,1h,ar)。1.35-溴-4-羟基间苯二甲酸的合成8g(27.68mmol)5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯加入80ml氢氧化钾水溶液(含氢氧化钾6.20g/110.72mmol)中。加热回流，刚开始反应液呈白色乳浊状，随着反应的进行，白色固体逐渐溶解。回流反应2小时后，停止加热，冷却至室温。反应液中加入10％盐酸调节溶液ph至1-2，析出白色固体。过滤，滤饼分别用蒸馏水、甲醇洗涤，收集滤饼，真空干燥，得到5.9g白色固体(收率82％)。1hnmr(dmso-d6):δ(ppm)8.45(d,1h,ar),8.49(d,1h,ar)。1.4n1,n3-二(2-氟苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成取2.0g(7.6mmol)5-溴-4-羟基间苯二甲酸，滴入几滴dmf，缓慢滴加25ml氯化亚砜，油浴65℃，瓶内剧烈回流，球形冷凝管上方接气体回收装置，尾部气体吸收装置采用氢氧化钠水溶液。反应8小时后，tlc检测发现5-溴-4-羟基间苯二甲酸基本反应完全。旋蒸除去氯化亚砜，单口瓶得到液状底物，备用。将3.2g的2-氟苯胺(28.5mmol)、2.8g(28.5mmol)三乙胺溶于40ml甲苯中在氮气保护的条件下冰浴搅拌直至全部溶解。再将底物溶于20ml二氯甲烷加入恒压滴液漏斗，在冰浴条件下缓慢滴加溶有2-氟苯胺的甲苯溶液中，在此过程中，有大量白烟生成。滴加完毕后，室温搅拌5小时。薄层色谱检测，底物反应完毕。抽滤，对滤饼和滤液进行检测分析，产物存在于滤饼中。将滤饼溶于四氢呋喃中搅拌溶解，过滤除去不溶的三乙胺盐酸盐，将滤液旋蒸得到产物，干燥后称量得到2.0g固体，柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)，产物白色晶体，收率为61.7％。1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.48(s,1h,nh),10.34(s,1h,nh),8.21(d,j＝1.9hz,2h，ar),7.78-7.21(m,8h,ar)。实施例2n1,n3-二(4-氟苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成2.14-羟基间苯二甲酸二甲酯的合成20g(109.9mmol)4-羟基间苯二甲酸加入330ml无水甲醇中。室温搅拌状态下，130g(1099mmol)氯化亚砜缓慢的滴入上述溶液中，40分钟内滴完。滴毕，升温至溶液缓慢回流。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)监测反应，3小时后反应完全。冷却至室温后，有白色固体析出。过滤固体，滤饼用大量水洗后真空干燥。得到的固体溶于120ml乙酸乙酯中，乙酸乙酯溶液分别用90ml饱和碳酸氢钠溶液、70ml蒸馏水、70ml饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸得到15g白色固体(收率86％)。1hnmr(cdcl3):δ(ppm)3.29(s,3h,ch3),3.27(s,3h,ch3)，7.02(d,1h,ar),8.12(dd,1h,ar),8.58(d,1h,ar),11.19(s,1h,oh)。2.25-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯的合成避光条件下，15g(62.41mmol)4-羟基间苯二甲酸二甲酯加入120ml的n,n-二甲基甲酰胺中。室温搅拌条件下，22.23g(124.82mmol)n-溴代丁二酰亚胺加入到上述溶液中。加毕，反应液升温至30℃。继续反应4小时后，停止加热，冷却至室温。搅拌状态下，在反应液中加入90ml蒸馏水，有白色固体析出。继续搅拌35分钟，过滤，滤饼用冷乙醇洗涤。收集滤饼，真空干燥，得到15.87g白色固体(收率87.6％)。1hnmr(cdcl3):δ(ppm)3.93(s,3h,ch3),4.03(s,3h,ch3)，7.27(d,1h,ar),8.45(dd,1h,ar)。2.35-溴-4-羟基间苯二甲酸的合成10g(34.61mmol)5-溴-4-羟基间苯二甲酸二甲酯加入90ml氢氧化钠水溶液(含氢氧化钠3.32g/103.83mmol)中。加热回流，刚开始反应液呈白色乳浊状，随着反应的进行，白色固体逐渐溶解。回流反应2.5小时后，停止加热，冷却至室温。反应液中加入10％盐酸调节溶液ph至1-2，析出白色固体。过滤，滤饼分别用蒸馏水、甲醇洗涤，收集滤饼，真空干燥，得到7.9g白色固体(收率88％)。1hnmr(dmso-d6):δ(ppm)8.45(d,1h,ar),8.49(d,1h,ar)。2.4n1,n3-二(4-氟苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成取3.0g(11.5mmol)5-溴-4-羟基间苯二甲酸，滴入几滴dmf，缓慢滴加35ml氯化亚砜，油浴65℃，瓶内剧烈回流，球形冷凝管上方接气体回收装置，尾部气体吸收装置采用氢氧化钠水溶液。反应7小时后，tlc检测发现5-溴-4-羟基间苯二甲酸基本反应完全。旋蒸除去氯化亚砜，单口瓶得到液状底物，备用。将2.55g的4-氟苯胺(23mmol)、2.4g(24mmol)三乙胺溶于50ml甲苯中在氮气保护的条件下冰浴搅拌直至全部溶解。再将底物溶于30ml二氯甲烷加入恒压滴液漏斗，在冰浴条件下缓慢滴加溶有4-氟苯胺的甲苯溶液中，在此过程中，有大量白烟生成。滴加完毕后，室温搅拌4小时。薄层色谱检测，底物反应完毕。抽滤，对滤饼和滤液进行检测分析，产物存在于滤饼中。将滤饼溶于四氢呋喃中搅拌溶解，过滤除去不溶的三乙胺盐酸盐，将滤液旋蒸得到产物，干燥后称量得到2.0g固体，柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯＝4:1)，白色晶体，收率67％，1hnmr(400mhz，dmso)δ＝10.77(s,1h),10.50(s,1h),8.24-8.04(m,2h),7.77-7.53(m,8h)。实施例3n1,n3-二(2-氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2-氯苯胺反应，产物白色晶体，收率52％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.73(s,1h,nh),10.46(s,1h,nh),8.20-8.06(m,2h,ar),7.76-7.56(m,8h,ar)。实施例4n1,n3-二(3-氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与3-氯苯胺反应，产物白色晶体，收率62％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.85(s,1h,nh),10.58(s,1h,nh),8.45-7.73(m,2h,ar),7.46-7.30(m,8h,ar)。实施例5n1,n3-二(4-氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与4-氯苯胺反应，产物白色晶体，收率68％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.15(s,1h),10.13(s,1h),8.14(dd,j＝49.9,5.1hz,2h),7.75(d,j＝8.4hz,1h),7.55-7.28(m,7h)。实施例6n1,n3-二(2-溴苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2-溴苯胺反应，产物白色晶体，收率64％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.48(s,1h),10.34(s,1h),8.20-7.23(m,10h)。实施例7n1,n3-二(3-溴苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与3-溴苯胺反应，产物白色晶体，收率71％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.77(s,1h,nh),10.50(s,1h,nh),8.21-8.07(m,2h,ar),7.77-7.54(m,8h,ar)。实施例8n1,n3-二(4-溴苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与4-溴苯胺反应，产物白色晶体，收率66％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.77(s,1h),10.77(s,1h),10.50(s,1h),10.50(s,1h),8.25-8.06(m,2h),7.83-7.42(m,8h)。实施例9n1,n3-二(2-碘苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2-碘苯胺反应，产物淡黄色晶体，收率67％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.43(s,1h,nh),10.41(s,1h,nh),8.21(d,j＝1.9hz,2h,ar),7.51-7.44(m,5h，ar),7.09(td,j＝7.8,5.1hz,3h,ar)。实施例10n1,n3-二(4-碘苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与4-碘苯胺反应，产物白色晶体，收率57％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.73(s,1h,nh),10.46(s,1h,nh),8.24-8.02(m,2h,ar),7.78-7.54(m,8h,ar)。实施例11n1,n3-二(2-氟-4-溴苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2-氟-4-溴苯胺反应，产物白色晶体，收率72％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.59(s,1h,nh),10.41(s,1h,nh),8.14(dd,j＝46.6,5.0hz,2h,ar),7.78,7.43(m,6h,ar)。实施例12n1,n3-二(2,4-二氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2,4-二氯苯胺反应，产物白色晶体，收率51％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.95(s,1h),10.63(s,1h),8.24-8.06(m,4h),7.72(d,j＝53.6hz,4h)。实施例13n1,n3-二(2,4-二氟苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2,4-二氟苯胺反应，产物白色晶体，收率51％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.57(s,1h),10.44(s,1h),8.30(dd,j＝114.8,2.0hz,2h),7.92-7.01(m,6h)。实施例14n1,n3-二(4-溴-2-甲基苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与4-溴-2-甲基苯胺反应，产物白色晶体，收率59％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.48(s,1h,nh),10.34(s,1h,nh),8.27-8.04(m,2h,ar),7.37-7.20(m,6h,ar),2.50(d,j＝1.6hz,6h,-ch3)。实施例15n1,n3-二(3,4-二氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与3,4-二氯苯胺反应，产物白色晶体，收率65％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.67(s,1h,nh),10.44(s,1h,nh),8.57-8.14(m,2h,ar),7.47-7.21(m,6h,ar)。实施例16n1,n3-二(3-氟-4-碘苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与3-氟-4-碘苯胺反应，产物白色晶体，收率62％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.73(s,1h,nh),10.46(s,1h,nh),8.24-8.02(m,2h,ar),7.78-7.54(m,6h,ar)。实施例17n1,n3-二(3-氯-4-氟苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与3-氯-4-氟苯胺反应，产物白色晶体，收率52％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.75(s,1h,nh),10.66(s,1h,nh),8.28-8.42(m,2h,ar),7.88-7.44(m,6h,ar)。实施例18n1,n3-二(3，5-二甲基苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与3，5-二甲基苯胺反应，产物白色晶体，收率57％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.78(s,1h,nh),10.57(s,1h,nh),8.35-8.00(m,2h,ar),7.73-7.84(m,6h,ar),2.64-2.53(m,12h,-ch3)。实施例19n1,n3-二(3，5-二氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与3，5-二氯苯胺反应，产物白色晶体，收率63％，1hnmr(400mhz,dmso):δ＝10.79(s,1h,nh),10.69(s,1h,nh),8.35-8.05(m,2h,ar),7.69-7.34(m,6h,ar)。实施例20n1,n3-二(2，5-二氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2，5-二氯苯胺反应，产物白色晶体，收率64％，1hnmr(400mhz,dmso):δ＝10.62(s,1h),10.51(s,1h),8.33(dd,j＝112.1,2.0hz,2h),7.95-7.30(m,6h)。实施例21n1,n3-二(5-溴-2-氟苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与5-溴-2-氟苯胺反应，产物白色晶体，收率60％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.69(s,1h),10.44(s,1h),8.11(dd,j27.0,7.6hz,2h),7.89-7.31(m,6h)。实施例22n1,n3-二(2，6-二氯苯基)-4-羟基-5-溴间苯二甲酰胺合成同实施例2操作，将5-溴-4-羟基间苯二甲酸与2,6-二氯苯胺反应，产物白色晶体，收率64％，1hnmr(400mhz,dmso)δ＝10.82(s,1h,nh),10.58(s,1h,nh),8.67-8.22(m,2h,ar),7.65-7.35(m,6h,ar)。下面是本发明部分化合物的药理学实验及结果：以人乳腺癌mda-mb-231细胞、人胃癌mgc-803细胞、人胃癌sgc-7901细胞为靶细胞，顺铂为阳性对照药，采用四甲基偶氮唑盐(mtt)比色法测试所合成的化合物对肿瘤细胞的体外抑制活性，测试方法及实验结果：mtt法测细胞增殖细胞复苏：将冻存细胞从液氮罐或-80℃冰箱中取出，放在37℃恒温水浴不断摇动使之快速融化，吸取细胞至离心管中，加入8ml基本培养基1000rpm离心5分钟，弃去上清液。吸取1ml完全培养基把细胞重新悬浮，转移到25ml细胞培养瓶中。补充5ml完全培养基，轻轻吹均匀后放入细胞培养箱中静置培养(37℃，含5％co2，95％的湿度)。细胞传代：细胞贴壁生长，待长满培养瓶约80％密度时弃去培养瓶中培养基，用3ml高压pbs洗细胞一次。加入550μl胰酶消化液，轻柔晃动培养瓶使所有细胞都接触到消化液，于培养箱中放置30秒至2分钟，显微镜下观察细胞质收缩，细胞与细胞之间间隙变大时，立刻吸走消化液，加入5ml完全培养基，停止消化。用玻璃吸管轻轻吹打培养瓶壁，使细胞与瓶壁分离。细胞计数后按所需的细胞数接种至新的培养瓶中。细胞冻存：选择处于对数生长期的细胞进行冻存，并在冻存前一天进行换液。将一瓶细胞消化后吸取至离心管中1000rpm离心5分钟，弃去上清液。用细胞冻存液重悬细胞，分装至冻存管中，将冻存管放入冻存盒内，放置于-80℃冰箱内，如需长期保存，则转移至液氮罐中。细胞计数：吸取消化后的待测细胞悬浮液滴于细胞计数板上，在低倍显微镜下观察并计算计数板四角大方格内的细胞数。计算过程中，对于边缘压线的细胞采用记上不记下，记左不记右原则。细胞数/ml＝(四个大方格细胞总数/4)×104×稀释倍数细胞毒性实验：取对数生长期的人乳腺癌mda-mb-231细胞、人胃癌mgc-803细胞、人胃癌sgc-7901为靶细胞按5.0×103个/孔接种于96孔板，边缘孔用pbs填充，将细胞培养板置于37℃细胞培养箱中孵育24小时时，待细胞贴壁后，将化合物用完全培养基等倍稀释分别加入96孔板，以顺铂为阳性对照。细胞置于37℃、5％二氧化碳培养箱中继续培养72小时后，每孔加入10μl的mtt液(浓度5mg/ml),培养4小时，用酶标仪在490nm处测定每孔的吸收值，计算不同浓度下的细胞抑制率，利用prism软件做浓度-抑制率的曲线计算ic50值，结果如表1所示。表1中化合物代号同上表。上述实验，每个孔设有三个复孔。表1受试样品对三种肿瘤细胞的抑制作用化合物ic50(μm)mda-mb-231mgc-803sgc-7901顺铂49.9846.9247.73531.33＞10050.92628.4463.24＞100830.9667.3846.47919.1635.3649.791024.8240.2927.161220.94＞10077.991428.1737.9047.261513.9219.8150.511835.6642.5139.8319＞100＞10031.992146.21＞10041.78由表1可见，在该实验条件下，对于人乳腺癌细胞mda-mb-231，化合物6,8,9,10,12,14,15,18,21抑制活性强于阳性对照品；对于胃癌细胞mgc-803，化合物5,6,8,9,10,14,15,18抑制活性强于阳性对照品；对于胃癌细胞sgc-7901，化合物5,8,9,10,12,14,15,18,19,21抑制活性强于阳性对照品。当前第1页12