一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂的制作方法

本发明涉及低密度脂蛋白胆固醇检测技术领域，特别涉及一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂。

背景技术

胆固醇在血液中以脂蛋白的形式存在。血浆中低密度脂蛋白(ldl)是运输内源性胆固醇的主要载体，ldl通过结合其细胞膜上的低密度脂蛋白受体(ldl-r)被降解和转化。

低密度脂蛋白胆固醇（ldl-c）浓度与冠心病的发病率有明显正相关，ldl-c成为评价个体冠心病发生的危险因素的一个重要指标，现已证实，ldl-c水平与动脉粥样硬化、冠心病的发生呈正相关。美国国家胆固醇教育计划(ncep)将ldl-c作为首要解决分析因子，并以ldl-c水平作为决策依据，确定高胆固醇患者是否需要限制饮食或进行药物治疗。

随着技术的不断进步，ldl-c的测定方法也在不断发展，目前在临床工作中比较简便实用且应用较广的ldl-c测定方法有均相法、β-定量法、聚乙烯硫酸（pvs）选择性沉淀法、公式计算法，不同的方法各有优缺。其中，β-定量法是超离心结合选择沉淀法，该方法具有良好的准确性，是公认的cdc参考方法，但是该方法需要经过超离心、选择性沉淀等步骤，操作复杂，一般只能应用在参考实验室，无法广泛应用到一般临床医院；聚乙烯硫酸（pvs）选择性沉淀法容易受到高vldl的干扰；公式计算法实质上不需要测量低密度脂蛋白胆固醇含量，而是通过总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇以及甘油三酯的含量进行计算，该方法一则受到其他三项结果的影响，二则对于异常样本准确性计算存在较大差异。目前临床使用最为普遍的为均相法，该方法不需要对血清样本进行处理而是可以直接进行检测，而均相法又可分为免疫透射比浊法、清除法、杯芳烃法、可溶性反应法、保护性试剂法等方法。

均相法检测血液中低密度脂蛋白胆固醇具有简单、迅速、灵敏度都较好且抗干扰能力强、无须样本预处理、可进行自动化分析等优点，但是目前临床应用中所使用的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂均为双试剂或多试剂组成，占用了设备更多的空间，降低了使用的便利性，为提高产品方便实用性，发明了一种单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，具有方便快捷、准确高效的优点。

技术实现要素：

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂选择添加特异性强的表面活性剂、多聚阴离子以及糖类环状物质，多聚阴离子和糖类环状物质能快速有效的抑制被测样本中vldl、cm和hdl-c三种物质的解离，具有特异性的表面活性剂能够有效激活低密度脂蛋白胆固醇（ldl-c）解离，而对于ldl-c以外的vldl、cm和hdl-c有较好的抑制解离作用，此时被测样本中被特异性解离出来的ldl-c通过胆固醇脂酶和胆固醇氧化酶的催化生成h2o2,参与trinder反应而显色,因其他脂蛋白的胆固醇分子已被有效抑制不参与反应,显色程度与ldl-c的量呈正比例，从而计算ldl-c的含量。

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，所述试剂r组成如下：

缓冲液··············································50mmol/l-100mmol/l，

氯化镁··············································2.5g/l-5g/l，

多聚阴离子··········································3g/l-5g/l，

糖类环状物··········································1g/l-5g/l

hdaos（n-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基氧基苯胺钠盐）···0.1g/l-1g/l，

表面活性剂1·········································0.1ml/l-1g/l，

表面活性剂2·········································0.1g/l-1g/l

表面活性剂3·········································5g/l-10g/l

抗坏血酸氧化酶······································1ku/l-5ku/l，

胆红素氧化酶········································1ku/l-3ku/l，

胆固醇脂酶··········································1ku/l-3ku/l，

胆固醇氧化酶········································0.5ku/l-3ku/l，

过氧化物酶··········································1ku/l-3ku/l，

4-aa················································0.1g/l-0.3g/l，

防腐剂··············································1ml/l-3ml/l。

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，试剂r中所述的缓冲液为25℃，ph=6.5的mes缓冲液。

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，试剂r中所述的多聚阴离子为硫酸葡聚糖5万（山海西宝生物）。

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，试剂r中所述的糖类环状物为β-环糊精。

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，试剂r中所述的表面活性剂1，表面活性剂2，表面活性剂3分别为amphitol20ab、壬基酚聚氧乙烯月桂醚np-07、聚氧乙烯聚丙烯醚嵌段共聚物（pluronicf-68）。

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，试剂r中所述的防腐剂为pc-300。

所述的一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂为单一检测试剂。

所述的一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，低密度脂蛋白胆固醇的检测方法，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为546nm，副波长为700nm。

本发明的创新处：

1）本法发明是一种均相法检测血中低密度脂蛋白胆固醇的检测试剂，是单一的检测试剂，具有方便快捷、准确高效的优点；

2）本法发明中添加了适量的氯化镁、硫酸葡聚糖5万以及β环糊精等遮蔽物质，能有效的抑制和掩盖vldl、cm和hdl-c，确保非ldl-c物质的参与反应；

3）本发明中优选了amphitol20ab、壬基酚聚氧乙烯月桂醚np-07、聚氧乙烯聚丙烯醚嵌段共聚物（pluronicf-68）三种表面活性剂，amphitol20ab和壬基酚聚氧乙烯月桂醚np-07两种表面活性剂对vldl、cm和hdl-c有强抑制作用，对ldl-c有适当激活作用，聚氧乙烯聚丙烯醚嵌段共聚物（pluronicf-68）仅对ldl-c有强激活作用，三种表面活性剂的添加，进一步确保反应的特异性；

4）本发明中添加了多种干扰物质的去干扰剂，能够有效的去除临床中常见干扰物质的干扰。

附图说明

图1实施例1和2试剂检测方法；

图2实施例1和2试剂干扰性实验检测结果；

图3实施例1和实施例2试剂与β定量法检测血清低密度脂蛋白胆固醇对比检测结果；

图4实施例1试剂和β定量法检测血清低密度脂蛋白胆固醇结果相关性曲线图；

图5实施例2试剂和β定量法检测血清低密度脂蛋白胆固醇结果相关性曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

一种准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，所述试剂r组成如下：

mes·····················································50mmol/l，

氯化镁··················································2.5g/l，

硫酸葡聚糖5万（上海西宝生物）·····························3g/l，

β-环糊精················································1g/l，

hdaos（n-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基氧基苯胺钠盐）·······0.1g/l，

amphitol20ab···········································0.1ml/l，

壬基酚聚氧乙烯月桂醚np-07······························0.1g/l，

聚氧乙烯聚丙烯醚嵌段共聚物（pluronicf-68）···············5g/l，

抗坏血酸氧化酶··········································1ku/l，

胆红素氧化酶············································1ku/l，

胆固醇脂酶··············································1ku/l，

胆固醇氧化酶············································0.5ku/l，

过氧化物酶··············································1ku/l，

4-aa····················································0.1g/l，

pc-300··················································1ml/l。

实施例2

1)本实施例描述的是一种重要组成部分含量增加的准确高效的单一试剂的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，所述试剂r的组成如下：

mes···························································100mmol/l，

氯化镁························································5g/l，

硫酸葡聚糖5万（上海西宝生物）···································5g/l，

β-环糊精······················································5g/l

hdaos（n-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基氧基苯胺钠盐）·············1g/l，

amphitol20ab·················································1g/l，

壬基酚聚氧乙烯月桂醚np-07····································1g/l

聚氧乙烯聚丙烯醚嵌段共聚物（pluronicf-68）·····················10g/l

抗坏血酸氧化酶················································5ku/l，

胆红素氧化酶··················································3ku/l，

胆固醇脂酶····················································3ku/l，

胆固醇氧化酶··················································3ku/l，

过氧化物酶····················································3ku/l，

4-aa··························································0.3g/l，

pc-300························································3ml/l。

3）检测使用方法：

本实施例描述的低密度脂蛋白胆固醇检测试剂，在使用全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用一点终点法进行测定。分别将实施例1和实施例2的r放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如图1。

4）干扰性试验：

根据临床样本中常见的干扰情况，模拟不同的干扰物质进行干扰实验。

取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到图2的要求。然后分别用实施例1和实施例2所得试剂，同时对比测定血清中低密度脂蛋白胆固醇的含量，加入不同干扰物质后各组的测定结果见图2。相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值－无干扰物质的样本的测定均值)/无干扰物质的测定均值×100%。

由图2可以看出，实施例1和实施例2试剂在抗坏血酸≤2000μmol/l、胆红素≤986μmol/l、血红蛋白≤10.5g/l、甘油三酯≤20.6u/l条件下对测试结果没有明显干扰。

5）相关性实验：

利用实施例1和实施例2中的配方配制试剂，与β定量法检测血清低密度脂蛋白胆固醇进行对照检测，同时检测了20个临床血清样本，检测结果图3所示。并获得了两种试剂分别与β定量法检测结果的相关性曲线（如图4和图5所示），通过检测结果显示，实施例1和实施例2试剂与β定量法检测血清低密度脂蛋白胆固醇相关系数分别为0.9988和0.9994，说明了实施例1和实施例2试剂与β定量法都有极大的相关性。