本发明涉及生物活性成分技术领域，特别涉及蝎子活性蛋白。
背景技术：
蝎子属于动物界的节肢动物门，蛛形纲，蝎目。是己知最古老的陆生节肢动物之一。目前，己知全世界蝎子种类有6科，70属，650多种。在我国蝎子约有15种，如东亚钳蝎、山蝎、藏蝎、斑蝎、辽克尔蝎、十腿蝎等，其分布也很广，主要分布在北讳32-42度之间的华北、东北及长江以南的广大地区，而水分较少的西北内陆则分布较少。东亚钳蝎亦称马氏钳蝎，在我国分布最广，主要分布在河南、河北、山东，福建、台湾等地也有分布。也是我国传统名贵中药，以河南南阳、湖北的老河口、山东青州等地所产蝎子最负盛名。全蝎为东亚钳蝎的干燥体，性味辛、平，有毒，归肝经，具有息风镇痉、攻毒散结、通络止痛的功效。临床应用多入丸、散剂，其次入水煎剂。全蝎中含有蝎毒素、三甲胺、牛黄酸、甜菜碱、胆留醇、卵磷脂、甘油脂、棕榈酸、硬脂酸、铵盐、饱和脂肪酸等多种化学成分，其主要活性成分为蝎毒。蝎毒中的活性作用主要为蛋白质类，具有抗肿瘤、镇痛、抗癫痫、抗血栓等多种药理作用。蛋白质在组织和细胞中一般都是以复杂的混合形式存在，各种不同类型细胞都含有上千种不同的蛋白质。显然，要从混杂、众多的蛋白质中获取目的蛋白质是一项艰巨的任务。目前全蝎蛋白的提取方法研宄主要包括了水煎煮、醇提法以及酶解法等，酶解法的应用最为普遍，也具有普遍的药理效应，但提取得到蝎子活性蛋白的活性和纯度不太理想，且提取率较低。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种活性和纯度高，含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，药理作用高，得率高的蝎子活性蛋白。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：
蝎子活性蛋白。该活性蛋白活性和纯度高，具有抗肿瘤、镇痛、抗癫痫、抗血栓等多种药理作用，同时该活性蛋白中含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，提高活性蛋白的药理作用，且该活性蛋白对机体不容易出现免疫原性和过敏反应，减少副作用，具有较好的发展前景。
蝎子活性蛋白的提取方法，其具体包括以下步骤：
步骤1：按固液比为1:10-15向干燥全蝎粗粉中加水，再加入莽草酸和对羟基肉桂酸，浸泡25-35min，湿法超微粉碎10-20min，然后在5000-10000r/min的条件下离心8-15min，上清液即为提取液备用，该步骤活性蛋白的溶出具有扩散阻力小、溶出路径短、溶出面积大的优点，使粉碎与提取一步完成，大大提高提取的效率，同时免去加热，从而有效能避免蛋白结构被破坏，提高活性蛋白的活性；
步骤2：调节步骤1得提取液的ph至6.5-7.5，然后在压力为0.25-0.35mpa条件下经5-6kda分子量中空纤维膜超滤20-30min，截留液用蒸馏水反复冲洗干净，浓缩至相对浓度为0.9-1.2g/ml，备用，该步骤条件设计合理，使得蛋白质类与水亲和力增大，膜通量达到最大，可以在不破坏活性蛋白的前提下，能有效去除湿法超微粉碎提取液中小分子核酸类物质被超滤除去；
步骤3：向步骤2浓缩液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为65-75%，低温条件下静置过夜，随后在5000-10000r/min的条件下离心8-15min，沉淀用等量浓度为0.008-0.012mol/l、ph为7.0-8.0的磷酸钠缓冲液充分溶解，透析，透析液即为粗蛋白溶液，该步骤中加入大量的硫酸铵，使蛋白质的溶解度降低而沉淀析出，该方法优点在于硫酸铵浓度变化具有连续性，盐析效果好，节约能耗；
步骤4：将粗蛋白溶液依次用纤维素柱、葡聚糖凝胶过滤纯化，冷冻干燥，即得蝎子活性蛋白，该活性蛋白活性和纯度高，具有抗肿瘤、镇痛、抗癫痫、抗血栓等多种药理作用，同时该活性蛋白中含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，提高活性蛋白的药理作用，且该活性蛋白对机体不容易出现免疫原性和过敏反应，减少副作用，具有较好的发展前景。
作为优选，步骤1中莽草酸的浓度为0.02-0.03mg/ml，对羟基肉桂酸的浓度为0.005-0.01mg/ml。莽草酸和对羟基肉桂酸的存在一方面能够改变细胞的渗透压，协助湿法超微粉碎快速破坏细胞膜物质，提高活性蛋白的溶出速率，大大提高了提取的效率，另一方面能够作用于蝎子蛋白质的疏水端，提高全蝎中蛋白质在水中的溶解度，使所得活性蛋白中含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，提高活性蛋白的药理作用。
作为优选，步骤3中饱和硫酸铵溶液中含有0.13-0.16mm环己基氨基磺酸钠。硫酸铵中常含有少量的重金属离子，对蛋白质巯基有敏感作用，而环己基氨基磺酸钠的存在能够保护蛋白的结构不被重金属离子破坏，保证所得蝎子活性蛋白的活性，同时能增加蛋白质在磷酸钠缓冲液中的溶解度，提高分离效果，最终提高蝎子活性蛋白的得率。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明活性蛋白活性和纯度高，含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，提高活性蛋白的药理作用，且该活性蛋白对机体不容易出现免疫原性和过敏反应，减少副作用，具有较好的发展前景。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
蝎子活性蛋白。该活性蛋白活性和纯度高，具有抗肿瘤、镇痛、抗癫痫、抗血栓等多种药理作用，同时该活性蛋白中含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，提高活性蛋白的药理作用，且该活性蛋白对机体不容易出现免疫原性和过敏反应，减少副作用，具有较好的发展前景。
蝎子活性蛋白的提取方法，其具体包括以下步骤：
步骤1：按固液比为1:15向干燥全蝎粗粉中加水，再加入莽草酸和对羟基肉桂酸，浸泡25min，湿法超微粉碎20min，然后在5000r/min的条件下离心15min，上清液即为提取液备用，该步骤活性蛋白的溶出具有扩散阻力小、溶出路径短、溶出面积大的优点，使粉碎与提取一步完成，大大提高提取的效率，同时免去加热，从而有效能避免蛋白结构被破坏，提高活性蛋白的活性；
步骤2：调节步骤1得提取液的ph至6.5，然后在压力为0.35mpa条件下经5kda分子量中空纤维膜超滤30min，截留液用蒸馏水反复冲洗干净，浓缩至相对浓度为0.9g/ml，备用，该步骤条件设计合理，使得蛋白质类与水亲和力增大，膜通量达到最大，可以在不破坏活性蛋白的前提下，能有效去除湿法超微粉碎提取液中小分子核酸类物质被超滤除去；
步骤3：向步骤2浓缩液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为75%，低温条件下静置过夜，随后在5000r/min的条件下离心15min，沉淀用等量浓度为0.008mol/l、ph为8.0的磷酸钠缓冲液充分溶解，透析，透析液即为粗蛋白溶液，该步骤中加入大量的硫酸铵，使蛋白质的溶解度降低而沉淀析出，该方法优点在于硫酸铵浓度变化具有连续性，盐析效果好，节约能耗；
步骤4：将粗蛋白溶液上样于deae-52纤维素柱（2.5×20cm），用含0-1mol/l氯化钠的浓度为0.05mol/l、ph为8.0的tris-hcl缓冲液进行线性梯度洗脱，分部收集器收集，检测a280nm吸光值，收集洗脱峰，合并活性峰各管，浓缩，浓缩液上样至sephacryls-100葡聚糖凝胶柱中，用浓度为0.05mol/l、ph为8.0的tris-hcl缓冲液进行洗脱，分部收集器收集，检测a280nm吸光值，收集洗脱峰，合并活性峰各管，浓缩，冷冻干燥，即得蝎子活性蛋白，该活性蛋白活性和纯度高，具有抗肿瘤、镇痛、抗癫痫、抗血栓等多种药理作用，同时该活性蛋白中含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，提高活性蛋白的药理作用，且该活性蛋白对机体不容易出现免疫原性和过敏反应，减少副作用，具有较好的发展前景。
步骤1中莽草酸的浓度为0.02mg/ml，对羟基肉桂酸的浓度为0.01mg/ml。莽草酸和对羟基肉桂酸的存在一方面能够改变细胞的渗透压，协助湿法超微粉碎快速破坏细胞膜物质，提高活性蛋白的溶出速率，大大提高了提取的效率，另一方面能够作用于蝎子蛋白质的疏水端，提高全蝎中蛋白质在水中的溶解度，使所得活性蛋白中含有较多种类蛋白质，各活性蛋白间起到增益作用，提高活性蛋白的药理作用。
步骤3中饱和硫酸铵溶液中含有0.13mm环己基氨基磺酸钠。硫酸铵中常含有少量的重金属离子，对蛋白质巯基有敏感作用，而环己基氨基磺酸钠的存在能够保护蛋白的结构不被重金属离子破坏，保证所得蝎子活性蛋白的活性，同时能增加蛋白质在磷酸钠缓冲液中的溶解度，提高分离效果，最终提高蝎子活性蛋白的得率。
实施例2：
蝎子活性蛋白的提取方法，其具体包括以下步骤：
步骤1：按固液比为1:12向干燥全蝎粗粉中加水，再加入莽草酸和对羟基肉桂酸，浸泡30min，湿法超微粉碎15min，然后在8000r/min的条件下离心10min，上清液即为提取液备用；
步骤2：调节步骤1得提取液的ph至7.0，然后在压力为0.3mpa条件下经5.5kda分子量中空纤维膜超滤25min，截留液用蒸馏水反复冲洗干净，浓缩至相对浓度为1g/ml，备用；
步骤3：向步骤2浓缩液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为70%，低温条件下静置过夜，随后在8000r/min的条件下离心10min，沉淀用等量浓度为0.01mol/l、ph为7.5的磷酸钠缓冲液充分溶解，透析，透析液即为粗蛋白溶液；
步骤4：将粗蛋白溶液依次用纤维素柱、葡聚糖凝胶过滤纯化，冷冻干燥，即得蝎子活性蛋白。
步骤1中莽草酸的浓度为0.025mg/ml，对羟基肉桂酸的浓度为0.008mg/ml。
步骤3中饱和硫酸铵溶液中含有0.15mm环己基氨基磺酸钠。
实施例3：
蝎子活性蛋白的提取方法，其具体包括以下步骤：
步骤1：按固液比为1:10向干燥全蝎粗粉中加水，再加入莽草酸和对羟基肉桂酸，浸泡35min，湿法超微粉碎10min，然后在10000r/min的条件下离心8min，上清液即为提取液备用；
步骤2：调节步骤1得提取液的ph至7.5，然后在压力为0.25mpa条件下经6kda分子量中空纤维膜超滤20min，截留液用蒸馏水反复冲洗干净，浓缩至相对浓度为1.2g/ml，备用；
步骤3：向步骤2浓缩液中加入饱和硫酸铵溶液至其浓度为65%，低温条件下静置过夜，随后在10000r/min的条件下离心8min，沉淀用等量浓度为0.012mol/l、ph为7.0的磷酸钠缓冲液充分溶解，透析，透析液即为粗蛋白溶液；
步骤4：将粗蛋白溶液依次用纤维素柱、葡聚糖凝胶过滤纯化，冷冻干燥，即得蝎子活性蛋白。
步骤1中莽草酸的浓度为0.03mg/ml，对羟基肉桂酸的浓度为0.005mg/ml。
步骤3中饱和硫酸铵溶液中含有0.16mm环己基氨基磺酸钠。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。