作为细胞色素P450抑制剂的四唑衍生物的制作方法

本发明涉及新化合物以及其在医药中的用途。更具体地说，它涉及化合物在治疗疾病和病状中的用途，在治疗所述疾病和病状中，通过抑制负责atra降解的酶cyp26b1，保留的内源性全反式视黄酸(atra)的细胞含量是有益的。

背景技术

视黄酸(ra)是胚胎发育和产后生命两者中的关键信号分子。ra是维生素a(视黄醇)的活性代谢物，并存在于几种同种型中，其中全反式ra(atra)、13-cisra和9,13-dicisra是人体中最常检测到的ra。对于干细胞和神经元分化，内源性ra异构体在调节胰岛素刺激的葡萄糖分泌、调节细胞周期和细胞凋亡以及维持健康的皮肤、上皮细胞和免疫系统等方面是必需的。高水平的细胞atra具有有效的抗增殖效果。

ra的生物活性主要由其与核ra受体(rar)的结合表现，这导致靶基因的转录增加。因此观察到的对基因转录的影响取决于atra的细胞浓度和三种rar同种型的表达水平。细胞atra的分解代谢由细胞色素p450家族26(cyp26)的成员实现，特别是肝脏中的cyp26a1和其它成人组织中的cyp26b1。因此，对cyp26家族成员的抑制可以提供确保细胞中内源性atra水平升高的途径。这种抑制剂被称为视黄酸代谢阻断剂ramba。

已经示出许多适应症，所述适应症导致atra降解酶的局部上调并且由于其下调细胞增殖的能力而对使用外源性atra(或其同种型中的一种)进行的治疗作出有利响应。

这些适应症包含如严重的痤疮/红斑痤疮、牛皮癣和角化细胞性鱼鳞病等皮肤病。合成维生素a衍生物(类维生素a)长期以来一直是治疗几种角质化病症的主要方法，尤其是鱼鳞病和严重的痤疮。某些形式的牛皮癣也反应良好。

就化妆品抗衰老应用而言，含有atra(旨在用于治疗痤疮)的处方乳膏是对细纹和皱纹具有已证明效果的唯一制剂。

最近的研究已经显示，视黄酸主要通过改变treg/th17谱来保护免受肠道炎症，从而允许对炎症性肠病的治疗。

atra已经成功用于各种癌症形式的化疗治疗，如神经母细胞瘤(nbi)、急性早幼粒细胞白血病(apl)、前列腺癌和某种程度的绝经后乳腺癌。已经在对apl的治疗中观察到了atra最令人印象深刻的效果中的一个。用高剂量atra治疗患有apl的患者导致完全缓解。进一步地，对动物的几个实验已经证明atra抑制诱导并导致前列腺肿瘤的消失。尽管取得了这些令人鼓舞的结果，但在临床上长时间的atra疗法对人类癌症效果的知识却很少。据建议，atra的治疗效果通过由细胞色素p450酶(cyp)对其进行的快速体内代谢和分解代谢而削弱。

临床和分子两者的新证据表明，类维生素a也可以用于治疗心血管疾病中的动脉粥样硬化损伤和再狭窄现象。尽管来自临床试验的检查维生素a和维生素a前体对心脏事件的效果的数据是矛盾的，但这些数据确实表明类维生素a确实影响与动脉粥样硬化相关的基本过程。临床前细胞和动物模型研究支持这些概念。类维生素a对血管平滑肌细胞(vsmc)的增殖、生长、分化和迁移展现出复杂的效果，包含对损伤和动脉粥样硬化的响应。类维生素a似乎也对与动脉粥样化形成相关的血栓症和炎症反应产生重要的抑制效果。最近的研究表明类维生素a还可以例如通过调整一氧化氮路径参与血管钙化和内皮功能。

因此，通过添加外源性atra或其同种型中的一种进行治疗通常是对这些病状的主要治疗或共同治疗。

尽管这样的atra治疗是成功的治疗模态，但过量摄入维生素a导致称为维生素a过多症或视黄酸综合征的综合征，其特征为红斑、体重下降和脱发、骨痛、肝脏问题、体液积聚在肺部和身体的其它部位、肾功能衰竭、皮肤刺激和眼刺激以及致畸性。此外，患者也可能在治疗期间产生耐ra性。

为了克服这些严重和不需要的副作用，已经提出使用选择性cyp26抑制剂，可能与温和添加外源性atra一起使用。这些ramba中最常见和研究最多的是酮康唑、利阿唑和他拉罗唑。尽管在细胞测试、动物模型和临床试验中有不同程度的成功，但它们的功效并不特别。在此上下文中，所有三个ramba的主要焦点都是用于治疗牛皮癣、罕见疾病角质细胞性鱼鳞病和前列腺癌的靶cyp26a1。

在本说明书中对于一份显然在前公开的文件的列举或者讨论不应必然地被视为是承认所述文件是现有技术的一部分或者是公知常识。

发明者已经惊奇地发现本文所公开的化合物作为cyp26的抑制剂，特别是cyp26b1同种型可以是有用的。

技术实现要素：

根据本发明，提供了一种式i的化合物：

其中：

r¹表示氢或c1-2烷基，所述烷基任选地被一个或多个氟原子取代；并且

r²表示氢或羧酸保护基；

或其药学上可接受的盐，

前提条件是所述化合物或其药学上可接受的盐不是式ii的化合物：

可能提及的药学上可接受的盐包含酸加成盐和碱加成盐。这种盐可以通过常规途径形成，例如通过式i的化合物的游离酸或游离碱形式与适当酸或碱的一种或多种当量，任选地在其中盐不溶的溶剂或介质中反应形成，然后使用标准技术(例如在真空中，通过冷冻干燥或通过过滤)移除所述溶剂或所述介质。还可以通过例如使用合适的离子交换树脂将呈盐形式的式i的化合物的一种平衡离子与另一种平衡离子进行交换来制备盐。

药学上可接受的加成盐的实例包含衍生自无机酸的加成盐，如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸；衍生自有机酸的加成盐，如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、马来酸、抗坏血酸、油酸、硬脂酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸、芳基磺酸(例如甲苯磺酸)、烷基磺酸(例如甲磺酸盐)；以及衍生自金属的加成盐，例如钠、镁或优选地，钾和钙。还可能提及的基于胺的药学上可接受的盐包含铵盐和葡甲胺盐。

为简洁起见，下文将式i的化合物以及这种化合物的药学上可接受的盐一起称为“式i的化合物”。

除非另行说明，否则术语“烷基”是指未支化或支化的烃基(如乙基、丙基、(例如正丙基或异丙基)、丁基(例如正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基)或更优选地，甲基)。

术语“羧酸保护基”是指在生理条件下可水解以羧酸形式提供式i的化合物的任何基团。合适的羧酸保护基的实例包含c1-4烷基、苯基和苄基。

在由j.w.f.mcomie，plenumpress(1973)编辑的《有机化学中的保护基(protectivegroupsinorganicchemistry)》和《有机合成中的保护基(protectivegroupsinorganicsynthesis)》，第三版，t.w.greene&p.g.m.wutz,wiley-interscience(1999)中描述了保护基的用途。

技术人员将理解的是，在本发明的化合物的某些优选实施例中，上述前提条件将变得多余(例如，当陈述r¹是被一个或多个氟原子取代的c1-2烷基，或r²是氢以外的基团时)。

在本发明的实施例中，提供了一种式i的化合物,其中r¹是甲基，任选地被一个或多个氟原子取代。例如，在进一步实施例中，r¹表示甲基或三氟甲基。

在替代性实施例中，r¹表示氢、甲基或乙基。

在本发明的进一步实施例中，提供了一种式i的化合物,其中r²是羧酸保护基(例如r²可以表示甲基、叔丁基或苄基)。

在另一个实施例中，r²表示氢、c1-4烷基、苯基或苄基(例如r²可以表示氢、甲基、叔丁基或苄基)。在进一步实施例中，r²表示甲基。

在r²可以表示氢(例如当r²表示氢、c1-4烷基、苯基或苄基时)的实施例中，r¹优选地是被一个或多个氟原子取代的c1-2烷基。

如权利要求1所限定的，本发明的化合物不包含式ii化合物。在本发明的实施例中，本发明的化合物既不包含式ii的化合物也不包含其盐。

除非上下文另外指示，否则用于本发明的给定方面、特征或参数的优选选择和选项应该被视为已经与本发明的所有其它方面、特征和参数的任何和所有优选选择和选项结合进行了公开。应当理解的是，本发明可以按不同的形式实施并且不应该被视为是限于在此所阐述的实施例。而是这些实施例被提供为使得本公开更完全和完整，并且将本发明的范围完全地转达给所属领域技术人员。

技术人员将理解的是，在此的本发明的说明中所使用的术语只是出于描述具体实施例的目的并且不打算对本发明进行限制。除非另外规定，否则本说明中所使用的包括技术和科学术语的所有术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。

如本发明的实施例的说明中所使用，除非上下文另外清楚地指示，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”旨在也包括复数形式。因此，可以用对相关组分或整体的“一个或多个”(例如一个)的引用来代替这种引用。

如本文所使用的，对具体组分或整体的“一个或多个”的所有引用将被理解为是指这种组分或整体的从一个到多个(例如两个、三个或四个)。应理解的是，对具体组分或整体的“一个或多个”的引用将包含对一个这种整体的具体引用。

此外，如在此所使用，“和/或”指代并涵盖相关列出项目中的一个或多个的任何和所有可能的组合。此外，如在此所使用，术语“约”在涉及如化合物的量、剂量、时间、温度等可测量的值时，是指所指定量的20％、10％、5％、1％、0.5％或甚至0.1％的变化。

当采用范围(例如从x到y的范围)时，意味着可测量的值是从约x到约y的范围，或其中的任何范围，如大约x1到约y1等。

应当进一步理解的是，术语“包括(comprises)”和/或“包括(comprising)”在本说明书中使用时，指定了所陈述的特征、完整物、步骤、操作、要素、组分和/或其群组的存在，但是不排除一个或多个其它特征、完整物、步骤、操作、要素、组分和/或其群组的存在或加入。

可以根据本领域技术人员所熟知的技术制备式i的化合物，例如如下文所描述的。

可以通过包括式iii的化合物的反应的过程制备式i的化合物，

其中r^2a表示具有式iv的化合物的合适的保护基(例如如关于r²所限定的)，

其中r^1a表示烷基(例如根据r¹)或如苄氧基甲基(bom)的合适的氮保护基，在本领域技术人员已知的适合迈克尔加成反应的条件下，例如在d.p.nair等人，《材料化学杂志(chem.mater.)》，2014年，第26卷，第1期，第724页到744页中所描述的条件下。例如，这个反应可以在合适的碱，如lda、buli、naoh、koh、k2co3、et3n、(i-pr)2net、t-buona或t-buok(或其混合物)的存在下且在合适的溶剂，如二恶烷、甲苯、乙二醇二甲醚、二甲基亚砜、乙腈、四氢呋喃、二甲氧基乙烷(dme)或其混合物中进行。例如，反应还可以在室温或高于室温下进行(例如，如溶剂系统的回流温度等高温下)。

本发明的带有羧酸酯官能团(例如r²处)的化合物可以在本领域广泛已知的条件下通过碱性或酸性水解转化成羧酸衍生物。

医学和药学用途

包含式ii的化合物的式i的化合物被表示为药物。因此，根据本发明的另外的方面，提供了一种不包含所述前提条件的用于医学的式i的化合物。为了避免引起怀疑，还提供了一种用于医学的式ii的化合物。

本发明提供了一种药物配制物，其包括不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂、赋形剂或载剂的混合物。在一个实施例中，提供了一种药物配制物，其包括式ii的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂、赋形剂或载剂的混合物。

在医学和化妆品应用、药物配制物、组合药物等的上下文中，引用“式i的化合物”或“本发明的化合物”包含引用式ii的化合物，除非另有规定。在如下所讨论的医学和化妆品应用中，式i的化合物可以是本文公开的任何优选式i的化合物。

有利地，不包含所述前提条件的式i的化合物(即包含式ii的化合物)可以有效地选择性地抑制cyp26酶家族，特别是cyp26b1。

术语“抑制”可以是指cyp26b1的催化活性的任何可测量的减少和/或预防。如对本领域技术人员将是明显的，可以通过将含有本发明的化合物的样本中的活性与本发明的化合物不存在的cyp26(例如cyp26b1)的等效物样本进行比较而测量催化活性的减少和/或预防。可测量的变化可以是客观的(例如通过一些测试或标记物可测量、例如在体外或体内测定或测试中、如下文所描述的一种或者否则所属领域技术人员已知的另一种合适的测定或测试)或主观的(例如受试者给出效果的指示或感受效果)。

如上所述，已经发现cyp26酶的抑制会导致内源性全反式视黄酸的细胞含量增加。

一旦使用，不包含所述前提条件的式i的化合物(即包含式ii的化合物)可以增加细胞内内源性全反式视黄酸含量。已经显示细胞内内源性全反式视黄酸含量增加4到6倍对全反式视黄酸含量升高有益的适应症有积极效果。不包含所述前提条件的式i的化合物(即包含式ii的化合物)还可以减少外源地添加的全反式视黄酸的降解。

根据本发明的进一步实施例，提供了不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐的用途，所述用途用于制备用于治疗期望或需要增加内源性全反式视黄酸的细胞含量或减少外源添加的全反式视黄酸的降解的病状的药物。

还提供了不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗期望或需要增加内源性全反式视黄酸的细胞含量或减少外源添加的全反式视黄酸的降解的病状。

仍进一步，提供了一种治疗期望或需要增加内源性全反式视黄酸的细胞含量或减少外源添加的全反式视黄酸的降解的病状的方法，所述方法包括对有需要的受试者施用治疗有效量的不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明还提供了一种药物配制物，其包括不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂、赋形剂或载剂的混合物，所述药物配制物用于治疗期望或需要增加内源性全反式视黄酸的细胞含量或减少外源添加的全反式视黄酸的降解的病状。

在本文描述的用途和治疗方法的一个实施例中，待治疗的病状是期望或需要增加内源性全反式视黄酸的细胞含量的病状。

在本文描述的用途和治疗方法的另外的实施例中，待治疗的病状是期望或需要减少外源添加的全反式视黄酸的降解的病状。

在本发明的那些方面，所述方面涉及(i)使用不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐制备如上述所限定的药物；(ii)如上述所限定的，使用不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐；或者(iii)涉及治疗有效量的不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐的如上述所限定的治疗方法，优选的是式i的化合物或其药学上可接受的盐是式ii的化合物或其药学上可接受的盐。

可以根据本发明治疗的人类或动物异常和病症包含响应于增加的atra含量或其受阻的分解代谢的任何恶性、恶变前和非恶性异常或病症，例如某些癌症形式、如牛皮癣或光化性角化病和痤疮等的皮肤病、皮肤擦伤、角质细胞性鱼鳞病、阳光损伤的皮肤、与动脉硬化有关的受损血管的不希望的生长以及其它疾病或感染。术语“病症或异常”在本文中用作还包括医学失衡、疾病和综合征以及细菌和病毒感染。

因此，期望或需要增加内源性全反式视黄酸的细胞含量的病状可以是选自以下的一种或多种：皮肤病症、不期望的细胞生长或增殖，以及在引入冠状动脉支架后发生的再狭窄或血栓形成。

本发明的化合物还可以在通过抑制atra分解代谢来增强人体肠组织中的免疫调节活性方面有用，并且因此可以在治疗炎症性肠病方面有用。因此，期望或需要增加内源性全反式视黄酸的细胞含量的病状还可以是炎症性肠病。

因此，根据进一步实施例，提供了不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐的用途，所述用途用于制备用于治疗选自以下各项的病状的药物：皮肤病症；不期望的细胞生长或增殖；引入冠状动脉支架后发生的再狭窄或血栓形成以及炎症性肠病。在这种实施例中，优选的是式i的化合物或其药学上可接受的盐是式ii的化合物或其药学上可接受的盐。

在这方面可能提及的具体皮肤病症包含但不限于牛皮癣、白癜风、严重的痤疮、红斑痤疮和老化皮肤。在一些实施例中，对皮肤病症的治疗的引用包含提供皮肤益处。因此本发明的化合物可以在提供(优选地人体中的)皮肤益处方面有用。术语“皮肤益处”在本文中用于指一个或多个皮肤上期望的效果，包含皮肤健康方面的一般性提升。皮肤益处包含例如以下各项中的一项或多项：增加的紧致度、增加的弹性、增加的紧张性以及特别是减少的皱纹(包含减少的皱纹宽度和/或量)。在与皮肤健康提升有关的具体实施例中，用途或方法可以是治疗用途或治疗方法。

不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐还可以在提升皮肤健康的化妆方法方面有用。根据本发明的另外的方面，因此提供了不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐在提升皮肤健康的化妆方法中的用途。这种用途涉及向受试者施用化合物，优选地经由局部施用。短语“提升皮肤健康”在本文中用于指结合术语“皮肤益处”提及的提升。例如，这种提升可以包含以下各项中的一项或多项：增加的紧致度、增加的弹性、增加的紧张性以及特别是减少的皱纹(包含减少的皱纹宽度和/或量)。

在本发明的这方面的实施例中，式i的化合物可以是式ii的化合物或其药学上可接受的盐。

术语“不期望的细胞生长或增殖”包含非癌症病状(包含疣，以及具体地牛皮癣)，以及癌症和/或肿瘤。因此，表明式i的化合物用于治疗癌症。

根据本发明的进一步实施例，提供了不包含所述前提条件的式i的化合物、或药学上可接受的盐或溶剂化物、或其药学功能衍生物的用于制备用于治疗癌症的药物的用途。

式i的化合物可以在原发性和转移性癌症两者的治疗方面有用。术语“癌症”将被本领域技术人员理解为包含病症类别中的一种或多种疾病，其特征为细胞的不受控制的分裂和这些细胞侵入其它组织的能力，或者通过侵入、增殖直接生长到邻近组织中，或者通过转移植入远端部位。

在优选实施例中，式i的化合物可以能够抑制癌细胞的增殖。“增殖”包含癌细胞的数量和/或大小的增加。

替代性地，或者此外优选地，式i的化合物可以能够抑制癌细胞的转移。“转移”是指癌细胞从受试者体内的原发性肿瘤位点到受试者体内的一个或多个其它区域(其中细胞可以然后形成继发性肿瘤)的移动或迁移(例如侵入)。因此，在一个实施例中，本发明提供了用于全部地或部分地抑制继发性肿瘤在患有癌症的受试者中形成的化合物和方法。技术人员将了解，式i的化合物对“转移”的效果不同于这种化合物对癌细胞增殖可能或可能不具有的任何效果。

有利地，式i的化合物可以能够选择性地抑制癌细胞的增殖和/或转移。

“选择性地”是指化合物相比于其调节非癌细胞的功能(例如增殖)在很大程度上抑制癌细胞的增殖和/或转移。优选地，化合物仅抑制癌细胞的增殖和/或转移。

式i的化合物可以适合于在任何癌症类型的治疗中使用，包含所有肿瘤(非固体以及优选地，实体肿瘤，如癌、腺瘤、腺癌、血癌，不论器官如何)。可能提及的癌症和/或肿瘤的具体实例包含但不限于急性早幼粒细胞白血病、神经母细胞瘤、前列腺癌和乳腺癌。可能被本文公开的化合物治疗的优选的癌症和/或肿瘤是急性早幼粒细胞白血病和神经母细胞瘤。

不包含所述前提条件的式i的化合物可以在阻止接受支架(例如冠状动脉支架)的患者中的再狭窄和血栓形成方面有用。在本发明的这方面的实施例中，不包含所述前提条件的式i的化合物可以用于为药物洗脱支架提供化学涂层。

增加的视黄酸含量被视为能够潜在地保护免受肠道炎症。因此，不包含所述前提条件的式i的化合物可以适合于在炎症性肠病的治疗中使用。

为了避免引起怀疑，在本发明的上下文中，术语“治疗”、“疗法”和“治疗方法”包含对有需要的患者的治疗性或缓解性治疗，以及对相关疾病状态敏感的患者的预防性治疗和/或诊断。

本发明的方法的“有需要的受试者”可以是已知患有或怀疑患有本文所提及的疾病中的任何疾病(具体地，本文所提及的皮肤病或癌症中的任何疾病)的受试者。

适于用本发明的如本文所描述的化合物和配制物治疗的受试者包含但不限于哺乳动物受试者。在一些实施例中，受试者可以是人类受试者。

如本文所使用的，引用待治疗的“受试者”可能与“患者”同义，反之亦然。“患者”包含哺乳动物患者，特别是人类患者。

如本文引用量或剂量所使用的术语“治疗有效”指本发明的足以产生预期效果的化合物、组合物和/或配制物的量，所述预期效果可以是治疗效果和/或有益效果。这种有效量将随以下各项变化：受试者的年龄、一般病状；被治疗的病状的严重程度；施用的特定药剂；治疗的持续时间；任何并行治疗的性质；所使用的药学上可接受载剂；以及在所属领域技术人员的知识和专业内的相似因素。适当地，任何个案中的有效量可以由所属领域技术人员通过参考相关文本和文献和/或通过使用常规实验来确定。

组合物中如本文之前所描述的化合物的浓度取决于化合物和组合物的性质、给药模式、待治疗的病状和患者，并且可以根据选择变化或调整。当式i的化合物(例如，式ii的化合物)存在于药物配制物中时，所述化合物优选地以占配制物重量的0.01％到90％的量存在，甚至更优选地以占配制物重量的0.05％到50％(例如，0.2％到30％)的量存在，如占配制物重量的1％到20％的量存在。当制备高度亲脂性衍生物时，可以使用较低剂量，例如浓度范围为配制物重量的0.01％到10％，例如，0.02％到1％。

替代性地，组合物中的式i的化合物的浓度(例如，式ii的化合物的浓度)可以被选择为足以导致患者的在1pm到1mm范围内的血清含量。优选地，组合物中式i的化合物的浓度足以导致1nm到20μm范围内的血清含量，如50nm到5μm。在一个实施例中，组合物中式i的化合物的浓度足以导致约10pm到约100μm范围内的血清含量。在另一个实施例中，组合物中式i的化合物的浓度足以导致约100pm到约10μm范围内的血清含量。可以选择药物洗脱支架中的剂量以使得患者的导致所达到的血清含量在1pm到1mm范围内。在一个实施例中，可以选择药物洗脱支架中的剂量以使得患者的导致所达到的血清含量在10pm到100μm范围内。

根据本领域中已知的技术，可以以使用一种或多种生理上可接受的载剂或赋形剂的常规方式制备本发明的配制物。在适当的情况下，在添加载剂或赋形剂之前或之后例如通过γ-辐射、高压灭菌或加热灭菌对根据本发明的化合物或组合物进行灭菌，以便在适当的情况下提供无菌配制物。

可以局部地、口服地或全身地、或者以从移植支架释放的形式施用配制物。局部组合物可以包含常规凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、喷雾剂、洗剂、药膏、棒、肥皂、粉末、阴道栓剂、气溶胶、滴剂、溶液、贴剂、直接注射以及本领域中其它常规药物形式中的任何药物形式。

软膏剂、凝胶剂以及乳膏剂可以例如用水基或油基同时添加适合的增稠剂和/或胶凝剂配制。洗剂可以用水基或油基配制，并通常还含有一种或多种乳化剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。粉末可以在任何合适的粉末基的帮助下形成。滴剂和溶液可以用水基或非水基配制，所述水基或非水基还包括一种或多种分散剂、溶解剂或悬浮剂。在使用合适的推进剂的情况下，喷雾剂可以从加压包中递送。化合物可以采用局部给药的形式，所述局部给药的形式以固体形式提供、在治疗之前或结合治疗与溶剂重组。以固体形式提供化合物可以提高其储存稳定性。

替代性地，配制物可以以适用于口服或肠胃外给药的形式提供，例如，通过皮内、皮下、腹膜内、瘤内、腔内、眼内或静脉内注射。因此，替代药物形式包含素片剂或包衣片剂、胶囊、悬浮液和溶液，所述溶液含有根据本发明的化合物或组合物，任选地连同一种或多种惰性常规载剂和/或稀释剂一起，如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、硬脂酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、酒石酸、水、水/乙醇、水/甘油、水/山梨醇、水/聚乙二醇、丙二醇、硬脂醇、羧甲基纤维素或脂肪物质，如硬脂或其合适的混合物。

本发明的配制物可以另外地包含润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、吸收促进剂，例如，如以上提及的表面渗透剂等。可以通过采用本领域中已知的程序配制本发明的配制物以便在对患者施用之后提供化合物的快速、持续或延迟释放。还可以使用增溶剂和/或稳定剂，例如，环糊精(cd)α、β、γ以及hp-β环糊精。配制物可以采用例如乳剂等任何适当的剂型或采用脂质体、类脂囊泡、微球体、纳米颗粒等，或者作为移植支架中的活性组分。然后，本发明的组合物可以被吸收以便掺入这些形式或与这些形式结合。

可以通过本领域中已知的技术实现对难于接近的位置的局部给药，例如，通过使用导管或其它适当的药物递送系统。

如本文中所描述的，根据本发明的药物组合物适合于用作例如治疗人类或动物的身体异常或失调的药剂。

可以根据本发明治疗的本文中还被称为仅“组织”的内部身体表面和外部身体表面包含皮肤以及所有其它上皮表面和浆膜表面，包含例如粘膜，例如呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道等器官内膜，以及具有在这种表面上是空的导管的腺体(例如，肝脏、具有皮脂腺的毛囊、乳腺、唾液腺和精囊)。除了皮肤外，这种表面包含例如阴道内膜、子宫内膜和尿路上皮。这种表面还可以包含在切除病变或癌组织之后在身体中形成的腔，例如，在切除如神经胶质瘤等肿瘤之后的脑腔。在此，“表面”还指血管壁。

“组织”和“体液”在本文中用于指可以被完全或部分治疗的或以其它方式改变的或受基于抑制酶cyp26b1的疗法影响的任何人类或动物组织和体液。

表面渗透辅助剂可以是医药文献中描述的皮肤渗透辅助剂中的任何皮肤渗透辅助剂，例如，螯合剂(例如，edta)、表面活性剂(例如，十二烷基硫酸钠)、非表面活性剂、胆汁盐(例如，脱氧胆酸钠)和脂肪酸(例如，油酸)。适当的表面渗透辅助剂的实例包含hpe-101(可从hisamitsu购买)、dmso和其它二烷基亚砜，具体地，n-癸基甲基亚砜(ndms)、二甲基硫化乙酰胺、二甲基甲酰胺(dmfa)、二甲基乙酰胺、乙二醇、各种吡咯烷酮衍生物(woodford等人，j.toxicol.cut.&oculartoxicology，1986年，第5期，第167页到177页)、以及氮酮at(stoughton等人，《药物开发与工业制药学(drugdpv.ind.pharm.)》，1983年，第9期，第725页到744页)或其混合物。然而，dmso由于其抗组织氨和抗炎活性而是优选的。

表面渗透剂可以便利地以浓度范围0.2％到50％(w/w)，例如约10％(w/w)而提供。

包括式i的化合物的药物配制物(不包含所述前提条件)可以另外包括选自由以下各项组成的组的一种或多种化合物：螯合剂、亚铁螯合酶抑制剂、免疫治疗剂、血管生成抑制剂、表面渗透辅助剂、光增敏剂、葡萄糖、抗癌剂(如砷)、麻醉剂或止痛剂(包含局部麻醉剂，如丙胺卡因和利多卡因)、视黄酸及其衍生物、视黄醇及其衍生物、抗炎剂(包含tnf抑制剂、优特克单抗、nsaid和类固醇)、降血压剂(如β-阻断剂和ace抑制剂)、细胞抑制化合物、抗生素(如小带uvb剂)以及叶酸拮抗剂(如甲氨蝶呤)。

替代性地或另外地，免疫治疗剂(例如，抗体或效应物，如巨噬细胞活化因子)、血管生成抑制剂、砷或其它化疗剂可以用于改善根据本发明的治疗。对这些补充剂的给予应当在途径、浓度和配制物方面根据使用这些药剂的已知方法进行。可以在给予当前抑制剂之前、之后或期间给予这些额外药剂，取决于其功能。例如，在治疗之后可以将血管生成抑制剂增加5到10天以防止肿瘤再生长。在一些情况下，组合的治疗效果将是协同的。

其它抗癌剂可以类似地结合本发明的组合物使用，或者作为配制物的一部分或者作为待同时地、分别地或顺序地给予的单独治疗。所属领域技术人员对于确定具体药物和本发明的化合物的适当的给药时间、顺序和剂量不会有任何困难。

根据正被治疗的病状以及组合物的性质，本发明中使用的化合物可以与这种其它可选药剂一起施用，例如以单个组合物或者其可以顺序地或分别地施用。实际上，在许多情况下，可以通过在施用根据本发明使用的化合物之前在单独步骤中用表面渗透辅助剂进行预治疗来获得特别有益的效果。

在一些情形下，用表面渗透辅助剂进行预治疗，之后结合表面渗透辅助剂施用cyp26b1封闭剂可能是有益的。当在预治疗时使用表面渗透辅助剂时，可以以高浓度使用所述表面渗透辅助剂，例如高达100％(w/w)。在一个实施例中，本发明的方法因此另外地包括在治疗之前的使用表面渗透辅助剂的预治疗步骤。

本发明因此提供结合至少一种表面渗透辅助剂以及任选地一种或多种抗癌剂的不包含所述前提条件的式i的化合物或其药学上可接受的盐。组合可以被提供为用于同时、分别或顺序给予患者以便治疗身体的外表面或内表面的失调或异常的组合制剂，所述失调或异常是对视黄酸及衍生物的降低的新陈代谢的响应。

根据一个实施例，本发明的用途另外地包括用atra或其相关衍生物进行治疗，由此在对患者施用atra的同时或之前施用所述式i的化合物。

如在本文其它地方提及的，不包含所述前提条件的式i的化合物以及其药学上可接受的盐可以在防止接收支架(例如，冠状动脉支架)的患者的再狭窄和血栓形成方面有用。

因此，本发明的另一方面提供移植支架，所述移植支架的表面至少部分地涂覆有如本文中定义的不包含所述前提条件的式i的化合物。可能在这方面提及的药物洗脱支架包含技术人员将已知的并且已经(至少部分地)涂覆有本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)的支架。

药物洗脱支架通常由支架平台、涂层以及一种或多种药物组成。支架本身是可膨胀金属(或合金)框架。支架具有复杂的网状设计以允许膨胀、柔韧性以及在一些情况下形成/增大侧血管的侧开口的能力。

涂层通常包括聚合物和药物。聚合物容纳药物并通过接触转移将药物洗脱到动脉壁中。涂层通常是喷涂或浸涂的。可以使用一层到三层或更多层涂层，例如，用于粘附的基底层，用于容纳药物的主要层，以及有时用于减慢释放药物并扩大其效果的顶层涂层。

在血管的经皮冠状动脉介入治疗(pci)之后插入药物洗脱支架，旨在抑制血管壁中的增殖。受损血管壁中的增殖是插入支架之后的主要问题。通过用本发明的化合物(具体地式ii的化合物)或其药学上可接受的盐来涂覆支架，冠状血管可以在较大程度上保持打开。不期望受理论束缚，应当相信，此效果是由于通过由本发明的化合物阻断atra新陈代谢实现的间接抑制增殖而产生的。

优选地，支架涂层中式i的化合物的量足以在患者体内达到在约1pm与约1mm之间的血清含量。更优选地，支架涂层中式i的化合物的量足以在患者体内达到在约10pm与约100μm之间的血清含量。最优选地，支架涂层中式i的化合物的量足以在患者体内达到在约100pm与约10μm之间的血清含量。

这种类型的移植支架可能在治疗患者的动脉粥样硬化方面有用。支架表面上的式i的化合物的存在允许所述化合物被递送到其能够提供治疗益处的周围血管壁。所述递送将通过支架与血管壁之间的接触显著地发生。另外，式i的化合物的一部分可以分散到患者的血流中，由此其能够对血管壁的邻近区域提供治疗益处。

因此，在本发明的另一方面中，提供了一种在治疗患者的动脉粥样硬化之后抑制再狭窄的方法，所述方法涉及对需要其的患者应用移植支架，所述移植支架的表面至少部分地涂覆有如本文中定义的不包含所述前提条件的式i的化合物。应用支架的外科方法是周所众知的。在这种方法中，移植支架以收缩形式引入患者的受影响血管中，在该点处，支架被扩张，使得其打开血管的内腔并且以打开的形式保持血管。

类似地，提供了如本文中定义的不包含所述前提条件的式i的化合物在药物洗脱支架的包层中的使用情况。

附图说明

提供以下附图以说明本发明构思的不同方面，并且不旨在限制本发明的范围，除非在本文中指定。

对于图1到图4中示出的数据，测试化合物是式ii的化合物。

图1示出了在测试化合物的不同浓度处的cyp26b1和rarβmrna的诱导：用0.001μm到10μm的测试化合物治疗的人类平滑肌细胞中的a)cyp26和b)rarβ。对于所有实验，n＝3，*p≤0.05，**p<0.01并且***p<0.001。

图2是在用atra和/或测试化合物治疗之后人类平滑肌细胞中的cyp26b1和rarβmrna表达的图示：用1μmatra、化合物或两者的组合物治疗持续48h的人类平滑肌细胞中a)cyp26b1和b)rarβmrna表达。实验在三次单独运行中执行，*p≤0.05，**p<0.01并且***p<0.001。

图3示出了由人类平滑肌细胞以及转染cos-1细胞中的hplc对atra含量的量化：a)用1μm或10μm新cyp26抑制剂治疗人类平滑肌细胞持续1h，之后是4h[³h]atra孵育。b)由1μg/μl的cyp26b1对cos-1进行转染并且用1μm或10μm测试化合物孵育，之后是2h[³h]atra孵育。对于所有实验，n＝3，*p≤0.05，**p<0.01并且***p<0.001。

图4是图示，示出了在不同时间点处来自对在存在氧化还原酶和nadph的情况下用5μm或25μm测试化合物孵育的纯净cyp26b1执行的酶法测定的结果。在没用nadph启动的情况下进行对照实验。对于所有实验，n＝3。

具体实施方式

本发明通过以下实例来说明，其中可以采用以下缩写：

aosmc人主动脉平滑肌细胞

atra全反式维甲酸

cos-1成纤维细胞类型(cos：起源cv-1(类人猿)，并且携带sv40遗传物质)

ra视黄酸

rar视黄酸受体

对于以下讨论的实验，独立双尾(学生t检验)和单向anova用于数据分析，并且所有实验执行最小三次，并且结果表示为均值±sd。p≤0.05处的p-值被认为具有统计学显著性。

制备方法1

在pcl3存在的情况下，4-(氨甲基)苯甲酸(甲酯)与丙烯酸反应形成期望的酰胺产物。

制备方法2

将丁基锂添加到乙醚中的2-n-苄氧基甲基(bom)四唑溶液。所产生的混合物在用硫淬火之前被搅动以产生硫醇产物。

实例1

在制备方法1中获得的酰胺与在制备方法2中获得的硫醇反应形成bom保护的硫醚产物。保护bom基经由通过pd(oac)2催化剂与氢反应而被移除。

实例2

向包含实例1的产物的溶液添加酸。所产生的混合物然后被加热以允许酯基水解并形成羧酸。

实例3.式ii的化合物在atra响应基因cyp26b1和rarβ水平上的效果

用不同浓度的式ii的化合物(0.001μm到10μm；图1a和图1b)治疗人主动脉平滑肌细胞(aosmc)。在37℃下，用不同浓度(0.001μm到10μm)的根据式ii的化合物或作为对照组的dmso孵育aosmc持续24h。根据制造商说明书，通过使用e.z.n.a总rna试剂盒(瑞典斯德哥尔摩的vwr公司)来分离总rna，并且通过高容量逆转录试剂盒(美国加利福尼亚福斯特市的应用生物系统公司)进行cdna合成。在7900ht快速实时pcr系统(美国加利福尼亚福斯特市的应用生物系统公司)上针对cyp26b1、rarβ和亲环素a(美国加利福尼亚福斯特市的应用生物系统公司)执行qrt-pcr，并且获得的值被标准化为亲环素a。以剂量依赖性方式显著地诱导cyp26b1和rarβmrna的表达。在治疗内皮细胞之后获得类似结果。

接下来，单独用1μm的atra或式ii的化合物，或者用两者的组合治疗人类aosmc持续48h。纯化和分析过程如以上描述的。式ii的化合物显著增大atra对cyp26b1和rarβmrna(图2a和图2b)两者的诱导的影响。结果强烈表明式ii的化合物增大类视色素信号传导。

实例4.式ii的化合物抑制人类平滑肌细胞以及cyp26b1转染cos-细胞中由cyp26b1进行的atra分解代谢的效率

为了演示式ii的化合物对由cyp26b1进行的ra分解代谢的影响，用1μm或10μm抑制剂治疗人类平滑肌细胞1小时，之后用[³h]atra(从美国马萨诸塞州波士顿市的perkin-elmerlifeandanalyticalsciences公司获得的[³h]atra)进行4小时孵育。aosmc在用两种不同浓度(1μm和10μm)的根据式ii的化合物孵育1h的6板孔中以密度2×10⁵结晶析出，之后暴露于1μci/ml的[³h]atra持续4h。此后，使用bsa1mg/ml的pbs洗涤细胞，之后进行hplc分析。如图3a中看到的，式ii的化合物大大减少了细胞中atra的降解。

为了研究我们候选项的特异性以抑制对atra的cyp26b1介导的分解代谢，用cyp26b1或空载体(在无法产生cyp26b1的情况下)转染cos-1细胞。将cos-1维持在杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(dmem；美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的生命技术公司)，并且使用1μg/μl的cyp26b1以及250μl的opti-mem(opti-mem：改良伊格尔最小基本培养基；美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的生命技术公司)中的2μl的lipofectamin2000在12板孔中进行cos-1的转染。将混合物在室温下孵育20分钟并添加到板孔4h，之后添加生长培养基24h。第二天，用新鲜dmem代替培养基并且用1μm或10μm根据式ii的化合物处理所述培养基1h，之后暴露于1μci/ml的[³h]atra持续2h，并且随后进行hplc分析。如图3b中所示出的，相比于对照组(空载体)，用cyp26b1进行的细胞转染显著降低atra含量。再次用1μm或10μm式ii的化合物处理转染的细胞显著增加atra含量，指示式ii的化合物具有阻断对atra的cyp26b1介导的分解代谢的能力。

实例5.新cyp26抑制剂对在ra分解代谢时介导的cyp26b1的影响

为了研究式ii的化合物阻断cyp26b1的效率，将cyp26b1纯化并且随后用5μm和25μm式ii的化合物孵育cyp26b1持续不同时间点(10秒到10分钟)。此实验因此不包含潜在地本可以存在于细胞实验中的任何其它可能代谢途径。纯化的cyp26b1储存在含有50mmk2hpo4、0.5mmedta以及20％甘油的，ph为7.4的，-80℃的缓冲液中。执行测定如下：预孵育5nm的cyp26b1和10nm氧化还原酶。在将1mmnadph添加到总容积100μl的kpi缓冲液中之后添加5μm或25μm式ii的化合物以及50nm[³h]atra，并且孵育10秒到10分钟。通过添加100μl无水乙醇停止反应。随后用hplc对样品进行萃取和分析。对于对照组，如上进行实验，但是不启动由nadph进行的反应。如图4中看到的，式ii的化合物在5μm浓度处有效地抑制ra降解，完全符合以上报告的不同细胞测试。