本发明涉及制药技术领域，特别涉及一种地榆皂苷ⅱ的制备方法。
背景技术：
地榆为常用的传统中草药，性寒，味苦酸，无毒；归肝、肺、肾和大肠经。有凉血止血，清热解毒，培清养阴，消肿敛疮等功效。现代药理实验表明，地榆具有止血、抗菌、抗炎、抗肿瘤等作用。地榆含有多种化学成分，其中三萜皂苷为其主要的化学成分。据文献(杨佳燕等.hplc-elsd法测定地榆药材中地榆皂苷ⅰ和地榆皂苷ⅱ的含量.中华中医药杂志,2016(08):3340-3343)报道，地榆药材中地榆皂苷ⅰ的含量为4.39％-5.57％，地榆皂苷ⅱ的含量为0.440％-0.511％。可见地榆中的主要皂苷类成分为地榆皂苷ⅰ，地榆皂苷ⅰ的含量为地榆皂苷ⅱ的十倍。此外，地榆总皂苷中，地榆皂苷ⅰ的含量为84.39％-85.75％,地榆皂苷ⅱ含量为3.440％-4.483％(范奎等.hplc-elsd法测定地榆总皂苷中地榆皂苷ⅰ和地榆皂苷ⅱ的含量.中华中医药杂志,2017(06):2639-2642)。
近年来，据报道，地榆皂苷ⅱ有升高红细胞、收缩血管、止血、抗真菌、抗肿瘤等作用，因此地榆皂苷ⅱ药物研究前景非常广阔。虽然目前已有很多专利报道地榆总皂苷的制备方法(申请号：200310119248.1，地榆总皂苷提取物及其制备方法和用途；申请号：200610152370.2，地榆总皂苷提取物的新用途；申请号：200910012312.3，具有抗炎镇痛作用的地榆总三萜及其制备方法；申请号：201510541406.5，一种地榆总皂苷提取物及其制备方法和用途)，但是尚未有文献或专利报道地榆皂苷ⅱ的制备方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种地榆皂苷ⅱ的制备方法，其通过水解法将地榆总皂苷中的一个酯苷水解，保留氧苷，将地榆皂苷ⅰ巧妙地进行部分水解成地榆皂苷ⅱ。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种地榆皂苷ⅱ的制备方法，包括步骤：
1)取地榆粉碎，加入地榆质量的6-12倍量50-80％乙醇回流提取1-3次，每次1-3h，合并提取液，静置冷却；
2)将提取液中的乙醇体积分数调至85-95％，加碱调ph值至12-14，静置8-14小时，抽滤得到上清液；
3)将上清液减压浓缩成干粉，加入干粉质量的50-80倍量的4％naoh溶液，70-90℃水浴1-5h，tlc检测地榆皂苷ⅰ完全水解，然后冷却至室温，以稀盐酸调ph值至1-3，过滤后收集滤渣，将滤渣水洗至中性，加入滤渣质量的8-12倍量的水进行搅拌分散0.5-4h，过滤，得粗提取品；
4)将步骤3所得的粗提取品用粗提取品质量的5-12倍量有机溶剂溶解结晶，或用制备液相分离，得到白色晶体或粉末状的地榆皂苷ⅱ纯品。
其中，步骤1)加入地榆质量的8-10倍量65-75％乙醇回流提取2-3次，每次1.5-2.5h；优选地，加入地榆质量的10倍量70％乙醇回流提取2次，每次1.5h。
所述的步骤2)中，乙醇体积分数调至90％，加碱调ph值至13-14,静置12h。
进一步，步骤3)中，加入干粉质量的60-70倍量的4％naoh溶液，75-85℃水浴2-4h，然后冷却至室温，以稀盐酸调ph值至1-2.5，过滤后收集滤渣，将滤渣水洗至中性，加入滤渣质量的9-11倍量的水进行搅拌分散0.5-2h；优选地，加入干粉质量的60倍量的4％naoh溶液，82℃水浴3h，然后冷却至室温，以稀盐酸调ph值至1-2，过滤后收集滤渣，将滤渣水洗至中性，加入滤渣质量的10倍量的水进行搅拌分散1h。所述粗提取品的得率为地榆质量的2-4％，其中地榆皂苷ⅱ含量为65-75％。
进一步，步骤4)用于溶解粗提取品的有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇或丙二醇甲醚中一种或几种任意比例混合。所述地榆皂苷ⅱ白色晶体纯品的得率为地榆质量的1.5-2.5％，其中地榆皂苷ⅱ含量≥98％。
本发明的有益效果：
1、利用简单的酸碱处理和结晶方法从地榆中制备地榆皂苷ⅱ的，利用碱部分水解法将榆皂皂苷ⅰⅰ中的酯苷水解，保留氧苷，得到地榆皂苷ⅱ，得率高；
2、制备的地榆皂苷ⅱ得率和纯度高，可用于新药的研发或是直接制备成各种口服液和注射液制剂；
3、该制备方法方便快捷，利用酸碱处理和重结晶技术，不需经过复杂的柱层析技术，所用的有机溶剂很少，对环境友好，且成本低廉。
附图说明
图1是实施例1的粗提取品的高效液相色谱法检测结果图；
图2是实施例1的地榆皂苷ⅱ白色晶体纯品的高效液相色谱法检测结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：取地榆饮片1kg，适当粉碎后加10倍量70％乙醇回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并2次提取液，静置放冷后，调乙醇体积分数至90％，加入naoh调ph值至13-14，静置过夜12h，滤液抽滤得到上清液。上清液减压浓缩至干，用60倍量4％naoh溶液，82℃水浴3h，tlc检测地榆皂苷ⅰ已全部水解。取出，放冷到室温，稀盐酸调ph值至1-2，过滤，水洗至中性，收集滤渣，滤渣至10倍量水中搅拌分散约1小时，过滤，得地榆皂苷ⅱ粗品30g，得率3％，其hplc(高效液相色谱法)检测结果如图1所示，地榆皂苷ⅱ含量为70％。将地榆皂苷ⅱ粗品用8倍的甲醇溶解重结晶，得到地榆皂苷ⅱ白色晶体纯品20g，得率约2％，其hplc(高效液相色谱法)检测结果如图2所示，地榆皂苷ⅱ含量约为99.2％。所述hplc检测条件：agⅰlent1260液相，流速1ml/mⅰn；agⅰlentextend-c18色谱柱(4.6*250mm,5μm)，检测波长203nm；以甲醇-水(70∶30)为流动相等度洗脱。
地榆皂苷ⅱ鉴别：白色无定型粉末(meoh)。hnmr(300mhz,pyridine-d5)δ:1.11(3h,d,j＝6.4hz,30-ch3),0.86,0.94,1.08,1.26,1.42,1.74(each3h,s,6×ch3),3.04(1h,brs,h-18),3.31(1h,m,h-3),4.76(1h,d,j＝6.8hz,arah-1′),5.52(1h,brs,h-12)。据以上数据并结合文献(方积年.硫酸酯化多糖的研究进展.中国药学杂志,1993,28(7):393-395),确定化合物为地榆皂苷ⅱ。
实施例2：取地榆饮片2kg，适当粉碎后加6倍量50％乙醇回流提取1次，每次1h，滤过，静置放冷后，调乙醇体积分数至85％，加koh调ph值至12-13，静置过夜8h，滤液抽滤得到上清液。上清液减压浓缩至干，用50倍量4％naoh溶液，70℃水浴3h，tlc检测地榆皂苷ⅰ已全部水解。取出，放冷到室温，稀盐酸调ph值至1-2，过滤，水洗至中性，收集滤渣，滤渣至8倍量水中搅拌分散约0.5小时，过滤，得地榆皂苷ⅱ粗品40g，得率2％，地榆皂苷ⅱ含量为65％。将地榆皂苷ⅱ粗品用8倍量乙醇：丙酮(1:1)的混合液溶解结晶，得到地榆皂苷ⅱ白色晶体纯品30g，得率约1.5％，地榆皂苷ⅱ含量约为98.0％。hplc检测条件与实施例1相同。
实施例3：取地榆饮片2kg，适当粉碎后加12倍量80％乙醇回流提取3次，每次3h，滤过，合并3次提取液，静置放冷后，调乙醇体积分数至95％，加koh调ph值至13-14，静置过夜14h，滤液抽滤得到上清液。上清液减压浓缩至干，用80倍量4％naoh溶液，90℃水浴5h，tlc检测地榆皂苷ⅰ已全部水解。取出，放冷到室温，稀盐酸调ph值至2-3，过滤，水洗至中性，收集滤渣，滤渣至12倍量水中搅拌分散约4小时，过滤，得地榆皂苷ⅱ粗品80g，得率4％，地榆皂苷ⅱ含量为75％。将地榆皂苷ⅱ粗品制备液相分离，得到粉末状的地榆皂苷ⅱ纯品50g，得率2.5％，地榆皂苷ⅱ含量为99.5％。
实施例4：取地榆饮片1kg，适当粉碎后加10倍量75％乙醇回流提取2次，每次2h，滤过，合并提取液，静置放冷后，调乙醇体积分数至90％，加koh调ph值至13-14，静置过夜10h，滤液抽滤得到上清液。上清液减压浓缩至干，用70倍量4％naoh溶液，85℃水浴4h，tlc检测地榆皂苷i全部水解。取出，放冷到室温，稀盐酸调ph值至1-2，过滤，水洗至中性，收集滤渣，滤渣至11倍量水中搅拌分散约2小时，过滤，得地榆皂苷ⅱ粗品35g，得率3.5％，地榆皂苷ⅱ含量为73％。将地榆皂苷ⅱ粗品以8倍量丙二醇甲醚溶解重结晶，得到粉末状的地榆皂苷ⅱ纯品21g，得率2.1％，地榆皂苷ⅱ含量为98.8％。