本发明主要是涉及从吴茱萸中可大规模制备吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，属于中药提取分离领域。
背景技术：
吴茱萸碱(evodiamine)和吴茱萸次碱(rutaecarpa)，主要存在于芸香科(rutaceae)植物的种子或果实中，如在吴茱萸的果实、石虎的果实、疏毛吴茱萸的果实等中都有较高含量的吴茱萸碱和吴茱萸次碱。药理学研究表明吴茱萸碱和吴茱萸次碱具有较强的生理活性，例如：抗氧化、抗炎、抗真菌、镇痛、抗肿瘤、抗病毒等活性。所以吴茱萸碱和吴茱萸次碱是一类具有非常高的开发价值的活性成分。
本发明提出了一种新的高效分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，该方法所用原料来源广泛、易得，制备方法简便易行，非常易于吴茱萸碱和吴茱萸次碱的大规模工业化生产。
在文献或专利中已经有多种制备合成吴茱萸碱和次碱的方法报道，如中国专利“申请号200810046164.2”采用柱层析和高效制备液相分离的手段来制备吴茱萸碱和次碱；中国专利“申请号200910040039.5、201010526899.1、201410664743.9、201010265405x”采用非常规药品方法来合成制备吴茱萸碱和次碱；中国专利“申请号201110067053.1、201110425809.5、201010201127.1、201010606325.6、200580027773.8、201010171738.6、201010124121.9等”多只对吴茱萸进行初步提取，未做进一步的分离提纯工艺。本专利以常规溶剂为提取溶剂，利用溶解度差异的原理来分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱，所以本发明与已有文献不一样。
技术实现要素：
本发明主要是在于提供一种吴茱萸碱和次碱的制备方法。它主要是通过溶剂对原料进行提取，回收溶剂得到的浸膏；对浸膏进行脱脂；脱脂后的浸膏先用稀酸溶液洗涤；洗涤后用碱溶液充分反应，过滤或离心，取固体，然后用酸调节反应，过滤或离心出固体；取固体，干燥后用有机溶剂溶解，得到固液两相，分别加入碱溶液中充分反应，过滤或离心，取所得固体分别进行结晶和重结晶，就可得到纯度较高的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体。
本发明是通过以下技术方案实现的：从吴茱萸中分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，原料为吴茱萸、吴茱萸果实、石虎果实、疏毛吴茱萸果实中的一种。
所述的吴茱萸中分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法，具体制备方法包括以下步骤：
(1)取原料适量，加入1-50倍量的溶剂，所述溶剂为：甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯，或其混合溶剂，混合溶剂体积比控制为1：9～9：1，或甲醇、乙醇、丙酮水溶液，控制体积比为50％～95％，提取1-5次，每次1-4h，合并提取液回收溶剂得到浸膏；
(2)将步骤(1)中得到的浸膏用1-100倍量的低极性溶剂脱脂1-5次，然后再用1-100倍浸膏量的1-10％的盐酸、硫酸、硝酸或磷酸水溶液浸泡洗涤1-48h，如此操作反复进行1-6次；
(3)将步骤(2)中得到的洗涤后的固体加入到1-100倍量的1-20％的氨水、氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾水溶液中，充分溶解1-48h，过滤，取出残余固体，再加盐酸、硫酸、硝酸或磷酸水溶液反应1-48h，过滤或离心，得到固体；
(4)将步骤(3)中得到的固体用1-200倍量二氯甲烷、氯仿、丙酮或乙酸乙酯溶解，再过滤或离心，得到固液两相，取出固液相分别用1-100倍量1-30％的氨水、氢氧化钙、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸一氢钠、磷酸一氢钾、磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的水溶液调节反应1-48h，液相部分经反应后，析出固体，过滤或离心，洗涤，干燥，得到吴茱萸碱粗品，固相部分经反应后，过滤或离心，洗涤，干燥，得到吴茱萸次碱粗品；
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、异丙醇或它们的混合溶剂进行结晶和重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体。
所述的从吴茱萸中分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法：步骤(1)中的提取过程在超声波或微波辅助提取，或加热回流提取。
所述从吴茱萸中分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方：步骤(2)中低极性溶剂为：石油醚、正己烷、环己烷、正庚烷或以它们的任意比混合物中的一种。
所述从吴茱萸中分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法：所述步骤(5)中高纯度的吴茱萸碱和次碱晶体纯度≥90％。
所述从吴茱萸中分离吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法：所述加热回流温度控制在20-100℃，所述超声波和微波辅助，控制超声功率为100-1000w，控制微波辅助100-1000w，提取1-10次，每次1-4h，控制搅拌速度0-2000r/min，过滤或离心，得到提取液。
本发明的有益效果
从原料中提取吴茱萸碱和吴茱萸次碱的提取率可达80％以上，且所得吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体纯度在90％以上，制作工艺简单易操作，且成本低，适用于工业化大规模生产。
具体实施方式
实施例1
(1)取经干燥、粉碎的中药吴茱萸粉末适量，加入1倍量的75％乙醇超声(400w，20℃)搅拌提取3次，每次2h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用10倍量的石油醚脱脂3次。然后用10倍量的1％的盐酸溶液浸泡洗涤反应1h，过滤，取用固体，重复3次。
(3)将上述固体浸泡入10倍量的20％的氢氧化钠溶液，反应1h，过滤，取残余固体加10％盐酸1h，过滤，得到固体。
(4)将所述的固体用10倍量的氯仿溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用10倍量10％的氢氧化钠、溶液调节反应1h，过滤，洗涤，取用固体，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用丙酮结晶，然后用丙酮—乙醇(体积比1/1)重结晶，即可到吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为98％。
实施例2
(1)取中药吴茱萸适量，加入4倍量的无水乙醇，搅拌，60℃回流提取5次，每次1h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用1倍量的正己烷脱脂5次。然后用100倍量的2％的硫酸溶液浸泡洗涤反应1h，过滤，取用固体，如此操作反复进行3次。
(3)将上述固体浸泡入20倍量的1％的氢氧化钾溶液，反应1h，过滤，取残余固体加硫酸调节反应48h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用10丙酮溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用10倍量30％的氢氧化钾溶液调节反应1h，离心，洗涤，取用固体，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用丙酮溶剂溶解固体进行结晶，然后用异丙醇进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为99％。
实施例3：
(1)取中药吴茱萸干燥粉末适量，加入15倍量的75％甲醇超声(300w，20℃)搅拌提取4次，每次1h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用20倍量的环己烷脱脂5次。然后用30倍量的10％的盐酸溶液浸泡洗涤反应10h，过滤，取用固体，重复3次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到20倍量的1％的氨水溶液中，充分溶解10h，过滤，取残余固体加硫酸调节反应1h，离心，得到固体。
(4)将上述固体用30倍量的二氯甲烷溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用10倍量1％的氨水溶液调节反应6h，过滤，洗涤，取用固体，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用乙酸乙酯溶解固体进行结晶，然后用乙醇溶剂进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为90％。
实施例4
(1)取中药吴茱萸适量，加入50倍量的二氯甲烷超声(300w，25℃)搅拌提取3次，每次2h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用2倍吴茱萸量的正庚烷脱脂5次。然后用7倍量的1％的磷酸溶液浸泡反应1h，过滤，重复2次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到5倍量的1％的氢氧化钙溶液中，充分溶解5h，过滤，取残余固体加10倍量硝酸调节反应14h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用10倍量二氯甲烷溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用30倍量30％的碳酸氢钠溶液调节反应10h，过滤，洗涤，取用固体，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用乙醇溶剂溶解固体进行结晶，然后用乙醇溶剂进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为98％。
实施例5
(1)取中药吴茱萸适量，加入50倍量的氯仿微波(400w，30℃)搅拌提取1次，提取1h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用5倍吴茱萸量的环己烷和正己烷混合液脱脂5次。然后用50倍量的10％的盐酸溶液浸泡反应10h，过滤，这样重复5次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到20倍量的10％的氢氧化钠溶液中，充分溶解24h，过滤，取残余固体加15倍量盐酸调节反应10h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用200倍量乙酸乙酯溶解，过滤或离心，取液体和固体两部分，分别用10倍量5％的碳酸氢钾溶液调节反应24h，过滤，洗涤，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用丙酮溶剂溶解固体进行结晶，然后用氯仿溶剂进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为99％。
实施例6：
(1)取中药吴茱萸适量，加入2倍量的氯仿和乙酸乙酯混合液(体积比1/9)，超声(400w，30℃)搅拌提取5次，每次2h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用50倍量的庚烷脱脂5次。然后用15倍量的5％的磷酸溶液浸泡反应1h，过滤，重复4次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到15倍量的5％的氢氧化钠溶液中，充分溶解48h，过滤，取残余固体加10倍量硫酸调节反应3h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用10倍量丙酮溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用30倍量30％的磷酸一氢钠溶液调节反应1h，过滤，洗涤，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用乙酸乙酯溶剂溶解固体进行结晶，然后用乙酸乙酯—甲醇混合溶剂(体积比5/1)进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为91％。
实施例7
(1)取石虎的果实干燥粉末适量，加入3倍量的乙酸乙酯超声(300w，20℃)搅拌提取3次，每次1h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用20倍量的石油醚脱脂5次。然后用15倍量的5％的盐酸溶液浸泡反应1h，过滤，这样重复5次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到25倍量的5％的氢氧化钾溶液中，充分溶解24h，过滤，取残余固体加5倍量硝酸调节反应1h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用50倍量丙酮溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用10倍量5％的酸氢钾溶液调节反应1h，过滤，洗涤，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用氯仿溶剂溶解固体进行结晶，然后用氯仿—乙醇混合溶剂(体积比9/1)进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为97％。
实施例8
(1)取疏毛吴茱萸的果实干燥粉末适量，加入50倍量的50％甲醇水溶液超声(500w，20℃)搅拌提取2次，每次4h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用30倍量的石油醚脱脂5次。然后用5倍量的5％的盐酸溶液浸泡反应48h，过滤，这样重复重复2次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到50倍量的5％的氢氧化钠5溶液中，充分溶解24h，过滤，取残余固体加50倍量盐酸调节反应48h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用100倍量二氯甲烷溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用50倍量10％的磷酸二氢钠溶液调节反应48h，过滤，洗涤，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗体。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用丙酮溶剂溶解固体进行结晶，然后用丙酮—乙醇混合溶剂(体积比4/1)进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为99％。
实施例9
(1)取吴茱萸干燥粉末适量，加入5倍量的75％丙酮水溶液50℃搅拌回流提取3次，每次1h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用60倍量的石油醚脱脂5次。然后用50倍吴茱萸量的5％的盐酸溶液浸泡反应24h，过滤，这样重复6次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到40倍量的10％的氢氧化钠溶液中，充分溶解24h，过滤，取残余固体加50倍量磷酸调节反应20h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用15丙酮溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用10倍量30％的氢氧化钠溶液调节反应48h，过滤，洗涤，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用乙醇溶剂溶解固体进行结晶，然后用丙酮进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为97％。
实施例10
(1)取吴茱萸干燥粉末适量，加入4倍吴茱萸量的氯仿/乙醇混合溶液(v/v：1/1)微波(300w，40℃)辅助提取5次，每次2h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用70倍量的石油醚脱脂5次。然后用75倍量的5％的盐酸溶液浸泡反应1h，过滤，这样重复3次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到65倍量的5％的氢氧化钠溶液中，充分溶解24h，过滤，取残余固体加25倍量盐酸调节反应10h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用150倍量二氯甲烷溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用10倍量30％的氢氧化钾溶液调节反应48h，过滤，洗涤，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用氯仿溶剂溶解固体进行结晶，然后用丙酮和甲醇的混合溶剂进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为96％。
实施例11：
(1)取吴茱萸干燥粉末适量，加入1倍量的丙酮/乙酸乙酯混合溶液(v/v：1/1)超声(300w，40℃)辅助提取3次，每次1h，合并提取液回收溶剂得到浸膏。
(2)将上述浸膏用20倍量的正已烷脱脂5次。然后用5倍量的10％的盐酸溶液浸泡反应10h，过滤，这样重复4次。
(3)将上述经洗涤的固体加入到5倍量的10％的氢氧化钠溶液中，充分溶解24h，过滤，取残余固体加30倍量硫酸调节反应1.5h，过滤，得到固体。
(4)将上述固体用10倍量氯仿溶解，过滤，取液体和固体两部分，分别用50倍量5％的氢氧化钠溶液调节反应2h，过滤，洗涤，分别得吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品。
(5)将上述吴茱萸碱粗品和吴茱萸次碱粗品，用乙酸乙酯溶剂溶解固体进行结晶，然后用氯仿—甲醇混合溶剂(体积比5/1)进行重结晶，最终得到高纯度的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体，纯度为97％。
从上述实施例中可以看出采用本发明方法提取的吴茱萸碱和吴茱萸次碱晶体纯度均在90％以上，尤其以实施例5、实施例8效果最佳，其纯度达到了99％。