一种鉴定香港牡蛎、熊本牡蛎及其杂交子一代的EST-SSR引物和鉴定方法与流程

技术特征：

1.鉴定香港牡蛎、熊本牡蛎及其杂交子一代的EST-SSR引物Ch513，其特征在于，所述的EST-SSR引物Ch513为：

F:5’-CTGGAATCGGTATGTCTT-3’；

R:5’-GTTACGTGCACCCTAAAT-3’。

2.一种鉴定香港牡蛎、熊本牡蛎及其杂交子一代的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的EST-SSR引物Ch513。

3.一种香港牡蛎、熊本牡蛎及其杂交子一代的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取待测牡蛎样品的基因组DNA，然后用权利要求1所述的EST-SSR引物Ch513进行PCR扩增，将扩增产物进行电泳和染色，若在260bp～290bp区间内出现1～2条条带，则待测牡蛎样品为香港牡蛎，出现1条条带说明该个体为纯合子，出现2条条带则说明该个体为杂合子；若在230bp～250bp区间内出现1～2条条带，则待测牡蛎样品为熊本牡蛎，出现1条条带说明该个体为纯合子，出现2条条带则说明该个体为杂合子；当同时在260bp～290bp区间和230bp～250bp区间内各出现1条带，则待测牡蛎样品为香港牡蛎与熊本牡蛎杂交子一代。

4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述的用EST-SSR引物Ch513进行PCR扩增，其PCR扩增体系为：25μL，其中各种成分及终浓度分别为：DNA模板50ng，Buffer 10mM，引物各0.2mM，dNTP 0.2mM，Mg²⁺2.0mM，Taq DNA聚合酶1U，用灭菌水补足25μL。

5.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述的用EST-SSR引物Ch513进行PCR扩增，其PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，重复30次；72℃延伸10min。

6.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述的将扩增产物进行电泳和染色，是将扩增产物经8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，220V稳压电泳4小时，然后用0.1％AgNO3溶液染色10min，银染后用2％NaOH、0.4％甲醛、0.2％NaS2O3、dH2O 1000mL显色，至条带清晰为止。