本发明涉及食品检测领域，尤其涉及一种检测转基因木瓜的方法。
背景技术：
转基因作物，是利用基因工程将原有作物的基因加入其它生物的遗传物质，并将不良基因移除，从而造成品质更好的作物。通常转基因作物，可增加作物的产量、改善品质、提高抗旱、抗寒及其它特性。转基因作物的种类主要有大豆、玉米、棉花和油菜，其性状主要是抗除草剂、抗虫、抗病等几类。
转基因产品因有抗寒、抗旱、抗虫、抗病毒等能力而为粮食缺少的国家所推崇。但反对者表示对转基因食物进行的安全性研究都是短期的，无法有效评估人类进食转基因食物几十年后或者更久以后的风险；而且反对者担心转基因生物不是自然界原有的品种，对于地球生态系统来说是“外来生物”。
由于转基因技术能够打破物种间基因转移的“天然屏障”，近年来转基因安全问题争议不断，转基因技术这一专业名词对普通大众不再陌生。公众对转基因安全的担忧并没有随着转基因作物在全球范围内的快速推进而有所减少。相反，随着第二代转基因作物的商业化，外源基因和转基因作物种类的增加，其安全性引发了越来越激烈的争论，这些说法不一的研究结果，更加提高了公众对转基因作物及产品安全性的担忧，并在许多国家成为转基因作物推广的强大阻力。
为了加强对农业转基因生物的安全管理，保障人体健康，规范转基因产品的销售行为，引导和保护消费者的知情权，2002年中国农业部颁布了《农业转基因生物标识管理办法》明确规定在中国境内销售列入标识的转基因生物及其产品，必须进行是否含有转基因成分的标识。因此，建立针对转基因作物快速检测方法具有十分重要的现实意义。
技术实现要素：
本发明属于食品检测领域，本发明提供一种检测转基因木瓜的方法。
本发明是以如下技术方案实现的：
本发明提供一种检测转基因木瓜的方法，包括使用LAMP特异性引物对木瓜基因组进行扩增。
进一步地，所述方法包括：
步骤一、取待检测木瓜品系新鲜果肉20g，加入液氮冻干研磨成粉末，去200mg研磨后的粉末置于1.5mL离心管中，用市售试剂盒提取DNA；
步骤二、所述LAMP特异性引物对包括FIP、BIP、F3和B3，所述LAMP反应体系于25μL体系中进行；反应体系包括KCl 50mmol/L,Tris-HCl(pH8.8)20mmol/L,(NH4)2SO410mmol/L，MgSO48mmol/L,Tween800.1％,F3和B3各0.2μmol/L，FIP和BIP各1.6μmol/L，Betaine 0.8mmol/L，Bst DNA聚合酶大片段10U，dNTPs 1.4mmol/L。将上述成分加入扩增管中，65℃恒温水浴60分钟，之后85℃水浴3分钟；
步骤三、向扩增管中加入SYBR Green(1000X)，变绿的的扩增管即为阳性，证明有转基因组织检出。
再进一步地，F3包括SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:9，B3包括SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:10，BIP包括SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:11，FIP包括SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:12。
优选地，所述引物对包括如下几组引物BIP-p gcaataaagaaccattgaactgaggaggctgaggctc；
FIP-p taggcaccacatagagaatttgagccgcctcgcca；
B3-p aggctcgactcgtccggg
F3-p tgctccgaaccatgtgccta
BIP-c gcgatgaggtgtctggcttgctttttaattcga
FIP-c cacgaaccccgatagcccatgtcagttacgct
B3-c cttctactgccttccagta
F3-c tagcagggcgggtacgg
BIP-ngagtcataaatacacacctaaccgaggctcaggttaac
FIP-n tttagcaacaaacaatgttggagcagcttcgcagcgg
B3-n taaacggcacgccttca
F3-n aacagccttactagtcgta。
本发明的有益效果是：本发明提供一种检测转基因木瓜的方法，本发明提供的方法可以准确、快速的检出靶基因的存在，操作简便，无需大型仪器，适于现场查验、快速检验、食品样品抽查等多种场景，可以弥补市场缺口，满足生产生活中快速检测转基因来源的需求。
附图说明
图1为本发明所述方法检测转基因木瓜的检测结果示意图，其中1为华农1号+引物组1；2为华农1号+引物组2；3为华农1号+引物组3；4为非转基因木瓜+引物组1；5为非转基因木瓜+引物组2；6非转基因木瓜+引物组3。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明作进一步地详细描述。
实施例1：用于检测转基因木瓜的基于LAMP反应的引物组的设计
Papain基因属于木瓜内源基因，在木瓜品种中作为内源基因广泛存在，CaMV 35S为转基因作物常用启动子，NOS基因为转基因作物常用中终止子，根据LAMP引物设计原则，用Primer Explorer V4.0软件(http://primer-explorer.jp/e/v4_manual/index.heml)进行引物设计。设计合适的引物是进行LAMP反应的关键点及难点，通过考虑碱基组成，GC含量，二级结构的形成，Tm值等因素来设计Papain基因、CaMV 35S、NOS的LAMP反应的引物。每种基因设计5组引物，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，最终经过筛选获得一组有效引物，引物如表1所示：
表1、本试剂盒所提供的有效引物组
实施例2：LAMP引物的扩增效果检测
检测步骤如下：
步骤一、待检测木瓜品系获得自华中农业大学，品系名称为华农1号；取新鲜果肉20g，加入液氮冻干研磨成粉末，去200mg研磨后的粉末置于1.5mL离心管中，用市售试剂盒提取DNA。
步骤二、LAMP反应体系于25μL体系中进行；反应体系包括KCl 50mmol/L,Tris-HCl(pH8.8)20mmol/L,(NH4)2SO4 10mmol/L，MgSO4 8mmol/L,Tween80 0.1％,F3和B3各0.2μmol/L，FIP和BIP各1.6μmol/L，Betaine 0.8mmol/L，Bst DNA聚合酶大片段10U，dNTPs 1.4mmol/L。将上述成分加入扩增管中，65℃恒温水浴60分钟，之后85℃水浴3分钟。
步骤三、向扩增管中加入SYBR Green(1000X)，变绿的的扩增管即为阳性，证明有转基因组织检出。
实施例3：转基因木瓜的检测
分别用引物组1、引物组2、引物组3检测华农1号及非转基因木瓜，其中，反应体系为KCl 50mmol/L,Tris-HCl(pH8.8)20mmol/L,(NH4)2SO4 10mmol/L，MgSO4 8mmol/L,Tween80 0.1％,F3和B3各0.2μmol/L，FIP和BIP各1.6μmol/L，Betaine 0.8mmol/L，Bst DNA聚合酶大片段10U，dNTPs 1.4mmol/L。扩增管1加入1为华农1号+引物组1；扩增管2为华农1号+引物组2；扩增管3为华农1号+引物组3；扩增管4为非转基因木瓜+引物组1；扩增管5为非转基因木瓜+引物组2；扩增管6非转基因木瓜+引物组3，将上述成分加入扩增管中，65℃恒温水浴60分钟，之后85℃水浴3分钟。
结果如图1所示，本发明提供的检测方法可以对转基因木瓜进行有效检出，引物组1也可以检测到非转基因木瓜中的内源基因，证明本发明提供的引物组可以有效对转基因及非转基因木瓜进行区分，本发明提供的检测方法具有高效和灵敏度高的特点，在操作时极易污染，因此严格遵守分区操作，各区应有专用的手套、移液器等，不得交叉使用；进行LAMP试验的工作桌面及相关物品应定期用1％次氯酸钠、75％酒精、1mol·L-1盐酸或紫外灯进行灭菌和消毒。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。
序列表
<110> 杭州更蓝生物科技有限公司
<120> 一种检测转基因木瓜的方法
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<221> unsure
<223> BIP-p
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gcaataaaga accattgaac tgaggaggct gaggctc 37
<210> 2
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<221> unsure
<223> FIP-p
<400> 2
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> unsure
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