本发明涉及一种高纯度甜菊糖苷rd和rm的制备方法，属于天然化学领域。
背景技术：
甜叶菊原产于巴拉圭瓜拉尼，上世纪30年代初有科研人员从其叶子中提取出具有甜味的物质即甜菊糖苷。甜菊糖苷含有多种不同成分的四环二萜类单体，根据不同程度的糖基化修饰后可以得到不同程度的甜味口感。甜菊糖苷类化合物中含量相对丰富的甜菊苷（stevioside，stv）、莱鲍迪甙a(ra)等已广泛应用于饮料、食品、调味品、乳制品等领域。虽然甜菊苷和莱鲍迪甙a(ra)具有高甜度，但在口感上还存在除甜味以为的后苦味，相比之下，莱鲍迪甙d(rd)和莱鲍迪甙m(rm)具有更好的口感特性。
目前国际上主要关照甜菊糖苷中stv、ra等单一组分的提纯方法的研究，因此存在大量的甜菊糖苷结晶的母液糖（提取ra、stv后的转晶母液糖）需要处理。如果能够利用甜菊糖苷结晶母液糖为原料，继续提取出rd和rm，则能充分地利用原料且能够取得更大的经济效益。有中国专利（cn201711154894.x）提供了一共重结晶方法：依次使用乙醇和甲醇对母液糖干粉进行重结晶，但此过程中必须使用大量的甲醇和乙醇，则必然产生大量的有机溶剂废液，且重结晶过程需要进行多次，过程繁琐且能耗较大，不利于进行工业化生产。
技术实现要素：
本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种高纯度甜菊糖苷rd和rm的制备方法，以解决现有技术中存在的问题。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种高纯度甜菊糖苷rd和rm的制备方法，具体步骤如下：其中部件的关系。
（1）色谱柱装柱、冲洗：将树脂分散于乙醇和水的混合溶液中，搅拌均匀，并装入至色谱柱中，用乙醇和水的混合溶液冲洗压实色谱柱床并浸泡2h，超纯水冲洗至流出液无醇味；
（2）样品制备：取甜菊糖苷母液糖浓液并用超纯水稀释，制成母液糖稀释液，备用；
（3）上样：将步骤（2）得到的样品液连续流过色谱柱；
（4）平衡：待上样结束后，用超声水冲洗色谱柱；
（5）洗脱：色谱柱平衡结束后，以乙醇和水的混合溶液为洗脱液对色谱柱进行洗脱，根据uv检测情况，收集流出液，检测纯度；将纯度合格的收集液合并，得到收集液；
（6）浓缩：将收集液浓缩，得到浓缩液；
（7）重结晶：将浓缩液重结晶，可得到rd和rm；
作为本发明的一种改进，所述步骤（1）中树脂为super200-x19球形材料。
作为本发明的一种改进，所述步骤（1）乙醇和水的混合溶液中乙醇和水的体积比为1-89:9；乙醇和水的混合溶液中乙醇的浓度为90%。
作为本发明的一种改进，所述步骤（1）中用乙醇和水的混合溶液冲洗色谱柱的速度为每小时1-4倍的柱体积。
作为本发明的一种改进，所述步骤（2）中母液糖稀释液的浓度为2-50%。
作为本发明的一种改进，所述步骤（3）中样品液经过色谱柱的速度为每小时1-4倍柱体积。
作为本发明的一种改进，所述步骤（3）中柱体积树脂和母液糖浓液的体积比为100:1-4。
作为本发明的一种改进，所述步骤（4）中超声水的体积为柱体积的1-3倍。
作为本发明的一种改进，所述步骤（5）乙醇和水的混合溶液中乙醇和水的体积比为1-21:9。
作为本发明的一种改进，所述步骤（5）中乙醇和水的混合溶液为对色谱柱进行洗脱时，速度为每小时1-4倍柱体积。
本发明的技术方案是采用南京亘闪生物科技有限公司生产的super200-x19树脂，该树脂是交联的聚苯乙烯系列球形材料，其可以达到提取rd和rm的目的；其过程包括将该树脂装填入色谱柱作为固定相，把含有待分离的rd、rm的母液糖样品流过色谱柱，然后再把吸附于super200-x19固体相上的rd和rm洗脱下来。
由于采用了以上技术，本发明较现有技术相比，具有的有益效果如下：
本发明公开了super200-x19树脂可以以超纯水为上样液，乙醇和水的混合溶液为洗脱液，对甜菊糖苷提取后的母液糖混合液中的rd和rm进行有效提取，且具有良好的选择性，效率高，重现性好，成本低、容易产业化等优点，避免过程中使用大量有机溶剂。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐明本发明。
实施例1：
样品准备：将称取母液糖浓液34.54ml，用超纯水稀释至20%的浓度；
纯化：采用50×440mm玻璃柱，super200-x19树脂（南京亘闪生物科技有限公司）为分离介质，装柱体积863.5ml，用2倍柱体积的90%乙醇和水混合溶液冲洗色谱柱并浸泡2h后，再用3倍柱体积超纯水冲洗色谱柱；将样品以每小时4倍柱体积的流速连续上样，上样结束后，用1倍柱体积的超纯水去冲洗色谱柱；然后以30%乙醇和水混合溶液以每小时4倍柱体积的速度洗脱，根据uv检测情况分管收集。将纯度合格的收集液合并，就行浓缩、重结晶可得到20.5grd和rm。
实施例2：
样品准备：将称取母液糖浓液3.19ml，用超纯水稀释至15%的浓度；
纯化：采用26×300mm玻璃柱，super200-x19树脂（南京亘闪生物科技有限公司）为分离介质，装柱体积159.5ml，用1倍柱体积的90%乙醇和水混合溶液冲洗色谱柱并浸泡2h后，用4倍柱体积超纯水冲洗色谱柱；将样品以每小时2倍柱体积的流速连续上样，上样结束后，用2倍柱体积的超纯水去冲洗色谱柱；然后以40%乙醇和水混合溶液以每小时2倍柱体积的速度洗脱，根据uv检测情况分管收集。将纯度合格的收集液合并，就行浓缩、重结晶可得到2.75grd和rm。
实施例3：
样品准备：将称取母液糖浓液0.603ml，用超纯水稀释至50%的浓度；
纯化：采用16×100mm玻璃柱，super200-x19树脂（南京亘闪生物科技有限公司）为分离介质，装柱体积20.1ml，用4倍柱体积的90%乙醇和水混合溶液冲洗色谱柱并浸泡2h后，用2倍柱体积超纯水冲洗色谱柱；将样品以每小时1倍柱体积的流速连续上样，上样结束后，用3倍柱体积的超纯水去冲洗色谱柱；然后以30%乙醇和水混合溶液以每小时1倍柱体积的速度洗脱，根据uv检测情况分管收集。将纯度合格的收集液合并，就行浓缩、重结晶可得到0.5grd和rm。
上述实施例仅为本发明的优选技术方案，而不应视为对于本发明的限制，本发明的保护范围应以权利要求记载的技术方案，包括权利要求记载的技术方案中技术特征的等同替换方案为保护范围，即在此范围内的等同替换改进，也在本发明的保护范围之内。