改善的光-发射分子的制作方法

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技术领域：
】本发明总的涉及光-发射分子。更具体而言，本发明涉及具有改善的光-发射活性的萤光素酶多肽和它们的编码核酸。这些分子有用于一系列测定包括基于萤光素酶的基因报告子测定，生物发光共振能量转移测定，蛋白互补测定和将萤光素酶用作可检测的和/或可定量的标记物的其他应用。本发明也涉及增加萤光素酶-催化的反应的灵敏度和/或改善萤光素酶-催化的反应的动力学以及降低不期望的变量的影响的方法和组合物。
背景技术：
：萤光素酶代表生物学研究中的重要工具。例如，萤光素酶是基因报告子测定中使用的优选的报告子类型；特别由于它们的高灵敏度。的确，此高灵敏度导至它们作为抗体标记物使用及在高信号和低背景是有利的其他应用中使用。萤光素酶也经技术诸如蛋白互补测定广泛用于研究蛋白:蛋白相互作用(pca；例如wo2008/049160中公开的)；及特别对于发射蓝光的萤光素酶，用于生物发光共振能量转移(bret)。基因报告子测定允许理解什么控制目标基因例如，dna序列，转录因子，rna序列，rna-结合蛋白，信号转导通路和特定刺激的表达。尤其是，报告子测定可用于鉴定基因调节中重要的核酸区。该区和/或结合或调节它们的因子可作为人疾病的治疗或预防中治疗性干预的潜在靶。报告子测定也可用于就它们的修饰基因表达的能力筛选药物。报告子测定可用于鉴定基因启动子区或启动子之内的特定元件，诸如转录因子结合位点或其他调控元件。或者，该测定用于研究启动子或调控元件针对各种刺激或剂的应答。在一些应用中，将测定或转染的细胞中使用的报告子构建体导入生物以研究体内启动子功能。而且，报告子测定可用于研究或测量特定启动子上游的信号转导通路。在一些情况中，启动子包含单类型的转录因子(tf)结合位点，使得报告子活性反映导致该tf活化的通路的活性。例如，在设计用于研究推定的启动子序列或其他转录调控元件的报告子测定的情况中，将待询问的核酸在允许调节下游报告基因的转录的位置克隆进报告子质粒，由此由报告基因编码的报告子蛋白表达。报告子蛋白应是自存在于报告子质粒转染进的细胞中的内源性蛋白可区分的，以容易检测，及优选报告子蛋白的表达应是容易可定量的。报告子蛋白在适当的测定中定量和常常相对于由普遍存在的启动子诸如，例如，启动子sv40驱动的对照报告子的水平表达。对照报告子必需是自测试报告子可区分的及通常在用测试载体共转染的独立载体上含有及用于转染效率的对照。该测定基于细胞按比例摄取等同量的两载体的前提。基因报告子测定的各种不同应用涉及经时或在添加化合物，诸如药物，配体，激素等之后测量基因表达的变化。此在药物筛选中具有特定重要性。添加药物之后，检测报告子蛋白水平的可测量的变化可随着表达水平变化通过mrna传给蛋白而延迟及稀释。最近由本申请人做的该应用的显著发展是报告子载体中mrna-及蛋白-去稳定化元件的组合的使用以改善应答的速度和量值，如描述于美国专利no.7,157,272，公开内容通过引用以其整体并入本文。各种报告基因检定系统是利用不同可检测的报告子蛋白可商购的，最常见的是氯霉素转移酶(cat)，β半乳糖苷酶(β-gal)，分泌的碱性磷酸酶，及各种荧光蛋白和萤光素酶。萤光素酶是用于体外检定系统的最通常使用的报告子蛋白。萤光素酶是能生物发光及在一系列生物中天然地发现的酶。在可商购的检定系统中，萤光素酶可主要分为2组；利用d-荧光素作为底物的那些和利用腔肠素作为底物的那些。前者的最广泛采用的例是萤火虫萤光素酶，一种细胞内酶。利用d-荧光素的萤光素酶的另外的例包括鞘翅目(coleoptera)的其他成员，诸如叩甲虫及竖毛甲虫。萤光素酶也可基于是否它们所来源的生物是陆生或水生(一般海洋)区别。利用腔肠素作为底物的萤光素酶一般来源自海洋动物诸如软珊瑚肾海鳃属(renilla)或挠足虫诸如长腹水蚤属(metridia)和gaussia，然而利用d-荧光素的萤光素酶一般来源自陆生动物。区别萤光素酶的其他手段基于是否它们在它们的天然状态；即，在它们所来源的生物中分泌或非-分泌。源于陆生生物的萤光素酶一般是非-分泌的(细胞内)，而源于海洋生物的那些可分泌或非-分泌(细胞内)。例如，肾海鳃属(renilla)萤光素酶是在细胞内，然而gaussia萤光素酶在其天然状态是分泌的酶。萤光素酶由海洋生物的分泌被认为是设计为使接近的捕食者分心的保护性应答。其他分泌的萤光素酶包括自长腹水蚤(metridialonga)，vargulahilgendorfii，细角刺蝦(oplophorusgracilirostris)，剑乳点水蚤(pleuromammaxiphias)，夜光海萤(cypridinanoctiluca)和其他长腹水蚤科(metridinidae)成员的那些。vargula萤光素酶利用与腔肠素或d-荧光素不同的底物。另一类的萤光素酶源于腰鞭毛虫。基于萤光素酶的检定系统可采用一般不同来源和各利用不同底物的多于一种萤光素酶，，致使在相同的测定中测量测试和对照报告子二者。例如，推定的启动子元件被克隆到萤火虫萤光素酶报告基因的上游使得其驱动萤光素酶基因的表达。将此质粒随含有由sv40启动子驱动的肾海鳃属(renilla)萤光素酶基因的对照质粒瞬时转染进细胞系。将第1荧光素加入以活化萤火虫萤光素酶，测量此报告子的活性，然后添加“淬灭和活化”试剂。此“淬灭和活化”试剂含有淬灭荧光素信号的化合物和也含有活化肾海鳃属(renilla)萤光素酶的腔肠素，然后测量其活性。萤火虫萤光素酶活性水平不仅依赖于启动子活性而且依赖于转染效率。此依赖于dna量，dna制备物质量和细胞条件大大改变。共转染的对照质粒(由适合的启动子诸如sv40启动子驱动的肾海鳃属(renilla)萤光素酶)用于校正这些变量，基于肾海鳃属(renilla)萤光素酶活性正比于由细胞摄取的编码萤火虫萤光素酶的质粒量的前提。替代性地或此外，肾海鳃属(renilla)萤光素酶可用于其他变量，诸如细胞数，细胞活力和/或一般的转录活性的对照；或可用于测定是否应用于细胞的特定处理或化合物影响启动子或特异于它们之一。基于萤光素酶的检定系统，尤其是利用一种或更多细胞内萤光素酶的那些，常常采用2种缓冲剂，裂解缓冲剂和测定缓冲剂。首先将裂解缓冲剂加入细胞以裂解细胞由此释放萤光素酶，辅助随后测量。然后添加含有萤光素酶底物和任何辅因子的测定缓冲剂，之后进行萤光素酶活性测量。测量可在添加测定缓冲剂之后立即(即,2秒内)进行(所谓的“闪光”反应)，或在几分钟或小时后在保持光信号稳定延长的时间的测定缓冲剂中通过使用“辉光”试剂进行(所谓的“辉光”反应)。闪光反应提供最高信号强度(光单元/s)和由此具有提供最高灵敏度的优势。辉光反应在例如，用户不具有容易可利用的适合的光度计(装备注射器)的应用中特别有利或当批-处理需要注射和测量之间延迟时在一些高通量筛选应用中特别有利。在围绕测试细胞的条件培养基样品中测量分泌的萤光素酶。像这样，裂解缓冲剂是一般不与分泌的萤光素酶使用。自挠足虫诸如长腹水蚤属(metridia)和gaussia物种的分泌的萤光素酶不仅是知道的最小萤光素酶而且提供全部知道的萤光素酶的最高灵敏度。这两个特征是明显有利的，但后一个特征当检定的报告基因在目标细胞中提供仅低水平的萤光素酶时，例如，当研究的启动子具有仅低活性，和/或当目标细胞难以用报告子载体转染/转导时具有特定重要性。灵敏度的进一步增加也会通过减少产生可可靠地测量的信号强度需要的最小细胞数来辅助报告子测定的小型化。当利用包括去稳定化元件诸如描述于美国专利7,157,272的那些的检定系统时，稳定-状态萤光素酶信号减少。由此提供更高信号强度的萤光素酶会对于利用去稳定化元件的报告子检定系统特别有利。如以上陈述，提供最高灵敏度的萤光素酶是自包括挠足虫诸如长腹水蚤属(metridia)和gaussia的萤光素酶家族的分泌的萤光素酶(也在本文称为“挠足虫萤光素酶”,“挠足虫萤光素酶家族”等)。但是，在一些应用中其是可优选使用非-分泌的萤光素酶。例如，为致使使用蛋白去稳定化元件和由此改善应答。因而，已例如通过移出功能信号肽(如公开于例如wo2008/049160)来开发挠足虫萤光素酶的非-分泌的型式。此萤光素酶家族的常见的特征是它们对经它们的10个保守的半胱氨酸，常常被称为c1至c10之间的二硫桥形成的折叠的依赖性。此特征最近用于开发采用还原剂诸如dtt来关闭萤光素酶或缩短其光发射时期的新多-萤光素酶测定，由此致使在相同的样品中测量不同萤光素酶，如公开于例如wo2008/074100。在其他应用中，目前有“闪光”和“辉光”缓冲剂和萤光素酶之间的妥协。即，为获得强闪光，牺牲辉光相及反之亦然。对可提供高灵敏度闪光反应而且提供延长的辉光的系统有清楚的需求。辅助自萤光素酶-催化的生物发光反应的高闪光及延长的辉光二者的产生的萤光素酶会给用户提供可在需要时提供高灵敏度(闪光反应)而且当不需要高灵敏度时提供用于应用的辉光反应的便利的双目的试剂。为了改善基于萤光素酶的检定的精确度，期望最小化不需要的或不能避免的变量对萤光素酶活性的效应。一种该变量是温度。多数基于体外萤光素酶的测定于“室温”在实验台上实施。但是，在样品之内提供恒定温度常常是不切实际的或不可能的。例如，测量装置(例如光度计)一般产生热，其在测量期间经时提高反应温度。此导至不准确性因为，例如，相比在测量的第1个样品，测量的最后样品中反应温度更高；及测量的参数(发光)被温度以及被存在于样品中的萤光素酶量影响。此外，样品和测定试剂常常在测量之前存储于冰箱或冷冻器中；及在反应起始之前加温程度的变化在实践中是常见的。明显，期望具有响应室温以上及以下的温度波动活性显示最小变化的萤光素酶。特别期望特征会是响应在光度计之内发生的室温以上温度上升的活性的最小变化。此外，期望具有在或约测量测定的想要的温度有最佳温度的萤光素酶。例如，此会提供更大灵敏度。如上所述，室温对于许多体外萤光素酶测定是常见的。但是，对于特定体内测定，诸如在活哺乳动物内实施的那些37℃会是可优选的。其他萤光素酶测定(例如,作为抗体标记物)会优选在或约4℃实施以便最小化样品和/或测定试剂中的必要的反应组分降解。因此，能根据旨在的测定类型的优选的参数通过调整其最佳温度和温度效应定制萤光素酶会是有利的。有与知道的自长腹水蚤属(metridia)和gaussia的挠足虫萤光素酶关联的许多缺点。尤其是，有对在萤光素酶反应中提供改善的灵敏度和精确度的萤光素酶的需求。例如，相比用即有的萤光素酶可达到的更大强度的闪光信号强度；和/或更大强度和/或经时更稳定的辉光信号；和/或对于旨在的测定类型更适合的温度效应。测定提供期望特征的这些萤光素酶的结构变化或元件的类型会是特别有利的。该知识会致使萤光素酶，包括挠足虫萤光素酶家族之内的萤光素酶的定制和优化。【发明概述】本发明部分基于发现，修饰萤光素酶，包括挠足虫萤光素酶家族之内的萤光素酶的特定结构元件可调节萤光素酶功能。尤其是，本发明人发现：(1)在第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的l；(2)跨信号(分泌)肽序列下游和约残基85的上游的区的全体或部分截短；(3)包括保守的半胱氨酸(例如,c5,c6,c9和c10)的至少一个4-残基基序；(4)包括保守的半胱氨酸(例如,c5,c6,c9和c10)的至少一个2-残基基序；和/或(5)包括保守的半胱氨酸(例如,c5,c6,c9和c10)的至少一个3-残基基序可显著地改善选自发光，闪光信号强度，辉光信号强度，辉光信号稳定性和有效温度范围的一种或更多光-发射特征，包括升高萤光素酶功能的最佳温度范围。这些发现已被还原至具有改善的光-发射动力学的新多肽的实践和它们的在测定中的使用，如下文描述。因此，一方面，本发明提供多肽，其适宜地处于分离的，合成，重组体或纯化的形式，包含具有萤光素酶活性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成，其中氨基酸序列选自：(a)由式i表示的氨基酸序列：lpgkkx1px2x3vx4x5ex6eanax7x8agc1x9rgc2lx10c3lsx11ikc4tx12x13mx14x15x16ipgb1c5x17x18yx19gdkx20x21x22qx23gix24x25x26x27ivdx28peix29gfkx30x31x32px33x34qfiaqvx35x36c6x37x38c7x39tgc8lkglanvx40c9σx41llkkwlpx42b2c10x43x44fax45kiqx46x47x48x49x50ikgx51x52gd(i)其中：x1选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)；x2选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x3选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如a,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x4选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或l,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,p或其修饰的形式)；x5选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i,m或v,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x6选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m,i或l,或其修饰的形式)；x7选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f,或其修饰的形式)；x8选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)；x9选自小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)；x10选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或v,或其修饰的形式)；x11选自碱性氨基酸残基(例如,h或k,或其修饰的形式)；x12选自小氨基酸残基(例如,p或a,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x13选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；x14选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；x15选自任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,疏水氨基酸残基包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q,或其修饰的形式)；x16选自疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f或y,或其修饰的形式)；b1选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；x17选自碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x18选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,t或s,或其修饰的形式)；x19选自酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x20选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x21选自小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x22选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x23选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x24选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)；x25缺失或选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)；x26选自酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)；x27选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x28选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或m,或其修饰的形式)；x29选自小氨基酸残基(例如,p,s或a,或其修饰的形式)；x30选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)；x31选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x32选自负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如e,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x33选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m或l,或其修饰的形式)；x34选自酸性氨基酸残基(例如,e或d,或其修饰的形式)；x35选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)；x36选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,r或其修饰的形式)；x37选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如a或t,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如h或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如e或d,或其修饰的形式)；x38选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x39选自小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)；x40选自碱性氨基酸残基(例如,k,r或h,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；σ选自小氨基酸残基(例如,s,a或t,或其修饰的形式)；x41选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x42选自任何氨基酸残基(例如,小氨基酸残基诸如p,g,t,s或a,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q或n,或其修饰的形式,碱性氨基酸残基诸如h,k或r或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如d或e，或其修饰的形式)；b2选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；x43选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x44选自小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x45选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或其修饰的形式)；x46选自小氨基酸残基(例如,g或s,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x47选自中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x48选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x49选自负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如d,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如h,或其修饰的形式)；x50选自任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如n,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如t,或其修饰的形式)；x51选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)；以及x52选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，或者(b)与由式i表示的氨基酸序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸序列在式i的第1位包含l，或其修饰的形式。适宜地，多肽是包含选自下列的氨基酸序列或由选自下列的氨基酸序列组成的多肽之外的多肽：mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:2](gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列,也在本文称为prolume)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:4](gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列,也在本文称为prolumekdel)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:6](gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列,也在本文称为突变1)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:8](gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列,也在本文称为突变2)；或者meakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:10](gaussiaprincepsinga萤光素酶的全长序列,也在本文称为gsinga)。在一些实施方式中，多肽还在由式i表示的序列上游(例如,紧邻上游)包含由式ii表示的氨基酸序列：x53x54x55x56x57rgo1x58(ii)其中：x53缺失或选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)，其中x53在一些实施方式中存在，前提是，x54存在；x54缺失或选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如l或v,或其修饰的形式；小氨基酸残基诸如s,t或a,或其修饰的形式；或中性/极性氨基酸残基诸如n,或其修饰的形式)，其中x54在一些实施方式中存在，前提是，x55存在；x55缺失或选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)，其中x55在一些实施方式中存在，前提是，x56存在；x56缺失或选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式；或小氨基酸残基诸如s,t或a,或其修饰的形式)，其中x56在一些实施方式中存在，前提是，x57存在；x57选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)，其中x57在一些实施方式中存在，前提是，o1存在；o1缺失或是序列j1j2j3，其中j1选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，j2选自碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)，及j3选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，其中o1在一些实施方式中存在，前提是，x58存在；以及x58选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)。在一些实施方式中，多肽包含选自下列的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)选自下列的氨基酸序列：mgvklifavlcvaaaqaatinenfedidvvaiggsfaldvdanrgghgglpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:12](具有h50l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgglpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:14](具有h50l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgglpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:16](具有h50l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；mgvklifavvcvavaqaatiqenfedidlvaiggsfasdvdanrgghgglpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:18](具有h50l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；mmeiqvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgklpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:20](具有m71l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgklpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:22](具有m71l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgklpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:24](具有m71l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgklpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:26](具有m70l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgklpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:28](具有m30l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:30](具有m26l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqaqktdiadtdrasnfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:32](具有m43l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:34](具有m80l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:36](具有m80l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；mdmkvifalifsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:38](具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:40](具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:42](具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；以及mdmrvifalvfsslvqakstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvatetdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:44](具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；或者(b)seqidno:12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42或44中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式；或者(c)由下列任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列：atgggngtnaarytnathttygcngtnytntgygtngcngcngcncargcngcnacnathaaygaraayttygargayathgaygtngtngcnathggnggnwsnttygcnytngaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngcnytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:11](编码具有h50l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的核苷酸序列)；atgggngtnaarytnathttygcngtngtntgygtngcngcngcncargcngcnacnathaaygaraayttygargayathgayytngtngcnathggnggnwsnttygcnytngaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:13](编码具有h50l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶的核苷酸序列)；atgggngtnaarytnathttygcngtngtntgygtngcngcngcncargcngcnacnathaaygaraayttygargayathgayytngtngcnathggnggnwsnttygcnytngaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:15](编码具有h50l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶的核苷酸序列)；atgggngtnaarytnathttygcngtngtntgygtngcngtngcncargcngcnacnathcargaraayttygargayathgayytngtngcnathggnggnwsnttygcnwsngaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnytnatggaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytngtntgyytnwsncayathaartgyacngcncaratgcaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygcnggngayaargaywsngcncarggnggnathgcnggnggngcnathgtngayathccngarathgcnggnttyaargaratgaarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygargaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:17](编码具有h50l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的核苷酸序列)；atgatggarathcargtnytnttygcnytnathtgyttygcnytngtncargcnaayccnacngaraayaargaygayathgayathgtnggngtngarggnaarttyggnacnacngayytngaracngayytnttyacnathgtngargayatgaaygtnathwsnmgngayacnaayytngcnaaywsngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:19](编码具有m71l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1的核苷酸序列)；atgatggarathaargtnytnttygcnytnathtgyttygcnytngtncargcnaayccnacngaraayaargaygayathgayathgtnggngtngarggnaarttyggnacnacngayytngaracngayytnttyacnathgtngargayatgaaygtnathwsnmgngayacnaayytngcnaaywsngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:21](编码具有m71l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶的核苷酸序列)；atgatggargtnaargtngtnttygcnytnathtgyttygcnytngtncargcnaayccnacngaraayaargaygayathgayathgtnggngtngarggnaarttyggnacnacngayytngaracngayytnttyacnathgtngargayatgaaygtnathwsnmgngayacnaayytngcnaaywsngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:23](编码具有m71l取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtnytnttygcnytnathtgyathgcnytngtncargcnaayccnacngaraayaaygaycayathaayathgtnggnathgarggnaarttyggnathacngayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnaaymgnatgathwsnacngayaaygarcargcnaayacngaywsnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnytnathgaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaaraartayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngayathwsnggnttyaargaratgggnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgyacngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtncayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:25](编码具有m70l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaarttyathttygcnytngtntgyathgcnytngtncargcnaayccnacngtnaayaaygaygtnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaarcartayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargcncayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:27](编码具有m30l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的核苷酸序列]；atgaaracngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:29](编码具有m30l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttyacnytngtnttywsngcnytngtncargcncaraaracngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:31](编码具有m43l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttyacnytngtnttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnatgathaargcngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:33](编码具有m70l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttyacnytngtnttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnatgathaargcngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngarmgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:35](编码具有m80l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的核苷酸序列)；atggayatgaargtnathttygcnytnathttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaarwsngayathgcngayacngaymgngtnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgyacnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:37](编码具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttygcnytngtnttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaaracngayathgcngayacngaymgngcnmgnwsnttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:39](编码具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttygcnytngtnttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgaygtngtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaaracngayathgcngayacngaymgngcnmgnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyaayacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:41](编码具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的核苷酸序列)；或者atggayatgmgngtnathttygcnytngtnttywsnwsnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathaayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggaygtnathaarwsngayathacngayacngaymgngtnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcnacntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccnggnmgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:43](编码具有m79l取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的核苷酸序列)；或11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41或43中的任何一个的补体；(d)由与seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41或43中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式；或者(e)由与seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41或43中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式。在一些实施方式中，多肽缺乏功能分泌-增强序列。在此类型的例证性例中，多肽包含选自下列的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)选自下列的氨基酸序列：dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:46，细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶]；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:48，细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶]；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:50，细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶]；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:52，细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶]；dvdanrgghgglpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:54，具有h50l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶]；dvdanrgghgglpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:56，具有h50l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶]；dvdanrgghgglpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:58，具有h50l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶]；dvdanrgghgglpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:60，具有h50l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶]；以及nsdadrgklpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:62，具有m71l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶]；ntdsnrgklpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:64，具有m70l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶]；nndvnrgklpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:66，具有m30l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶]；etdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:68](具有m26l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:70，相对于全长长腹水蚤(metridialonga)164m3编号具有m43l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3&v1萤光素酶]；etdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:72，具有m80l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶]；etdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:74，具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶]；etdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:76，具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶]；etdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:78，具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶]；etdanrgklpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:80，具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶]；eaeaergklpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcatfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:82，细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs2萤光素酶]；(b)与seqidno:46，48，50。52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80或82中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式；或者(c)由下列任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列：gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:45](编码细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngayaargaygarytn[seqidno:47](编码细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarathgargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:49](编码细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarytngargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnytngarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:51](编码细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngcnytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:53](编码具有h50l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:55](编码具有h50l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnccngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:57](编码具有h50l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggnytnccnggnaaraaratgccnaargargtnytnatggaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytngtntgyytnwsncayathaartgyacngcncaratgcaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygcnggngayaargaywsngcncarggnggnathgcnggnggngcnathgtngayathccngarathgcnggnttyaargaratgaarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygargaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:59](编码具有h50l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的核苷酸序列)；aaywsngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:61](编码具有m71l取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶的核苷酸序列)；aayacngaywsnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnytnathgaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaaraartayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngayathwsnggnttyaargaratgggnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgyacngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtncayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:63](编码具有m70l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的核苷酸序列)；aayaaygaygtnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaarcartayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargcncayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:65](编码具有m30l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:67](编码具有m26l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:69](编码相对于全长长腹水蚤(metridialonga)164m3编号具有m43l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3&v1萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngarmgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:71](编码具有m80l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngarmgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:73](编码具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:75](编码具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的核苷酸序列]；garacngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyaayacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:77](编码具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcnacntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccnggnmgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:79](编码具有m79l取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的核苷酸序列)；或者gargcngargcngarmgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaaraartayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccnaaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:81](核苷酸序列编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；或45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79或81中的任何一个的补体，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式；(d)由与seqidno:45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79或81中的任何一个,或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式；或者(e)由与seqidno:45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79或81中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式。在一些实施方式中，多肽包含由式iii表示的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：z1-π-z2(iii)其中：π选自由式i表示的氨基酸序列或与由式i表示的氨基酸序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式；z1缺失或选自包含约1～约80个氨基酸残基(及其间的全部整数残基)的蛋白性部分，用于起始蛋白体内合成的氨基酸残基(例如,m或其修饰的形式)，及保护部分(例如,n-端阻断残基诸如焦谷氨酸)中的至少一种；以及z2缺失或是包含约1～约50氨基酸残基(及其间的全部整数残基)的蛋白性部分。适宜地，z1包含将多肽分泌到细胞外位置的信号肽，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方式中，信号肽包含由式iv表示的氨基酸序列：u1x60x61x62x63x64x65fx66x67x68x69x70x71x72x73x74a(iv)其中：u1缺失或选自用于起始蛋白体内合成的氨基酸残基(例如,m或其修饰的形式)和n-端阻断残基中的至少一种；x60缺失或是用于起始蛋白体内合成的氨基酸残基(例如,m或其修饰的形式)；x61选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或d,或其修饰的形式)；x62选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,i或m,或其修饰的形式)；x63选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；x64选自疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基(例如,v或l,或其修饰的形式)和芳族氨基酸残基(例如,f或其修饰的形式)；x65选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,v或i,或其修饰的形式)；x66选自小氨基酸残基(例如,a或t,或其修饰的形式)；x67选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或v,或其修饰的形式)；x68选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i,v或l,或其修饰的形式)；x69选自疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基(例如,c或其修饰的形式)和芳族氨基酸残基(例如,f或其修饰的形式)；x70选自疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基(例如,i或v,或其修饰的形式)和芳族氨基酸残基(例如,f或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或其修饰的形式)；x71选自小氨基酸残基(例如,a或s,或其修饰的形式)；x72选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v或l,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x73选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)；以及x74选自酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)。代表性的信号肽包含选自下列的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)mgvkvlfaliciavaea[seqidno:84，gaussiaprincepsprolume，prolumekdel，突变1和突变2的信号肽]，mgvklifavlcvaaaqa[seqidno:86，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a，2bv1，2bv2和长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的信号肽]，mmeiqvlfalicfalvqa[seqidno:88，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶的信号肽]，mmeikvlfalicfalvqa[seqidno:90，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶的信号肽]，mmevkvvfalicfalvqa[seqidno:92，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶的信号肽]，mdikvlfalicialvqa[seqidno:94，长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的信号肽]，mdikfifalvcialvqa[seqidno:96，长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的信号肽]，mdikvvftlvfsalvqa[seqidno:98，长腹水蚤(metridialonga)164m3，v1和v2萤光素酶的信号肽]，mdmkvifalifsalvqa[seqidno:100，长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的信号肽]，mdikvvfalvfsalvqa[seqidno:102，长腹水蚤(metridialonga)45和52萤光素酶的信号肽]或mdmrvifalvfsslvqa[seqidno:104，长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的信号肽]；(b)与seqidno:84，86，88，90，92，94，96，98，100，102或104中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列；(c)由下列任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列：atgggngtnaargtnytnttygcnytnathtgyathgcngtngcngargcn[seqidno:83](编码gaussiaprincepsprolume,prolumekdel,突变1或突变2萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atgggngtnaarytnathttygcngtnytntgygtngcngcngcncargcn[seqidno:85](编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a,2bv1,2bv2或长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atgatggarathcargtnytnttygcnytnathtgyttygcnytngtncargcn[seqidno:87](编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atgatggarathaargtnytnttygcnytnathtgyttygcnytngtncargcn[seqidno:89](编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atgatggargtnaargtngtnttygcnytnathtgyttygcnytngtncargcn[seqidno:91](编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atggayathaargtnytnttygcnytnathtgyathgcnytngtncargcn[seqidno:93](编码长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atggayathaarttyathttygcnytngtntgyathgcnytngtncargcn[seqidno:95](编码长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttyacnytngtnttywsngcnytngtncargcn[seqidno:97](编码长腹水蚤(metridialonga)164m3,v1或v2萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atggayatgaargtnathttygcnytnathttywsngcnytngtncargcn[seqidno:99](编码长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttygcnytngtnttywsngcnytngtncargcn[seqidno:101](编码长腹水蚤(metridialonga)45和52萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，或者atggayatgmgngtnathttygcnytngtnttywsnwsnytngtncargcn[seqidno:103](编码长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)；或seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个的补体；(d)由与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列；或者(e)由与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方式中，z1包含分泌-增强序列，由其组成或基本上由其组成。分泌-增强序列的非限制性例选自：(a)选自下列的氨基酸序列：kptennedfnivavasnfatt[seqidno:106，gaussiaprincepsprolume，prolumekdel，突变1和突变2萤光素酶的分泌-增强序列]，atinenfedidvvaiggsfal[seqidno:108，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的分泌-增强序列]，atinenfedidlvaiggsfal[seqidno:110，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1&2萤光素酶的分泌-增强序列]，atiqenfedidlvaiggsfas[seqidno:112，长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的分泌-增强序列]，nptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnla[seqidno:114，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶的分泌-增强序列]，nptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqa[seqidno:116，长腹水蚤(metridialonga)39的分泌-增强序列]；nptv[seqidno:118，长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的分泌-增强序列]；ktdiadtdrasnfvat[seqidno:120，长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的分泌-增强序列]；qktdiadtdrasnfvat[seqidno:122，长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvat[seqidno:124，长腹水蚤(metridialonga)164v1&2萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvat[seqidno:126，长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvat[seqidno:128，长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvat[seqidno:130，长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvat[seqidno:132，长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的分泌-增强序列]；或；(b)与seqidno:106，107，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130或132中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列；或者(c)由下列任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列：aarccnacngaraayaaygargayttyaayathgtngcngtngcnwsnaayttygcnacnacn[seqidno:105](编码gaussiaprincepsprolume,prolumekdel,突变1和突变2萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；gcnacnathaaygaraayttygargayathgaygtngtngcnathggnggnwsnttygcnytn[seqidno:107](编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；gcnacnathaaygaraayttygargayathgayytngtngcnathggnggnwsnttygcnytn[seqidno:109](编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1&2萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；gcnacnathcargaraayttygargayathgayytngtngcnathggnggnwsnttygcnwsn[seqidno:111](编码长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aayccnacngaraayaargaygayathgayathgtnggngtngarggnaarttyggnacnacngayytngaracngayytnttyacnathgtngargayatgaaygtnathwsnmgngayacnaayytngcn[seqidno:113](编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aayccnacngaraayaaygaycayathaayathgtnggnathgarggnaarttyggnathacngayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnaaymgnatgathwsnacngayaaygarcargcn[seqidno:115](编码长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aayccnacngtn[seqidno:117](编码长腹水蚤(metridialonga)gs的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aaracngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacn[seqidno:119](编码长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；caraaracngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacn[seqidno:121](编码长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnatgathaargcngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacn[seqidno:123](编码长腹水蚤(metridialonga)164v1&2萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaarwsngayathgcngayacngaymgngtnwsnaayttygtngcnacn[seqidno:125](编码长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaaracngayathgcngayacngaymgngcnmgnwsnttygtngcnacn[seqidno:127](编码长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aarwsnacngarttygayccnaayathgaygtngtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaaracngayathgcngayacngaymgngcnmgnaayttygtngcnacn[seqidno:129](编码长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)；aarwsnacngarttygayccnaayathaayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggaygtnathaarwsngayathacngayacngaymgngtnwsnaayttygtngcnacn[seqidno:131](编码长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，或105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个的补体；(d)由与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列；或者(e)由与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方式中，x17是h之外的残基。在一些实施方式中，x17选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。在特定实施方式中，x17是a或其修饰的形式。在一些实施方式中，亚序列b1c5x17x18由式v表示的氨基酸序列组成：bcωω(v)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ωis选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)在特定实施方式中，x17是a或其修饰的形式。在一些实施方式中，x18选自小氨基酸残基(例如,t或s,或其修饰的形式)。在一些实施方式中，亚序列b1c5x17x18选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd，kctd，rcat和rcas。在一些实施方式中，x36选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)或中性极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)。在一些实施方式中，x37选自a或e，或修饰的形式。在一些实施方式中，x38是d或其修饰的形式。在一些实施方式中，亚序列x36c6x37x38选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd，适宜地自rcad和rced。在一些实施方式中，x40选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)。在一些实施方式中，σ选自s或t，或其修饰的形式。在一些实施方式中，x41选自d，或其修饰的形式。在一些实施方式中，亚序列x40c9σx41是kcsd。在一些实施方式中，选自b1c5x17x18，x36c6x37x38和x40c9σx41的多肽的至少一种亚序列由式vi表示的氨基酸序列组成：bcωd(vi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。在此类型的例证性例中，亚序列b1c5x17x18选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd。在例证性例中，亚序列x36c6x37x38选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd。在例证性例中，亚序列x40c9σx41由序列kcsd组成。在一些实施方式中，x42不是d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。在一些实施方式中，选自b1c5x17x18，x36c6x37x38，x40c9σx41和b2c10x43x44的至少1，2，3或全部4种亚序列由以上定义的式v表示的氨基酸序列(即,bcωω)组成。在此类型的例证性例中，由式v表示的氨基酸序列选自bcad(例如,rcad,kcad)，bcat(例如,rcat,kcat)，bced(例如,rced,kced)，bcsd(例如,rcsd,kcsd)，bctd(例如,rctd,kctd)和bcas(例如,rcas,kcas)。在一些实施方式中，x36c6和x40c9之一或之二由式xiii表示的氨基酸序列组成：bc(xiii)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在这些实施方式的一些例证性例中，选自b1c5，x36c6，x40c9和b2c10的至少1，2，3或全部亚序列存在于由式xiv表示的氨基酸序列组成的亚序列之内：bcω(xiv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。在这些例中，bcω适宜地由选自bca或bce的序列组成。在一些实施方式中，选自b1c5x17，x36c6x37，x40c9σ和b2c10x43的至少1，2，3或全部亚序列由式xv表示的氨基酸序列组成：bca(xv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在这些实施方式的一些例证性例中，氨基酸序列bca存在于选自bcad或bcat的亚序列之内。在这些例中，亚序列b1c5x17x18适宜地由bcad或bcat表示。适宜地，亚序列b2c10x43由bcat表示。在这些实施方式的一些例证性例中，氨基酸序列bca存在于亚序列gbcat之内。在这些例中，亚序列gbcat适宜地表示亚序列gb1c5x17x18和x42b2c10x43之一或之二。在一些实施方式中，x42不是d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。在这些实施方式的一些例证性例中，亚序列b2c10x43由bca表示或亚序列b2c10x43x44由bcat表示。在一些实施方式中，x35x36c6和x42b2c10之一或之二由式xvi表示的氨基酸序列组成：ebc(xvi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在一些实施方式中，x42b2c10由式xvii表示的氨基酸序列组成：gbc(xvii)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在这些实施方式的一些例证性例中，gb1c和x42b2c10之一或之二存在于由式xviii表示的亚序列之内：gbcω(xviii)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。适宜地，gbcω是gbca。在这些实施方式的一些例证性例中，gb1c和x42b2c10之一或之二存在于由式xix表示的亚序列之内：gbcωω(xix)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。适宜地，gbcωω是gbcat。在一些实施方式中，多肽可任选地包含将多肽分泌到细胞外位置的信号序列和分泌-增强序列中的任何一种或更多。在一些实施方式中，如以上广泛地描述的包含根据式i的氨基酸序列的多肽具有任何一种或更多选自下列的活性：增强的发光，更强闪光信号强度，增强的辉光信号强度，增强的辉光信号稳定性及增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，相对无在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的l的参照萤光素酶多肽的酶操作(例如,相对于以下萤光素酶中的任何一种或更多：太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a,太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1&2,长腹水蚤(metridialonga)22，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&，长腹水蚤(metridialonga)39，长腹水蚤(metridialonga)gs长腹水蚤(metridialonga)7，长腹水蚤(metridialonga)164m3，长腹水蚤(metridialonga)164v1&2，长腹水蚤(metridialonga)16，长腹水蚤(metridialonga)45,长腹水蚤(metridialonga)52和长腹水蚤(metridialonga)al)。在另一方面，本发明提供分离的，合成，重组体或纯化的核酸分子，其包含编码以上广泛地描述的根据式i的多肽的氨基酸序列的核苷酸序列，由其组成或基本上由其组成，包括如由相关于式i的实施方式的任何一个或更多进一步定义的根据式i的多肽。在一些实施方式中，核酸分子包含选自下列的核苷酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)编码选自seqidno:12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80或82中的任何一个的氨基酸序列的核苷酸序列；(b)选自seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79或81中的任何一个，或其补体的核苷酸序列；(c)与seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79或81中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列，其中由核苷酸序列编码的氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式；或者(d)与seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79或81中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列，其中由核苷酸序列编码的氨基酸序列在对应于式i的第1位的位置包含l，或其修饰的形式。在一些实施方式中，核酸分子还包含编码信号肽的核苷酸序列，其代表性的例选自：(a)83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的核苷酸序列；(b)与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列；或者(c)与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列。在一些实施方式中，核酸分子还包含编码分泌-增强序列的核苷酸序列，其代表性的例选自：(a)seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的核苷酸序列；(b)与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列；或者(c)与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列。在一些实施方式中，由以上广泛地描述的核酸分子编码的多肽具有任何一种或更多选自下列的活性：增强的发光，更强闪光信号强度，增强的辉光信号强度，增强的辉光信号稳定性及增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，用于相对于无在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的l的参照萤光素酶多肽操作酶(例如,相对于以下萤光素酶中的任何一种或更多：太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a,太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1&2,长腹水蚤(metridialonga)22，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&，长腹水蚤(metridialonga)39，长腹水蚤(metridialonga)gs长腹水蚤(metridialonga)7，长腹水蚤(metridialonga)164m3，长腹水蚤(metridialonga)164v1&2，长腹水蚤(metridialonga)16，长腹水蚤(metridialonga)45,长腹水蚤(metridialonga)52和长腹水蚤(metridialonga)al)。本发明人也发现，例如以上定义的萤光素酶的分泌-增强结构域对于萤光素酶活性不是必要的，和其功能缺失在一些实施方式中改善一种或更多萤光素酶活性。由此，在另一方面，本发明提供多肽，其适宜地处于分离的，合成，重组体或纯化的形式，包含具有萤光素酶活性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成，其中氨基酸序列由式vii表示：ψ-θ(vii)其中：ψ包含下列中的至少一种：用于起始蛋白体内合成的氨基酸残基(例如,m或其修饰的形式)，保护部分(例如,n-端阻断残基诸如焦谷氨酸)和任选地用于将多肽分泌到细胞外位置的信号序列；以及θ包含下列序列，由其组成或基本上由其组成：(a)具有萤光素酶活性的氨基酸序列，其中氨基酸序列由式viii表示：δx1pgkkx2px3x4vx5x6ex7eanax8x9agc1x10rgc2lx11c3lsx12ikc4tx13x14mx15x16x17ipgb1c5x18x19yx20gdkx21x22x23qx24gix25x26x27x28ivdx29peix30gfkx31x32x33px34x35qfiaqvx36x37c6x38x39c7x40tgc8lkglanvx41c9σx42llkkwlpx43b2c10x44x45fax46kiqx47x48x49x50x51ikgx52x53gd(viii)其中：δ缺失或是包含约1～约20氨基酸残基(及其之间的全部整数残基)的蛋白性部分，其不是功能分泌-增强序列；x1选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)；x2选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)；x3选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x4选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如a,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x5选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或l,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,p或其修饰的形式)；x6选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i,m或v,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x7选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m,i或l,或其修饰的形式)；x8选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f,或其修饰的形式)；x9选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)；x10选自小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)；x11选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或v,或其修饰的形式)；x12选自碱性氨基酸残基(例如,h或k,或其修饰的形式)；x13选自小氨基酸残基(例如,p或a,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x14选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；x15选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；x16选自任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q,或其修饰的形式)；x17选自疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f或y,或其修饰的形式)；b1选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；x18选自碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x19选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,t或s,或其修饰的形式)；x20选自酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x21选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x22选自小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x23选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x24选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x25选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)；x26缺失或选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)；x27选自酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)；x28选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x29选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或m,或其修饰的形式)；x30选自小氨基酸残基(例如,p,s或a,或其修饰的形式)；x31选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)；x32选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x33选自负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如e,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x34选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m或l,或其修饰的形式)；x35选自酸性氨基酸残基(例如,e或d,或其修饰的形式)；x36选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)；x37选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,r或其修饰的形式)；x38选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如a或t,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如h或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如e或d,或其修饰的形式)；x39选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x40选自小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)；x41选自碱性氨基酸残基(例如,k,r或h,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；σ选自小氨基酸残基(例如,s,a或t,或其修饰的形式)；x42选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s,t或a,或其修饰的形式)；x43选自任何氨基酸残基(例如,小氨基酸残基诸如p,g,t,s或a,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q或n,或其修饰的形式,碱性氨基酸残基诸如h,k或r或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如d或e，或其修饰的形式)；b2选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；x44选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x45选自小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x46选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或其修饰的形式)；x47选自小氨基酸残基(例如,g或s,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x48选自中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x49选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x50选自负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如d,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如h,或其修饰的形式)；x51选自任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如n,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如t,或其修饰的形式)；x52选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)；以及x53选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，或者(b)与由式viii表示的氨基酸序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列。适宜地，θ缺失或另外排除功能分泌-增强序列，例如选自下列之一：kptennedfnivavasnfatt[seqidno:106，gaussiaprincepsprolume，prolumekdel，突变1和突变2萤光素酶的分泌-增强序列]，atinenfedidvvaiggsfal[seqidno:108，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的分泌-增强序列]，atinenfedidlvaiggsfal[seqidno:110，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1&2萤光素酶的分泌-增强序列]，atiqenfedidlvaiggsfas[seqidno:112，长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的分泌-增强序列]，nptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnla[seqidno:114，太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶的分泌-增强序列]，nptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqa[seqidno:116，长腹水蚤(metridialonga)39的分泌-增强序列]；nptv[seqidno:118，长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的分泌-增强序列]；ktdiadtdrasnfvat[seqidno:120，长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的分泌-增强序列]；qktdiadtdrasnfvat[seqidno:122，长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvat[seqidno:124，长腹水蚤(metridialonga)164v1&2萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvat[seqidno:126，长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvat[seqidno:128，长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的分泌-增强序列]；kstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvat[seqidno:130，长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的分泌-增强序列]；及kstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvat[seqidno:132，长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的分泌-增强序列]。在一些实施方式中，多肽是除了由以下序列组成的多肽之外的多肽：mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:134](全长野生型长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)。在一些实施方式中，根据θ的氨基酸序列还在由式viii表示的序列上游(例如,紧邻上游)包含由式ix表示的氨基酸序列：x54x55x56x57x58rgo1x59(ix)其中：x54缺失或选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)，其中x54在一些实施方式中存在，前提是，x55存在；x55缺失或选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如l或v,或其修饰的形式；小氨基酸残基诸如s,t或a,或其修饰的形式；或中性/极性氨基酸残基诸如n,或其修饰的形式)，其中x55在一些实施方式中存在，前提是，x56存在；x56缺失或选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)，其中x56在一些实施方式中存在，前提是，x57存在；x57缺失或选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式；或小氨基酸残基诸如s,t或a,或其修饰的形式)，其中x57在一些实施方式中存在，前提是，x58存在；x58选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)，其中x58在一些实施方式中存在，前提是，o1存在；o1缺失或是序列j1j2j3，其中j1选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，j2选自碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)，及j3选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，其中o1在一些实施方式中存在，前提是，x59存在；以及x59选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)。在一些实施方式中，θ包含选自下列的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)选自下列的氨基酸序列：dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:46，细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶]；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:48，细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶]；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:50，细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶]；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:52，细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶]；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:136，细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶]；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:138，细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶]；dvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:140，细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶]；dvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:142，细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶]；以及nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:144，细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶]；ntdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:146，细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶]；nndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:148，细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶]；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:150](细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:152，细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3&v1萤光素酶]；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:154，细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶]；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:156，细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶]；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:158，细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶]；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:160，细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶]；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:162，细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶]；eaeaergklpgkkmplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcatfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:82，细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs2萤光素酶]；(b)与seqidno:46中的任何一个，48，50，52，82，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160或162所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列；或者(c)由下列任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列：gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:45](编码细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngayaargaygarytn[seqidno:47](编码细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarathgargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:49](编码细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarytngargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgycayacntaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnytngarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:51](编码细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngcnytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:135](编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:137](编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnccngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:139](编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytnatggaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytngtntgyytnwsncayathaartgyacngcncaratgcaraarttyathccnggnmgntgycaywsntaygcnggngayaargaywsngcncarggnggnathgcnggnggngcnathgtngayathccngarathgcnggnttyaargaratgaarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygargaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:141](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的核苷酸序列)；aaywsngaygcngaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:143](编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶的核苷酸序列)；aayacngaywsnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnytnathgaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaaraartayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngayathwsnggnttyaargaratgggnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgyacngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtncayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:145](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的核苷酸序列)；aayaaygaygtnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaarcartayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargcncayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:147](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:149](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:151](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3&v1萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngarmgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:153](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgyacnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:155](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:157](核苷酸序列编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶]；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcnwsntgyaayacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:159](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcnacntgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngarytnytnaaraartggytnccnggnmgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:161](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的核苷酸序列)，或者gargcngargcngarmgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaaraartayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccnaaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:81](编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs2萤光素酶的核苷酸序列)，或者45，47，49，51，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159或161中的任何一个的补体；(d)由与seqidno:45，47，49，51，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159或161中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列；或者(e)由与seqidno:45，47，49，51，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159或161中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方式中，信号肽包含以上广泛地描述的由式iv表示的氨基酸序列，非限制性例包括(a)seqidno:84，86，88，90，92，94，96，98，100，102或104所示的氨基酸序列，或(b)与seqidno:84，86，88，90，92，94，96，98，100，102或104中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，或由seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，或(d)由与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列，或(e)由与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方式中，根据式viii的多肽缺乏将多肽分泌到细胞外位置的信号肽。在一些实施方式中，式viii中x1是l或其修饰的形式。在一些实施方式中，x18是h之外的残基。在一些实施方式中，x18选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。在特定实施方式中，x18是a或其修饰的形式。在一些实施方式中，亚序列b1c5x18x19由式v表示的氨基酸序列组成：bcωω(v)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)在特定实施方式中，x18是a或其修饰的形式。在一些实施方式中，x19选自小氨基酸残基(例如,t或s,或其修饰的形式)。在一些实施方式中，亚序列b1c5x18x19选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd，kctd，rcat或rcas。在一些实施方式中，x37选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)或中性极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)。在一些实施方式中，x38选自a或e，或修饰的形式。在一些实施方式中，x39是d或其修饰的形式。在一些实施方式中，亚序列x37c6x38x39选自rcad或rced。在一些实施方式中，x41选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)。在一些实施方式中，σ选自s或t，或其修饰的形式。在一些实施方式中，x42选自d，或其修饰的形式。在一些实施方式中，亚序列x41c9σx42是kcsd。在一些实施方式中，选自b1c5x18x19，x37c6x38x39和x41c9σx42的多肽的至少一种亚序列由式vi表示的氨基酸序列组成：bcωd(vi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。在此类型的例证性例中，亚序列b1c5x18x19选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd。在例证性例中，亚序列x37c6x38x39选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd。在例证性例中，亚序列x41c9σx42由序列kcsd组成。在一些实施方式中，x43不是d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。在一些实施方式中，选自b1c5x18x19，x37c6x38x39，x41c9σx42和b2c10x44x45的至少1，2，3或全部4种亚序列由以上定义的式v表示的氨基酸序列(即,bcωω)组成。在此类型的例证性例中，由式v表示的氨基酸序列选自bcad(例如,rcad,kcad)，bcat(例如,rcat,kcat)，bced(例如,rced,kced)，bcsd(例如,rcsd,kcsd)，bctd(例如,rctd,kctd)和bcas(例如,rcas,kcas)。在一些实施方式中，x37c6和x41c9之一或之二由式xx表示的氨基酸序列组成：bc(xx)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在这些实施方式的一些例证性例中，选自b1c5，x37c6，x41c9和b2c10的至少1，2，3或全部亚序列存在于由式xxi表示的氨基酸序列组成的亚序列之内：bcω(xxi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。在这些例中，bcω适宜地由选自bca或bce的序列组成。在一些实施方式中，选自b1c5x18，x37c6x38，x41c9σ和b2c10x44的至少1，2，3或全部亚序列由式xxii表示的氨基酸序列组成：bca(xxii)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在这些实施方式的一些例证性例中，氨基酸序列bca存在于选自bcad或bcat的亚序列之内。在这些例中，亚序列b1c5x18x19适宜地由bcad或bcat表示。适宜地，亚序列b2c10x44由bcat表示。在这些实施方式的一些例证性例中，氨基酸序列bca存在于亚序列gbcat之内。在这些例中，亚序列gbcat适宜地表示亚序列gb1c5x18x19和x43b2c10x44之一或之二。在一些实施方式中，亚序列x42不是d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。在这些实施方式的一些例证性例中，亚序列b2c10x44由bca表示或亚序列b2c10x44x45由bcat表示。在一些实施方式中，x36x37c6和x43b2c10之一或之二由式xxiii表示的氨基酸序列组成：ebc(xxiii)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在一些实施方式中，x43b2c10由式xxiv表示的氨基酸序列组成：gbc(xxiv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)。在这些实施方式的一些例证性例中，gb1c和x43b2c10之一或之二存在于由式xxv表示的亚序列之内：gbcω(xxv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。适宜地，gbcω是gbca。在这些实施方式的一些例证性例中，gb1c和x43b2c10之一或之二存在于由式xxvi表示的亚序列之内：gbcωω(xxvi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)。适宜地，gbcωω是gbcat。在一些实施方式中，包含根据θ的氨基酸序列的多肽具有任何一种或更多选自下列的活性：增强的发光，更强闪光信号强度，增强的辉光信号强度，增强的辉光信号稳定性及增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，用于相对于包含功能分泌-增强序列的参照萤光素酶多肽的酶操作。在相关的方面，本发明提供分离的，合成，重组体或纯化的核酸分子，其包含以上，或与式vii相关的实施方式中的任何一个广泛地描述的编码根据式vii的多肽的氨基酸序列的核苷酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方式中，核酸分子包含选自下列的核苷酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)编码选自seqidno:46，48，50，52，82，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160或162中的任何一个的氨基酸序列的核苷酸序列；(b)选自下列的核苷酸序列：seqidno:45(编码细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:47(编码细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:49(编码细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:51(编码细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:135(编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:137(编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:139(编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:141(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:143(编码细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:145(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:147(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:149(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:151(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3&v1萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:153(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:155(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:157(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:159(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的核苷酸序列)，seqidno:161(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的核苷酸序列)，或seqidno:81(编码细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的核苷酸序列)，或其补体；(b)与seqidno:45，47，49，51，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159或161中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列；或者(c)与seqidno:45，47，49，51，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159或161中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列。在一些实施方式中，核酸分子还包含编码信号肽的核苷酸序列，其代表性的例选自：(a)编码选自82，84，86，88，90，92，94，96，98，100或102中的任何一个的氨基酸序列的核苷酸序列；(b)seqidno:83(编码gaussiaprincepsprolume,prolumekdel,突变1或突变2萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:85(编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a,2bv1,2bv2或长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:87(编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:89(编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:91(编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:93(编码长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:95(编码长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:97(编码长腹水蚤(metridialonga)164m3,v1或v2萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:99(编码长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)，seqidno:101(编码长腹水蚤(metridialonga)45和52萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)或seqidno:103(编码长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的信号肽的核苷酸序列)中的任何一个，或其补体所示的核苷酸序列；(b)与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列；或者(c)与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列。适宜地，核酸分子排除编码分泌-增强序列的核苷酸序列，其代表性的例包括：seqidno:105(编码gaussiaprincepsprolume,prolumekdel,突变1和突变2萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:107(编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:109(编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1&2萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:111(编码长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:113(编码太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)v1&2&3萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:115(编码长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:117(编码长腹水蚤(metridialonga)gs的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:119(编码长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:121(编码长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:123(编码长腹水蚤(metridialonga)164v1&2萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:125(编码长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:127(编码长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:129(编码长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)，seqidno:131(编码长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的分泌-增强序列的核苷酸序列)中的任何一个所示的核苷酸序列。在一些实施方式中，以上广泛地描述的由核酸分子编码的多肽具有任何一种或更多选自下列的活性：增强的发光，更强闪光信号强度，增强的辉光信号强度，增强的辉光信号稳定性及增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，用于相对于包含功能分泌增强序列的参照萤光素酶多肽的酶操作。本发明人也发现了包括保守的半胱氨酸(例如,c5,c6,c9和c10)的特定4-残基基序的修饰，可显著地改善萤光素酶，尤其挠足虫萤光素酶的一种或更多光-发射特征，其中光-发射特征选自：发光，闪光信号强度，辉光信号强度，辉光信号稳定性和有效温度范围，包括升高的萤光素酶操作的最佳温度范围。因此，在仍另一方面，本发明提供多肽，其适宜地处于分离的，合成，重组体或纯化的形式，包含具有萤光素酶活性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成，其中氨基酸序列选自：(a)由式x表示的氨基酸序列：x1pgkkx2px3x4vx5x6ex7eanax8x9agc1x10rgc2lx11c3lsx12ikc4tx13x14mx15x16x17ipgb1c5x18x19yx20gdkx21x22x23qx24gix25x26x27x28ivdx29peix30gfkx31x32x33px34x35qfiaqvx36x37c6x38x39c7x40tgc8lkglanvx41c9σx42llkkwlpx43b2c10x44x45fax46kiqx47x48x49x50x51ikgx52x53gd(x)其中：x1选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)；x2选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)；x3选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x4选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如a,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x5选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或l,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,p或其修饰的形式)；x6选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i,m或v,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x7选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m,i或l,或其修饰的形式)；x8选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f,或其修饰的形式)；x9选自碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)；x10选自小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)；x11选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或v,或其修饰的形式)；x12选自碱性氨基酸残基(例如,h或k,或其修饰的形式)；x13选自小氨基酸残基(例如,p或a,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x14选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；x15选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；x16选自任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q,或其修饰的形式)；b1选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；x17选自疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f或y,或其修饰的形式)；x18选自碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x19选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,t或s,或其修饰的形式)；x20选自酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x21选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x22选自小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x23选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x24选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x25选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)；x26缺失或选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)；x27选自酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)；x28选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x29选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或m,或其修饰的形式)；x30选自小氨基酸残基(例如,p,s或a,或其修饰的形式)；x31选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)；x32选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x33选自负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如e,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)；x34选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m或l,或其修饰的形式)；x35选自酸性氨基酸残基(例如,e或d,或其修饰的形式)；x36选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)；x37选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,r或其修饰的形式)；x38选自任何氨基酸(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如a或t,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如h或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如e或d,或其修饰的形式)；x39选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x40选自小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)；x41选自碱性氨基酸残基(例如,k,r或h,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)；σ选自小氨基酸残基(例如,s,a或t,或其修饰的形式)；x42选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x43选自任何氨基酸残基(例如,小氨基酸残基诸如p,g,t,s或a,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q或n,或其修饰的形式,碱性氨基酸残基诸如h,k或r或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如d或e，或其修饰的形式)；b2选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；x44选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x45选自小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)；x46选自酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或其修饰的形式)；x47选自小氨基酸残基(例如,g或s,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；x48选自中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；x49选自疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)；x50选自负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如d,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如h,或其修饰的形式)；x51选自任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如n,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如t,或其修饰的形式)；x52选自小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)；以及x53选自小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，前提是，选自b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列由式xi表示的氨基酸序列组成：bcωd(xi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，或者(b)与由式x表示的氨基酸序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，及其包含选自b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成。在一些实施方式中，多肽是由选自下列的氨基酸序列组成的多肽之外的多肽：(1)mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:166](全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；(2)mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:168](全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；以及(3)mgvklifavvcvavaqaatiqenfedidlvaiggsfasdvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:170](全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；(4)mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:172](全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)。在一些实施方式中，选自b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少2种亚序列各由式xi表示的氨基酸序列组成。在其他实施方式中，选自b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的各亚序列由式xi表示的氨基酸序列组成。在一些实施方式中，式xi的b选自r或k，或其修饰的形式。在一些实施方式中，式xi的ω选自a，s，t或e，或其修饰的形式。在特定实施方式中，x18是a或其修饰的形式。在特定实施方式中，x38选自a，t，d或e，或其修饰的形式。在特定实施方式中，σ选自s，t或a，或其修饰的形式。在一些实施方式中，式xi的b选自r或k，或其修饰的形式，及式xi的ω选自a，s，t或e，或其修饰的形式。在一些实施方式中，多肽还在由式x表示的序列上游(例如,紧邻上游)包含由式ix表示的氨基酸序列：x54x55x56x57x58rgo1x59(ix)其中：x54缺失或选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)，其中x54在一些实施方式中存在，前提是，x55存在；x55缺失或选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如l或v,或其修饰的形式；小氨基酸残基诸如s,t或a,或其修饰的形式；或中性/极性氨基酸残基诸如n,或其修饰的形式)，其中x55在一些实施方式中存在，前提是，x56存在；x56缺失或选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)，其中x56在一些实施方式中存在，前提是，x57存在；x57缺失或选自任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式；或小氨基酸残基诸如s,t或a,或其修饰的形式)，其中x57在一些实施方式中存在，前提是，x58存在；x58选自酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)，其中x58在一些实施方式中存在，前提是，o1存在；o1缺失或是序列j1j2j3，其中j1选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，j2选自碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)，及j3选自小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，其中o1在一些实施方式中存在，前提是，x59存在；以及x59选自碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)；或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)。在一些实施方式中，多肽包含由式xii表示的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：z1-π-z2(xii)其中：π选自由式x表示的氨基酸序列或与由式x表示的氨基酸序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列；z1缺失或选自包含约1～约80个氨基酸残基(及其之间的全部整数残基)的蛋白性部分，用于起始蛋白体内合成的氨基酸残基(例如,m或其修饰的形式)，及保护部分(例如,n-端阻断残基诸如焦谷氨酸)中的至少一种；以及z2缺失或是包含约1～约50个氨基酸残基(及其之间的全部整数残基)的蛋白性部分。适宜地，z1包含将多肽分泌到细胞外位置的信号肽，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方式中，信号肽包含由式iv表示的氨基酸序列，如以上广泛地定义的。代表性的信号肽包含选自下列的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)选自seqidno:84，86，88，90，92，94，96，98，100，102或104的氨基酸序列；(b)与seqidno:84，86，88，90，92，94，96，98，100，102或104中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列；(c)由seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列；(d)由与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列；或者(e)由与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方式中，z1包含分泌-增强序列，由其组成或基本上由其组成，其非限制性例选自：(a)seqidno:106，107，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130或132中的任何一个所示的氨基酸序列；或；(b)与seqidno:106，107，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130或132中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列；(c)由seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列；(d)由与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列；或者(e)由与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施方式中，根据式x的多肽包含选自下列的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)选自下列的氨基酸序列：mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:174](在c5具有rcad取代的gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:176](在c5具有rcad取代的gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:178](在c5具有rcad取代的gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:180](在c5具有rcad取代的gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列)；meakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:182](在c5具有rcad取代的gaussiaprincepsgs萤光素酶的全长序列)；mgvklifavlcvaaaqaatinenfedidvvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:184](在c5具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:186](在c5具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:188](在c5具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；mgvklifavvcvavaqaatiqenfedidlvaiggsfasdvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrcadyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:190](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；mmeiqvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:192](在c5具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:194](在c5具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:196](在c5具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:198](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:200](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:202](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqaqktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:204](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:206](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:208](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；mdmkvifalifsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:210](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:212](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:214](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；以及mdmrvifalvfsslvqakstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:216](在c5具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:218](在c6具有rcad取代的gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:220](在c6具有rcad取代的gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:222](在c6具有rcad取代的gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:224](在c6具有rcad取代的gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列)；meakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:226](在c6具有rcad取代的gaussiaprincepsgs萤光素酶的全长序列)mgvklifavlcvaaaqaatinenfedidvvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:228](在c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:230](在c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:232](在c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；mgvklifavvcvavaqaatiqenfedidlvaiggsfasdvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:234](在c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；mmeiqvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:236](在c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:238](在c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:240](在c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:242](在c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:244](在c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgma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在c5及c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:326](在c5及c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:328](在c5及c6具有rcad取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:330](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:332](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:334](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqaqktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:336](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:338](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:340](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；mdmkvifalifsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:342](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:344](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:346](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；mdmrvifalvfsslvqakstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:348](在c5及c6具有rcad取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:350](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:352](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:354](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:356](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列)；meakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:358](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsgs萤光素酶的全长序列)；mgvklifavlcvaaaqaatinenfedidvvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:360](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:362](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:364](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；mgvklifavvcvavaqaatiqenfedidlvaiggsfasdvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrcadyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:366](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；mmeiqvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:368](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:370](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:372](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:374](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:376](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:378](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqaqktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:380](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:382](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:384](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；mdmkvifalifsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:386](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:388](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:390](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；以及mdmrvifalvfsslvqakstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:392](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:394](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:396](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:398](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:400](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列)；meakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:402](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsgs萤光素酶的全长序列)mgvklifavlcvaaaqaatinenfedidvvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:404](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:406](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:408](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；mgvklifavvcvavaqaatiqenfedidlvaiggsfasdvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:410](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；mmeiqvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:412](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:414](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:416](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:418](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:420](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:422](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqaqktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:424](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:426](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:428](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；mdmkvifalifsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:430](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:432](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcntgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:434](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；mdmrvifalvfsslvqakstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:436](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:438](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:440](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:442](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列)；mgvkvlfaliciavaeakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:444](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列)；meakptennedfnivavasnfattdldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:446](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的gaussiaprincepsgs萤光素酶的全长序列)；mgvklifavlcvaaaqaatinenfedidvvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:448](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:450](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；mgvklifavvcvaaaqaatinenfedidlvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:452](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；mgvklifavvcvavaqaatiqenfedidlvaiggsfasdvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrcadyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:454](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；mmeiqvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:456](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:458](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:460](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；mdikvlfalicialvqanptenndhinivgiegkfgitdletdlftiwetnrmistdneqantdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:462](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:464](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:466](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqaqktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:468](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:470](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:472](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；mdmkvifalifsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:474](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:476](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcntgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:478](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；mdmrvifalvfsslvqakstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:480](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；或者(b)与seqidno:174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478或480中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成；或者(c)由下列任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列：atgggngtnaargtnytnttygcnytnathtgyathgcngtngcngargcnaarccnacngaraayaaygargayttyaayathgtngcngtngcnwsnaayttygcnacnacngayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:173](编码在c5具有rcad取代的gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列的核苷酸序列)；atgggngtnaargtnytnttygcnytnathtgyathgcngtngcngargcnaarccnacngaraayaaygargayttyaayathgtngcngtngcnwsnaayttygcnacnacngayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngayaargaygarytn[seqidno:175](编码在c5具有rcad取代的gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列的核苷酸序列)；atgggngtnaargtnytnttygcnytnathtgyathgcngtngcngargcnaarccnacngaraayaaygargayttyaayathgtngcngtngcnwsnaayttygcnacnacngayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarathgargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:177](编码在c5具有rcad取代的gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列的核苷酸序列)；atgggngtnaargtnytnttygcnytnathtgyathgcngtngcngargcnaarccnacngaraayaaygargayttyaayathgtngcngtngcnwsnaayttygcnacnacngayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarytngargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnytngarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:179](编码在c5具有rcad取代的gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列的核苷酸序列)；atggargcnaarccnacngaraayaaygargayttyaayathgtngcngtngcnwsnaayttygcnacnacngayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:181](编码在c5具有rcad取代的gaussiaprincepsgs萤光素酶的全长序列的核苷酸序列)；atgggngtnaarytnathttygcngtnytntgygtngcngcngcncargcngcnacnathaaygaraayttygargayathgaygtngtngcnathggnggnwsnttygcnytngaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaym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nytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:469](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttyacnytngtnttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnatgathaargcngayathgcngayacngaymgngcnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngarmgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:471](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的核苷酸序列)；atggayatgaargtnathttygcnytnathttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaarwsngayathgcngayacngaymgngtnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:473](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttygcnytngtnttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaaracngayathgcngayacngaymgngcnmgnwsnttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:475](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的核苷酸序列)；atggayathaargtngtnttygcnytngtnttywsngcnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathgaygtngtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggargtnathaaracngayathgcngayacngaymgngcnmgnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyaayacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:477](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的核苷酸序列)，或者atggayatgmgngtnathttygcnytngtnttywsnwsnytngtncargcnaarwsnacngarttygayccnaayathaayathgtnggnytngarggnaarttyggnathacnaayytngaracngayytnttyacnathtgggaracnatggaygtnathaarwsngayathacngayacngaymgngtnwsnaayttygtngcnacngaracngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccnggnmgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:479](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的全长长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的核苷酸序列)或其补体；(d)由与seqidno:173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477或479中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成；或者(e)由与seqidno:173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477或479中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成。在其他实施方式中，根据式x的多肽包含选自下列的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)选自下列的氨基酸序列：dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:482](在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:484](在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:486](在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:488](在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:490](在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsgs萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:492](在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:494](在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:496](在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrcadyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:498](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:500](在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:502](在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:504](在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；ntdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:506](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；nndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:508](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:510](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:512](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:514](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:516](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:518](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:520](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:522](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；以及etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:524](在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:526](在c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:528](在c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:530](在c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:532](在c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:534](在c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsgs萤光素酶)dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:536](在c6具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:538](在c6具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:540](在c6具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvhcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:542](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:544](在c6具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:546](在c6具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:548](在c6具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；ntdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:550](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；nndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:552](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:554](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:556](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:558](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:560](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:562](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:564](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:566](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:568](在c6具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:570](在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:572](在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:574](在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:576](在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:578](在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsgs萤光素酶)dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:580](在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:582](在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:584](在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:586](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:588](在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:590](在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:592](在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；ntdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:594](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；nndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:596](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:598](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:600](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:602](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:604](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:606](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:608](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:610](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:612](在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:614](在c5及c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:616](在c5及c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:618](在c5及c6具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdrcadcttgclkglanvqcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:620](在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvd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光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:670](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:672](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrcadyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdlcedcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:674](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:676](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:678](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:680](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；ntdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrctdcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:682](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；nndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:684](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:686](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:688](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:690](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:692](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:694](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:696](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:698](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；以及etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:700](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:702](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:704](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:706](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:708](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrchtyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:710](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsgs萤光素酶)dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:712](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:714](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:716](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrchsyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:718](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:720](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:722](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:724](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；ntdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:726](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；nndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:728](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:730](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:732](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:734](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:736](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:738](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:740](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcntgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:742](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:744](在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:746](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggdkdel[seqidno:748](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeieanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:750](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkeleanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepleqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:752](在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶)；dldadrgklpgkklplevlkemeanarkagctrgcliclshikctpkmkkfipgrcadyegdkesaqggigeaivdipeipgfkdlepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpqrcatfaskiqgqvdkikgaggd[seqidno:754](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsgs萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:756](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:758](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevpvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrcadyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:760](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；dvdanrgghgghpgkkmpkevlmemeanakragchrgclvclshikctaqmqkfipgrcadyagdkdsaqggiaggaivdipeiagfkemkpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:762](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:764](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:766](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；nsdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:768](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；ntdsnrgkmpgkklplavliemeanafkagctrgcliclskikctakmkkyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipdisgfkemgpmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqsevhnikglagdr[seqidno:770](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶)；nndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:772](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:774](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:776](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:778](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:780](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:782](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:784](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcadcntgclkglanvkcsdllkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:786](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)；etdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrcadyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcadcttgclkglanvkcsdllkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:788](在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)；或者(b)与seqidno:482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，780，782，784，786或788中的任何一个所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成；或者(c)由下列任何一个所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列：gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:481](编码在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngayaargaygarytn[seqidno:483](编码在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarathgargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:485](编码在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarytngargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnytngarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:487](编码在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:489](编码在c5具有rcad取代的细胞内gaussiaprincepsgs萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngcnytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:491](编码在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:493](编码在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnccngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaargarccnatggaycarttyathgcncargtngayytntgygtngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:495](编码在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytnatggaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytngtntgyytnwsncayathaartgyacngcncaratgcaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygcnggngayaargaywsngcncarggnggnathgcnggnggngcnathgtngayathccngarathgcnggnttyaargaratgaarccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygargaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtncaytgywsngayytnytnaaraartggytnccnwsnmgntgyaaracnttygcnwsnaarathcarwsncargtngayacnathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:497](编码在c5具有rcad取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的核苷酸序列)；aaywsngaygcngaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:499](编码在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶的核苷酸序列)；aaywsngaygcngaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcarwsngargtngayaayathaarggnytngcnggngaymgn[seqidno:501](编码在c5具有rcad取代的细胞内太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶的核苷酸序列)；aaywsngaygcngaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngargtnytnathgaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargarytnggnccnatggarcarttyathgcncargtngayytntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngcnytnytnaar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具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:737](编码在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:739](编码在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyaayacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:741](编码在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgycaygaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccnggnmgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:743](编码在c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:745](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolume萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngayaargaygarytn[seqidno:747](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarathgargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:749](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变1萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargarytngargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnytngarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:751](编码在c5具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprinceps突变2萤光素酶的核苷酸序列)；gayytngaygcngaymgnggnaarytnccnggnaaraarytnccnytngargtnytnaargaratggargcnaaygcnmgnaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnccnaaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargarwsngcncarggnggnathggngargcnathgtngayathccngarathccnggnttyaargayytngarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccncarmgntgygcnacnttygcnwsnaarathcarggncargtngayaarathaarggngcnggnggngay[seqidno:753](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内gaussiaprincepsgs萤光素酶的核苷酸序列)；gaygtngaygcnaaymgnggnggncayggnggncayccnggnaaraaratgccnaargargtnytngtngaratggargcnaaygcnaarmgngcnggntgycaymgnggntgyytnathtgyytnwsncayathaartgyacnaaraaratgaaraarttyathccnggnmgntgygcngaytaygarggngayaargaywsngcncarggnggnathggngargarathgtngayatgccngarathccnggnttyaargayaar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有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:775](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:777](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngarmgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:779](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:781](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:783](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)45萤光素酶的核苷酸序列)；garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggarccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyaayacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccngaymgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:785](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶的核苷酸序列)；或者garacngaygcnaaymgnggnaaratgccnggnaaraarytnccnytngcngtnathatggaratggargcnaaygcnttyaargcnggntgyacnmgnggntgyytnathtgyytnwsnaarathaartgyacngcnaaratgaargtntayathccnggnmgntgygcngaytayggnggngayaaraaracnggncargcnggnathgtnggngcnathgtngayathccngarathwsnggnttyaargaratggcnccnatggarcarttyathgcncargtngaymgntgygcngaytgyacnacnggntgyytnaarggnytngcnaaygtnaartgywsngayytnytnaaraartggytnccnggnmgntgygcnwsnttygcngayaarathcaraargargtncayaayathaarggnatggcnggngaymgn[seqidno:787](编码在c5及c6具有rcad取代及在c9具有kcsd取代的细胞内长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的核苷酸序列)，或其补体；(d)由与seqidno:481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成；或者(e)由与seqidno:481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787中的任何一个，或其补体所示的序列在至少中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列，其中氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成。在一些实施方式中，式x中的x1是l或其修饰的形式。在一些实施方式中，x43不是d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。在一些实施方式中，包含根据式x的氨基酸序列的多肽可任选地包含将多肽分泌到细胞外位置的信号序列和分泌-增强序列中的任何一种或更多。在一些实施方式中，包含根据式x的氨基酸序列的多肽具有任何一种或更多选自下列的活性：增强的发光，更强闪光信号强度，增强的辉光信号强度，增强的辉光信号稳定性及增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，用于相比具有1，2或3或更少由式xi表示的氨基酸序列的参照萤光素酶多肽的酶操作。在相关的方面，本发明提供分离的，合成，重组体或纯化的核酸分子，其包含以上广泛地描述的编码根据式viii的多肽的氨基酸序列的核苷酸序列，由其组成或基本上由其组成。在一些实施方式中，核酸分子包含选自下列的核苷酸序列，由其组成或基本上由其组成：(a)编码选自下列中的任何一个的氨基酸序列的核苷酸序列：174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，780，782，784，786或788；(b)选自seqidno:173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477，479，481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787中的任何一个的核苷酸序列；(c)与seqidno:173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477，479，481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列，其中由核苷酸序列编码的氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成；或者(c)与seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79或81中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列，其中由核苷酸序列编码的氨基酸序列包含对应于式x的b1c5x18x19，x37c6x38x39或x41c9σx42的至少一种亚序列，其中个体亚序列由以上定义的式xi表示的氨基酸序列组成。在一些实施方式中，以上广泛地描述的由核酸分子编码的多肽具有任何一种或更多选自下列的活性：增强的发光，更强闪光信号强度，增强的辉光信号强度，增强的辉光信号稳定性及增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，用于相比具有1，2或3或更少由式xi表示的氨基酸序列的参照萤光素酶多肽的酶操作。在一些实施方式中，核酸分子还包含编码信号肽的核苷酸序列，其代表性的例选自：(a)编码选自seqidno:84，86，88，90，92，94，96，98，100，102或104的氨基酸序列的核苷酸序列；(b)seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的核苷酸序列；(c)与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列；或者(d)与seqidno:83，85，87，89，91，93，95，97，99，101或103中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列。在一些实施方式中，核酸分子还包含编码分泌-增强序列的核苷酸序列，其代表性的例选自：(a)编码seqidno:106，107，108，110，112，114，116，118，120，122，124，126，128，130或132中的任何一个所示的氨基酸序列的核苷酸序列；或(b)seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的核苷酸序列；(b)与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列同一性的核苷酸序列；或者(c)与seqidno:105，107，109，111，113，115，117，119，121，123，125，127，129或131中的任何一个，或其补体所示的序列在至少低，中或高严格度条件下杂交的核苷酸序列。在另一方面，本发明提供多肽，其适宜地处于分离的，合成，重组体或纯化的形式，包含具有萤光素酶活性的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成，其中对应于挠足虫萤光素酶氨基酸序列的氨基酸序列包含以下最佳温度范围-升高氨基酸或基本上由以下最佳温度范围-升高氨基酸组成：l，或其修饰的形式，在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置；及，碱性氨基酸残基，其在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序。在一些实施方式中，多肽包含(1)l，或其修饰的形式，在第85位(相对于图1中显示的共有编号)。在一些实施方式中，多肽包含(2)l，或其修饰的形式，在第98位(相对于图1中显示的共有编号)。适宜地，多肽包含(3)l，或其修饰的形式，在第85和98位(相对于图1中显示的共有编号)。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6和c9的至少一个位置包含(4)bc基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(5)bc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(6)bc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(7)bc基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(8)bcω基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(9)bcω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(10)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(11)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(12)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(13)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(14)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(15)bcω基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(16)bcωω基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(17)bcωω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(18)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(19)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(20)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(21)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(22)bcωω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(23)bcωω基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的至少一个位置包含(24)bcωd基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(25)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(26)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(27)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(28)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(29)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(30)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c10的位置包含(31)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(32)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c10的位置包含(33)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c9和c10的位置包含(34)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(35)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c10的位置包含(36)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c9和c10的位置包含(37)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6，c9和c10的位置包含(38)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的位置包含(39)bcωd基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的至少一个位置包含(40)ebc基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(41)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(42)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(43)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(44)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(45)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(46)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c10的位置包含(47)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(48)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c10的位置包含(49)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c9和c10的位置包含(50)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(51)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c10的位置包含(52)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c9和c10的位置包含(53)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6，c9和c10的位置包含(54)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的位置包含(55)ebc基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6，c9和c10的至少一个位置包含(56)gbc基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(57)gbc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(58)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(59)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(60)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c10的位置包含(61)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c9和c10的位置包含(62)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6，c9和c10的位置包含(63)gbc基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(64)bca基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(65)bca基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(66)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(67)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(68)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(69)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(70)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(71)bca基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(72)bcaω基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(73)bcaω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(74)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(75)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(76)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(77)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(78)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(79)bcaω基序。在一些实施方式中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(80)xbc基序，其中x不是d或p，及选自，例如，r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。适宜地，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(4)～(7)之任一个中定义的基序。在其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(8)～(15)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(16)～(23)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(24)～(39)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(40)～(55)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(56)～(63)之任一个中定义的基序。在其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(64)～(71)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(72)～(79)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(80)中定义的基序。在一些实施方式中，多肽还包含参照挠足虫萤光素酶氨基酸序列的全体或部分缺失，其中氨基酸序列跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游，适宜地约残基84，83，82，81，80，79，78，77，76，75，74，73，72，71(相对于图1中显示的共有编号)的上游。在一些实施方式中，挠足虫氨基酸序列包含式i定义的氨基酸序列或与由式i表示的氨基酸序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的序列，由其组成或基本上由其组成。本发明的再一方面提供制备具有改善的光-发射特征(例如,改善的发光,改善的闪光信号强度,改善的辉光信号强度,改善的辉光信号稳定性及改善的有效温度范围,包括萤光素酶功能的升高的最佳温度范围)的萤光素酶多肽的方法。这些方法通常包括制备与参照萤光素酶多肽序列，适宜地挠足虫萤光素酶多肽序列差至少一个选自下列的修饰的氨基酸序列：(i)在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基用l或其修饰的形式取代；(ii)参照萤光素酶多肽的氨基酸序列的全体或部分缺失，其中氨基酸序列跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游，适宜地约残基84，83，82，81，80，79，78，77，76，75，74，73，72，71(相对于图1中显示的共有编号)的上游；(iii)取代与参照萤光素酶多肽的至少一个保守的半胱氨酸相邻的一个或更多氨基酸残基以产生由式xi表示的氨基酸亚序列：bcωd(xi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5，c6和c9；ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；以及d是天冬氨酸或其修饰的形式；(iv)与参照萤光素酶多肽的保守的半胱氨酸c10相邻的一个或更多氨基酸残基取代以产生由序列xrcas表示的氨基酸亚序列，其中x是适宜地其他相比d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式；(v)与参照萤光素酶多肽的选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸相邻的一个或更多氨基酸残基的取代，其中在个别保守的半胱氨酸的取代产生由式xx表示的氨基酸序列：bc(xx)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5，c6，c9和c10，或在特定实施方式中选自c6和c9，其中在个别保守的半胱氨酸的取代，在特定实施方式中，产生由式xxi表示的氨基酸序列：bcω(xxi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5，c6，c9和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中由式xxi表示的氨基酸序列适宜地选自bca或bce，其中在个别保守的半胱氨酸的取代，在特定实施方式中，产生由式v表示的氨基酸序列：bcωω(v)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5，c6c9和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中由式v表示的氨基酸序列选自，例如，bcad(例如,rcad,kcad)，bcat(例如,rcat,kcat)，bced(例如,rced,kced)，bcsd(例如,rcsd,kcsd)，bctd(例如,rctd,kctd)和bcas(例如,rcas,kcas)，其中与保守的半胱氨酸c5或c6相邻的取代产生例如选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd的氨基酸序列，其中与c9相邻的取代产生例如由kcsd组成的氨基酸序列；其中与选自c6和c10的一个或二个保守的半胱氨酸相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxiii表示的氨基酸序列：ebc(xxiii)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c6和c9，其中与保守的半胱氨酸c10相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxiv表示的氨基酸序列：gbc(xxiv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及c是保守的半胱氨酸c10，或其修饰的形式，其中与选自c5和c10的一个或二个保守的半胱氨酸相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxv表示的氨基酸序列：gbcω(xxv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中gbcω，例如，由gbca表示，其中与选自c5和c10的一个或二个保守的半胱氨酸相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxvi表示的氨基酸序列：gbcωω(xxvi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中gbcωω例如由gbcat表示。在有利的实施方式中，根据本文定义的(i)～(v)之任一个修饰升高最佳温度范围，包括萤光素酶功能的最佳温度及也在本文称为“最佳温度范围-升高修饰”或“最佳温度-升高修饰”。适宜地，所述方法包含修饰参照多肽，其中修饰导致制备包含以上(i)～(v)定义的至少1，2，3，4，5个修饰的修饰的萤光素酶。修饰的例证性组合列于下表a。表a在一些实施方式中，挠足虫氨基酸序列用作修饰的基础和适宜地包含式i中定义的氨基酸序列或与由式i表示的氨基酸序列共享至少70％(及至少71％～至少99％和其间的全部整数百分率)序列相似性或序列同一性的序列，由其组成或基本上由其组成。在特定实施方式中，至少一个修饰选自：l，或其修饰的形式，在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置；，碱性氨基酸残基，其在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序；以及参照挠足虫萤光素酶氨基酸序列的全体或部分缺失，其中氨基酸序列跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游，适宜地约残基84，83，82，81，80，79，78，77，76，75，74，73，72，71(相对于图1中显示的共有编号)的上游。在这些实施方式中的一些中，多肽包含(1)l，或其修饰的形式，在第85位(相对于图1中显示的共有编号)。在一些实施方式中，多肽包含(2)l，或其修饰的形式，在第98位(相对于图1中显示的共有编号)。适宜地，多肽包含(3)l，或其修饰的形式，在第85和98位(相对于图1中显示的共有编号)。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6和c9的至少一个位置包含(4)bc基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(5)bc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(6)bc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(7)bc基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(8)bcω基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(9)bcω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(10)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(11)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(12)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(13)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(14)bcω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(15)bcω基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(16)bcωω基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(17)bcωω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(18)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(19)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(20)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(21)bcωω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(22)bcωω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(23)bcωω基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的至少一个位置包含(24)bcωd基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(25)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(26)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(27)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(28)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(29)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(30)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c10的位置包含(31)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(32)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c10的位置包含(33)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c9和c10的位置包含(34)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(35)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c10的位置包含(36)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c9和c10的位置包含(37)bcωd基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6，c9和c10的位置包含(38)bcωd基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的位置包含(39)bcωd基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的至少一个位置包含(40)ebc基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(41)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(42)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(43)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(44)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(45)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(46)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c10的位置包含(47)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(48)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c10的位置包含(49)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c9和c10的位置包含(50)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(51)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c10的位置包含(52)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c9和c10的位置包含(53)ebc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6，c9和c10的位置包含(54)ebc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的位置包含(55)ebc基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6，c9和c10的至少一个位置包含(56)gbc基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(57)gbc基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(58)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(59)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(60)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c10的位置包含(61)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c9和c10的位置包含(62)gbc基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6，c9和c10的位置包含(63)gbc基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(64)bca基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(65)bca基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(66)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(67)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(68)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(69)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(70)bca基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(71)bca基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的至少一个位置包含(72)bcaω基序。在此类型的代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含(73)bcaω基序。在其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含(74)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含(75)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含(76)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5和c9的位置包含(77)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含(78)bcaω基序。在仍其他代表性的例中，多肽在对应于各保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含(79)bcaω基序。在这些实施方式中的一些中，多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含(80)xbc基序，其中x不是d或p，及选自，例如，r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。在这些实施方式中的一些中，多肽包含(81)参照挠足虫萤光素酶氨基酸序列的全体或部分缺失，其中氨基酸序列跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游，适宜地约残基84，83，82，81，80，79，78，77，76，75，74，73，72，71(相对于图1中显示的共有编号)的上游。适宜地，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(4)～(7)之任一个中定义的基序。在其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(8)～(15)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(16)～(23)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(24)～(39)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(40)～(55)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(56)～(63)之任一个中定义的基序。在其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(64)～(71)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(72)～(79)之任一个中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(80)中定义的基序。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸和(81)中定义的缺失。在其他实施方式中，多肽包含(4)～(8)之任一个中定义的基序和(81)中定义的缺失。在仍其他实施方式中，多肽包含(1)～(3)中定义的至少一个氨基酸，(4)～(8)之任一个中定义的基序和(81)中定义的缺失。在相关的方面，本发明提供制备具有升高的最佳温度范围的修饰的挠足虫萤光素酶多肽的方法，包括萤光素酶功能的升高的最佳温度。这些方法通常包括制备修饰的挠足虫萤光素酶多肽使得其包含与参照挠足虫萤光素酶多肽差至少一个氨基酸序列修饰的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成，其中基于其相对于参照挠足虫萤光素酶多肽升高萤光素酶功能的最佳温度范围选择至少一个氨基酸序列修饰。适宜地，至少一个有效温度范围-升高修饰选自：以下定义的修饰(i)～(v)。在此类型的例证性例中，参照多肽修饰为包括根据本文定义的(i)～(xi)的至少1，2，3，4，5个修饰，及例如在表a中例证。在一些实施方式中，至少一个修饰升高最佳温度范围，包括萤光素酶功能的最佳温度至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30℃。在此类型的例证性例中，至少一个修饰升高萤光素酶功能的最佳温度范围。适宜地，至少一个修饰升高萤光素酶功能的最佳温度到20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39或40℃。在特定实施方式中，至少一个修饰导致增强的于37℃的萤光素酶活性。在其他特定实施方式中，至少一个修饰导致增强的于室温的萤光素酶活性(例如,22℃)。在一些实施方式中，所述方法包含修饰参照多肽从而其在第85位(相对于图1中显示的共有编号)包含l或其修饰的形式。适宜地，所述方法还包含测定如此制备的多肽活性(例如,闪光信号强度的强度,辉光信号强度的强度,辉光信号稳定性和有效温度范围,包括升高的萤光素酶功能的最佳温度范围)。在一些实施方式中，所述方法还包含比较多肽活性与参照萤光素酶多肽活性。非限制性参照萤光素酶多肽序列可选自：[seqidno:2](gaussiaprincepsprolume萤光素酶的全长序列)；[seqidno:4](gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶的全长序列)；[seqidno:6](gaussiaprinceps突变1萤光素酶的全长序列)；[seqidno:8](gaussiaprinceps突变2萤光素酶的全长序列)；[seqidno:10](gaussiaprincepsgs萤光素酶的全长序列)；[seqidno:166](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶的全长序列)；[seqidno:168](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶的全长序列)；[seqidno:170](长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶的全长序列)；[seqidno:172](长腹水蚤(metridialonga)39萤光素酶的全长序列)；mgvklifavlcvaaaqaatinenfedidvvaiggsfaldvdanrgghgghpgkkmpkevlvemeanakragchrgcliclshikctkkmkkfipgrchsyegdkdsaqggigeeivdmpeipgfkdkepmdqfiaqvdlcvdcttgclkglanvhcsallkkwlpsrcktfaskiqsqvdtikglagdr[seqidno:790](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶的全长序列,也在本文称为mp2a)；mmeiqvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:792](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶的全长序列,也在本文称为mp1v1)；mmeikvlfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:794](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶的全长序列,也在本文称为mp1v2)；mmevkvvfalicfalvqanptenkddidivgvegkfgttdletdlftivedmnvisrdtnlansdadrgkmpgkklplevliemeanarkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkelgpmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsallkkwlpdrcasfadkiqsevdnikglagdr[seqidno:796](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶的全长序列,也在本文称为mp1v3)；mdikfifalvcialvqanptvnndvnrgkmpgkklplevliemeanafkagctrgcliclskikctakmkqyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdlcadcttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkeahnikglagdr[seqidno:798](长腹水蚤(metridialonga)7萤光素酶的全长序列,也在本文称为ml7)；mktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:800](长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶的全长序列,也在本文称为mlgs)；mdikvvftlvfsalvqaqktdiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:802](长腹水蚤(metridialonga)164m3萤光素酶的全长序列,也在本文称为ml164m3)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:804](长腹水蚤(metridialonga)164v1萤光素酶的全长序列,也在本文称为ml164v1)；mdikvvftlvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmevmikadiadtdrasnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvercascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:806](长腹水蚤(metridialonga)164v2萤光素酶的全长序列,也在本文称为ml164v2)；mdmkvifalifsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviksdiadtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdrctscttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:808](长腹水蚤(metridialonga)16萤光素酶的全长序列,也在本文称为ml16)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidivglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarsfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascttgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:810](长腹水蚤(metridialonga)45荧光素酶的全长序列,也在本文称为ml45)；mdikvvfalvfsalvqakstefdpnidvvglegkfgitnletdlftiwetmeviktdiadtdrarnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemepmeqfiaqvdrcascntgclkglanvkcsellkkwlpdrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:812](长腹水蚤(metridialonga)52荧光素酶的全长序列,也在本文称为ml52)及mdmrvifalvfsslvqakstefdpninivglegkfgitnletdlftiwetmdviksditdtdrvsnfvatetdanrgkmpgkklplavimemeanafkagctrgcliclskikctakmkvyipgrchdyggdkktgqagivgaivdipeisgfkemapmeqfiaqvdlcatcttgclkglanvkcsellkkwlpgrcasfadkiqkevhnikgmagdr[seqidno:814](长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶的全长序列,也在本文称为mlal)。在相关的方面，本发明提供本发明的另一相关的方面提供包含与调控序列可操作地连接的以上广泛地描述的核酸分子的构建体。在仍另一方面，本发明提供含有以上广泛地描述的构建体的宿主细胞。在再一方面，本发明提供评价与细胞关联的报告子酶的活性的方法，其中报告子酶包含以上广泛地描述的多肽，由其组成或基本上由其组成，其具有改善的光-发射特征(例如,改善的发光,改善的闪光信号强度,改善的辉光信号强度,改善的辉光信号稳定性及改善的有效温度范围,包括萤光素酶功能的升高的最佳温度范围)。这些方法通常包括：(a)使细胞与腔肠素或其类似物或衍生物接触(例如,benzy-腔肠素；双脱氧腔肠素；腔肠素,h-腔肠素,f-腔肠素,cl-腔肠素,n-腔肠素,cp-腔肠素,ch-腔肠素,hch-腔肠素,fch-腔肠素,e-腔肠素，ef-腔肠素，ech-腔肠素，hcp-腔肠素，等)；及(b)检测自腔肠素或其类似物或衍生物产生的信号以评价报告子酶的活性。在一些实施方式中，检测在改善的有效温度范围，包括萤光素酶功能的升高的最佳温度范围之内实施。在一些实施方式中，细胞含有以上广泛地描述的核酸分子。在仍另一方面，本发明提供试剂盒包含：包含以上广泛地描述的多肽，或以上广泛地描述的核酸分子，或以上广泛地描述的构建体，或以上广泛地描述的细胞的容器。在一些实施方式中，试剂盒还包含含有适宜地冷冻干燥的荧光素的容器。【附图说明】图1是显示以下推定地全长萤光素酶氨基酸序列的序列比对结果的示意表示：[seqidno:2](gaussiaprincepsprolume萤光素酶)；[seqidno:4](gaussiaprincepsprolumekdel萤光素酶)；[seqidno:6](gaussiaprinceps突变1萤光素酶)；[seqidno:8](gaussiaprinceps突变2萤光素酶)；[seqidno:10](gaussiaprincepsgs萤光素酶)；[seqidno:166](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv1萤光素酶)；[seqidno:168](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2bv2萤光素酶)；[seqidno:170](长腹水蚤(metridialonga)22萤光素酶)；[seqidno:172](长腹水蚤属(metridialonga)39萤光素酶)；[seqidno:790](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)2a萤光素酶)；[seqidno:792](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v1萤光素酶)；[seqidno:794](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v2萤光素酶)；[seqidno:796](太平洋长腹水蚤(metridiapacifica)1v3萤光素酶)；[seqidno:798](长腹水蚤属(metridialonga)7萤光素酶)；[seqidno:800](长腹水蚤(metridialonga)gs萤光素酶)；[seqidno:802](长腹水蚤(metridialonga)164m3荧光素酶)；[seqidno:804](长腹水蚤(metridialonga)164v1荧光素酶)；[seqidno:806](长腹水蚤属(metridialonga)164v2萤光素酶)；[seqidno:808](萤光素酶长腹水蚤(metridialonga)16荧光素酶)；[seqidno:810](长腹水蚤(metridialonga)45荧光素酶)；[seqidno:812](长腹水蚤(metridialonga)52萤光素酶)和[seqidno:814](长腹水蚤(metridialonga)al萤光素酶)。图2是显示来自冰箱-rt-炉的裂解物的辉光f&g的图形表示(相对于对照rt板)。图3是显示自冰箱至rt测定缓冲剂注射用机器的裂解物的闪光dla板的图形表示。图4是显示于21℃进入机器的辉光f&g的图形表示(结束温度增加0.5℃)。图5是显示自冰箱-rt-炉的条件培养基的辉光f&g的图形表示(相对于对照rt板)。图6是显示跨一系列温度的辉光f&g萤光素酶数据的图形表示。【发明详述】【1.定义】除非另外定义，本文所用的全部技术和科学术语具有由本发明所属于的本领域普通技术人员通常明白的相同的含义。尽管类似或相当于本文所述的那些的任何方法和材料可用于实践或本发明的测试，描述优选的方法和材料。为本发明的目的，接下来定义以下术语。物品“a”和“an”在本文指称一个或多于一个(即至少一个)语法对象。例如，“元件”指一个元件或多于一个元件。由“约”是指相对参照量，水平，值，数，频度，百分率，尺度，尺寸，量，重量，位置或长度改变多至15，14，13，12，11，10，9，8，7，6，5，4，3，2或1％的量，水平，值，数，频度，百分率，尺度，尺寸，量，重量，位置或长度。术语“生物学活性片段”，如应用于参照的片段或全长多核苷酸或多肽序列，指称具有参照序列的至少约0.1，0.5，1，2，5，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，96，97，98，99％的活性的片段。包括在本发明的范围之内的是至少约40，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，105，110，115，120，125，130，135，140，145，150，155，160，165，170，175，180，185，190，195，200个残基长度或120，150，180，210，240，270，300，330，360390，420，450，480，510，540，570，600个核苷酸长度的生物学活性片段，该片段包含或编码参照多核苷酸或多肽的活性。代表性的生物学活性片段通常参与相互作用，例如，分子内或分子间相互作用。例如，本发明的有生物学活性的部分的萤光素酶多肽(例如,肽或多肽)包括包含与本发明的萤光素酶多肽的氨基酸序列具有足够的相似性或同一性或源于本发明的萤光素酶多肽的氨基酸序列的氨基酸序列及包含选自酶的发光，闪光信号，辉光信号，辉光信号稳定性及增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围的至少一种活性的多肽。如本文所用，术语“顺式作用序列”或“顺式-调控区”或类似术语是指源于遗传序列的表达，至少部分，由核苷酸序列调控的可表达的遗传序列的任何核苷酸序列。本领域技术人员会明白顺式-调控区可能活化，沉默，增强，阻遏或另外改变任何结构基因序列的表达水平和/或细胞-型-特异性和/或发育特异性。如本文所用，“嵌合构建体”指称具有异源核酸元件的多核苷酸。嵌合构建体包括“表达盒”或“表达构建体”，指称能指导目标序列或基因(例如,萤光素酶编码序列)的表达的组件。表达盒通常包括控制元件诸如可操作地连接到(如此指导其转录)本发明的合成多核苷酸的启动子，及也常常包括多聚腺苷酸化序列。在本发明的特定实施方式之内，嵌合构建体可含在载体之内。除了嵌合构建体组分之外，载体可包括，一种或更多可选择的标记物，信号，其允许载体作为单链dna存在(例如,m13复制原点)，至少一个多克隆位点，及“哺乳动物”复制原点(例如,sv40或腺病毒复制原点)。“编码序列”是指贡献于基因的多肽产物编码的任何核酸序列。相反，术语“非-编码序列”指称不贡献于基因多肽产物编码的任何核酸序列。术语“互补”和“互补性”指称由碱基-配对规则相关的多核苷酸(即,核苷酸序列)。例如，序列“a-g-t”，互补于序列“t-c-a”。互补性可为“部分”，其中仅一些核酸碱基根据碱基配对规则匹配。或者，可为“完全”或“全部”互补性核酸之间。核酸链之间互补性程度对核酸链之间杂交的效率和强度具有显著效应。贯穿此说明书，除非情景需要另外，词汇“包含(comprises)”，“包含(comprise)”和“包含(comprising)”会理解为暗示包括陈述的步骤或步骤的元件或组或元件但不排除任何其他步骤或元件或步骤或元件的组。由此，使用术语“包含(comprising)”等指示所列的元件是需要或强制性的，但其他元件是任选的和可或可不存在。由“由…组成(consistingof)”是指包括，及限于，无论任何跟随短语“由…组成(consistingof)”。由此，短语“由…组成(consistingof)”指示所列的元件是需要或强制性的，及无其他元件可存在。由“基本上由…组成(consistingessentiallyof)”是指包括在短语之后列的任何元件，及限于不干扰或贡献于对于所列的元件的公开中特定的活性或作用的其他元件。由此，短语“基本上由…组成(consistingessentiallyof)”指示所列的元件是需要或强制性的，但其他元件是任选的和可或可不存在依赖于是否它们影响所列的元件的活性或作用。“对应于”或“对应于”是指与参照氨基酸序列显示实质性序列相似性或同一性的氨基酸序列。一般对应于参照氨基酸序列的氨基酸序列会与至少部分参照氨基酸序列显示至少约50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，97，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99％或甚至达100％序列相似性或同一性。“基因”是指占据染色体上的特定座位及由转录和/或翻译调控序列和/或编码区和/或非-翻译的序列(即,内含子,5’及3’未翻译的序列)组成的遗传单元。术语“宿主细胞”包括可为或已为本发明的任何重组体构建体或分离的多核苷酸的受者的个体细胞或细胞培养物。宿主细胞包括单宿主细胞的后代，及后代可由于天然的，意外或有意的突变和/或变化而不必然是与原亲本细胞完全同一(在形态或总共dna补体上)。宿主细胞包括用本发明的重组体构建体或多核苷酸体内或体外转染的或感染的细胞。包含本发明的重组体构建体的宿主细胞是重组宿主细胞。“杂交”在本文所用表示互补核苷酸序列的配对以产生dna-dna杂交体或dna-rna杂交体。互补碱基序列是由碱基-配对规则相关的那些序列。在dna中，a配对t和c配对g。在rna中，u配对a和c配对g。在这点上，本文所用的术语“匹配”和“错配”指称互补核酸链中配对的核苷酸的杂交潜力。匹配的核苷酸有效杂交，诸如上述典型a-t和g-c碱基对。错配是不有效杂交的核苷酸的其他组合。由“分离的”是指基本上或基本上游离于在其天然状态正常伴随其的组分的物质。例如，“分离的多核苷酸”，如本文所用，指称已自在天然存在的状态侧接其的序列纯化的多核苷酸，例如，已从与片段正常相邻的序列除去的dna片段。或者，“分离的肽”或“分离的多肽”等，如本文所用，指称多肽分子自其天然的细胞环境，及自与其他细胞组分的关联体外分离和/或纯化，即，其未与体内物质关联。类似地，“分离的”或“纯化的”蛋白性分子(例如,肽,多肽,蛋白等)是基本上无细胞物质或自蛋白性分子所来源的细胞或组织源的其他混杂分子，或当化学合成时基本上无化学前体或其他化学物质。“基本上游离的”是指本发明的萤光素酶多肽的制备物是至少10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，91，92，93，94，95，96，97，98或99％纯。在优选的实施方式中，萤光素酶多肽制备物具有少于约30，25，20，15，10，9，8，7，6，5，4，3，2或1％(由干重)的非-萤光素酶多肽(也在本文称为"混杂分子")，或化学前体或非-萤光素酶化学品。当萤光素酶多肽重组产生时，也期望地基本上无培养基，即，培养基表示少于萤光素酶制备物的约20，15，10，5，4，3，2，1％的体积。本发明包括至少0.01，0.1，1.0和10mg干重的分离的或纯化的制备物。术语“发光”指称萤光素酶多肽在适当的条件下，例如，在适合的底物诸如腔肠素存在的光输出。光输出可测量为发光反应起始后光输出的瞬时或接近-瞬时量度(一般以秒,其有时被称为“t＝0”发光或“闪光”)，所述反应可在腔肠素底物添加后起始。发光反应在各种实施方式中在含有例如自原核生物或真核生物表达系统中的细胞的裂解物的溶液中实施；在其他实施方式中，表达在体外系统发生或萤光素酶蛋白分泌到细胞外培养基，使得，在此后者情况中，其对于产生裂解物不是必需的。在一些实施方式中，反应通过注射适当的物质(例如,腔肠素)进含有萤光素酶蛋白的反应室(例如,多-孔板诸如96-孔板的孔)来起始。反应室可设置为可例如，使用光度计或光电倍增管测量光输出的读取装置。光输出或发光也可经时测量，例如在相同的反应室中经分钟，小时，等测量。(有时被称为“辉光”)。光输出或发光可报道为经时平均值，信号衰变半衰期，经时信号和，或峰输出。增强的发光包括由可比较地获得的测量间适合的比较测定的增加的光输出或发光。如在本文公开，对挠足虫萤光素酶序列的一个或更多适合的氨基酸修饰产生具有增强的发光的修饰的萤光素酶多肽。自野生型或其他亲本挠足虫萤光素酶核苷酸序列的核苷酸序列的变化可通过导致氨基酸取代和/或通过增强蛋白表达贡献于增强的发光。增强的信号稳定性包括自萤光素酶的信号持续发光(“辉光”)增加多久，例如，如由时间进程中信号衰变半衰期测量。萤光素酶操作的增强的有效温度范围包括可实施发光测定而维持适合的信号强度的更广温度范围；即，信号强度无实质性温度-依赖性损失。例如，萤光素酶活性响应跨更广温度范围的温度波动(例如,室温以上或以下)显示最小或无实质的变化。增强的有效温度范围也包括修饰萤光素酶的温度范围从而其可在或约待实施的测定的旨在的温度实施的范围之内(例如,对于在活的哺乳动物内实施的体内测定在或约37℃或对于桌面测定在或约室温(rt；～22℃)或对于测定诸如在冰箱或冷室中实施的以便最小化样品和/或测定试剂中的必要的反应组分降解的免疫测定在或约4℃)。在此类型的有利的实施方式中，当在相同的反应条件下测量时，萤光素酶的温度范围(包括最佳温度)相比在修饰之前或对照或参照萤光素酶的其温度范围(或最佳温度)升高。精确的最佳温度可根据反应条件，诸如反应溶液改变，但萤光素酶的温度范围(包括最佳温度)的升高当在给出的缓冲剂条件下测量时对于本领域普通技术人员是显而易见的，诸如本文所述的那些。本文所用的术语“最佳温度范围”指称萤光素酶呈现其最佳温度的至少80％的信号强度的信号强度的温度范围。“升高的最佳温度范围”是指包含相比参照萤光素酶的最佳温度范围的上阈值温度更高上阈值温度的温度范围。术语“5’非-编码区”在本文在其最宽情景中新而包括源于可表达的基因的上游区的全部核苷酸序列，不是编码包含基因的多肽产物的氨基酸残基的那些序列，其中5’非-编码区赋予或活化或另外辅助，至少部分，基因表达。本文所用的术语“可操作地连接的”或“可操作地连接的”是指将结构基因放置在调控元件包括但不限于启动子的调控控制下，其然后控制基因的转录和任选地翻译。在异源启动子/结构基因组合的构建中，其通常优选将遗传序列或启动子放在与在其天然的设置中遗传序列或启动子和其控制的基因(即遗传序列或启动子所来源的基因)之间的距离大致相同的自基因转录起始位点的距离。如为本领域所知，此距离内的一些变异可无功能损失地调节。类似地，关于待放置在其控制下的异源基因的调控序列元件的优选的定位被定义为元件在其天然的设置中的定位；即元件所来源的基因。本文所用的术语“寡核苷酸”指称由经磷酸二酯键(或其相关的结构变体或合成类似物)连接的多个核苷酸残基(脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸,或其相关的结构变体或合成类似物)组成的聚合物。由此，而术语“寡核苷酸”一般指称核苷酸残基和它们之间的连接是天然存在的核苷酸聚合物，需知术语也在其范围之内包括各种类似物包括但不局限于肽核酸(pna)，氨基磷酸酯，硫代磷酸酯，膦酸甲酯，2-o-甲基核糖核酸，等。分子的确切的尺寸可依赖于特定应用改变。寡核苷酸是一般长度更短，通常约10～30个核苷酸残基，但术语可指称任何长度的分子，尽管术语“多核苷酸”或“核酸”一般用于大寡核苷酸。本文所用的术语“多核苷酸”或“核酸”指mrna，rna，crna，cdna或dna。术语一般指称至少10个碱基长度的核苷酸的聚合物形式，核糖核苷酸或脱氧核苷酸或任意核苷酸类型的修饰的形式。术语包括单和双链形式的dna。术语“多核苷酸变体”和“变体”等指称与参照多核苷酸序列显示实质性序列同一性的多核苷酸或在下文定义的严格条件下与参照序列杂交的多核苷酸。这些术语也包括通过添加，缺失或取代至少一个核苷酸而区别自参照多核苷酸的多核苷酸。因此，术语“多核苷酸变体”和“变体”包括已添加或删除一个或更多核苷酸，或用不同核苷酸取代的多核苷酸。在这点上，本领域熟知，可进行对参照多核苷酸的包括突变，添加，缺失和取代的特定改变，其中改变的多核苷酸保留参照多核苷酸的生物学功能或活性。术语“多核苷酸变体”和“变体”也包括天然存在的等位基因变体。“多肽”，“肽”，“蛋白”和“蛋白性分子”在本文互换使用以指称包含氨基酸残基聚合物或由氨基酸残基聚合物组成的分子及相同的变体和合成类似物。由此，这些术语应用于一个或更多氨基酸残基是合成非-天然存在的氨基酸的氨基酸聚合物，诸如相应天然存在的氨基酸的化学类似物，以及天然存在的氨基酸聚合物。此术语也在其范围内包括包含本发明的萤光素酶多肽的不同部分或部分(例如,多肽结构域,多肽链等)的2个或更多互补或相互作用多肽，其中个别互补多肽一起重建不同部分或部分的活性而形式功能萤光素酶多肽。为本领域技术人员所熟知，该互补多肽在蛋白互补测定中常规使用。术语“肽变体”和“多肽变体”等指称通过添加，缺失或取代至少一个氨基酸残基而区别自参照多肽的多肽。在特定实施方式中，多肽变体区别自参照多肽一个或更多可为保守性或非-保守性取代。在特定实施方式中，多肽变体包含保守性取代及，在这点上，本领域熟知一些氨基酸可无多肽活性性质变化地变化为具有广泛地类似性质的其他氨基酸。肽和多肽变体也包括一个或更多氨基酸已添加或删除的，或用不同氨基酸残基取代的多肽。“引物”是指当与dna链配对时，能在适合的聚合化剂的存在下起始引物延伸产物合成的寡核苷酸。引物优选是单链为在扩增中是最大效率但可替代性地是双链。引物必需是足够长以在聚合剂存在下引发延伸产物合成。引物长度依赖于许多因素，包括应用，采用温度，模板反应条件，其他试剂和引物源。例如，依赖于靶序列的复杂性，寡核苷酸引物一般含有15至35或更多核苷酸残基，尽管其可含有更少核苷酸残基。引物可为大的多核苷酸，诸如约200个核苷酸残基～几kbp或更大。引物可选择为“基本上互补”于被设计为与之杂交的模板序列及作为合成起始位点。“基本上互补”是指引物是足够互补以与靶多核苷酸杂交。优选地，引物与设计为与之杂交的模板不含有错配，但此不是必要的。例如，可将非-互补核苷酸残基附接于引物的5’端，引物序列其余部分互补于模板。或者，非-互补核苷酸残基或非-互补核苷酸残基的延伸物可散在于引物中，只要是引物序列和与之杂交的模板序列具有足够的互补性及由此形成用于引物的延伸产物合成的模板。“探针”指称与另一分子的特定序列或亚序列或其他部分结合的分子。除非另外指示，术语“探针”一般指称与另一多核苷酸结合的多核苷酸探针，常常被称为“靶多核苷酸”，通过互补碱基配对。探针可结合缺少与探针的完全序列互补性的靶多核苷酸，依赖于杂交条件的严格度。探针可直接或间接标记。本文所用的术语“重组多核苷酸”指称通过将核酸操作为天然中不正常发现的形式来体外形成的多核苷酸。例如，重组多核苷酸可为表达载体形式。一般而言，该表达载体包括与核苷酸序列可操作地连接的转录和翻译调控核酸。“重组多肽”是指通过使用重组技术，即，通过表达重组多核苷酸制造的多肽。由“调控元件”或“调控序列”是指对于可操作地连接的编码序列在特定宿主细胞中表达必需的核酸序列(例如,dna)。适宜于原核生物细胞的调控序列例如，包括启动子，及任选地顺式作用序列诸如操纵子序列和核糖体结合位点。适宜于真核生物细胞的控制序列包括启动子，多聚腺苷酸化信号，转录增强子，翻译增强子，调节mrna稳定性的前导序列或拖拽序列，以及使由转录的多核苷酸编码的产物靶向细胞之内的细胞内隔室或细胞外环境的靶向序列。本文所用的术语“序列同一性”指称序列在比较窗上逐个核苷酸或逐个氨基酸同一的程度。由此，“序列同一性百分率”通过比较在比较窗上2个最佳对齐的序列计算，测定两个序列中发生同一核酸碱基(例如,a,t,c,g,i,u)或同一氨基酸残基(例如,ala,pro,ser,thr,gly,val,leu,ile,phe,tyr，trp，lys，arg，his，asp，glu，asn，gln，cys和met)的位置数而产生匹配的位置数，匹配的位置除以比较窗(即,窗口大小)中位置总数，及结果乘以100而产生序列同一性百分率。本发明涵盖在本发明的方法和系统中使用全长萤光素酶多肽以及它们的生物学活性片段。一般而言，全长萤光素酶多肽的生物活性片段可参与相互作用，例如，分子内或分子间相互作用。分子间相互作用可为特异性结合相互作用或酶促相互作用(例如,相互作用可为瞬时的和共价键形成或断裂)。全长萤光素酶多肽的生物学活性片段包括包含足够类似于或源于(推定的)全长萤光素酶多肽的氨基酸序列的氨基酸序列的肽。一般而言，生物活性片段包含具有至少一种选自下列的活性的结构域或基序：发光，闪光信号，辉光信号，辉光信号稳定性和有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，闪光信号或辉光信号。全长萤光素酶多肽的生物学活性片段可为多肽，其长度例如，40，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，105，110，115，120，125，130，135，140，145，150，155，160，165，170，175，180，185，190，195，200或更多氨基酸残基。适宜地，生物学活性片段具有不少于其所来源的全长多肽的约1％，10％，25％，50％的活性。“相似性”指称如下表2和3中定义同一或构成保守性取代的氨基酸百分率数。相似性可通过使用序列比较程序诸如gap(deverauxetal.1984,nucleicacidsresearch12：387～395)测定。以此方式，与本文引用的那些类似或基本上不同长度的序列可通过将间隔插入比对，例如，由由gap使用的算法比较测定该间隔来比较。用来描述2个或更多多核苷酸或多肽之间的序列关系的术语包括“参照序列”，“比较窗”，“序列同一性”，“序列同一性百分率”和“实质性鉴定”。“参照序列”长度是至少12个，但常15至18个和常常至少25个单体单元，包括核苷酸和氨基酸残基。因为2个多核苷酸可各包含(1)2个多核苷酸之间类似的序列(即,仅部分完全多核苷酸序列)，及(2)2个多核苷酸之间差异的序列，2个(或更多)多核苷酸之间的序列比较一般通过比较在“比较窗”上2个多核苷酸的序列来实施以鉴定及比较序列相似性局部区。“比较窗”指称至少6个连续的位置，通常约50～约100，更通常约100～约150的概念段，其中在2个序列最佳对齐之后，将序列与相同的数的连续的位置的参照序列比较。为2个序列的最佳比对，比较窗可包含相比参照序列(其不包含添加或缺失)约20％或更少添加或缺失(即,间隔)。用于比对比较窗的序列最佳比对可由算法的(gap,bestfit,fasta,andtfastainthewisconsingeneticssoftwarepackagerelease7.0,geneticscomputergroup,575sciencedrivemadison,wi,usa)计算机化的实现或通过由选择的任何各种方法产生的检查和最佳比对(即,导致在比较窗上最高百分率同源性)进行。可参考例如由altschuletal.,1997,nucl.acidsres.25:3389.adetaileddiscussionofsequenceanalysiscanbefoundinunit19.3ofausubeletal.,“currentprotocolsinmolecularbiology”,johnwiley&sonsinc,1994-1998,chapter15公开的blast家族程序。“本文所用的严格度”，指称在杂交及洗涤过程期间温度和离子强度条件，及特定有机溶剂的存在或缺失。严格度越高，固定的靶核苷酸序列和在洗涤之后与靶保持杂交的标记的探查多核苷酸序列之间的互补性程度越高。术语“高严格度”指称仅具有高频度的互补碱基的核苷酸序列会杂交的温度和离子条件。需要的严格度是核苷酸序列依赖性的及依赖于在杂交期间存在的各种组分。一般而言，严格条件选择为对于特定序列在定义的离子强度和ph约10～20℃小于热熔点(tm)。tm是50％的靶序列与互补探针杂交的温度(在定义的离子强度和ph下)。本文所用的术语“同义密码子”指称相比另一密码子具有不同核苷酸序列但与该其他密码子编码相同的氨基酸的密码子。由“载体”是指来源于，例如，可插入或克隆多核苷酸的质粒，噬菌体，酵母或病毒的多核苷酸分子，适宜地dna分子。载体可含有一个或更多独特限制性位点和可能在定义的宿主细胞包括靶细胞或其组织或祖先细胞或组织中自主复制，或整合进定义的宿主的基因组使得可繁体克隆的序列。因此，载体可为自主复制载体，即，作为额外-染色体实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，线性或闭合的环状质粒，额外-染色体元件，小型-染色体或人工染色体。载体可含有保证自身-复制的任何手段。或者，载体可为当导入宿主细胞时整合到基因组及与已整合进的染色体一起复制的载体。载体系统可包含单载体或质粒，将一起含有总dna的2种或更多载体或质粒导入宿主细胞基因组，或转座子。载体选择一般会依赖于载体与导入载体的宿主细胞的兼容性。在此情况中，载体源于优选病毒或病毒的载体，其可操作地在动物和优选哺乳动物细胞中发挥功能。该载体可源于痘病毒，腺病毒或酵母。载体也可包括选择标记物诸如可用于选择适合的转化体的抗生素抗性基因。该抗性基因的例为本领域技术人员所知及包括赋予针对抗生素卡那霉素和g418的抗性的nptii基因及赋予针对抗生素潮霉素b的抗性的hph基因。术语“野生型”和“天然存在的”互换使用指称当自天然存在的源分离时具有基因或基因产物的特征的基因或基因产物。野生型基因或基因产物(例如,多肽)在种群中最常观察到及由此任意设计为基因的“正常”或“野生型”形式。【2.缩写】贯穿本申请使用以下缩写：nt＝核苷酸nts＝核苷酸数aa＝氨基酸kb＝千碱基或千碱基对kda＝千道尔顿d＝天h＝小时s＝秒w.t.＝野生型【3.修饰的萤光素酶】本发明部分基于确定萤光素酶，包括挠足虫萤光素酶家族之内的萤光素酶的特定结构元件对于调节萤光素酶功能重要和那些特征的特定修饰可导致萤光素酶的光-发射特征的显著改善。尤其是，本发明人发现了：(1)在第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的l；(2)跨信号肽序列的下游和约残基85的上游的区的全体或部分截短；(3)至少一个4-残基基序，其包括保守的半胱氨酸(例如,c5,c6,c9和c10)；(4)至少一个2-残基基序，其包括保守的半胱氨酸(例如,c5,c6,c9和c10)；和/或(5))；至少一个3-残基基序，其包括保守的半胱氨酸(例如,c5,c6,c9和c10)可显著地改善萤光素酶，包括挠足虫萤光素酶的一种或更多光-发射特征或性质。因此，本发明提供改善萤光素酶的至少一种光-发射特征的方法，包括萤光素酶功能的发光，闪光信号强度，辉光信号强度，辉光信号稳定性和有效温度范围，包括升高的温度范围。这些方法通常包括制备与参照萤光素酶多肽序列差至少一个选自下列的修饰的氨基酸序列：(i)在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基用l或其修饰的形式取代；(ii)参照萤光素酶多肽的氨基酸序列全体或部分缺失，其中氨基酸序列跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游，适宜地约残基84，83，82，81，80，79，78，77，76，75，74，73，72，71(相对于图1中显示的共有编号)的上游；(iii)与参照萤光素酶多肽的至少一个保守的半胱氨酸(例如,选自在第143,145,146,193，195，196，210，212和213位的氨基酸残基的任何1,2,34,5,6,7,8或9个氨基酸残基)相邻的一个或更多氨基酸残基取代以产生由式xi表示的氨基酸亚序列：bcωd(xi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，其中保守的半胱氨酸在一些实施方式中选自c5，c6和c9；ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)；以及d是天冬氨酸或其修饰的形式；(iv)与参照萤光素酶多肽的保守的半胱氨酸c10相邻的一个或更多氨基酸残基取代以产生由序列xrcas表示的氨基酸亚序列，其中x适宜地不是d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式；(v)与参照萤光素酶多肽的选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸相邻的一个或更多氨基酸残基取代，其中在个别保守的半胱氨酸的取代产生由式xx表示的氨基酸序列：bc(xx)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5，c6，c9和c10，或在特定实施方式中选自c6和c9，其中在个别保守的半胱氨酸的取代，在特定实施方式中，产生由式xxi表示的氨基酸序列：bcω(xxi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5，c6，c9和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中由式xxi表示的氨基酸序列适宜地选自bca或bce，其中在个别保守的半胱氨酸的取代，在特定实施方式中，产生由式v表示的氨基酸序列：bcωω(v)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5，c6c9和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中由式v表示的氨基酸序列选自，例如，bcad(例如,rcad,kcad)，bcat(例如,rcat,kcat)，bced(例如,rced,kced)，bcsd(例如,rcsd,kcsd)，bctd(例如,rctd,kctd)和bcas(例如,rcas,kcas)，其中与保守的半胱氨酸c5或c6相邻的取代产生例如选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd的氨基酸序列，其中与c9相邻取代产生例如由kcsd组成的氨基酸序列；其中与选自c6和c10的一个或二个保守的半胱氨酸相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxiii表示的氨基酸序列：ebc(xxiii)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c6和c9，其中与保守的半胱氨酸c10相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxiv表示的氨基酸序列：gbc(xxiv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；以及c是保守的半胱氨酸c10，或其修饰的形式，其中与选自c5和c10的一个或二个保守的半胱氨酸相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxv表示的氨基酸序列：gbcω(xxv)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中gbcω，例如，由gbca表示，其中与选自c5和c10的一个或二个保守的半胱氨酸相邻的取代，在特定实施方式中，产生由式xxvi表示的氨基酸序列：gbcωω(xxvi)其中：b选自碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)；c是保守的半胱氨酸，或其修饰的形式，选自c5和c10；以及ω选自小氨基酸残基(例如,a,s或t,或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，其中gbcωω例如由gbcat表示。或以上修饰的组合，如例证于下表a。在一些实施方式中，修饰包括与参照萤光素酶多肽的保守的半胱氨酸c5相邻的一个或更多残基的取代以产生选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd，kctd，rcat和rcas的氨基酸亚序列。在一些实施方式中，修饰包括与参照萤光素酶多肽的保守的半胱氨酸c6相邻的一个或更多残基的取代以产生选自rcad，kcad，rced，kced，rcsd，kcsd，rctd和kctd的氨基酸亚序列。在一些实施方式中，修饰包括与参照萤光素酶多肽的保守的半胱氨酸c9相邻的一个或更多残基的取代以产生氨基酸亚序列kcsd。在一些实施方式中，修饰可还包括与参照萤光素酶多肽的保守的半胱氨酸c10相邻的一个或更多残基的取代以产生由序列xrcas表示的氨基酸亚序列，其中x不是d或p及适宜地选自r或k或其修饰的形式，更适宜地h或其修饰的形式，甚至更适宜地t，a，s或n或其修饰的形式，优选q或其修饰的形式，更优选g或其修饰的形式，甚至更优选e或其修饰的形式。代表性的参照萤光素酶多肽包括包含seqidno:2，4，6，8，10，166，168，170，172，790,792，794，796，798，800，802，804，806，808，810，812和814所示的氨基酸序列的那些。本发明也涵盖修饰其他参照萤光素酶，其包括合成或人工创建的萤光素酶以及自萤光素酶-产生生物的天然存在的萤光素酶以包括本文所述的至少1，2，3，4，5，6或更多修饰。在特定实施方式中，参照萤光素酶获自亚-类挠足亚纲(copepoda)，更适宜地自挠足亚纲(copepoda)科的发光属，其选自长腹水蚤科(metridinidae)，光水蚤科(lucicutiidae)，异肢水蚤科(heterorhabdidae)，亮羽水蚤科(augaptilidae)，megacalanidae，隆水蚤科(oncaeidae)，保猛水蚤科(aegisthidae)，鹰嘴水蚤科(aetideidae)和角水蚤科(pontellidae)。自长腹水蚤科(metridinidae)的发光生物的非限制性例包括：长腹水蚤科(metridinidae)物种诸如m.lucens，m.longa，m.princeps，m.norvegica，m.pacifica，m.gerlachei及m.macrura；乳点水蚤属(pleuromamma)物种诸如p.xiphias，p.adbominalis，p.robusta，p.gracilis，p.piseki，p.borealis，p.indica及p.quadrangulata；及gaussia物种诸如g.princeps。自光水蚤科(lucicutiidae)科的发光生物的代表性的例包括：光水蚤科(lucicutiidae)物种诸如l.flavicornis，l.gemina，l.ovalis，l.wolfendeni，l.sarsi，l.aurita，l.clause，l.grandis及l.magna。自异肢水蚤科(heterorhabdidae)的发光生物的例证性例包括：异肢水蚤属(heterorhabdus)物种诸如h.papilliger，h.norvegicus，h.robustus和h.spinifron；半肢水蚤属(hemirhabdus)物种诸如hemirhabdusgrimaldii及h.latus；异柱水蚤属(heterostylites)物种诸如长角异柱水蚤(heterostyliteslongicornis)；及desseta物种诸如dessetapalumbio。自亮羽水蚤科(augaptilidae)的发光生物的非限制性例包括：真亮羽水蚤属(euaugaptilus)物种诸如e.magnus，e.laticep，e.perodiosus，e.filiger，e.squamatus，e.nodifron，e.truncates/vicinus，e.rectus，e.grandicornis，e.farrani及e.bullifer；刺亮羽水蚤属(centraugaptilus)物种诸如c.horridus，c.rattrayi及c.cucullatus；haptoptilus物种诸如h.longicirrus；heteroptilus物种诸如h.acutilobus；厚海羽水蚤属(pachyptilus)物种诸如p.eurygnathus。自megacalanidae科的发光生物的代表性的例包括：megacalanus物种诸如m.princeps。自隆水蚤科(oncaeidae)科的发光生物的例证性例包括：隆水蚤属(oncaea)物种诸如o.conifera。自保猛水蚤科(aegisthidae)的发光生物的非限制性例包括：保猛水蚤属(aegisthus)物种诸如尖额保猛水蚤(aegisthusmucronatus)。自鹰嘴水蚤科(aetideidae)的发光生物的代表性的例包括：柚水蚤属(chiridius)物种诸如c.poppei。自角水蚤科(pontellidae)的发光生物的例证性例包括：角水蚤属(pontella)物种诸如p.mimocerami。在一些实施方式中，本发明的萤光素酶多肽具有任何一种或更多以下活性：(i)增强的发光，(ii)更强闪光信号强度，(iii)增强的辉光信号强度，(iv)增强的辉光信号稳定性及(v)增强的有效温度范围，包括升高的最佳温度范围，用于相比缺少氨基酸序列修饰的参照萤光素酶多肽的酶操作。本发明涵盖全长萤光素酶多肽以及它们的生物学活性片段。一般而言，全长萤光素酶的生物活性片段可参与相互作用，例如，分子内或分子间相互作用和/或可显示以上提及的(i)至(v)的任何一种或更多活性。该生物学活性片段包括包含足够类似于或源于(推定的)全长萤光素酶多肽的氨基酸序列，例如，seqidno:46，48，50，52，82，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160或162所示的氨基酸序列(即,缺少信号肽和分泌-增强序列及使多肽导向细胞内位置的那些)的氨基酸序列的肽，其相比推定全长萤光素酶多肽包括更少氨基酸，及呈现该多肽的至少一种活性(例如，以上定义的(i)至(v)的任何一种或更多活性。一般而言，生物活性片段会包含具有推定全长萤光素酶多肽的至少一种活性和可包括开始于约残基85(相对于图1中显示的共有编号)的约140-残基结构域及包含各保守的半胱氨酸(c1～c10)的结构域，例如显示于图1。在一些实施方式中，生物学活性片段会在第85位包含疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基l或m或其修饰的形式)，在第86位包含p或其修饰的形式，在第87位包含g或其修饰的形式，在第88位包含k或其修饰的形式，在第89位包含k或其修饰的形式，在第90位包含疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)，在第91位包含p或其修饰的形式，在第92位疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)，在第93位包含疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如a,或其修饰的形式)或在第94位包含酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，v或其修饰的形式；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或l,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,p或其修饰的形式)，在第95位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i,m或v,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)，在第96位；e或其修饰的形式，在第97位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m,i或l,或其修饰的形式)，在第98位；e或其修饰的形式，在第99位；a或其修饰的形式，在第100位；n或其修饰的形式，在第101位；a或其修饰的形式，在第102位；碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f,或其修饰的形式)，在第103位；碱性氨基酸残基(例如,k或r,或其修饰的形式)，在第104位；a或其修饰的形式，在第105位；g或其修饰的形式，在第106位；c1or其修饰的形式，在第107位；小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)，在第108位；r或其修饰的形式，在第109位；g或其修饰的形式，在第110位；c2或其修饰的形式，在第111位；l或其修饰的形式，在第112位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或v,或其修饰的形式)，在第113位；c3或其修饰的形式，在第114位；l或其修饰的形式，在第115位；s或其修饰的形式，在第116位；碱性氨基酸残基(例如,h或k,或其修饰的形式)，在第117位；i或其修饰的形式，在第118位；k或其修饰的形式，在第119位；c4or其修饰的形式，在第120位；t或其修饰的形式，在第121位；小氨基酸残基(例如,p或a,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)，在第122位；碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)，在第123位；m或其修饰的形式，在第124位；碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)，在第125位；任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q,或其修饰的形式)，在第126位；疏水氨基酸残基(例如,芳族氨基酸残基诸如f或y,或其修饰的形式)，在第127位；i或其修饰的形式，在第128位；p或其修饰的形式，在第129位；g或其修饰的形式，在第130位；碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)，在第131位；c5或其修饰的形式，在第132位；碱性氨基酸残基(例如,h或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)，在第133位；酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,t或s,或其修饰的形式)，在第134位；y或其修饰的形式，在第135位；酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，在第136位；g或其修饰的形式，在第137位；d或其修饰的形式，在第138位；k或其修饰的形式，在第139位；酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)，在第140位；小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)，在第141位；小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，在第142位；q或其修饰的形式，在第143位；小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，在第144位；g或其修饰的形式，在第145位；i或其修饰的形式，在第146位；小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)，在第147位；无氨基酸残基或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，在第148位；酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或其修饰的形式)，在第149位；小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，在第150位；i或其修饰的形式，在第151位；v或其修饰的形式，在第152位；d或其修饰的形式，在第153位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如i或m,或其修饰的形式)，在第154位；p或其修饰的形式，在第155位；e或其修饰的形式，在第156位；i或其修饰的形式，在第157位；小氨基酸残基(例如,p,s或a,或其修饰的形式)，在第158位；g或其修饰的形式，在第159位；f或其修饰的形式，在第160位；k或其修饰的形式，在第161位；酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)，在第162位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)，在第163位；负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如e,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，在第164位；p或其修饰的形式，在第165位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如m或l,或其修饰的形式)，在第166位；酸性氨基酸残基(例如,e或d,或其修饰的形式)，在第167位；q或其修饰的形式，在第168位；f或其修饰的形式，在第169位；i或其修饰的形式，在第170位；a或其修饰的形式，在第171位；q或其修饰的形式，在第172位；v或其修饰的形式，在第173位；酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)，在第174位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,r或其修饰的形式)，在第175位；c6或其修饰的形式，在第176位；任何氨基酸残基(例如,疏水氨基酸残基，其包括脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如a或t,或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如e,或其修饰的形式)，在第177位；酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)，在第178位；c7或其修饰的形式，在第179位；小氨基酸残基(例如,t或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,n或其修饰的形式)，在第180位；t或其修饰的形式，在第181位；g或其修饰的形式，在第182位；c8或其修饰的形式，在第183位；l或其修饰的形式，在第184位；k或其修饰的形式，在第185位；g或其修饰的形式，在第186位；l或其修饰的形式，在第187位；a或其修饰的形式，在第188位；n或其修饰的形式，在第189位；v或其修饰的形式，在第190位；碱性氨基酸残基(例如,h或k,或其修饰的形式)或中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)，在第191位；c9或其修饰的形式，在第192位；s或其修饰的形式，在第193位；酸性氨基酸残基(例如,d或e,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)，在第194位；l或其修饰的形式，在第195位；l或其修饰的形式，在第196位；k或其修饰的形式，在第197位；k或其修饰的形式，在第198位；w或其修饰的形式，在第199位；l或其修饰的形式，在第200位；p或其修饰的形式，在第201位；任何氨基酸残基(例如,小氨基酸残基诸如g,t,s或a,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如q或n,或其修饰的形式,或酸性氨基酸残基诸如d,或其修饰的形式)，在第202位；碱性氨基酸残基(例如,r或k,或其修饰的形式)，在第203位；c10或其修饰的形式，在第204位；小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)，在第205位；小氨基酸残基(例如,s或t,或其修饰的形式)，在第206位；f或其修饰的形式，在第207位；a或其修饰的形式，在第208位；酸性氨基酸残基(例如,d或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,s或其修饰的形式)，在第209位；k或其修饰的形式，在第210位；i或其修饰的形式，在第211位；q或其修饰的形式，在第212位；小氨基酸残基(例如,g或s,或其修饰的形式)或碱性氨基酸残基(例如,k或其修饰的形式)，在第213位；中性/极性氨基酸残基(例如,q或其修饰的形式)或酸性氨基酸残基(例如,e或其修饰的形式)，在第214位；疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如v,或其修饰的形式)或小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)，在第215位；负荷的氨基酸残基(例如,酸性氨基酸残基诸如d,或其修饰的形式,或碱性氨基酸残基诸如h,或其修饰的形式)，在第216位；任何氨基酸残基(例如,碱性氨基酸残基诸如k,或其修饰的形式,或中性/极性氨基酸残基诸如n,或其修饰的形式,或小氨基酸残基诸如t,或其修饰的形式)，在第217位；i或其修饰的形式，在第218位；k或其修饰的形式，在第219位；g或其修饰的形式，在第220位；小氨基酸残基(例如,a或其修饰的形式)或疏水氨基酸残基(例如,脂肪族氨基酸残基诸如l或m,或其修饰的形式)，在第221位；小氨基酸残基(例如,g或a,或其修饰的形式)，在第222位；g或其修饰的形式在第223位和d或其修饰的形式，在第224位；相对于图1的共有编号。全长萤光素酶多肽的生物学活性片段可为多肽其长度是，例如，40，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，105，110，115，120，125，130，135，140，145，150，155，160，165，170，175，180，185，190，195，200或更多氨基酸残基。适宜地，生物学活性片段具有其所来源的全长多肽的少于约1％，10％，25％，50％的活性。本发明涵盖分泌的及非-分泌的或细胞内萤光素酶。分泌的萤光素酶会通常包含信号肽，例如包含约残基1至约残基28，相对于图1中显示的共有编号。它们也会通常包括延伸信号肽的下游和约第85位的上游的分泌-增强序列，适宜地约第84，83，82，81，80，79，78，77，76，75，74，73，72，71位的上游。例证性非-分泌的或细胞内萤光素酶通常排除功能信号肽和/或功能分泌-增强序列。本发明也涵盖是野生型或天然存在的萤光素酶或它们的片段或合成或人工创建的萤光素酶或它们的片段的变体的萤光素酶，该变体包括一个或更多在本文定义的发光-增强修饰。该“变体”多肽包括蛋白源于天然蛋白通过天然蛋白的n-端和/或c-端缺失(所谓的截短)或添加一个或更多氨基酸；天然蛋白的一个或更多位点的一个或更多氨基酸的缺失或添加；或天然蛋白中一个或更多位点的一个或更多氨基酸的取代。该变体萤光素酶的非限制性例包括全长或前体萤光素酶的经处理形式，包括但不限于信号肽结构域(约残基1至约残基17或18,相对于图1中显示的共有编号)已从前体形式除去的多肽。由本发明包括的变体蛋白是有生物学活性的，即，它们持续具有天然蛋白的期望的生物学活性。该变体可自，例如，遗传多态性或自人操作得到。萤光素酶多肽可以各种方式改变，包括氨基酸取代，缺失，截短和插入。该操作方法通常为本领域知道。例如，萤光素酶多肽的氨基酸序列变体可通过dna中突变制备。诱变和核苷酸序列改变方法为本领域所熟知。见，例如，kunkel(1985,proc.natl.acad.sci.usa.82:488-492)，kunkel等人，(1987,methodsinenzymol,154:367-382)，美国专利no.4,873,192，watson，j.d.等人，(“molecularbiologyofthegene”,fourthedition,benjamin/cummings,menlopark,calif.,1987)和该文引用的参考文献。不影响目标蛋白的生物学活性的适当的氨基酸取代的指南可见于dayhoff等人的模型，(1978)atlasofproteinsequenceandstructure(natl.biomed.res.found.,washington,d.c.)。筛选由点突变或截短制造的组合库的基因产物的方法，及就具有选择的性质的基因产物筛选cdna库的方法为本领域所知。该方法可适应于由萤光素酶多肽的组合的诱变产生的基因库的快速筛选。递归总体诱变(rem)，增强库中功能突变体的频度的技术，可组合筛选测定使用以鉴定萤光素酶变体(arkinandyourvan(1992)proc.natl.acad.sci.usa89:7811-7815；delgraveetal.,(1993)proteinengineering,6:327-331)。保守性取代，诸如用另一具有类似性质的氨基酸替换一个氨基酸，可为期望的，如在下文以更多细节讨论。变体萤光素酶多肽可在沿着它们的序列的各位置，相比亲本(例如,天然存在的或参照)萤光素酶氨基酸序列含有保守性氨基酸取代。“保守性氨基酸取代”是将氨基酸残基用具有类似侧链的氨基酸残基取代。具有类似侧链的氨基酸残基家族已在本领域定义，其可为通常如下亚-分类：酸性：由于在生理学ph损失h离子而具有负电荷的残基和当肽处于生理学ph的水性介质中时被水溶液吸引以寻求含有其的肽构象的表面位置的残基。具有酸性侧链的氨基酸包括谷氨酸和天冬氨酸。碱性：由于在生理学ph或在其1或2个ph单位之内与h离子结合而具有正电荷的残基(例如,组氨酸)和当肽处于生理学ph的水性介质时被水溶液吸引而寻求含有其的肽的构象中的表面位置的残基。具有碱性侧链的氨基酸包括精氨酸，赖氨酸和组氨酸。带电的：在生理学ph带电的残基及因此，包括具有酸性或碱性侧链的氨基酸(即,谷氨酸,天冬氨酸,精氨酸,赖氨酸和组氨酸)。疏水的：在生理学ph不带电的残基和当肽处于水性介质中时被水溶液排斥而寻求含有其的肽的构象的内部位置的残基。具有疏水侧链的氨基酸包括酪氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸和色氨酸。中性/极性：在生理学ph不带电的残基，但当肽处于水性介质中时不被水溶液充分排斥从而其会寻求含有其的肽构象中的内部位置的残基。具有中性/极性侧链的氨基酸包括天冬酰胺，谷氨酰胺，半胱氨酸，组氨酸，丝氨酸和苏氨酸。本说明书也表征特定氨基酸为“小”氨基酸，由于它们的侧链不足够大，即便缺少极性基，以赋予疏水性。除了脯氨酸为例外，“小”氨基酸是当至少一个极性基在侧链上时具有4个碳或更少和当不是时具有3个碳或更少的那些。具有小侧链的氨基酸包括甘氨酸，丝氨酸，丙氨酸和苏氨酸。基因-编码的二级氨基酸脯氨酸是特殊情况，由于其对肽链的二级构象的知道的效应。脯氨酸结构不同于全部其他天然存在的氨基酸，其侧链键合于α-氨基的氮，以及α-碳的。但是，几种氨基酸相似性矩阵(例如,由dayhoff等人，(1978)，amodelofevolutionarychangeinproteins.matricesfordeterminingdistancerelationshipsinm.o.dayhoff,(ed.),atlasofproteinsequenceandstructure,vol.5,pp.345-358,nationalbiomedicalresearchfoundation,washingtondc；及由gonnet等人，(1992,science,256(5062):14430-1445)公开的pam120矩阵和pam250矩阵)在与甘氨酸，丝氨酸，丙氨酸和苏氨酸相同的组中包括脯氨酸。因此，为本发明的目的，将脯氨酸分类为“小”氨基酸。因此，分类为极性或非-极性需要的吸引或排斥程度是任意的，及由本发明特别涵盖的氨基酸已被分类为一组或其他组。不特别命名的多数氨基酸可基于知道的行为分类。氨基酸残基可进一步亚-分类为环状或非-环状，及芳族或非-芳族，关于残基的侧链取代基自明分类，及如小或大。如果其含有总4个碳原子或更少，包括羧基碳，假设另外的极性取代基存在；如果不是，则3个碳原子或更少，则残基被认为小。小残基当然是总是非-芳族。依赖于它们的结构性质，氨基酸残基可落入2个或更多类。对于天然存在的蛋白氨基酸，根据此方案亚-分类显示于表1。表1氨基酸亚-分级保守性氨基酸取代也包括基于侧链分组。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸是甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；具有含有酰胺的侧链的一组氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳族侧链的一组氨基酸是苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的一组氨基酸是赖氨酸，精氨酸和组氨酸；及具有含有硫的侧链的是一组氨基酸半胱氨酸和甲硫氨酸。例如，可合理预期亮氨酸用异亮氨酸或缬氨酸，天冬氨酸用谷氨酸，苏氨酸用丝氨酸的取代，或氨基酸用结构上相关的氨基酸类似取代不会对得到的变体多肽的性质具有主要效应。是否氨基酸变化导致功能萤光素酶肽多肽可通过检定其活性来容易测定。保守性取代显示于表2的例示及优选的取代的表头下。落在本发明的范围之内的氨基酸取代，一般而言，通过选择在它们对维持(a)取代区内肽主链结构，(b)靶位点的分子电荷或疏水性，或(c)侧链本体的效应中不显著地不同的取代来实现。在导入取代之后，就生物学活性筛选变体。表2例示及优选的氨基酸取代原残基例示取代优选的取代alaval，leu，ilevalarglys，gln，asnlysasngln，his，lys，argglnaspgluglucysserserglnasn，his，lys，asngluasp，lysaspglyproprohisasn，gln，lys，argargileleu，val，met，ala，phe，norleuleuleunorleu，ile，val，met，ala，pheilelysarg，gln，asnargmetleu，ile，pheleupheleu，val，ile，alaleuproglyglyserthrthrthrsersertrptyrtyrtyrtrp，phe，thr，serphevalile，leu，met，phe，ala，norleuleu或者，用于制造保守性取代的类似氨基酸可基于侧链分组进3个类别。第1组包括谷氨酸，天冬氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，其全部具有带电的侧链；第2组包括甘氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，酪氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺；及第3组包括亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，丙氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，甲硫氨酸，如描述于zubay,g.,biochemistry,thirdedition,wm.c.brownpublishers(1993)。由此，萤光素酶多肽中的预测的非-必要的氨基酸残基一般用来自相同的侧链家族的另一氨基酸残基取代。或者，突变可沿着萤光素酶基因编码序列的全部或部分随机导入，诸如由饱和诱变，及得到的突变体可就亲本多肽活性筛选，例如在本文描述，以鉴定保留该活性的突变体。编码序列诱变后，编码的多肽可重组表达和测定其活性。“非-必要的”氨基酸残基是可不消除或基本上改变一种或更多其活性地自一实施方式多肽的野生型序列改变的残基。适宜地，改变不基本上改变这些活性之一，例如，活性是野生型的至少20％，40％，60％，70％或80％。例证性非-必要的氨基酸残基包括在图1中显示的知道的萤光素酶多肽之间在相同的位置(例如,残基x1-x53,如在上式viii中定义)不同的任何一个或更多氨基酸残基。相反，“必要的”氨基酸残基是当自参照萤光素酶多肽的野生型序列改变时，导致亲本分子活性消失使得存在少于20％的野生型活性的残基。在一些实施方式中，必要的氨基酸残基，其包括在跨不同物种的萤光素酶多肽中保守的那些，例如，p，在第86位；g，在第87位；k，在第88位；k，在第89位；p，在第91位；v，在第94位；e，在第97位；e，在第99位；a，在第100位；n，在第101位；a，在第102位；a，在第105位；g，在第106位；c1，在第107位；r，在第109位；g，在第110位；c2，在第111位；l，在第112位；c3，在第114位；l，在第115位；s，在第116位；i，在第118位；k，在第119位；c4，在第120位；t，在第121位；m，在第124位；i，在第128位；p，在第129位；g，在第130位；r，在第131位；c5，在第132位；y，在第135位；g，在第137位；d，在第138位；k，在第139位；q，在第143位；g，在第145位；i，在第146位；i，在第151位；v，在第152位；d，在第153位；p，在第155位；e，在第156位；i，在第157位；g，在第159位；f，在第160位；k，在第161位；p，在第165位；q，在第168位；f，在第169位；i，在第170位；a，在第171位；q，在第172位；v，在第173位；c6，在第176位；c7，在第179位；t，在第181位；g，在第182位；c8，在第183位；l，在第184位；k，在第185位；g，在第186位；l，在第187位；a，在第188位；n，在第189位；v，在第190位；c9，在第192位；s，在第193位；l，在第195位；l，在第196位；k，在第197位；k，在第198位；w，在第199位；l，在第200位；p，在第201位；r，在第203位；c10，在第204位；f，在第207位；a，在第208位；k，在第210位；i，在第211位；q，在第212位；i，在第218位；k，在第219位；g，在第220位；g在第223位和d，在第224位；相对于图1的共有编号。因此，本发明也作为萤光素酶多肽涵盖，参照萤光素酶多肽(例如,天然存在的萤光素酶多肽序列或它们的生物学活性片段)的变体，其中变体通过添加，缺失或取代一个或更多氨基酸残基区别自参照序列。一般而言，变体会与例如，seqidno:12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，780，782，784，786或788所示的亲本或参照萤光素酶多肽序列显示至少约40％，45％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相似性，如由在本文别处描述的序列比对程序使用默认参数测定。期望地，变体会与例如，seqidno:12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，780，782，784，786或788所示的亲本萤光素酶多肽序列具有至少40％，45％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％序列同一性，如由在本文别处描述的序列比对程序使用默认参数测定。在落入变体多肽的范围之内的参照萤光素酶多肽(例如,野生型)的变体，可不同于参照分子通常多至50，49，48，47，46，45，44，43，42，41，40，39，38，37，36，35，34，33，32，31，30，29，28，27，26，25，24，23，22，21，20，19，18，17，16，15，14，13，12或11个氨基酸残基或适宜地少至10，9，8，7，6，5，4，3，2或1个氨基酸残基。在一些实施方式中，变体多肽不同于seqidno:12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，780，782，784，786或788中的对应序列至少1个但由少于或等于50，49，48，47，46，45，44，43，42，41，40，39，38，37，36，35，34，33，32，31，30，29，28，27，26，25，24，23，22，21，20，19，18，17，16，15，14，13，12，11，10，9，8，7，6，5，4，3或2个氨基酸残基。在其他实施方式中，其不同于seqidno:12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，56，58，60，62，64，66，68，70，72，74，76，78，80，82，136，138，140，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，142，144，146，148，150，152，154，156，158，160，162，166，168，170，172，174，176，178，180，182，184，186，188，190，192，194，196，198，200，202，204，206，208，210，212，214，216，218，220，222，224，226，228，230，232，234，236，238，240，242，244，246，248，250，252，254，256，258，260，262，264，266，268，270，272，274，276，278，280，282，284，286，288，290，292，294，296，298，300，302，304，306，308，310，312，314，316，318，320，322，324，326，328，330，332，334，336，338，340，342，344，346，348，350，352，354，356，358，360，362，364，366，368，370，372，374，376，378，380，382，384，386，388，390，392，394，396，398，400，402，404，406，408，410，412，414，416，418，420，422，424，426，428，430，432，434，436，438，440，442，444，446，448，450，452，454，456，458，460，462，464，466，468，470，472，474，476，478，480，482，484，486，488，490，492，494，496，498，500，502，504，506，508，510，512，514，516，518，520，522，524，526，528，530，532，534，536，538，540，542，544，546，548，550，552，554，556，558，560，562，564，566，568，570，572，574，576，578，580，582，584，586，588，590，592，594，596，598，600，602，604，606，608，610，612，614，616，618，620，622，624，626，628，630，632，634，636，638，640，642，644，646，648，650，652，654，656，658，660，662，664，666，668，670，672，674，676，678，680，682，684，686，688，690，692，694，696，698，700，702，704，706，708，710，712，714，716，718，720，722，724，726，728，730，732，734，736，738，740，742，744，746，748，750，752，754，756，758，760，762，764，766，768，780，782，784，786或788中的任何一个中的对应序列至少1％但少于或等于25％，24％，23％，22％，21％，20％，19％，18％，17％，16％，15％，14％，13％，12％，11％，10％，9％，8％，7％，6％，5％，4％，3％或2％的残基。如果序列比较需要比对，序列一般就最大相似性或同一性对齐。自缺失或插入，或错配“去环”的序列通常被认为是差异。差异是，适宜地，在非-必要的残基差异或变化或保守性取代，如在下文以更多细节讨论。本发明的萤光素酶也包括包含具有修饰的侧链的氨基酸，在肽，多肽或蛋白合成期间并合非天然的氨基酸残基和/或它们的衍生物的萤光素酶多肽和交联接头的使用和向本发明的肽，部分和变体强加构象约束的其他方法。侧链修饰的例包括氨基的修饰诸如通过用乙酸酐酰化；氨基用琥珀酸酐和四氢酞酸酐酰化；用甲基乙酰亚胺脒化；氨基用氰酸盐氨甲酰化；赖氨酸用吡哆醛-5-磷酸之后是用nabh4还原吡哆化；通过与醛反应之后是用nabh4还原来还原性烷基化；及氨基用2，4，6-三硝基苯磺酸(tnbs)三硝基苄化。羧基可由经o-酰基异脲形成的碳二亚胺活化之后是随后衍生化，例如，为对应酰胺来修饰。精氨酸残基的胍基可通过用试剂诸如2,3-丁二酮，苯甲酰甲醛和乙二醛形成杂环缩合产物来修饰。巯基可修饰由方法诸如过甲酸氧化为磺基丙氨酸来；使用4-氯汞苯磺酸，4-氯汞苯甲酸；2-氯汞-4-硝基苯酚，氯化苯汞，及其他汞制剂形成汞衍生物；用其他氢硫基化合物形成混合的二硫化物；与马来酰亚胺，马来酸酐或其他取代的马来酰亚胺反应；用碘乙酸或碘乙酰胺羧甲基化；及用氰酸盐在碱性ph氨甲酰化。色氨酸残基可，例如，通过将吲哚环用2-羟基-5-硝基苄基溴化物或磺酰卤烷基化或通过用n-溴琥珀酰亚胺氧化来修饰。酪氨酸残基可通过用四硝基甲烷硝化而形成3-硝基酪氨酸衍生物来修饰。组氨酸残基的咪唑环可通过用焦碳酸二乙酯n-乙酯基化或通过用碘乙酸衍生物烷基化来修饰。在肽合成期间合并非天然的氨基酸和衍生物的例包括但不限于，使用4-氨基丁酸，6-氨基己酸，4-氨基-3-羟基-5-苯基戊酸，4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸，t-丁基甘氨酸，正亮氨酸，正缬氨酸，苯基甘氨酸，鸟氨酸，肌氨酸，2-噻吩基丙氨酸和/或氨基酸的d-异构体。由本发明涵盖的一列非天然的氨基酸显示于表3。表3非-常规氨基酸本发明的萤光素酶也包括由在本文定义的严格度条件下，尤其中或高严格度条件下，与编码萤光素酶的多核苷酸序列，或其非-编码链杂交的多核苷酸编码的多肽，如下所述。例证性萤光素酶多核苷酸序列如seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477，479，481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787，或它们的补体所示。在一些实施方式中，序列之间的序列相似性或序列同一性的计算如下实施：为了测定2个氨基酸序列，或2个核酸序列的百分率同一性，为最佳比较目的(例如,为最佳比对可在第1和第2氨基酸或核酸序列的一或二者内导入间隔和为比较目的可忽略非-同源序列)对齐序列。在一些实施方式中，用于比较目的对齐的参照序列的长度是参照序列的长度的至少30％，通常至少40％，更通常至少50％，60％和甚至更通常至少70％，80％，90％，100％。然后比较在对应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当当第1序列中的位置被第2序列中的对应位置的相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则在该位置分子是同一的。对于氨基酸序列比较，当第1序列中的位置被在第2序列中的对应位置的相同的或类似氨基酸残基占据(即,保守性取代)时，然后在该位置分子是类似的。2序列之间的百分率同一性是在个体位置由序列共享的同一氨基酸残基数的函数，计入间隔数，及各间隔长度，其需要导入用于2序列的最佳比对。相反，2序列之间的百分率相似性是在个体位置由序列共享的同一和类似氨基酸残基数的函数，计入间隔数，及各间隔长度，其需要导入用于2序列的最佳比对。序列比较和序列之间的百分率同一性或百分率相似性的确定可通过使用数学算法实现。在特定实施方式中，氨基酸序列之间的百分率同一性或相似性通过使用已合入gcg软件包中的gap程序(在http://www.gcg.com可利用)的needleman和wünsch，(1970,j.mol.biol.48：444～453)算法，使用blossum62矩阵或pam250矩阵，及16，14，12，10，8，6或4的空位权重和1，2，3，4，5或6的长度权重来测定。在特定实施方式中，核苷酸序列之间的百分率同一性通过使用gcg软件包中的gap程序(在http://www.gcg.com可利用)，使用nwsgapdna.cmp矩阵和40，50，60，70或80的空位权重和1，2，3，4，5或6的长度权重来测定。非限制性参数组(及除非另外说明应当使用的)包括具有12的空位罚分，4的间隔延伸罚分，及5的移码空位罚分blossum62评分矩阵。在一些实施方式中，氨基酸或核苷酸序列之间的百分率同一性或相似性可通过使用已合入align程序(2.0版)的e.meyers和w.miller算法(1989,cabios,4：11～17)，使用pam120加权残基表，12的间隔长度罚分和4的空位罚分来测定。本文所述的核酸和蛋白序列可用作“查询序列”以针对公共数据库实施搜索，例如，鉴定其他家族成员或相关的序列。该搜索可通过使用altschul，等人，(1990,j.mol.biol,215:403-10)的nblast和xblast程序(2.0版)来实施。blast核苷酸搜索可用nblast程序，分值＝100，字长＝12实施以获得与本发明的53010核酸分子同源的核苷酸序列。blast蛋白搜索可用xblast程序，分值＝50，字长＝3实施以获得与本发明的53010蛋白分子同源的氨基酸序列。为了获得比较目的的空位的比对，可如描述于altschul等人，(1997,nucleicacidsres,25:3389-3402)利用空位blast。当利用blast和空位blast程序时，可使用相应程序(例如,xblast和nblast)的默认参数。参照萤光素酶多肽的变体可通过筛选萤光素酶多肽的突变体，例如，截短突变体的组合库来鉴定。萤光素酶编码序列的库或片段例如，n末端，c末端或内部片段可用于产生用于参照萤光素酶变体的筛选及随后选择的片段的杂色的群。筛选由点突变或截短制造的组合库的基因产物，及筛选具有选择的性质的基因产物的cdna库的方法为本领域所知。该方法可适应于由萤光素酶多肽的组合的诱变产生的基因库的快速筛选。本发明的萤光素酶多肽可由本领域技术人员知道的任何适合的方法制备。例如，萤光素酶多肽可由任何方便的方法诸如通过自萤光素酶-产生生物纯化多肽来产生。纯化方法包括尺寸排阻，亲和性或离子交换层析/分离。例如由sds-聚丙烯酰胺电泳或以层析方式诸如由高效液相层析(hplc)测定衍生的萤光素酶的同一在和纯度。或者，萤光素酶多肽可由化学合成法合成，例如，使用溶液合成或固相合成，例如描述于atherton和shephard的第9章(见上)及roberge等人，(1995,科学,269：202)。在一些实施方式中，萤光素酶多肽由重组技术制备。例如，本发明的萤光素酶多肽可由包括下列步骤的过程制备：(a)制备包含编码萤光素酶多肽的及可操作地连接于调控元件的多核苷酸序列的构建体；(b)将构建体导入宿主细胞；(c)培养宿主细胞以表达多核苷酸序列由此产生编码的萤光素酶多肽；及(d)自宿主细胞分离萤光素酶多肽。在例证性例中，核苷酸序列编码seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477，479，481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787，或其变体所示的序列的至少有生物学活性的部分。重组萤光素酶多肽可通过使用描述于例如sambrook，等人，(1989,见上)，尤其是16和17部分；ausubel等人，(1994,见上)，尤其是第10和16章；及coligan等人，currentprotocolsinproteinscience(johnwiley&sons,inc.1995-1997)，尤其是第1，5和6章的标准流程便利地制备。编码本发明的萤光素酶多肽的例示核苷酸序列包括全长萤光素酶基因以及萤光素酶基因的全长或基本上全长核苷酸序列的部分或它们的转录物或这些转录物的dna拷贝。萤光素酶核苷酸序列的部分可编码保留天然多肽的生物学活性的多肽部分或段。编码萤光素酶多肽的生物学活性片段的部分萤光素酶核苷酸序列可编码至少约40，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，105，110，115，120，125，130，135，140，145，150，155，160，165，170，175，180，185，190，195，200或更多连续的氨基酸残基，或几乎达全长萤光素酶多肽中存在的氨基酸总数。本发明也涵盖萤光素酶核苷酸序列的变体。核酸变体可为天然存在的，诸如等位基因变体(相同的座位)，同源物(不同座位)，及直系同原物(不同生物)或可为非天然存在的。天然存在的核酸变体(也在本文称为多核苷酸变体)诸如这些可使用熟知的分子生物学技术，例如本领域知道的聚合酶链反应(pcr)和杂交技术鉴定。非-天然存在的多核苷酸变体可由诱变技术制造，包括应用于多核苷酸，细胞或生物的那些。变体可含有核苷酸取代，缺失，逆转和插入。变异可在编码和非-编码区中的一方或两方中发生。变异可产生保守性和非-保守性氨基酸取代(如在编码的产物中比较)。对于核苷酸序列，保守性变体包括因为遗传密码的简并性，编码参照萤光素酶多肽的氨基酸序列的那些序列。变体核苷酸序列也包括合成来源的核苷酸序列，诸如，例如，通过使用定点诱变但仍编码萤光素酶多肽产生的那些。一般而言，特定萤光素酶核苷酸序列的变体会与该特定核苷酸序列具有至少约40％，45％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更高序列同一性，如由在本文别处描述的序列比对程序使用默认参数测定的。在一些实施方式中，萤光素酶核苷酸序列与选自seqidno:11，13，15，17，19，21，23，25，27，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477，479，481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787中的任何一个，或它们的补体的核苷酸序列显示至少约40％，45％，50％，51％，52％，53％，54％，55％，56％，57％，58％，59％，60％，61％，62％，63％，64％，65％，66％，67％，68％，69％，70％，71％，72％，73％，74％，75％，76％，77％，78％，79％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更高序列同一性。萤光素酶核苷酸序列可用于自其他生物，特别其他挠足虫分离对应序列和等位基因。方法是本领域为核酸序列杂交容易可利用的。自其他生物的编码序列可根据熟知的技术基于它们与本文所述的编码序列的序列同一性分离。在这些技术中，将知道的编码序列的全部或部分用作与存在于自选择的生物(例如,挠足虫)的一群克隆的基因组dna片段或cdna片段(即,基因组或cdna库)的其他萤光素酶-编码序列选择性地杂交的探针。因此，本发明也涵盖与参照萤光素酶核苷酸序列，或它们的补体，(例如,seqidno:11,13,15,17,19,21,23,25,27,29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，51，53，55，57，59，61，63，65，67，69，71，73，75，77，79，81，135，137，139，141，143，145，147，149，151，153，155，157，159，161，173，175，177，179，181，183，185，187，189，191，193，195，197，199，201，203，205，207，209，211，213，215，217，219，221，223，225，227，229，231，233，235，237，239，241，243，245，247，249，251，253，255，257，259，261，263，265，267，269，271，273，275，277，279，281，283，285，287，289，291，293，295，297，299，301，303，305，307，309，311，313，315，317，319，321，323，325，327，329，331，333，335，337，339，341，343，345，347，349，351，353，355，357，359，361，363，365，367，369，371，373，375，377，379，381，383，385，387，389，391，393，395，397，399，401，403，405，407，409，411，413，415，417，419，421，423，425，427，429，431，433，435，437，439，441，443，445，447，449，451，453，455，457，459，461，463，465，467，469，471，473，475，477，479，481，483，485，487，489，491，493，495，497，499，501，503，505，507，509，511，513，515，517，519，521，523，525，527，529，531，533，535，537，539，541，543，545，547，549，551，553，555，557，559，561，563，565，567，569，571，573，575，577，579，581，583，585，587，589，591，593，595，597，599，601，603，605，607，609，611，613，615，617，619，621，623，625，627，629，631，633，635，637，639，641，643，645，647，649，651，653，655，657，659，661，663，665，667，669，671，673，675，677，679，681，683，685，687，689，691，693，695，697，699，701，703，705，707，709，711，713，715，717，719，721，723，725，727，729，731，733，735，737，739，741，743，745，747，749，751，753，755，757，759，761，763，765，767，769，781，783，785或787，或它们的补体)在以下描述的严格度条件下杂交的多核苷酸。如本文所用，术语“在低严格度,中等严格度,高严格度或非常高严格度条件下杂交”描述用于杂交及洗涤的条件。用于实施杂交反应的指南可见于ausubel等人，(1998,见上)，第6.3.1-6.3.6部分。水性和非-水性方法描述于该参考文献及均可使用。参考本文是低严格度条件包括至少约1％v/v～至少约15％v/v甲酰胺及至少约1m～至少约2m盐用于于42℃杂交，及至少约1m～至少约2m盐用于于42℃洗涤。低严格度条件也可包括1％牛血清白蛋白(bsa)，1mmedta，0.5mnahpo4(ph7.2)，于65℃杂交，及(i)2×ssc，0.1％sds；或(ii)0.5％bsa，1mmedta，40mmnahpo4(ph7.2)，5％sds用于于室温洗涤。低严格度条件的一实施方式包括在6×氯化钠/柠檬酸钠(ssc)在约45℃杂交，之后是在0.2×ssc，0.1％sds至少于50℃(对于低严格度条件洗涤温度可增加至55℃)洗涤2次。中等严格度条件包括为于42℃杂交的至少约16％v/v～至少约30％v/v甲酰胺及至少约0.5m～至少约0.9m盐，及为于55℃洗涤的至少约0.1m～至少约0.2m盐。中等严格度条件也可包括为于65℃杂交的1％牛血清白蛋白(bsa)，1mmedta，0.5mnahpo4(ph7.2)，7％sds，及为于60～65℃洗涤的(i)2×ssc，0.1％sds；或(ii)0.5％bsa，1mmedta，40mmnahpo4(ph7.2)，5％sds。中等严格度条件的一实施方式包括在6×ssc中于约45℃杂交，之后是在0.2×ssc，0.1％sds中于60℃一次或更多次洗涤。高严格度条件包括为于42℃杂交的至少约31％v/v～至少约50％v/v甲酰胺及约0.01m～约0.15m盐，及为于55℃洗涤的约0.01m～约0.02m盐。高严格度条件也可包括为于65℃杂交的1％bsa，1mmedta，0.5mnahpo4(ph7.2)，7％sds，及为于超过65℃的温度洗涤的(i)0.2×ssc，0.1％sds；或(ii)0.5％bsa，1mmedta，40mmnahpo4(ph7.2)，1％sds。高严格度条件的一实施方式包括在6×ssc中于约45℃杂交，之后是在0.2×ssc，0.1％sds中于65℃一次或更多次洗涤。在特定实施方式中，萤光素酶多肽由与公开的核苷酸序列在非常高严格度条件下杂交的多核苷酸编码。非常高严格度条件的一实施方式包括在0.5m磷酸钠，7％sds中于65℃杂交，之后是在0.2×ssc，1％sds中于65℃一次或更多次洗涤。其他严格度条件为本领域所熟知和熟练的收件人会识别可操作各种因素来优化杂交的特异性。最终洗涤的严格度的优化可用于确保高程度的杂交。作为详细例，见ausubel等人，见上第2.10.1～2.10.16页和sambrook等人(1989,见上)第1.101～1.104部分。而严格洗涤一般在约42℃～68℃的温度进行，本领域技术人员会同意其他温度可适宜于严格条件。最大杂交速度一般发生在低于用于dna-dna杂交体形成的tm约20℃～25℃。本领域熟知，tm是熔解温度，或2个互补多核苷酸序列解离的温度。估计tm的方法为本领域所熟知(见ausubel等人,见上在第2.10.8页)。一般而言，dna的完美匹配的双联体的tm可如由式逼近预测：tm＝81.5+16.6(log10m)+0.41(％g+c)-0.63(％甲酰胺)-(600/长度)其中：m是na+浓度，优选在0.01m～0.4m范围内；％g+c是作为碱总数的百分率的鸟苷和胞嘧啶碱的和，在30％和75％g+c之间的范围之内；％甲酰胺是体积百分率甲酰胺浓度；长度是dna双联体中碱基对数。随机错配的碱基对数每增加1％，则双联dna的tm减小大致1℃。对于高严格度，洗涤通常在tm-15℃进行，或对于中等严格度，在tm-30℃进行。在杂交过程的一例中，含有固定的dna的膜(例如,硝酸纤维素膜或尼龙膜)在含有标记的探针的杂交缓冲剂(50％去离子化的甲酰胺,5×ssc,5×denhardt氏溶液(0.1％ficoll,0.1％聚乙烯吡咯烷酮和0.1％牛血清白蛋白)，0.1％sds和200mg/ml变性的鲑鱼精子dna)中于42℃杂交过夜。然后使膜经历2次连续中等严格度洗涤(即,2×ssc,0.1％sds于45℃经15min,之后是2×ssc,0.1％sds于50℃经15min)，之后是2次连续更高严格度洗涤(即，0.2×ssc，0.1％sds于55℃经12min之后是0.2×ssc和0.1％sds溶液于65～68℃经12min。【4.嵌合构建体】本发明还涵盖包含可操作地连接于调控序列的编码本发明的萤光素酶的核酸序列的嵌合构建体。调控序列适宜地包含转录和/或翻译控制序列，其会对在目标生物或该生物的细胞中表达相容。一般而言，转录和翻译调控控制序列包括，但不限于，启动子序列，5’非-编码区，用于转录调控蛋白或翻译调控蛋白的顺式-调控区诸如功能结合位点，上游开放阅读框，核糖体-结合序列，转录起始位点，翻译起始位点，和/或编码前导序列的核苷酸序列，终止密码子，翻译停止位点和3’非-翻译的区。本发明涵盖本领域知道的组成性或诱导型启动子。启动子可为天然存在的启动子，或组合多于一种启动子的元件的杂交体启动子。由本发明可涵盖的启动子序列为对于目标生物是天然的是或可源于替代性的来源，其中区在选择的生物中发挥功能。依赖于旨在的宿主或细胞或组织类型而启动子的选择会不同。例如，可用于在哺乳动物中表达的启动子包括可响应重金属诸如镉诱导的金属硫蛋白启动子，β-肌动蛋白启动子以及病毒启动子诸如sv40大t抗原启动子，人巨细胞病毒(cmv)立即早期(ie)启动子，rous肉瘤病毒ltr启动子，小鼠乳腺肿瘤病毒ltr启动子，腺病毒主要晚期启动子(admlp)，单纯疱疹病毒启动子，及hpv启动子，特别hpv上游调控区(urr)，其中。全部这些启动子良好描述及在本领域容易可利用。增强子元件也可在本文用来增加哺乳动物构建体的表达水平。例包括sv40早期基因增强子，例如描述于dijkema等人(1985,emboj.4:761)，源于rous肉瘤病毒的长末端重复子(ltr)的增强子/启动子，例如描述于gorman等人，(1982,proc.natl.acad.sci.usa79:6777)和源于人cmv的元件，例如描述于boshart等人(1985,细胞41:521)，诸如cmv内含子a序列中包括的元件。嵌合构建体也可包含3’非-翻译的序列。3’非-翻译的序列指称包含含有多聚腺苷酸化信号和能实现mrna处理或基因表达的任何其他调控信号的dna段的基因的部分。多聚腺苷酸化信号表征通过聚腺苷酸段添加到mrna前体的3’端来实现。多聚腺苷酸化信号通常由与规范形式5’aataaa-3’同源性的存在识别，尽管变异不是不常见的。除了多聚腺苷酸化信号和能实现mrna处理或基因表达的任何其他调控信号之外，3’非-翻译的调控dna序列优选包括约50～1,000nt和可含有转录和翻译终止序列。在一些实施方式中，嵌合构建体还含有允许选择含有构建体的细胞的可选择的标记物基因。选择基因为本领域所熟知和会对于目标细胞中表达是相容的。但是，需知，现在熟知异源系统中编码蛋白的多核苷酸的表达，及本发明不针对或依赖于任何特定载体，转录控制序列或用于表达多核苷酸的技术。相反，根据本文所述的方法制备的嵌合构建体可以任何适合的方式以任何适合的构建体或载体形式导入宿主细胞或动物，及萤光素酶编码序列可用知道的转录调控元件以任何常规方式表达。嵌合构建体的编码萤光素酶的部分可包含已通过使用重组技术加工的天然存在的序列或其变体。在变体的一例中，将萤光素酶编码序列的密码子组成修饰为允许在选择的宿主细胞或组织中使用本领域知道的标准方法萤光素酶的增强的表达。例如，萤光素酶编码序列可修饰为导入相对于另一生物，例如，远缘相关的生物在一生物中更频繁地采用的密码子。替代性地或此外，编码序列可修饰为添加或修饰kozak序列和/或内含子，和/或移出不期望的序列，例如，潜在转录因子结合位点。该优化的序列可在导入宿主细胞时产生增强的表达，例如，增加的蛋白表达水平。用于本发明的实践的非限制性宿主细胞包括原核生物细胞(例如,细菌)和真核生物细胞(例如,植物,酵母,蠕虫,昆虫或哺乳动物细胞)。在特定实施方式中，宿主细胞是哺乳动物细胞，特别灵长类动物，人和可相关于任何目标动物，包括但不限于家畜，诸如马，牛，鼠，绵羊，狗，猫，等。这些中物种，可使用各种类型或细胞，诸如造血，神经，间叶，皮肤，粘膜，间质，肌肉脾脏，网状内皮，上皮，内皮，肝脏，肾，胃肠，肺部等。而且，在另一实施方式中，细胞是干细胞和祖先，诸如造血神经，间质，肌肉，肝脏，肺部，胃肠，等。【5.融合蛋白】本发明也涵盖融合到异源蛋白性部分的对象修饰的萤光素酶多肽，或其片段的融合蛋白，其非限制性例包括降解序列(例如,萤光素酶多肽的氨基-端的去稳定化氨基酸,pest序列或泛素或其生物学活性片段,用于降低修饰的萤光素酶多肽的半衰期,尤其用作用于药物发现的转录报告子)，信号肽(例如,将萤光素酶多肽或其片段分泌到细胞外位置的,等)，细胞内定位信号诸如核定位信号，膜定位信号，细胞质定位信号，线粒体定位信号，内质网(er)定位信号或跨膜定位信号。融合蛋白可包含受试萤光素酶，或其片段，及在本发明的修饰的萤光素酶多肽的n-端和/或c-端框内融合的异源或非-萤光素酶多肽(例如,“融合偶体”)。融合偶体包括，但不限于，可结合特异于融合偶体(例如,表位标签)的抗体的多肽；抗体或其结合片段；提供催化功能或诱导细胞应答的多肽；配体或其受体或模拟物；等。在该融合蛋白中，融合偶体与融合蛋白的修饰的萤光素酶多肽通常不天然地关联，及一般不是挠足虫蛋白或其衍生物/片段，即，其未在挠足亚纲(copepoda)物种中发现。在其他实施方式中，异源部分是可选择的标记物蛋白，其例证性例包括可选择的标记物蛋白诸如但不限于卡那霉素激酶，新霉素磷酸转移酶，氨基糖苷磷酸转移酶，嘌罗霉素n-乙酰转移酶，嘌罗霉素抗性蛋白或其生物学活性片段。此类型的嵌合基因可通过使用标准重组体或合成技术构建，例如描述于美国专利申请公开no.2002/0150912及欧洲专利申请no.1262553。本发明的修饰的萤光素酶也可融合到是发光蛋白的异源部分用于bret应用。该发光蛋白的非限制性例包括但不限于水母荧光素，海蜇荧光素，克林霉素，瓜水母光蛋白或bolinopsin发光蛋白。【6.应用】本文所述的修饰的萤光素酶能在广泛的过程和应用中使用。例如，它们可用于标记，分析或检测生物学分子，细胞或细胞器的方法。在一些实施方式中，受试萤光素酶发现在细胞和分子生物学测定中，包括在细菌和真核生物系统中，尤其在哺乳动物细胞中，在细菌中，在酵母及在植物中作为体内标记物(或报告子分子)使用。在例证性例中，修饰的萤光素酶对于用于“高含量筛选”(hcs)，用于细胞系统，尤其用于受体(例如,受体二聚体,异源二聚体和同源二聚体的检测,包括但不限于g蛋白偶联的受体(gpcr)的检测)，用于离子(例如,ca2+,na+,k+)通道，用于转运子，用于转录因子，用于诱导性系统，用于蛋白酶，用于激酶，用于磷酸二酯酶，用于水解酶，用于肽酶，用于转移酶，用于膜蛋白或用于糖蛋白的单或多(例如,双)报告子系统有用。本发明的修饰的萤光素酶是也作为用于细胞系统组合生物发光或化学发光系统，尤其具有加氧酶，或具有磷酸酶或具有发光蛋白和离子指示物，尤其水母荧光素，海蜇荧光素，克林霉素，瓜水母光蛋白及bolinopsin的系统的报告子分子有用。它们是也作为标记物蛋白有用，包括用于流式细胞分析。在其他实施方式中，本文所述的修饰的萤光素酶适宜于，尤其由抗体，由生物素，由磁或可磁化的支持物固定。本发明的修饰的萤光素酶也发现用作，包括偶联于抗体，偶联于酶，偶联于受体，偶联于离子通道和其他蛋白的标记物，或经偶联介质，包括经生物素，经nhs(n-羟基磺基琥珀酰亚胺)或经cn-br用作标记物。它们也在能量转移系统，尤其fret(荧光共振能量转移)，bret(生物发光共振能量转移)，fet(领域实现晶体管)，fp(荧光偏振)，htrf(均质时间-溶解的荧光)系统中发现实用性。本发明的萤光素酶是也在蛋白互补测定中有用(例如公开于remy&michnick,2006,naturemethods,3(12):977-979andkimetal.,2009,analchem.,81:67-74)及用于分析相互作用，包括蛋白-蛋白相互作用，dna-蛋白相互作用，dna-rna相互作用，rna-rna相互作用和rna-蛋白相互作用(dna:脱氧核糖核酸；rna:核糖核酸)。在其他实施方式中，它们有用作为用于在转基因生物，尤其小鼠，大鼠，仓鼠和其他哺乳动物，在灵长类动物，鱼，蠕虫，植物中表达的标记物或融合蛋白。此外，它们在细菌系统中发现实用性，尤其用于测定滴度，用作生物化学系统的底物，尤其用于蛋白酶和激酶，在微阵列中，在体内和离体生物发光成像，肿瘤研究，成像(例如,体外,体内和离体以及全动物成像)，感染性疾病监测，基因递送监测，基因治疗监测，污染物和生物学疾病标记物的生物传感器，免疫测定(例如,免疫组织化学,蛋白印迹,elisa和原位杂交)，药物测试，药物开发及生物处理中(例如公开于roda等人,2004,trendsinbiotechnology,22(6)：295～303)。修饰的萤光素酶也基于直接或通过偶联的酶反应的atp水平的监测在任何应用中有用，诸如微生物测试；酶，底物和辅因子测定；食品细菌混杂监测；dna探查测定；受体:配体(例如,离子,第二信使和蛋白)相互作用；蛋白印迹及摄影测定(见,例如,l.j.kricka,1988,anal.biochem.,175:14-21)。它们是也基于不用热，火花或火焰提供照明的装置的光发射有用于任何工业/家用/休养/军事生物发光照明/照明应用(例如,cyalumetechnology)。本发明是也有用于任何应用，其中光发射用于制造新颖性物品，例如，制备设计用于招待，消遣和娱乐的物品，包括玩具，个人物品，诸如化妆品，浴粉，身体洗液，凝胶，粉和霜剂，牙膏和其他洁牙剂，肥皂，身体涂料，及气泡浴，喷泉，包括液体“烟火”和是溶液，混合物，悬浮液，粉，糊剂，粒子或其他制剂的组合物的其他该喷剂或喷雾剂或气雾剂，例如描述于美国专利no.6,113,886，6,232,107和6,436,682。本发明是也有用于可用于标记应用或抗-干预应用的任何物质。【7.试剂盒】本发明还提供用于上述应用的试剂盒。试剂盒可为多功能的，如此它们对于多于一种目的或应用有用。试剂盒一般包括本发明的萤光素酶多肽，或适宜地具有用于表达受试多肽的元件的编码本发明的萤光素酶多肽的核酸，例如，构建体诸如包含编码本文定义的萤光素酶多肽的核酸的载体。在一些实施方式中，试剂盒在一容器中包含冷冻干燥的修饰的萤光素酶，而另一容器含有再构成缓冲剂和任选地一种或更多atp酶抑制物(例如,tca,dmsa,ctab,乙醇,等)。试剂盒也可供给萤光素酶底物，诸如荧光素，腔肠素或其类似物或功能衍生物。试剂盒也可供给镁或其他阳离子诸如锰或钙。为了辅助具有知道的浓度的atp的对照实验的使用，诸如在用于定量样品中的atp的试剂盒的实施方式中，具有atp的容器也可供给到该试剂盒中。试剂盒也可供给下列之一种或更多：防止样品中atp量经时增加的化合物(例如,naf)；atp酶抑制物，缓冲剂或二价阳离子(mg2+；mn2+)。或者，或此外，试剂盒可包含下列之任一种或更多：稳定剂，螯合剂或螯合剂，还原剂或细胞-裂解剂(例如,去污剂)。稳定剂的非限制性例包括血清白蛋白，乳清蛋白，卵白蛋白，明胶或thesit。例证性螯合剂选自乙二胺四乙酸(edta)，乙二醇-双(2-氨基乙基醚)-四乙酸(egta)或环己烷-1,2-二胺四乙酸(cdta)。适合的还原剂包括但不限于含有氢硫基的化合物，诸如dttcoa，或非-氢硫基还原剂诸如硫代硫盐或连二亚硫酸盐。在一些实施方式中，试剂盒包含用于进行报告子测定的核酸构建体或载体，其中构建体或载体包含编码本发明的萤光素酶多肽的核苷酸序列。在特定实施方式中，试剂盒包含各编码本文定义的修饰的萤光素酶的多种不同载体，其中载体设计用于在不同环境和/或在不同条件下表达，例如，组成性表达，其中载体包括用于在哺乳动物细胞中表达的强启动子，或具有用于启动子的自定义插入及剪裁的表达的多克隆位点的无启动子载体，等。也存在于试剂盒中的可为特异于提供的萤光素酶多肽的抗体。试剂盒的不同组分可包装进独立容器及在使用之前混合。不同组分可包含这些部分的子集和可以辅助本发明的应用或延长储存寿命的任何方式组合。在多数实例中，试剂盒含有用于在例如以上描述的任何适合的应用中使用本发明的修饰的萤光素酶的使用说明小册子。为了本发明可容易明白及投入实践效应，现在通过以下非限制性例的方式描述特定优选的实施方式。【实施例】【实施例1】【部分i：家族的知道的萤光素酶】图1显示对应于知道的挠足虫萤光素酶的氨基酸序列，包括野生型和突变体序列的比对。全部全长野生型萤光素酶以它们的天然形式分泌和它们的信号肽端是以灰色凸显的分泌-增强序列的立即上游。保守的半胱氨酸c1至c10以黄色凸显。这些指示半胱氨酸全部在折叠的蛋白中形成二硫键及对于萤光素酶活性重要。保守的pgkk基序加下划线。发明人注意到自向前的保守的pgkk基序的这些家族成员之间的高程度的同源性。因此它们使用clustalw2程序之内的blosum算法此多肽(及信号肽)部分。信号肽和保守的pgkk基序(今后命名为“前导序列肽”)之间的区在家族成员之中显示显著的发散及对齐比对于图1。图1也显示家族的知道的突变萤光素酶的氨基酸序列。在这些中，仅3是[非-分泌的/细胞内]。这些之一是由prolume描述的内质网-保留的gaussia萤光素酶，其包含c-端er-保留信号kdel。其他2种是描述于wo/2008/049160的细胞内gaussia萤光素酶(gsinga)和细胞内长腹水蚤(metridialonga)(ml164)萤光素酶，其缺乏信号肽和也包含融合到它们的c-端的pest序列(未示于图)。氨基酸序列(自向前pgkk)比较及结果显示为氨基酸同一性表(表4)。这些数据揭示，家族包含2个亚-家族。亚-家族1包括ml45，ml39，ml7，ml16，ml52，ml164，mlal和mp1。亚-家族2包括ml22，mp2a，mp2b和ga。表4pgkk->停止为实验分析，起初选择亚-家族1的3个成员(ml45,ml39和mp1)和亚-家族2的2个成员(mp2a和ml22)。【实施例2】【部分ii：萤光素酶的细胞内表达】尽管这些萤光素酶的分泌型被报道相比萤火虫或肾海鳃属(renilla)萤光素酶提供更高灵敏度，由于分泌的萤光素酶在培养基中蓄积，由此在目标在测量基因表达的时间变化的报告子研究中不理想。因此，本发明人寻求定量及比较它们作为细胞内萤光素酶的性能。为此，它们构建了包含各5中选择的萤光素酶的人源化的编码序列的表达质粒，其中信号肽被删除。加工这些构建体编码的多肽，以及限制酶(re)位点用于它们的随后操作。为了确保与酶促活性相关的活性而非简单蛋白或mrna半衰期的任何差异，发明人使用了genestream的prr-29.3plasmids，其包含有力的rna去稳定化元件及融合到萤光素酶蛋白的c-端，用于蛋白去稳定的有力的pest结构域。表达由ef1-α启动子驱动。得到的质粒瞬时转染进hela细胞。包括之前描述的gsinga萤光素酶(例如,如公开于wo2008/049160)作为比较。作为转染对照，发明人共转染了利用荧光素作为底物的ef1-α驱动的合成橙萤光素酶(sol)萤光素酶。在转染之后24小时裂解细胞和将等份转移到96-孔板及于室温使用双-萤光素酶检定试剂盒(例如,如公开于wo2002/072844)检定。闪光发光通过使用victor光光度计(perkinelmer)测量和数据是就sol活性标准化的数据。表5显示细胞内ml45(iml45)，ml39(iml39)，mp1v1(imp1v1)，mp2a(imp2a)，ml22(iml22)和gsinga萤光素酶的相对活性。意外地，数据显示相比知道的gsinga萤光素酶，全部新细胞内萤光素酶突变体的非常低活性，指示信号肽的简单移出不足以创建具有充足的性能水平的此萤光素酶家族的非-gaussia成员的细胞内突变体。表5dlagsinga1264.1imp1v166.0imp2a40.1iml2211.6iml3930.6iml4544.9【实施例3】【部分iii：优化新细胞内萤光素酶的n-端(前导序列)序列】显示于图1的野生型萤光素酶的分析揭示，家族之内的最高度可变区位于信号肽下游和位于我们的加工的xmai位点的保守的pgkk序列上游。此区指定为“前导序列”(也在本文称为“分泌-增强子序列”)和推测此区可贡献于不同家族成员的改变的性能。像这样，发明人测试了在各不同合成前导序列经ncoi和xmai位点取代的性能效应。使用渐进地变短的前导序列，发明人意外地发现此前导序列的大部分对于有活性的萤光素酶的细胞内定位非-必要。例如，发明人创建了编码各5种测试萤光素酶的截短的突变体的质粒，其中野生型前导序列被非常短合成前导序列取代，其被指定为“dad”(mgsdadrgkm；其中第1个m是起始密码子和第2个m是保守的pgkk基序的立即上游)。将这些质粒和它们的全长(fl)对应物瞬时转染进hela细胞和如在实施例2/表5中描述定量萤光素酶活性。数据示于表6a。表6adlaimp1v1iml45iml22imp2aiml39gadad31.7364.0212.3022.1014.44fl18.0810.031.729.567.18519.64示于表6a的结果显示用dad前导序列取代野生型前导序列的改善全部5种萤光素酶的信号强度。接下来，发明人如下测试了温度对这些萤光素酶的效应：将20μl等份的裂解物转移到96-孔板和与60μl的flash&辉光测定缓冲剂(f&g)(genestreamptyltd,australia)手动混合以起始辉光反应。10分钟后，于室温(rt)测量发光。板然后转移到设置为8℃的冰箱和放置15min以冷却，之后快速转移用于第2测量的回光度计。同时检定两份板及于室温保持用于发光信号标准化。数据表示为发光的百分率变化；即，(8℃板-rt板)/rt板；及显示于表6b。表6b8℃imp1v1iml45iml22imp2aiml39dad645％246％656％868％999％fl670％370％986％973％1239％表6b显示，全部5种全长萤光素酶在更冷的温度产生更强得多发光信号。意外地，在全部情况中截短的前导序列减少了此变化的量值。接下来，本发明人研究了dad前导序列肽之内的氨基酸的重要性。为了测定，是否这些氨基酸之任何是必要的，它们构建了及测试了(按照实施例3/表6)dad前导序列肽的多种突变变体，在imp1v1的情景中，其中取代或删除(m)gsdadrgkm肽内的一个或更多氨基酸。一种该突变体是(m)nsdadrgkm，其代表存在于该mp1v1区的天然肽。由此，此构建体代表无任何氨基酸取代的简单截短。其指定为mp1-d。测试的另一突变体是(m)nsdadrgkl，其仅经用l取代最后的m而不同于对应天然序列inimp1v1。其指定为mp1-dl。表7a显示这些突变体的性能。相对于全长mp1(mp1-fl)，缺失突变体(mp1-d)在双萤光素酶测定(dla)中显示增强的信号和温度变化的减少的效应。意外地，mp1-dl的两个参数显示非常实质性改善，不仅相对于全长对照而且相对于mp1-d，其是同一构建体，除了m→l取代之外。此单氨基酸变化导至发光的6倍增强和大大减少的温度效应(比较mp1-dl和mp1-d)。的确，此突变体的于8℃的阴性值提示，其最佳温度已上移至相比8℃更接近于rt的水平。表7adla8℃mp1-fl10.5459.6％mp1-d15.4390.2％mp1-dl92.2-8.8％这些数据显示，改善的性能可经a)删除nsdadrgkm的mp1上游区和b)在位于保守的pgkk的立即上游用l取代m来达到。为了测定是否家族的其他成员中的对应突变提供类似益处，发明人选择的其他亚-家族的成员；iml22。在iml22中，对应区是dvdanrgghggh。像这样，它们创建了iml22(ml22d)缺失构建体，其包含以下截短的前导序列；[(m)dvdanrgghggh-pgkk…]。显著地，iml22和imp2a在imp1v1的km位点包含ghggh。因此，为测试iml22中“l”突变的益处，它们创建了缺失加l构建体，其中ghggh转化为kl；(ml22dl1)；(m)dvdanrgkl-pgkk…]。相比全长细胞内对照[iml22]测试这些构建体二者，如描述于实施例2/表5中。表7b中显示的数据展示，对应突变也受益于iml22。表7bdla8℃ml22-fl1.22705％ml22-d4.42593％ml22-dl86.1240％接下来，发明人构建及测试了其他家族成员的对应突变；即ml39，mp2a和ml45。对于这些实验，它们也包括包含“l”突变，无截短(ml39-l,mp2a-l和ml45-l)的突变体。闪光发光也通过使用dla和f&g试剂盒(彼此组成大大不同)测量以便确认突变萤光素酶改善的信号强度未局限于任何一种测定缓冲系统。表7c～e显示，对于测试的各家族成员，经单独缺失或单独“l”获得显著益处。此益处表现为改善的信号强度(在两测定缓冲剂中)和也表现为温度效应中的移位。此外，数据显示还受益于组合突变。表7cf&gdla8℃ml39-fl32.04.0981％ml39-d72.011.7673％ml39-l172.330.497％ml39-dl304.479.24％表7df&gdla8℃mp2a-fl9.34.61450％mp2a-d27.112.4872％mp2a-l114.384.1451％mp2a-dl133.8108.9269％表7e(闪光)f&gdla8℃ml45-fl24.38.9374％ml45-d82.846.8225％ml45-l99.951.813％ml45-dl404.4278.6-34％如上所述，iml22和imp2a在其他长腹水蚤属(metridia)萤光素酶的km处包含ghggh；及表7b和7d显示的构建体ml22-dl，mp2a-l和mp2a-dl包含用kl取代天然ghggh。为了测定是否简单用最后h取代l足以赋予优势，发明人构建了这些萤光素酶的非-删除的突变体，其中ghggh转化为ghggl(mp2a-l2和ml22-l2)及如描述于表6测试它们。表8a显示，此单氨基酸变化足以改善这些萤光素酶的性能。表8af&gdla8℃mp2a-fl24.013.9978％mp2a-l2317.2330.1370％ml22-fl10.93.03325％ml22-l2276.7132.7413％也在mp1分泌型中测试m→l取代的效应。为此实验，当然，检定条件培养基而非裂解物。表8b显示，此m→l取代也给分泌的萤光素酶提供显著的益处。表8bdlaf&g8℃wtsmp11,8612,928-61.5％m->l5,1595,064-85.7％【实施例4】【部分iv：新细胞内萤光素酶中c6的优化情景】在对其他有益突变延伸的搜索/筛选期间，本发明人将氨基酸侧接第6半胱氨酸(c6)鉴定为性能的重要决定子。此区之内，野生型萤光素酶具有以下亚序列：lcvd，lcad，rctd，rcas，rcts，lcat和lced(见图1)。作为这些研究的起点，使用包含上述截短的前导序列和m->l突变的突变mp1v1构建体。发明人利用加工的xmai，bsrgi，sali，agei和hindiii限制酶(re)位点以创建此构建体与其他家族成员的部分的嵌合体，然后如描述于实施例2/表5中测试性能。一种嵌合体(指定为χ5)，显示改善的性能。此构建体包含iml45的sali-agei片段，其包括c6区及导致c6情景自lcad向rcas的变化。为了测定是否rcas负责改善；及也为筛选经对此区的其他改变的进一步改善，发明人构建及测试了在此区包含各种不同氨基酸序列的χ5突变体，如示于下表9a～9c。表9adlaf&g10m8℃lc6ad116.5577.0195.174.4％lc6as84.0455.5197.782.0％lc6vd69.5360.0185.8105.1％rc6ad329.0>1000.5595.642.1％rc6td193.5869.0356.5111.6％rc6ts156.0745.0282.2138.7％rc6as220.0793.0445.682.0％表9bdlaf&g10m8cqc6sd26539969207.2％qc6ad389.1551.5115.382.9％hc6ad293.0502.258.9197.5％kc6ad419.4749.5139.068.0％rc6ad367.2711.2153.724.8％rc6ed444.2791.0160.722.9％rc6hd231.4482.4102.091.3％表9cdlaf&g10m8℃rc6ae26273096120％rc6ad329853138106％示于表9a的数据显示以下信息：rcas负责改善见于χ5；比较rcas与lcad。第1位置的r优于l；例如比较rcas与lcas和rcad与lcad。第3位置的a优于v，t或s；例如，比较rcad与rctd和lcad与lcvd和qcad与qcsd。第4位置的d优于s；例如，比较rcad与rcas最佳序列是rcad；比较rcad与全部其他。示于表9b的数据显示以下信息：在第1位置，r，k，q和(在更少程度)h是全部可接受的，其中它们提供相比l更佳信号强度；比较表9b中的kcad，qcad和hcad与rcad及比较此差异与表9a中rcad和lcad之间的更大差异。但是，关于温度效应，见到显著的差异；r于8℃显示最小的增加，之后是k，然后q然后h。在第3位置，e与(或好于)a同样好，而h是明显在下；比较rced，rchd和rcad。示于表9c的数据显示以下信息：在第4位置，e提供良好性能；比较rcae和rcad及比较此差异与表9a中rcad和rcas之间的更大差异。组合的数据显示，改善的性能可通过转变c6区为以下肽式来达到；r/k/q/h---c---a/e---d/e，其未含在任何知道的萤光素酶内。随后寻求确认相同的突变给其他亚家族的成员提供益处。因此，发明人创建及测试了imp2a和iml22的突变体(如描述于实施例2)其中c6肽突变为rcad。对应野生型萤光素酶序列的对应亚序列在imp2a中是lcvd和在iml22中是lced。表10a和10b显示，此突变的确改善这些萤光素酶的性能。表10adlaf&g10m8℃iml22lc6ed(wt)2.273.800.133950.7％rc6ad3.8013.020.363839.8％表10b101005dlaf&g10m8℃imp2alc6vd(wt)8.097.920.122342.0％rc6ad36.8048.430.581271.3％此外，本发明人测试了在分泌的萤光素酶的情景中c6突变的益处。为此实验，它们利用了具有如描述于表8b的m→l取代的分泌的mp1v1(smp1v1)萤光素酶。得到的数据显示于表1℃，展示此突变的确给其分泌的形式的萤光素酶提供益处。表10c【实施例5】【部分v：优化新细胞内萤光素酶中c9的情景】发明人也在侧接第9半胱氨酸(c9)的氨基酸之内搜索有益突变。在此区之内，野生型萤光素酶具有以下亚序列：kcsa，kcse，qcsd，hcsd和hcsa。作为这些研究的起点，使用包含rc6ad，上述截短的前导序列和m→l突变的突变体imp1v1构建体。数据显示于表11。表11adlaf&g10m8℃kc9ae319920151％kc9sd15752094116％kc9se14437571101％rc9ad101921114％rc9ae14343394％rc9se943074281％kc9sa13235058146％表11bdlaf&g10m8℃qc9ad31485697％qc9sd252612101175％rc9ad45667635％kc9sd26677213886％示于表11的数据显示以下信息：第1位置的k优于r或q；例如，比较表11a中kcse和rcse和kcae和rcae；及表11b中kcsd和qcsd。第3位置的s优于a；例如，比较表11a中的kcse和kcae和表11b中的qcsd和qcad。第4位置的d优于a或e；例如，比较表11a中的kcsd与kcsa和kcse最佳序列是kcsd；比较kcsd和全部其他。组合的数据显示，改善的性能可通过转变c9区为任何知道的萤光素酶中未含有的kcsd来获得。接下来，寻求确认相同的修饰给其他亚家族成员提供益处。因此，创建及测试imp2a和iml22的突变体(如描述于实施例2)，其中c9肽突变为kcsd。野生型萤光素酶的对应肽在imp2a中是hcsa和在iml22中是hcsd。由此，iml22突变也用于比较第1位置k和h。表12显示，此突变的确改善这些萤光素酶的性能。此外，数据显示，第1位置的k优于h；比较表12a中的iml22-kcsd与iml22-hcsd。表12adlaab910m8℃iml22hc9sd(wt)2.273.800.133950.7％kc9sd7.2818.850.363104.1％表12bdlaab910m8℃imp2ahc9sa(wt)8.097.920.122342.0％kc9sd28.0748.440.481898.3％【实施例6】【部分vi：优化新细胞内萤光素酶内c5的情景】本发明人也在侧接第5半胱氨酸(c5)的氨基酸之内搜索有益突变。此区野生型萤光素酶之内具有以下亚序列：rchd，rcht和rchs。作为这些研究的起点，使用包含截短的前导序列，m→l突变，及上述rc6ad的突变体imp1v1构建体。数据示于表13a。表13adlaf&g10m8℃rc5hd1,028974173116％rc5ad1,6851,67120019％此外，作为起点，它们使用包含相同的突变而且包含上述kc9sd的突变体imp1v1构建体。数据示于表13b。表13bdlaf&g10m8℃rc5hd13141387268104％rc5ad1738195928725％显示于表13的数据展示自h至a的单氨基酸变化足以提供基本上改善的性能。考虑到此位置的天然h在全部野生型萤光素酶之中保守，此是特别惊人的。然而亚-家族1的全部成员包含rc5hd，亚家族2的成员包含rcht(gaussia)或rchs(mp2a和ml22)。发明人构建了mp2a-l2突变体，其中天然rchs转化为rcas，rcat或rcad；及如上述测试它们。数据显示于表13c。表13cdlaf&g10m8℃rc5hs53.061.40.68416％rc5as102.187.00.72230％rc5at96.5138.31.02201％rc5ad75.069.80.76301％示于表13c的数据展示自h至a的单氨基酸变化也足以提供此萤光素酶的基本上改善的性能。此外，全部3种置换(rcas,rcat和rcad)提供性能益处。【实施例7】【部分vii：n-端(前导序列)序列的进一步优化】在测试的许多合成前导序列之中，一种实施的非常好的是eaeaergkl。发明人将此前导序列和其各种突变克隆进描述于表13b的rc5ad构建体[即，具有rc5ad，rc6ad和kc9sd的突变体imp1v1]及如描述于实施例2～6中测试它们的性能。数据显示于表14。表14a显示前导序列的进一步截短的性能效应。甚至最长截短，其全部延伸至关键l(构建体＝m-l-pgkk…)产生功能萤光素酶；包括位于此残基立即上游的2-6氨基酸尽管达到更佳性能。表14b包括这些相同的缺失构建体的一些以及包含氨基酸取代的构建体。显著地，关键“l”至v的突变，或甚至更保守性变化至i，导致性能非常实质性降低。的确，这些突变体的性能相比最长截短(至单独l)的更差。包括关键l的氨基酸上游(例如,ergk)改善性能，尽管其他突变体推荐此基序之内的r和k可耐受取代(例如,r→a和k→g)。表14c显示对关键l的其他取代的效应。当此l用a，f，h，p或t取代时，见到非常实质性的性能降低。表14adlaf&g10m8℃eaeaergkl494747195-57.3％aeaergkl508711190-62.5％eaerkgl438636181-62.2％ergkl361530156-60.8％gkl17528589-67.0％l9722264-57.1％表14bdlaf&g10m8℃eaeaergkl704828222-72.0％eaeaergki1002197349.7％eaeaergkv6414452100.6％eaeaerggl748738196-56.3％eaeagkl544721177-61.8％表14cdlaf&g10m8℃eaeaergkl540.91,179.5221.3-68.2％eaeaergka44.1194.960.0129.3％eaeaergkf47.5195.480.383.1％eaeaergkh40.7192.459.0248.7％eaeaergkp56.3283.082.1124.3％eaeaergkt57.5310.886.6127.1％eaeaergky22.4127.639.6265.8％表14ddlaf&g10m8℃32℃m24.984.219.3264.4％-85.1％ml133.9280.276.0-75.1％-54.9％mkl117.4249.763.1-66.0％-47.6％mgkl175.6299.573.5-68.4％-41.1％mrgkl50.5169.640.3-70.0％-44.6％mergkl418.3684.7156.8-64.9％-50.6％mgghggh20.465.217.2244.2％-86.6％mgghggl215.0472.6110.1-56.1％-54.8％mggl89.9203.549.1-56.2％-53.3％【实施例8】【部分viii：优化新细胞内萤光素酶内c10的情景】本发明人也在侧接第10半胱氨酸(c10)的氨基酸之内搜索有益突变。此区之内野生型萤光素酶具有以下肽；drcas，qrcat，srckt和grcas。作为这些研究的起点，使用具有如描述于表14的eaeaergkl前导序列的突变体imp1v1构建体[即，也含有rc5ad，rc6ad，kc9sd]。测试c10周围的各种修饰及一种突变体展示增强的性能。此突变体，在表15a中指定为grc10as[及在表16中指定为克隆21]，在c10上游的第2残基包含d→g取代。数据显示，此取代导致dla的增强的闪光信号，在闪光&辉光(f&g)中稍微降低的闪光信号和于8℃活性显著地，更大损失。此后来的特征提示最佳温度进一步上升至大大高于8℃的水平。因此，实施另外的温度实验，其中板移动至32℃温育器。数据显示，当样品加热至32℃时，d→g突变减少信号损失。表15adlaf&g10m8℃32℃drc10as497.6778.3196.2-74.5％-41.2％grc10as937.5611.9189.2-91.3％-24.3％基于表15a的惊人的结果，本发明人测试了对c10位置上游第2残基的另外的修饰及结果示于表15b和15c。表15bdlaf&g10m8℃32℃drc10as357568147-65.7％-41.3％nrc10as695626153-83.4％-23.9％src10as704584120-81.0％-31.1％arc10as594451141-83.4％-23.9％trc10as671556149-83.8％-19.1％qrc10as587496159-87.2％-23.7％grc10as704474141-88.2％-22.8％grc10at805500158-90.0％-23.4％qrc10at732610185-88.4％-11.8％src10kt38732978-89.3％-24.3％表15cdlaf&g10m8℃32℃drc10as(wt)7581,157238-61.77％-45.80％grc10as952584155-86.12％-32.98％erc10as1,3451,255320-89.59％-26.48％hrc10as1,042907150-60.78％-36.28％krc10as464463152-82.35％-35.19％prc10as26584144.44％-57.92％rrc10as462439147-82.73％-35.39％trc10as939724163-81.59％-24.83％qrc10at891720184-88.77％-16.20％grc10at1,073731202-88.85％-21.32％表15b和表15c中的数据展示性能增强可通过用d取代下列之任何一个获得；g，n，s，a，t，q，e，h，k和r。这些数据也显示，在drc10as基序中用t取代s提供进一步益处。此外，数据显示，src10kt基序(以mp2a和ml22存在)可通过用a取代k改善。接下来，发明人在nsmp2a中构建及测试了类似突变。数据显示于表15d。表15ddlaf&g10m8℃32℃qrc10at94.6190.81.231538.1％-84.5％trca10t32.589.30.981582.1％-83.0％grca10s114.2167.31.191180.5％-85.0％grca10t147.1221.11.81985.9％-81.8％grck10t59.387.40.731467.5％-79.9％srck10t(wt)17.834.40.272025.5％-81.5％表15d展示nsmp2a的性能也可经在src10kt基序中用g取代s来改善以产生grc10kt。进一步用a取代k而产生grc10at提供了另外的益处。接下来，我们测试了nsmp1中c10突变的益处；即不含有其他有益突变的构建体。结果显示于表15e及指示用g取代d在其他突变缺失下也提供显著的益处。表15edlaf&g10m8℃32℃mp1drc10as(wt)102517297.9％-84.9％mp1grc10as116181457.7％-70.4％【实施例9】【部分ix：本发明的合成萤光素酶的比较性性能】为了定量组合上述突变的性能益处，发明人与描述于表15的grc10as克隆一起测试了6种不同全长(wt)细胞内萤光素酶，其指定为克隆21。克隆21包含以下突变：前导序列肽截短和m→l取代(meaeaergkl)rc6adkc9sdrc5adgrc10as数据显示于表16a及展示信号强度的全部量度的大量改善和最佳温度的实质性上升，其导致自rt加温至32℃的大大减少的效应。表16adlaf&g10m8℃32℃ml220.611.700.112731.7％-57.4％mp2a2.613.310.11983.7％-64.9％ml395.3617.855.78737.6％-79.7％ml1641.657.1410.25207.2％-78.4％ml454.7117.6015.50152.2％-76.3％mp17.4030.8211.99388.5％-82.2％ga273.44182.1235.8188.4％-68.2％克隆211,014.19600.81173.52-90.9％-23.1％为了确认这些突变的益处不限于包含pest序列的萤光素酶，将pest序列从克隆21除去和测试及比较了原imp1v1的性能。tablr16b显示，达到显著的益处，甚至在pest序列缺失下。表16bdlaf&g10m8℃32℃mp1无pest55.2173.948.7197.2％-79.0％cl-21无pest2,216.61,201.3231.6-89.7％-20.7％表16c为了定量在定义的测定缓冲系统中这些突变的益处，通过使用在wo2008/049160的实施例28中定义的包含25mmtrisph7.75，0.6mm还原型谷胱甘肽，0.4mm氧化的谷胱甘肽，1mmedta，2mm抗坏血酸盐，24μmcz的v6裂解缓冲剂和测定缓冲剂实施测定。表17显示，关于信号强度和温度效应的这些突变的显著的益处也应用于使用这些试剂的测定。克隆22与克隆21相同，除了其含有grc10at之外。克隆16与克隆21相同，除了其含有drc10as之外。表17dlav610m8℃32℃ml397.014.53.6633.7％-53.8％mp110.624.29.6488.9％-71.4％ml1641.64.16.5243.0％-57.1％ml456.515.111.5236.4％-67.9％ga398.3580.967.632.7％-64.3％cl-16877.71,146.5252.4-20.8％-49.7％cl-211,223.81,066.3281.4-59.0％-33.9％cl-221,180.61,057.7316.9-62.5％-31.2％为了定量在分泌的萤光素酶的情景中这些突变的益处，发明人使用之前对细胞内蛋白描述的相同的方法对分泌型(其缺乏pest序列)实施测定。结果显示于表18a和18b，及确认发明人的发现的益处是可应用于细胞内及分泌的萤光素酶。表18af&g10m8℃32℃sga无pest169.713.549.56％-60.2％sml164无pest17.812.63.14％-66.7％scl-16无pest1,234.334.0-78.17％-24.6％scl-16mp1lls无pest2,075.594.1-78.89％-31.3％表18bdlaf&g10m8℃32℃smp1无pest90322431095-53.7-70.06scl16-mp1llsnopest3,9344,2212275-82.5％-0.05％为了展示发明人的突变对分泌的萤光素酶的益处，产生受益突变的连续缺失以展示如示于表18c和18d的益处。在表18c&18d中，smp1突变如下标记：l＝m-l取代；c6＝rc6ad；c9＝kc9sd；c5＝rc5ad；c10＝grc10as；截短的＝在信号肽之后gseaeaergkl。需特别注意的是对32℃的应答，其指示各和每随后突变升高萤光素酶的最佳温度。表18cdlaf&g10m8℃32℃wtmp19032,243219-60.4％-71.7％-5l3,0504,301389-79.8％-29.2％-4lme3,3504,831398-78.1％-33.2％-3lmec63,7314,199299-85.4％-25.2％-2lmec6c93,5413,936313-89.2％-23.5％-1lmec6c9kk3,2323,467275-83.2％-16.7％0lmec6c9kkc53,9344,221228-82.5％0.0％-3grc10aslmec6c104,0972,519200-94.1％36.7％表18ddlaf&g10m8℃32℃0lmec6c9kkc51,4281,28671-86.70％0.37％截短lmec6c9kkc5trunc46130122-86.77％9.28％为了定量组合上述突变的性能益处，发明人与描述于表18c和18d的突变体一起测试了6种不同全长(wt)分泌的萤光素酶。数据显示于表19a及展示信号强度的全部量度的巨大的改善和最佳温度的实质性上升，其导致自rt加温至32℃的大大减少的效应。表19adlaab910m8c32cgawt1,054498516.58％-59.67％ml164wt206747-14.04％-71.72％mp1wt8352,073202-60.4％-71.7％-5l3,0494,301389-79.8％-29.2％-4lme3,7544,830397-78.1％-33.2％-3lmec63,9494,318297-85.4％-25.2％-2lmec6c93,5413,936313-89.2％-23.5％-1lmec6c9kk3,2313,467275-83.2％-16.7％0lmec6c9kkc53,9344,225228-82.5％0.0％-3grc10aslmec6c104,3502,721217-94.1％36.7％此外，为确认益处不依赖于缓冲剂组合物，发明人经包含仅培养基(rpmi)和腔肠素的测定缓冲剂检定了条件培养基。数据显示于表19b及展示信号强度的全部量度上的巨大的改善和最佳温度的实质性上升，其导致自rt加温至32℃的大大减少的效应。表19brpmi&ctz10m8c32cgawt2438.7％-52.9％ml164wt23162.0％-55.6％mp1wt97148.8％-81.5％-5l2698.2％-70.9％-4lme25719.1％-71.7％-3lmec6206-14.5％-67.8％-2lmec6c9198-20.2％-70.4％-1lmec6c9kk183-18.7％-63.5％0lmec6c9kkc5489-30.6％-65.5％-3grc10aslmec6c10307-75.6％-44.6％接下来，发明人寻求定量更紧密模拟“室温”样品可暴露的温度的潜在范围的温度范围的情景中改善的温度应答的益处。为此，发明人修饰了8℃/32℃～19℃/27℃的我们的标准温度测定。注意，这些是在刚要将板移动进光度计之前的温度，使得一些温度平衡的水平会发生在测量之前；由此甚至进一步减少真温度范围。数据显示于表20a表20ansml164nsgansmp1nsml45nsml22nsmp2ansml39c1-2119℃39.3％13.9％62.9％24.3％44.3％-6.7％61.6％-12.7％27℃-70.6％-53.8％-77.1％-71.4％-60.8％-68.3％-77.8％-11.0％表20a显示，当冷却至19℃或加温至27℃时，克隆-21(c1-21)的发光自真rt测量偏离少于13％。与此成鲜明对比，全部野生型细胞内萤光素酶在响应这些温度变化的发光中显示基本上更大变异。为了进一步限定非-分泌的萤光素酶的最佳温度和它们对温度变化的应答，发明人将裂解物平铺于重复的96-孔板及用f&g测定缓冲剂起始辉光反应。然后将一个板移至冰箱而冷却而对照板保持于室温。然后重复测量两板和在各读数之前立即监测测定反应的温度。随着冷却的板达到室温，将其移入及移出37℃炉以便获得更高温度读数。数据显示于图2，显示为相对于对照(rt)板的温度调整板的发光。图2显示，相比w.t.萤光素酶和克隆22，克隆22包含以下突变：前导序列肽截短和m→l取代(meaeaergkl)rc6adkc9sdrc5adgrc10at克隆22(随着温度在18～28℃范围之内变化而仅经历发光的最小变化。此是对在实验台上进行的测定重要温度范围，其中rt可改变及当一些加热到rt以上是由于由光度计之内的电子学产生的热而不能避免时；例如，发明人的光度计之内的温度可在延长的操作期间升高至27℃。接下来发明人测量了闪光反应中的温度效应。将裂解物装载进96-孔板(对各萤光素酶32个重复样品)及在将板移至光度计之前在冰箱中冷却，用于通过rt测定缓冲剂的自动注射经闪光反应的测量。在光度计之内，将这些裂解物由自光度计的热加温使得特定类型的裂解物的各连续样品相比相同的类型的之前样品稍微更温。数据表示为相对于该类型的全部32个样品的平均发光的各个体样品的发光及显示于图3。图3显示各w.t(但非-分泌的)萤光素酶的发光强度的显著地大的变异，尽管仅裂解物(及不是测定缓冲剂)的温度在此类型的实验期间改变。相反，用克隆22见到更少得多的变异。这些数据指示，使用克隆22的测定会受益于减少的温度-介导的误差，即便用户未能在测量之前适当地将裂解物加温至rt。接下来，发明人使用辉光反应和在放入测量用光度计之前维持于21℃的板测试了光度计之内的此不能避免的加热的效应。将重复裂解物装载到96-孔板和用f&g测定缓冲剂起始辉光反应。在刚要将板插入测量用光度计之前反应温度测量为21℃。数据表示为相对于该类型的全部样品的平均发光的各个体样品的发光，及显示于图4。图4展示，再次，相比任何w.t(非-分泌的)萤光素酶，用克隆22发生更少变异(由此更少误差)。最终，发明人通过实施类似于描述于图2的实验测量了对分泌型的萤光素酶的温度效应，除了使用含有指示的w.t.和突变萤光素酶的条件培养基之外。imp1v1的突变如在表15d中指定(即,l＝m-l取代；c6＝rc6ad；c9＝kc9sd；c5＝rc5ad；c10＝grc10as)。得到的数据显示于图5。图5例证突变萤光素酶的更高得多的最佳温度和它们对更高温度；例如，21℃以上及33℃以上的改善的抗性。在最高温度(40℃)，突变萤光素酶保留它们的活性的约10倍更多。【实施例10】【进一步温度范围-升高修饰】由于之前描述的例展示通过保守的pgkk残基的立即上游的m→l取代而萤光素酶的最佳温度的显著的增加，本发明人寻求测定是否其他m→l取代也会增加最佳温度。为此，在对应于图1中第98位的m突变分泌的萤光素酶，指定为克隆25(包含克隆22的突变)。在按照实施例8的萤光素酶测定中测试变体(使用条件培养基，由于萤光素酶是分泌型)和结果显示于表21a。表21a分泌的cl25dlaf&g10m8℃32℃l113.359.00.18-96.7％221.8％m110.762.40.45-93.0％63.2％i93.343.60.07-89.3％69.5％v93.155.30.1-90.4％78.0％a25.317.10.27-96.6％48.3％表21a显示，将m用l，i或v但不是a取代产生相对于室温，于32℃发光信号更大上升的突变萤光素酶，指示最佳温度增加。最大上升见于具有m→l取代的突变体。此最佳温度的上升还在按照实施例9，图5实施的最佳温度实验中定义。结果显示于图6及展示，相比无该修饰的克隆25(scl-25m)的29℃，克隆25的m→l变体(scl-25l)具有约37℃的最佳温度。此外，相比野生型分泌的gaussia萤光素酶(sga)，这些萤光素酶在检定的最高温度(41℃)显示分别>10倍及>20倍更高活性。也测试cl25萤光素酶的细胞内类型中的m→(l，i，v或a)修饰的效应。对此实验，当然，检定裂解物而非条件培养基。表21b显示，此m→(l，i或v)修饰也在细胞内萤光素酶的情景中提供显著的益处；例如于32℃发光的更大上升。类似于用分泌的萤光素酶所见的，m→l修饰提供最大上升及m→a取代未提升最佳温度。表21b细胞内cl-25dlaf&g8℃32℃l29.514.8-97.8％285.5％m18.711.5-93.8％-21.1％i19.911.9-96.0％183.1％v7.97.5-97.1％89.2％a1.41.8-93.2％-34.0实施例8(见表15c)显示，c10上游2个氨基酸的残基影响最佳温度及在此位置的e是一个期望实施方式。发明人因此寻求测定是否在相对于c6的对应位置的e的取代会提供类似益处。将m和l版本的分泌的克隆25的drc6ad基序转化为erc6ad及如上述测试。结果显示于表21c，其展示经此d→e修饰而最佳温度进一步上升。表21c分泌的cl-25dlaf&g10m32℃m+erc6ad98.075.50.4956.4％m+drc6ad134.084.50.7141.2％l+erc6ad138.090.00.41218.5％l+drc6ad146.086.00.37170.8％本文引用的每个专利，专利申请和出版物的公开内容通过引用以其整体在本文合并。任何参考文献的引用在本文应不解释为准许该参考文献作为本申请的“现有技术”可利用。贯穿说明书描述了本发明的优选的实施方式，其不旨在将本发明限制到任何一个实施方式或特定特征集。本领域技术人员会因此同意，鉴于本公开，各种修饰和变化可在例示的特定实施方式中进行而不离开本发明的范围。全部该修饰和变化旨在包括在随附的权利要求的范围之内。本说明书还包括下列内容：1.制备具有相对于参照挠足虫萤光素酶多肽升高的萤光素酶功能的最佳温度范围的修饰的挠足虫萤光素酶多肽的方法，所述方法包括制备修饰的挠足虫萤光素酶多肽使得其包含与参照挠足虫萤光素酶多肽差至少一个氨基酸序列修饰的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成，其中基于该相对于参照挠足虫萤光素酶多肽升高萤光素酶功能的最佳温度范围选择所述至少一个氨基酸序列修饰。2.实施方式1的方法，其中至少一个修饰选自：(a)l，或其修饰的形式，在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置；(b)碱性氨基酸残基，其在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序，其中b选自碱性氨基酸残基和c是保守的半胱氨酸，其修饰的形式；以及(c)参照挠足虫萤光素酶多肽的氨基酸序列的全体或部分缺失，其中氨基酸序列跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游。3.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在第85位(相对于图1中显示的共有编号)包含l，或其修饰的形式。4.实施方式3的方法，其中修饰的多肽在第98位(相对于图1中显示的共有编号)包含l，或其修饰的形式。5.实施方式3的方法，其中修饰的多肽在第85和98位(相对于图1中显示的共有编号)包含l，或其修饰的形式。6.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c6和c9的位置包含bc基序。7.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含bcω基序，其中ω选自小氨基酸残基或酸性氨基酸残基。8.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含bcωω基序，其中ω选自小氨基酸残基或酸性氨基酸残基。9.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的位置包含bcωd基序，其中ω选自小氨基酸残基或酸性氨基酸残基和d是天冬氨酸或其修饰的形式。10.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5，c6，c9和c10的位置包含ebc基序，其中e是谷氨酸或其修饰的形式。11.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c6，c9和c10的位置包含gbc基序，其中g是甘氨酸或其修饰的形式。12.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含bca基序，其中a是丙氨酸或其修饰的形式。13.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5，c6和c9的位置包含bcaω基序，其中ω选自小氨基酸残基或酸性氨基酸残基和a是丙氨酸或其修饰的形式。14.实施方式2的方法，其中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含xbc基序，其中x不是d或p。15.实施方式2～14之任一项的方法，其中修饰的多肽包含实施方式3～5中定义的至少一个氨基酸和实施方式6～14之任一项中定义的至少一个基序。16.实施方式2～14之任一项的方法，其中修饰的多肽包含实施方式3～5中定义的至少一个氨基酸和实施方式2中定义的缺失。17.实施方式2～14之任一项的方法，其中修饰的多肽包含实施方式6～14之任一项中定义的至少一个基序和实施方式2中定义的缺失。18.实施方式2～14之任一项的方法，其中修饰的多肽包含实施方式3～5中定义的至少一个氨基酸，实施方式6～14之任一项中定义的至少一个基序和实施方式2中定义的缺失。19.实施方式1～18之任一项的方法，其中至少一个修饰升高萤光素酶功能的最佳温度范围至少2℃。20.实施方式1～18之任一项的方法，其中至少一个修饰导致增强的于37℃的萤光素酶活性。21.实施方式1～18之任一项的方法，其中至少一个修饰导致增强的于室温的萤光素酶活性。22.实施方式1～14之任一项的方法，还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式。23.实施方式1～14之任一项的方法，还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序。24.实施方式19的方法，还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序。25.实施方式20的方法，还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式。26.实施方式1～14之任一项的方法，还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其包含跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体或部分缺失。27.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式，且所述方法还包括修饰参照多肽从而其包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序。28.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式，且所述方法还包括修饰参照多肽从而其包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c6和c9的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序。29.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序，且所述方法还包括修饰参照多肽从而其在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式。30.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c6和c9的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序，且所述方法还包括修饰参照多肽从而其在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式。31.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式，且所述方法还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其包含跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体或部分缺失。32.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序，且所述方法还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其包含跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体或部分缺失。33.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c6和c9的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序，且所述方法还包括修饰参照挠足虫萤光素酶多肽从而其包含跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体或部分缺失。34.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽包含跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体或部分缺失，且所述方法还包括修饰参照多肽从而其在至少一个对应于第85或98位(相对于图1中显示的共有编号)的位置包含l，或其修饰的形式。35.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽包含跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体或部分缺失，且所述方法还包括修饰参照多肽从而其包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c5，c6，c9和c10的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序。36.实施方式1～14之任一项的方法，其中参照挠足虫萤光素酶多肽包含跨信号肽序列的下游和在第85位(相对于图1中显示的共有编号)的氨基酸残基的上游的氨基酸序列的全体或部分缺失，且所述方法还包括修饰参照多肽从而其包含碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基在选自c6和c9的至少一个保守的半胱氨酸的紧邻上游，以产生bc基序。37.实施方式27～36之任一项的方法，其中l，或其修饰的形式在对应于第85位(相对于图1中显示的共有编号)的位置。38.评价与细胞关联的报告子酶的活性的方法，其中报告子酶包含由实施方式1～37之任一项的方法产生的多肽，由其组成或基本上由其组成，所述方法包括：(a)使细胞与腔肠素或其类似物或衍生物接触；及(b)检测自腔肠素或其类似物或衍生物产生的信号以评价报告子酶的活性。39.实施方式38的方法，其中检测在升高的萤光素酶功能的最佳温度范围之内实施。40.试剂盒，其包含容器，所述容器包含：由实施方式1～38之任一项的方法产生的多肽，或编码所述多肽的核酸分子，或包含与调控多核苷酸可操作地连接的所述核酸分子的构建体，或包含所述构建体的细胞。本说明书还包括下列内容：11.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽在对应于保守的半胱氨酸c10的位置包含grc，其中g是甘氨酸，且r是精氨酸。12.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5、c6和c10的位置包含rca，或(b)中修饰的多肽在对应于保守的半胱氨酸c5的位置包含rca，其中a是丙氨酸，且r是精氨酸。13.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽在对应于保守的半胱氨酸c6的位置包含rcae或kcae，其中a是丙氨酸，e是谷氨酸，k是赖氨酸，且r是精氨酸。14.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含rcad或rcat，或(b)中修饰的多肽在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5和c6的位置包含rcad，其中a是丙氨酸，d是天冬氨酸，t是苏氨酸，且r是精氨酸。15.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含kcsd，或(b)中修饰的多肽在对应于保守的半胱氨酸c9的位置包含kcsd，其中k是赖氨酸，d是天冬氨酸，且s是丝氨酸。16.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽包含：选自下列的至少一个氨基酸：在对应于共有序列seqidno:905的第85位的位置的l；在对应于共有序列seqidno:905的第98位的位置的l；及在对应于共有序列seqidno:905的第85和98位的位置的l，和选自下列的至少一个基序：在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rc或kc；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rce、kca或kce，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rcee或kcee，其中r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rced、kcad或kced，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，k是赖氨酸，且d是天冬氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c6和c10的位置的erc，其中e是谷氨酸，且r是精氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c10的位置的grc，其中g是甘氨酸，且r是精氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5、c6和c10的位置的rca，其中a是丙氨酸，且r是精氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rcae或kcae，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5和c6的位置的rcad；和在对应于保守的半胱氨酸c9的位置的kcsd。17.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽包含：选自下列的至少一个氨基酸：在对应于共有序列seqidno:905的第85位的位置的l；在对应于共有序列seqidno:905的第98位的位置的l；及在对应于共有序列seqidno:905的第85和98位的位置的l，和下列氨基酸序列的全体缺失：当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当待修饰的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列。18.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽包含：选自下列的至少一个基序：在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rc或kc；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rce、kca或kce，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rcee或kcee，其中r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rced、kcad或kced，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，k是赖氨酸，且d是天冬氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c6和c10的位置的erc，其中e是谷氨酸，且r是精氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c10的位置的grc，其中g是甘氨酸，且r是精氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5、c6和c10的位置的rca，其中a是丙氨酸，且r是精氨酸；及在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rcae或kcae，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5和c6的位置的rcad；在对应于保守的半胱氨酸c9的位置的kcsd，和下列氨基酸序列的全体缺失：当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当待修饰的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列；或(b)中修饰的多肽包含：选自下列的至少一个基序：在对应于保守的半胱氨酸c10的位置的erc，其中e是谷氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c5的位置的rca，其中a是丙氨酸，且r是精氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5和c6的位置的rcad；及在对应于保守的半胱氨酸c9的位置的kcsd；及下列氨基酸序列的全体缺失：当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当待修饰的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列。19.项目1的方法，其中(a)中修饰的多肽包含：选自下列的至少一个氨基酸：在对应于共有序列seqidno:905的第85位的位置的l；在对应于共有序列seqidno:905的第98位的位置的l；及在对应于共有序列seqidno:905的第85和98位的位置的l，选自下列的至少一个基序：在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rc或kc；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rce、kca或kce，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rcee或kcee，其中r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rced、kcad或kced，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，k是赖氨酸，且d是天冬氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c6和c10的位置的erc，其中e是谷氨酸，且r是精氨酸；在对应于保守的半胱氨酸c10的位置的grc，其中g是甘氨酸，且r是精氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5、c6和c10的位置的rca，其中a是丙氨酸，且r是精氨酸；及在对应于保守的半胱氨酸c6的位置的rcae或kcae，其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，且k是赖氨酸；在至少一个对应于保守的半胱氨酸c5和c6的位置的rcad；在对应于保守的半胱氨酸c9的位置的kcsd，和下列氨基酸序列的全体缺失：当待修饰的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当待修饰的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列。20.评价与细胞关联的修饰的挠足虫萤光素酶多肽的活性的方法，其中所述萤光素酶多肽由seqidno:792、170、172、790、810、2、4、6、8、10、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814的氨基酸序列、或者其缺少有功能的信号肽或无信号肽的氨基酸序列构成、但包括下列至少一个修饰：(i)选自下列的基序：在c6的rce、kca或kce，在c6的rcee或kcee，在c6的rced、kcad或kced，在c6和/或c10的erc，在c6的rc或kc，在c10的grc，在c5、c6和/或c10的rca，在c6的rcae或kcae；在c5和/或c6的rcad或rcat；和在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；且其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，d是天冬氨酸，g是甘氨酸，s是丝氨酸，t是苏氨酸，且k是赖氨酸；(ii)下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列；以及(iii)当荧光素酶多肽的氨基酸序列是seqidno:792、170、172、790、810、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814时，在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置的l，所述方法包括：(i)使细胞与腔肠素或其类似物或衍生物接触；及(ii)检测自腔肠素或其类似物或衍生物产生的信号以评价萤光素酶的活性。21.项目20的方法，其中修饰的挠足虫萤光素酶多肽在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置包含l。22.经修饰的挠足虫萤光素酶多肽，其由seqidno:792、170、172、790、810、2、4、6、8、10、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814的氨基酸序列、或者其缺少有功能的信号肽或无信号肽的氨基酸序列构成、但包括下列至少一个修饰：(i)选自下列的基序：在c6的rce、kca或kce，在c6的rcee或kcee，在c6的rced、kcad或kced，在c6和/或c10的erc，在c6的rc或kc，在c10的grc，在c5、c6和/或c10的rca，在c6的rcae或kcae，在c5和/或c6的rcad或rcat；在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；且其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，d是天冬氨酸，g是甘氨酸，s是丝氨酸，t是苏氨酸，且k是赖氨酸；(ii)下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列；以及(iii)当荧光素酶多肽的氨基酸序列是seqidno:792、170、172、790、810、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814时，在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置的l。23.项目22的多肽，其中修饰的挠足虫萤光素酶多肽在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置包含l。24.核酸分子，其编码项目22或23的多肽。25.构建体，其包含与调控多核苷酸可操作地连接的项目24的核酸分子。26.细胞，其包含项目25的构建体。27.试剂盒，其包括：项目22或23的多肽，项目24的核酸分子，项目25的构建体，或项目26的细胞。28.评价与细胞关联的修饰的挠足虫萤光素酶多肽的活性的方法，其中所述萤光素酶多肽由seqidno:792、170、172、790、810、2、4、6、8、10、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814的氨基酸序列、或者其缺少有功能的信号肽或无信号肽的氨基酸序列构成、但包括下列至少一个修饰，其中至少一个修饰是：(a)下列之至少一个：(i)选自下列的基序：在c6的rce、kca或kce，在c6的rcee或kcee，在c6的rced、kcad或kced，在c6和/或c10的erc，在c6的rc或kc，在c10的grc，在c5、c6和/或c10的rca，在c6的rcae或kcae，在c5和/或c6的rcad或rcat；在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；且其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，d是天冬氨酸，g是甘氨酸，s是丝氨酸，t是苏氨酸，且k是赖氨酸；(ii)下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列；以及(iii)当荧光素酶多肽的氨基酸序列是seqidno:792、170、172、790、810、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814时，在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置的l，或者(b)选自下列的基序：在c10的erc，在c5的rca，在c5和/或c6的rcad，在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；以及任选地还包括下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，所述方法包括：(i)使细胞与腔肠素或其类似物或衍生物接触；及(ii)检测自腔肠素或其类似物或衍生物产生的信号以评价萤光素酶的活性。29.项目28的方法，其中修饰的挠足虫萤光素酶多肽在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置包含l。30.经修饰的挠足虫萤光素酶多肽，其由seqidno:792、170、172、790、810、2、4、6、8、10、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814的氨基酸序列、或者其缺少有功能的信号肽或无信号肽的氨基酸序列构成、但包括下列至少一个修饰：(a)下列之至少一个：(i)选自下列的基序：在c6的rce、kca或kce，在c6的rcee或kcee，在c6的rced、kcad或kced，在c6和/或c10的erc，在c6的rc或kc，在c10的grc，在c5、c6和/或c10的rca，在c6的rcae或kcae，在c5和/或c6的rcad或rcat，在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；且其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，d是天冬氨酸，g是甘氨酸，s是丝氨酸，t是苏氨酸，且k是赖氨酸；和/或(ii)下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或者(b)选自下列的基序：在c10的erc，在c5的rca，在c5和/或c6的rcad，在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；以及任选地还包括下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列。31.项目30的多肽，其中修饰的挠足虫萤光素酶多肽在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置包含l。32.核酸分子，其编码项目30或31的多肽。33.构建体，其包含与调控多核苷酸可操作地连接的项目32的核酸分子。34.细胞，其包含项目33的构建体。35.试剂盒，其包括：项目30或31的多肽，项目32的核酸分子，项目33的构建体，或项目34的细胞。36.评价与细胞关联的修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶多肽的活性的方法，其中所述修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶多肽由seqidno:792、170、172、790、810、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814的氨基酸序列、或者其缺少有功能的信号肽或无信号肽的氨基酸序列构成、但包括下列至少一个修饰，其中至少一个修饰选自：选自下列的基序：在c10的erc，在c5的rca，在c5和/或c6的rcad，在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；且其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，d是天冬氨酸，s是丝氨酸，且k是赖氨酸；以及任选地，所述修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶多肽还包含下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，所述方法包括：(i)使细胞与腔肠素或其类似物或衍生物接触；及(ii)检测自腔肠素或其类似物或衍生物产生的信号以评价修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶的活性。37.项目36的方法，其中修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶多肽在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置包含l。38.修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶多肽，其由seqidno:792、170、172、790、810、166、168、794、796、798、800、802、804、806、808、812或814的氨基酸序列、或者其缺少有功能的信号肽或无信号肽的氨基酸序列构成、但包括下列至少一个修饰，其中至少一个修饰选自：选自下列的基序：在c10的erc，在c5的rca，在c5和/或c6的rcad，在c9的kcsd，其中c5、c6、c9和c10是共有序列seqidno:905的保守的半胱氨酸；且其中a是丙氨酸，r是精氨酸，e是谷氨酸，d是天冬氨酸，s是丝氨酸，且k是赖氨酸；以及任选地，所述修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶多肽还包含下列氨基酸序列的全体缺失：当荧光素酶多肽的氨基酸序列有信号肽时，跨信号肽序列的下游和对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列，或当荧光素酶多肽的氨基酸序列无信号肽时，对应于共有序列seqidno:905的第74、75、76、77、78或79位的位置的氨基酸残基的上游的氨基酸序列。39.项目38的方法，其中修饰的长腹水蚤属(metridia)萤光素酶多肽在至少一个对应于共有序列seqidno:905的第85或98位的位置包含l。40.核酸分子，其编码项目38或39的多肽。41.构建体，其包含与调控多核苷酸可操作地连接的项目40的核酸分子。42.细胞，其包含项目41的构建体。43.试剂盒，其包括：项目38或39的多肽，项目40的核酸分子，项目41的构建体，或项目42的细胞。当前第1页12