一种用于Lp-PLA2、NGAL和Derf24增强免疫的方法与流程

文档序号:15746843发布日期:2018-10-23 23:24阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种新型阳离子载体蛋白的制备方法,其特征在于,使用一定比例的1,5-戊二胺和1,10-癸二胺同时与BSA偶联,制备出阳离子化牛血清白蛋白。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述1,5-戊二胺和1,10-癸二胺的摩尔数比2:1。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述1,5-戊二胺和1,10-癸二胺总量与BSA的重量比为1:2。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括:

(1)、将200mg的1,5-戊二胺和168.6mg的1,10-癸二胺加入20ml H2O中,用6N HCl调pH到4.75,总体积调为50ml,平衡至室温;

(2)、在上述溶液加入到溶于5ml H2O的737.2mg BSA中;

(3)、在上述溶液加入220mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,室温搅拌1小时;

(4)、配4M的pH=4.75醋酸缓冲液加3.5ml终止上述溶液反应;

(5)、用50mM的pH=6MES对上述溶液进行透析;

(6)、测定浓度后分装冻干,保存于4℃,得到所述阳离子载体蛋白。

5.一种新型阳离子载体蛋白,所述新型阳离子载体蛋白为阳离子化牛血清白蛋白,通过前述权利要求1-4任一项所述的制备方法制得。

6.一种用于Lp-PLA2、NGAL和Derf24增强免疫的方法,包括:将前述权利要求5所述的阳离子化载体蛋白作为载体蛋白,分别偶联重组人脂蛋白相关磷脂酶A2、重组中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和重组Derf24,得到偶联蛋白,对小鼠注射给药,实现免疫。

7.根据权利要求6所述一种用于Lp-PLA2、NGAL和Derf24增强免疫的方法,包括,用无菌水将上述偶联蛋白稀释至1mg/ml,得到抗原溶液,然后用1.0ml的抗原溶液与等量的弗氏完全佐剂混合后,对实验小鼠进行免疫,每只小鼠皮下注射100μg,每隔一周免疫一次,共计免疫4次。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1