一种用于检测宫颈癌PAX1基因甲基化的试剂盒的制作方法

本发明涉及一种用于检测宫颈癌pax1基因甲基化的试剂盒。

背景技术

以pcr技术为基础的核酸诊断分析方法是分子诊断中的核心技术。将核酸自动提取过程与pcr扩增检测过程相互集成，构建一体化的核酸提取与扩增检测系统，对于进一步提高核酸诊断分析效率，实现整个核酸诊断分析过程的自动化具有重要的现实意义。

中国专利申请201610266982.8公开了一种基于硼掺杂石墨烯量子点的宫颈癌细胞检测试剂盒，属于生物检测领域。所述宫颈癌细胞检测试剂盒包括试剂a、b和c，试剂a为硼掺杂石墨烯量子点溶液，试剂b为硝酸铈溶液，试剂c为腺苷三磷酸溶液。

中国专利申请201510608996.9公开了一种宫颈癌预后检测方法，依次包括以下步骤：组织芯片的处理、结果评判、判定等步骤，该方法通过免疫组化和定量pcr方法检查setd4表达水平，发现相对正常组织，宫颈炎症组织setd4轻度升高，肿瘤组织中显著升高，setd4的表达水平在可用来预测宫颈癌预后，并可作为预测宫颈癌治疗效果的预后指标。

中国专利申请201710064368.8公开了一种宫颈癌的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测血液中sparcl1表达水平的试剂。本发明还公开了检测血液中sparcl1表达水平的试剂在制备宫颈癌筛查用试剂中的用途。

上述技术方案的缺陷在于：

检测过程繁琐，多个环节需要增加手工操作；核酸提取、核酸亚硫酸转化、核酸甲基化检测分为三部分操作，不能同时进行，步骤繁多，操作复杂；核酸提取和核酸亚硫酸转化不能和核酸甲基化检测试剂一体化，检测过程开放，容易引起外部环境与检测试剂交叉污染；检测时间长。

因此，如何提供一种核酸提取、亚硫酸转化和甲基化检测一体化进行、操作快捷的试剂盒成为了业界需要解决的问题。

技术实现要素：

针对现有技术的缺点，本发明的目的是提供一种用于检测宫颈癌pax1基因甲基化的试剂盒，其结构简单，高效准确，核酸提取、亚硫酸转化和甲基化检测一体化进行，检测过程封闭、可有效避免外部环境与检测试剂交叉污染。

为了实现上述目的，本发明提供了一种用于检测宫颈癌pax1基因甲基化的试剂盒，试剂盒内设有裂解试剂；裂解试剂包括：

裂解修饰液，裂解修饰液包括亚硫酸氢铵、亚硫酸铵、盐酸胍、氢氧化钠和对苯二酚；

结合增强剂，结合增强剂包括异丙醇和氯化钠。

本发明中，各试剂的溶剂均为水。

裂解修饰液配方为：

亚硫酸氢铵3mol/l、亚硫酸铵2mol/l、盐酸胍2.5mol/l、

氢氧化钠0.5mol/l、对苯二酚0.5mmol/l。

结合增强剂配方为：异丙醇70％(体积分数)、氯化钠0.3mol/l。

样本在裂解修饰液中会被裂解，释放出核酸；核酸会被转化修饰，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响。

本发明解决了核酸提取和核酸扩增检测不能一体化、核酸提取和核酸扩增检测过程操作繁杂的技术问题，高效简便，结果准确。

根据本发明另一具体实施方式，试剂盒包括：

提取仓，提取仓包括按照样本流向依次分布的裂解机构、洗涤机构和洗脱机构；裂解机构内设有裂解试剂和磁性物质；洗涤机构包括第一油槽和洗涤槽，洗涤槽内设有洗涤液；第一油槽位于裂解机构和洗涤槽之间；洗脱机构包括第二油槽和洗脱槽，洗脱槽内设有洗脱液；第二油槽位于洗涤槽和洗脱槽之间；第一油槽和第二油槽内均设有油相；相邻两槽之间设有可活动的隔断；裂解机构与第一油槽之间设有可活动的隔断；

驱动机构，驱动机构包括可按照样本流向滑移的滑块；滑块上设有磁铁；

扩增管，扩增管位于洗脱机构下游；扩增管与洗脱槽连通。

本方案中，提取仓可以由弹性材料制成。

提取仓中，槽的数量根据所承载试剂或固体物质所需而定，容量可不尽相同。

磁铁位于滑块中心，其为永磁铁或电磁铁；磁性物质可为磁珠。

驱动机构进一步包括用于驱动滑块运行的动力部件，动力部件可为电机或气缸。

样本裂解后产生的核酸附着在磁性物质上；滑块运动时，通过磁铁带动磁性物质运动，从而带动核酸运动。

各槽沿直线分布；在使用过程中，提取仓可以水平放置、竖直放置或者倾斜放置。

当滑块经过隔断时，驱动机构会使隔断失效，隔断两侧的槽相通；部分隔断永久失效，部分隔断在滑块经过后再度恢复。

洗涤液配方为：异丙醇70％(体积分数)、氯化钠0.3mol/l。

洗脱液配方为：tris-hcl(ph8.8)50mmol/l、edta0.3mol/l；tris-hcl为缓冲液。

根据本发明另一具体实施方式，裂解机构包括按照样本流向依次分布的修饰槽、结合槽和磁性槽；裂解机构内，相邻两槽之间设有可活动的隔断；磁性槽与第一油槽之间设有可活动的隔断。

根据本发明另一具体实施方式，裂解机构进一步包括位于修饰槽上游的样本槽，样本位于样本槽中；裂解修饰液和结合增强剂分别设于修饰槽和结合槽内；磁性物质设于磁性槽内。

本方案中，样本槽上设有用于添加样本的进料口，进料口上设有样本盖，用于样本添加后封闭样本槽。

根据本发明另一具体实施方式，提取仓进一步包括缓冲液槽，缓冲液槽位于洗脱槽下游，且与洗脱槽之间设有可活动的隔断；缓冲液槽位于扩增管上游，且与扩增管相通。

本方案中，缓冲液槽与扩增管通过连接头相连，连接头上设有出料口；样本通过出料口从缓冲液槽流入扩增管。

此外，也可以不设扩增管，而在缓冲液槽内进行扩增反应；此时，无需设置连接头，在缓冲液槽上直接设置出料口，用于扩增反应后样本的流出。

根据本发明另一具体实施方式，第一油槽和洗涤槽之间设有可上下移动的密封片；第二油槽和洗脱槽之间设有可上下移动的密封片。

根据本发明另一具体实施方式，裂解机构内，相邻两槽之间设有可脱落的固定卡片；磁性槽与第一油槽之间设有可脱落的固定卡片；洗涤槽和第二油槽之间设有可脱落的固定卡片；洗脱槽与缓冲液槽之间设有可脱落的固定卡片。

根据本发明另一具体实施方式，提取仓进一步包括弹性密封膜，弹性密封膜位于密封片与固定卡片下方，且被密封片与固定卡片压紧。

根据本发明另一具体实施方式，滑块上设有用于顶起密封片或使固定卡片脱落的楔形块。

本方案中，试剂盒进一步包括上盖、支架和底盖；支架固定在提取仓上，二者通过粘接、胶结、热粘结等方式结合；上盖和底盖可拆卸地连接，二者围成一个空腔，提取仓和支架位于空腔内；支架上设有上盖安装孔，用于与上盖连接。

提取仓底部采用封膜密封，封膜可封住装于提取仓中各个槽内的液体或固体；封膜与提取仓可以通过粘接、胶结、热粘结等方式结合；弹性密封膜位于封膜上方，其在固定卡片及密封片的压紧作用下，与封膜贴合，对各槽之间的液体或固体形成隔离。

固定卡片用于试剂封堵，防止相邻两槽中的试剂相混，其数量根据反应要求而定；固定卡片两侧分别通过弱支撑连接上盖底部；弱支撑用于连接固定卡片和上盖，其很容易被切断。

支架上设有用于限制密封片自由度的限位槽，限位槽与密封片对应设置；密封片用于防止相邻两槽中的试剂相混；上盖内侧顶部设有弹簧安装孔，其与密封片对应设置；密封片包括用于压紧弹性密封膜的突起和用于与弹簧配合的销轴，突起位于密封片底部，销轴位于密封片顶部；弹簧一侧安装于弹簧安装孔内，另一侧套在销轴上。

楔形块的数目为两个，分别位于磁铁两侧；滑块位于底盖外侧。

底盖中部设有用于磁铁移动的驱动槽，两侧设有用于楔形块移动的滑道；滑块运动时，提取仓位于两个楔形块之间；楔形块可切断弱支撑，使固定卡片脱落；或者通过其顶部的斜面顶起密封片。

上盖上设有挤出孔，挤出孔位于缓冲液槽上方；挤出孔上连有可开合的压板，压板向下移动时可挤压洗脱槽和缓冲液槽。

根据本发明另一具体实施方式，相邻两槽之间设有可旋转的密封轴，密封轴上设有通道。

根据本发明另一具体实施方式，相邻两槽之间设有与密封轴配合的密封槽，密封槽与密封轴对应设置。

本方案中，试剂盒进一步包括顶盖，顶盖可拆卸地连接提取仓顶端，并封闭提取仓各槽；提取仓各槽的大小和形状可按需定制，数量根据反应需求而定。

密封轴上设有旋钮，旋钮位于通道上方；顶盖设有若干旋转孔，其与密封轴对应设置；旋钮穿过对应的旋转孔。

顶盖进一步包括两个活塞孔，分别位于洗脱槽和缓冲液槽上方；每一个活塞孔均有一个活塞穿过。

根据本发明另一具体实施方式，扩增管内设有用于实现核酸增量扩增的扩增试剂，扩增试剂为pcr平台试剂或恒温扩增试剂。

本方案中，扩增试剂配方为：

tris-hcl(ph8.8)70mmol/l、kcl65mmol/l、

(nh4)2so425mmol/l、mgcl26mmol/l、peg80003％(质量分数)、海藻糖10％(质量分数)、

目的上游引物f110μmol/l、目的下游引物r110μmol/l、

目的探针p13μmol/l、内对照上游引物f210μmol/l、

内对照下游引物r210μmol/l、内对照探针p23μmol/l。

其中，引物探针序列如下(f1、r1、r1为pax1目的检测基因甲基化的引物探针；f2、r2、r2为检测beta-actin基因的的内对照引物探针)：

f1：5'-tattttgggtttgggggtc-3'；

r1：5'-cccgaaaaccgaaaaccgc-3'；

p1：5'fam-ccaaccgcgaactaaaaacgcg-3'bhq1；

f2：5'-gtagtggaggaggtttagtaagt-3'；

r2：5'hex-accacccaacacataacaataacaaacaca-3'bhq1；

p2：5'-caataaaacctactcctcccttaa-3'。

本发明中，扩增试剂原料各组分混合在一起，呈液态；经过冻干工艺处理后得到干粉状的扩增试剂。

根据本发明另一具体实施方式，扩增试剂原料通过冻干工艺处理，得到扩增试剂：冻干工艺包括：

步骤s1：将所述扩增试剂原料在-58℃环境下放置5h；

步骤s2：将所述扩增试剂原料在-40℃环境下放置8h；

步骤s3：将所述扩增试剂原料在-20℃环境下放置6h；

步骤s4：将所述扩增试剂原料在20℃环境下放置5h。

本方案中，扩增试剂需保存于2-8℃环境中。

本发明的操作原理如下(磁铁为电磁铁)：

1、将样本加入样本槽，封闭进料口；同时，滑块置于样本槽下方；此时，磁铁尚未通电，不具有磁性；2、滑块向扩增管方向移动，隔断失效，液体流入修饰槽；样本被裂解，释放出核酸；核酸同时被转化修饰，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶不受影响；3、滑块继续移动，隔断失效，液体流入结合槽；4、滑块继续移动，隔断失效，液体流入磁性槽；5、磁性物质均匀扩散到结合增强剂中，核酸跟磁性物质结合在一起；6、磁铁通电，开始具有磁性；滑块继续移动，隔断失效，磁性物质流入第一油槽；7、滑块继续移动，隔断暂时失效，磁性物质流入洗涤槽；当滑块位于洗涤槽下方时，第一油槽与洗涤槽之间的隔断恢复，继续隔开第一油槽与洗涤槽；8、磁铁断电，磁性物质均匀扩散到洗涤液中；磁性物质上的杂质被洗掉，并转移到洗涤液中；9、磁铁通电，滑块继续移动，隔断失效，磁性物质流入第二油槽；10、滑块继续移动，隔断暂时失效，磁性物质流入洗脱槽；当滑块位于洗脱槽下方时，第二油槽与洗脱槽之间的隔断恢复，继续隔开第二油槽与洗脱槽；11、磁铁断电，磁性物质均匀扩散到洗脱液中；磁性物质上的核酸被洗掉，并转移到洗脱液中；12、磁铁通电，滑块继续移动，隔断失效，液体流入缓冲液槽；滑块往回运动，停在洗脱槽下方，使磁性物质保留在洗脱槽中；核酸留在缓冲液槽中；13、在外界挤压下，缓冲液槽内的液体流入扩增管，并在扩增管内进行核酸扩增。

与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：

本发明可将核酸提取和核酸扩增检测无缝联合，仅需加入样本，1小时内即可得到结果；整个过程无需再增加操作步骤，且均在全封闭环境下进行，可有效避免外部环境与检测试剂交叉污染；裂解试剂、洗涤液、洗脱液分别固定在单独的液体储存腔，且用油相将液体两两隔开，液体之间不会相互直接接触，避免交叉污染；扩增管也是单独设置，更有利于进行扩增反应；核酸提取、亚硫酸转化和甲基化检测一体化设置，全封闭反应，人手操作时间仅需3分钟。

下面结合附图对本发明作进一步的详细说明。

附图说明

图1是实施例1的试剂盒的爆炸图；

图2是实施例1的试剂盒的剖视图；

图3是实施例1的支架的结构示意图；

图4是实施例1的上盖的结构示意图；

图5是实施例1的滑块的结构示意图；

图6是实施例1的密封片的结构示意图；

图7是实施例1的试剂盒的整体结构示意图；

图8是实施例2的试剂盒的爆炸图；

图9是实施例2的试剂盒的剖视图；

图10是实施例2的提取仓的结构示意图；

图11是实施例2的顶盖的结构示意图；

图12是实施例2的滑块的结构示意图；

图13是实施例2的密封轴的结构示意图；

图14是实施例2的试剂盒的整体结构示意图；

图15是实施例1的灵敏度检测结果图；

图16是实施例1的阴性样本检测结果图。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供了一种用于检测宫颈癌pax1基因甲基化的试剂盒，如图1-7所示，其包括提取仓1、裂解机构2、洗涤机构3、洗脱机构4、驱动机构5、扩增管6、上盖7、支架8和底盖9。

其中，提取仓1由弹性材料制成，其包括按照样本流向依次分布的裂解机构2、洗涤机构3、洗脱机构4、缓冲液槽101和弹性密封膜104；支架8固定在提取仓1上，二者通过黏结剂粘合；上盖7和底盖9可拆卸地连接，二者围成一个空腔，提取仓1和支架8位于空腔内；支架8上设有上盖安装孔801，用于与上盖7连接。

裂解机构2内设有裂解试剂和磁性物质；磁性物质为磁珠。

洗涤机构3包括第一油槽301和洗涤槽302，洗涤槽302内设有洗涤液；第一油槽301位于裂解机构2和洗涤槽302之间。

洗脱机构4包括第二油槽401和洗脱槽402，洗脱槽402内设有洗脱液；第二油槽401位于洗涤槽302和洗脱槽402之间；第一油槽301和第二油槽401内均设有油相；相邻两槽之间设有可活动的隔断；裂解机构2与第一油槽301之间设有可活动的隔断。

裂解机构2包括按照样本流向依次分布的样本槽201、修饰槽202、结合槽203和磁性槽204；裂解机构2内，相邻两槽之间设有可活动的隔断；磁性槽204与第一油槽301之间设有可活动的隔断；样本槽201上设有用于添加样本的进料口205，进料口205上设有样本盖206，用于样本添加后封闭样本槽201。

裂解试剂包括裂解修饰液和结合增强剂，分别设于修饰槽202和结合槽203内；磁性物质设于磁性槽204内。

驱动机构5包括可按照样本流向滑移的滑块501和用于驱动滑块501运行的动力部件(图中未示)，动力部件为电机；滑块501上设有磁铁502；磁铁502位于滑块501中心，其为电磁铁。

扩增管6位于洗脱机构4下游；扩增管6与洗脱槽402连通；扩增管内设有用于实现核酸增量扩增的扩增试剂，扩增试剂为pcr平台试剂。

本实施例中，扩增试剂原料各组分混合在一起，呈液态；经过冻干工艺处理后得到干粉状的扩增试剂。

缓冲液槽101位于洗脱槽402下游，且与洗脱槽402之间设有可活动的隔断；缓冲液槽101位于扩增管6上游，且与扩增管6相通；缓冲液槽101与扩增管6通过连接头102相连，连接头102上设有出料口103；样本通过出料口103从缓冲液槽101流入扩增管6；上盖7上设有挤出孔701，挤出孔701位于缓冲液槽101上方；挤出孔701上连有可开合的压板702，压板702向下移动时可挤压洗脱槽402和缓冲液槽101。

第一油槽301和洗涤槽302之间设有可上下移动的密封片11；第二油槽401和洗脱槽402之间设有可上下移动的密封片11；支架8上设有用于限制密封片11自由度的限位槽802，限位槽802与密封片11对应设置；密封片11用于防止相邻两槽中的试剂相混；上盖7内侧顶部设有弹簧安装孔703，其与密封片11对应设置；密封片11包括用于压紧弹性密封膜104的突起1101和用于与弹簧13配合的销轴1102，突起1101位于密封片11底部，销轴1102位于密封片11顶部；弹簧13一侧安装于弹簧安装孔703内，另一侧套在销轴1102上。

裂解机构2内，相邻两槽之间设有可脱落的固定卡片12；磁性槽204与第一油槽301之间设有可脱落的固定卡片12；洗涤槽302和第二油槽401之间设有可脱落的固定卡片12；洗脱槽402与缓冲液槽101之间设有可脱落的固定卡片12；固定卡片12用于试剂封堵，防止相邻两槽中的试剂相混；固定卡片12两侧分别通过弱支撑1201连接上盖7底部。

弹性密封膜104位于密封片11与固定卡片12下方，且被密封片11与固定卡片12压紧。

滑块501上设有用于顶起密封片11或使固定卡片12脱落的楔形块503；楔形块503的数目为两个，分别位于磁铁502两侧；滑块501位于底盖9外侧；底盖9中部设有用于磁铁502移动的驱动槽901，两侧设有用于楔形块503移动的滑道902；滑块501运动时，提取仓1位于两个楔形块503之间；楔形块503可切断弱支撑1201，使固定卡片12脱落；或者通过其顶部的斜面顶起密封片11。

本实施例中，提取仓1底部采用封膜105密封，封膜105可封住装于提取仓1中各个槽内的液体或固体；封膜105与提取仓1通过黏结剂粘合；弹性密封膜104位于封膜105上方，其在固定卡片12及密封片11的压紧作用下，与封膜105贴合，对各槽之间的液体或固体形成隔离。

本实施例的使用方法如下：

1、取下样本盖206，向样本槽201加入样本，盖上样本盖206；

2、在动力部件驱动下，滑块501往扩增管6方向移动；当滑块501经过固定卡片12时，楔形块503切断固定卡片12两侧的弱支撑1201；固定卡片12脱落，密封作用失效；被固定卡片12顶紧密封的弹性密封膜104在自身弹性作用下弹起，且永不恢复密封状态；此时形成通路，位于通路两侧槽内的液体连通；

3、样本流入修饰槽202，磁性物质携带样本信息；在磁铁502作用下，携带样本信息的磁性物质随滑块501继续移动；经过固定卡片12时，重复步骤2；

4、当滑块501经过密封片11时，密封片11在楔形块503经过时弹起，被密封片11顶紧密封的弹性密封膜104在自身弹性作用下弹起；磁性物质随滑块501通过；在楔形块503通过后，密封片11在弹簧13作用下再次压紧弹性密封膜104，重新阻断其两侧液体；

5、当磁性物质保留在洗脱槽402中，而核酸留在缓冲液槽101中时，压板702向下移动，挤压洗脱槽402和缓冲液槽101；缓冲液槽101内的液体流入扩增管6，并在扩增管6内进行pcr扩增。

裂解修饰液配方为：

亚硫酸氢铵3mol/l、亚硫酸铵2mol/l、盐酸胍2.5mol/l、

氢氧化钠0.5mol/l、对苯二酚0.5mmol/l。

结合增强剂配方为：异丙醇70％(体积分数)、氯化钠0.3mol/l。

洗涤液配方为：异丙醇70％(体积分数)、氯化钠0.3mol/l。

洗脱液配方为：tris-hcl(ph8.8)50mmol/l、edta0.3mol/l。

扩增试剂配方为：

tris-hcl(ph8.8)70mmol/l、kcl65mmol/l、

(nh4)2so425mmol/l、mgcl26mmol/l、peg80003％(质量分数)、海藻糖10％(质量分数)、

目的上游引物f110μmol/l、目的下游引物r110μmol/l、

目的探针p13μmol/l、内对照上游引物f210μmol/l、

内对照下游引物r210μmol/l、内对照探针p23μmol/l。

其中，引物探针序列如下(f1、r1、r1为pax1目的检测基因甲基化的引物探针；f2、r2、r2为检测beta-actin基因的的内对照引物探针)：

f1：5'-tattttgggtttgggggtc-3'；

r1：5'-cccgaaaaccgaaaaccgc-3'；

p1：5'fam-ccaaccgcgaactaaaaacgcg-3'bhq1；

f2：5'-gtagtggaggaggtttagtaagt-3'；

r2：5'hex-accacccaacacataacaataacaaacaca-3'bhq1；

p2：5'-caataaaacctactcctcccttaa-3'。

本发明中，扩增试剂原料各组分混合在一起，呈液态；经过冻干工艺处理后得到干粉状的扩增试剂。

根据本发明另一具体实施方式，扩增试剂原料通过冻干工艺处理，得到扩增试剂：冻干工艺包括：

步骤s1：将所述扩增试剂原料在-58℃环境下放置5h；

步骤s2：将所述扩增试剂原料在-40℃环境下放置8h；

步骤s3：将所述扩增试剂原料在-20℃环境下放置6h；

步骤s4：将所述扩增试剂原料在20℃环境下放置5h。

本方案中，扩增试剂需保存于2-8℃环境中。

为验证裂解试剂的效果，进行灵敏度检测：

以pax1基因完全甲基化的细胞为样本，分别取10、10²、10³、10⁴个细胞进行提取、修饰、检测；其fam通道结果如图15所示：10个细胞的检测结果是阴性，10²、10³、10⁴个细胞的检测结果都是pax1甲基化阳性；裂解试剂盒灵敏度可至10²个细胞。

同时，还需进行阴性样本检测：

以pax1基因完全没有甲基化的细胞为样本，取10⁴个细胞，进行提取、修饰、检测；其结果如图16所示，为pax1甲基化阴性。

实施例2

本实施例提供了一种用于检测宫颈癌pax1基因甲基化的试剂盒，如图8-14所示，其包括提取仓21、裂解机构22、洗涤机构23、洗脱机构24、驱动机构25、扩增管26和顶盖27。

其中，提取仓21包括按照样本流向依次分布的裂解机构22、洗涤机构23、洗脱机构24和缓冲液槽2101。

裂解机构22内设有裂解试剂和磁性物质；磁性物质为磁珠。

洗涤机构23包括第一油槽2301和洗涤槽2302，洗涤槽2302内设有洗涤液；第一油槽2301位于裂解机构22和洗涤槽2302之间。

洗脱机构24包括第二油槽2401和洗脱槽2402，洗脱槽2402内设有洗脱液；第二油槽2401位于洗涤槽2302和洗脱槽2402之间；第一油槽2301和第二油槽2401内均设有油相；相邻两槽之间设有可活动的隔断；裂解机构22与第一油槽2301之间设有可活动的隔断。

裂解机构22包括按照样本流向依次分布的样本槽2201、修饰槽2202、结合槽2203和磁性槽2204；裂解机构22内，相邻两槽之间设有可活动的隔断；磁性槽2204与第一油槽2301之间设有可活动的隔断；样本槽2201上设有用于添加样本的进料口2205，进料口2205上设有样本盖2206，用于样本添加后封闭样本槽2201。

裂解试剂包括裂解修饰液和结合增强剂，分别设于修饰槽2202和结合槽2203内；磁性物质设于磁性槽2204内。

驱动机构25包括可按照样本流向滑移的滑块2501和用于驱动滑块2501运行的动力部件(图中未示)，动力部件为电机；滑块2501上设有磁铁2502；磁铁2502位于滑块2501中心，其为电磁铁。

扩增管26位于洗脱机构24下游；扩增管26与洗脱槽2402连通；扩增管内设有用于实现核酸增量扩增的扩增试剂，扩增试剂为恒温扩增试剂。

缓冲液槽2101位于洗脱槽2402下游，且与洗脱槽2402之间设有可活动的隔断；缓冲液槽2101位于扩增管26上游，且与扩增管26相通；缓冲液槽2101与扩增管26通过连接头2102相连，连接头2102上设有出料口2103；样本通过出料口2103从缓冲液槽2101流入扩增管26。

本实施例中，相邻两槽之间设有可旋转的密封轴28，密封轴28上设有通道2801和旋钮2802，旋钮2802位于通道2801上方；顶盖27可拆卸地连接提取仓21顶端，并封闭提取仓21各槽；相邻两槽之间设有与密封轴28配合的密封槽29，密封槽29与密封轴28对应设置。

顶盖27设有若干旋转孔2701和两个活塞孔2702，其与密封轴28对应设置；旋钮2802穿过对应的旋转孔2701；两个活塞孔2702分别位于洗脱槽2402和缓冲液槽2101上方；每一个活塞孔2702均有一个活塞2703穿过。

本实施例的使用方法如下：

1、取下样本盖2206，加入样本，盖上样本盖2206；此时，通道2801与其两侧槽之间的连线垂直，防止两槽内的物质流通，起到隔离的作用；

2、在动力部件驱动下，滑块2501往扩增管26方向移动；当滑块2501经过密封轴28时，密封轴28旋转90°，通道2801将相邻两槽连通；

3、样本经通道2801流入修饰槽2202，磁性物质携带样本信息；在磁铁2502作用下，携带样本信息的磁性物质随滑块2501继续移动；经过密封轴28时，重复步骤2；第一油槽2301和洗涤槽2302之间的密封轴28以及第二油槽2401和洗脱槽2402之间的密封轴28在滑块2501经过后，旋转90°，重新封闭两侧槽；其余密封轴28不再旋转；

4、当磁性物质保留在洗脱槽2402中，而核酸留在缓冲液槽2101中时，向下推动活塞2703，挤压缓冲液槽2101；缓冲液槽2101内的液体流入扩增管26，并在扩增管26内进行pcr扩增。

实施例3

本实施例与实施例1的区别在于：不设扩增管，而在缓冲液槽内进行扩增反应；此时，无需设置连接头，在缓冲液槽上直接设置出料口，用于扩增反应后样本的流出。

实施例4

本实施例与实施例2的区别在于：提取仓竖直放置。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于：缓冲液槽和扩增管之间设有第三油槽，第三油槽内设有油相；缓冲液槽与第三油槽之间设有可脱落的固定卡片，扩增管与第三油槽之间设有可脱落的固定卡片。

虽然本发明以较佳实施例揭露如上，但并非用以限定本发明实施的范围。任何本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的发明范围内，当可作些许的改进，即凡是依照本发明所做的同等改进，应为本发明的范围所涵盖。