本发明涉及化妆品原料开发领域，尤其是涉及一种从枇杷子中提取制备苦杏仁苷富集产品的方法。
背景技术：
枇杷【Eriobotrya japonica(Thunb)L.】是一种产于我国的常绿蔷薇科树状植物，至今已有千年的栽培历史，大部分分布于我国西北、华北、华东、和东南地区。枇杷子为枇杷的种子，5-6月果实成熟时，鲜用，捡拾果核，晒干。枇杷子的主要成分为淀粉，含有蜡醇，氨基酸，脂肪酸，甾醇(sterol)，还有游离的的氢氰酸，二十六烷醇(ceryl alcohol)，棕榈酸二十六醇酯(ceryl palmitate)，种子油中包含的脂肪酸由C14-20不饱和脂肪酸以及饱和C12-20脂肪酸组成。翁爱彬等检测出枇杷子中含有苦杏仁苷，苦杏仁苷具有抗肿瘤、镇咳平喘、镇痛止痒、抗氧化以及抑菌等等多种生物活性。
近年来，国内外高度重视对枇杷的应用与开发，发表了很多有关枇杷栽培、品种鉴定、营养价值、化学成分和药理作用等方面研究的论文。枇杷资源广阔，采集容易，成本低廉，目前大多数的枇杷落叶一般作为垃圾处理,没有得到充分利用，而且可以四季采摘，67具有广阔的开发利用市场前景.随着枇杷作为一种观赏型植物种植面积在稳步的变多，提高枇杷叶的利用率已经成为一个吸引很多人关注的课题.近年来对枇杷子的研究也逐渐增多，除了四季会产生大量的枇杷叶垃圾之外，枇杷子作为一种食物遗留，每年会产生3～4万吨的枇杷子废弃物。近年，有研究表明，从枇杷叶和枇杷子中均能提取出苦杏仁苷，苦杏仁苷具有抗氧化、抗菌和镇痛止痒等药用价值。
目前，对苦杏仁苷提取方法的研究较多，其中水提法和醇提法提取时间较长，效率低；超声波辅助提取法利用超声波破坏细胞壁，增加溶解度，从而减少了提取时间，提高了提取速度和提取率而被广泛利用，但是也存在选择性较低，所得提取物成分复杂的缺点。有许多文献报道利用微波进行天然产物中活性成分的辅助提取，具有较高的选择性，同时微波提取方便省时，有效的提高了提取效率，取得了较好的研究结果。本发明正是基于微波辅助法提取枇杷子中苦杏仁苷，并采用大孔吸附树脂法进行分离和纯化。
技术实现要素：
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种从枇杷子中制备苦杏仁苷富集产品的方法。所得产品色浅，呈淡黄色，抗氧化活性显著，可作为天然抗氧化剂用于化妆品领域。
本发明是一种基于微波辅助溶剂提取法提取枇杷子中苦杏仁苷，并采大孔吸附树脂法进行分离纯化，得到苦杏仁苷富集产品的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种苦杏仁苷富集产品的制备方法，所述方法包括如下步骤：
提取步骤：称取枇杷子粉碎物，加入乙醇溶液，微波辅助提取，过滤，滤液减压浓缩得到浓缩液；
分离纯化步骤：将所述浓缩液加于预处理好的大孔吸附树脂柱顶端，以乙醇溶液洗脱，得到苦杏仁苷富集流分，减压回收溶剂，即得。
优选地，所述提取步骤中，所述枇杷子粉碎物和乙醇溶液的固液比g/mL为1:20，乙醇溶液的体积分数为30％，微波辅助提取30秒钟，提取2次。
优选地，所述分离纯化步骤具体为：将经提取步骤获得的浓缩液上样于已预处理好的大孔吸附树脂柱，依次以3-6倍柱体积的20％，60％，和无水乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得苦杏仁苷富集产品。
在实验过程中，各洗脱液均分别收集，但最终经苦杏仁苷含量测定，以苦杏仁苷得率和其在产品中质量分数两方面为指标，保留60％乙醇洗脱液为所得产品，无水乙醇洗脱过程可计入大孔吸附树脂柱的再生过程。
提取工艺优化
(1)乙醇体积分数对苦杏仁苷含量的影响
称取1g枇杷子粉末，在料液比为1:20，提取时间为60s时，采用微波辅助提取，选取高火功率，分别对提取剂体积分数为20％、40％、60％、80％、100％的样品进行提取。
如图1所示，最高的苦杏仁苷提取效率所对应的乙醇体积分数为40％，如果再增加乙醇浓度，苦杏仁苷的提取率反而会降低.乙醇浓度太低，苦杏仁苷的提取率也不高，苦杏仁苷不能完全的被提取出来；乙醇浓度太高时，溶液的渗透压会增大，也会影响苦杏仁苷的溶解度。
(2)料液比对苦杏仁苷含量的影响
准确称取1g枇杷子粉末，在乙醇体积分数为60％，提取时间60s时，采用微波辅助提取，选取高火功率，分别对料液比为1:10、1:15、1:20、1:30、1:40(g/mL) 的样品进行提取。
由图2可知，当料液比为1:20g/mL时，苦杏仁苷的提取率最高，当料液比比值不断变小时，苦杏仁苷的提取率是在升高的，但是，当料液比的比值到达1:20后，苦杏仁苷的提取率变化的不再明显，说明，当料液比到达到1：20时，料液比对提取率的影响就不再明显.为了充分的让苦杏仁苷溶出同时节省原料，从经济角度考虑，选用1:20的料液比最为提取效率最佳的料液比。
(3)微波时间对苦杏仁苷含量的影响
称取1g枇杷子粉末，在乙醇浓度为60％，料液比为1:20时，采用微波辅助提取作为提取方法，选取高火功率，对提取样品分别提取：10s、20s、30s、40s、50s的时间。
由图3可知，当提取时间为20s时，枇杷子中苦杏仁苷的提取效率最高，如果时间少于20s，这样对原料的提取不够充分，提取率较低，但是当时间多于20s时，又可能由于长时间的微波使分子间的碰撞加剧，造成分子结构被破坏，也可能是持续微波产生的高温条件让提取物中的一些有效成分产生氧化分解，从而又导致了提取物中有效物质的含量降低，提取率又开始下降.因此，选择20s最为最佳的提取时间能够取得最大化的苦杏仁苷的提取效率。
(4)正交实验优化工艺条件
单因素实验结果表明，从枇杷子中提取苦杏仁苷的提取率会受到乙醇溶液体积分数、料液比、提取时间这三个因素的影响.为了全面考察这3个因素的影响作用大小和优化出一个最优的提取组合，把苦杏仁苷的含量情况作为参考指标，设计3因素 3水平的正交实验，选用L9(33)正交表，进行进一步的优化从枇杷子中提取苦杏仁苷的工艺，正交实验数据和苦杏仁苷得率情况见表1。
表1正交试验设计及结果
根据表1中的试验数据分析，提取时间、料液比和乙醇体积分数对枇杷子中苦杏仁苷提取效果都有影响，三个因素对提取效果影响程度从小到大依次为：提取时间 <料液比<乙醇体积分数。A1B2C2的组合为最佳提取工艺条件，即当乙醇体积分数为 30％，料液比为1:20g/mL，提取时间为30s时，从枇杷子中提取苦杏仁苷的提取效率会达到最高。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
①本发明制备苦杏仁苷的工艺耗时极短，仅需1分钟；
②本发明制备所得苦杏仁苷富集产品的颜色较浅，呈淡黄色，苦杏仁苷含量高，抗氧化活性显著，可作为天然抗氧化剂用于化妆品领域。
附图说明
图1为乙醇体积分数对苦杏仁苷得率的影响。
图2为料液比对苦杏仁苷得率的影响。
图3为提取时间对苦杏仁苷得率的影响。
图4为苦杏仁苷富集产品的DPPH自由基清除能力情况。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例提供了一种苦杏仁苷富集产品的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：提取步骤
按固液比g/mL为1:20，称取枇杷子粉碎物，加入体积分数为30％乙醇溶液，微波辅助提取30秒钟，过滤，滤渣重复提取1次，滤液合并，减压浓缩。
步骤二：分离纯化步骤
步骤一所述浓缩液，上样于已预处理好的大孔吸附树脂柱，依次以3-6倍柱体积的 20％，60％，和无水乙醇洗脱，并收集60％乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得苦杏仁苷富集产品。
采用不同洗脱流分：20％，60％，和无水乙醇的苦杏仁苷富集产品得率分别为26.9％， 50.1％，和4.2％，其中苦杏仁苷含量以质量分数计，分别为15.2％，45.5％和12.1％。
实施例2
苦杏仁苷富集产品的DPPH自由基能力检测
采用DPPH法测定实施例1中采用不同洗脱流分洗脱获得的苦杏仁苷富集产品对DPPH 自由基的清除能力。
由图4可见，本发明所制备苦杏仁苷富集产品的DPPH自由基IC50值为1.75mg/mL，当苦杏仁苷富集产品的浓度达到4.0mg/mL时，DPPH的清除率高达88.9％.本实验结果表明，本发明制备的苦杏仁苷富集产品具有一定的抗氧化作用。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。