本发明涉及生物
技术领域：
，具体涉及一种利用猪牛软骨提取活性胶原蛋白和弹性蛋白的方法。
背景技术：
胶原蛋白是人和脊椎动物体内含量最多的蛋白质，约占体内蛋白总量的1/3。由于具有良好的生物相容性、可降解性、低抗原性以及良好的止血性能和促进细胞生长等功能，使其成为最早应用于临床的体内植入材料。皮肤，肌腱等组织是目前提取ⅰ型胶原的主要原料，但它们含有大量其它种类的胶原和非胶原杂质，提取纯化操作复杂且成本高昂。骨中胶原含量丰富，且主要为ⅰ型胶原。如何充分利用骨提取ii胶原蛋白和弹性蛋白，使其能应用于改善肌肤健康和骨骼关节健康，是目前需要解决的问题。技术实现要素：针对现有技术中的缺陷，本发明目的在于提供一种利用猪牛软骨提取活性胶原蛋白和弹性蛋白的方法，以通过改进的酶解技术增强酶解法从猪软骨和/或牛软骨中提取ii胶原蛋白和弹性蛋白。为实现上述目的，本发明提供的技术方案为：本发明提供了一种利用猪牛软骨提取活性胶原蛋白和弹性蛋白的方法，包括步骤：在经过前期处理的软骨中加入醋酸，然后加入胃蛋白酶进行消化，然后进行后期处理，得到活性胶原蛋白和弹性蛋白提取物。优选地，软骨为猪软骨和/或牛软骨。优选地，前期处理具体包括步骤：将软骨捣碎成片状，然后去除脂肪组织。优选地，去除脂肪组织是采用生理盐水和/或蒸馏水洗涤多次，优选为4次。优选地，醋酸的摩尔浓度为0.5mol/l，醋酸的加入量为调整经过前期处理的软骨的ph值为2.4～2.6，优选为2.5。优选地，消化的温度为4℃，消化的时间为60～84h，优选为72h。优选地，后期处理依次包括过滤、离子交换、浓缩、灭菌和干燥造粒的步骤。优选地，浓缩是将离子交换后的溶液中的浓度提升至25％～30％，优选为30％。优选地，灭菌为瞬时高温灭菌。本发明还保护根据上述方法制备得到的活性胶原蛋白和弹性蛋白。本发明提供的技术方案，具有如下的有益效果：(1)本发明通过改进的酶解技术增强酶解法从猪软骨和/或牛软骨中提取ii胶原蛋白和弹性蛋白，该产品在针对肌肤健康，骨骼关节健康方面具有积极的临床作用；(2)本发明经过大量的创造性实验，不断的优化整个方法中的各个参数，包括采用的试剂及加入量、消化温度和消化时间等，最终得到了本发明提供的具体方法，对参数的任意调整均将影响提取ii胶原蛋白和弹性蛋白的效果；本发明提供的方法效果好，且操作简单，可重复性强。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。具体实施方式下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，数据为三次重复实验的平均值或平均值±标准差。本发明提供一种利用猪牛软骨提取活性胶原蛋白和弹性蛋白的方法，包括如下步骤：s1：将猪软骨和/或牛软骨捣碎成片状，然后采用生理盐水和/或蒸馏水洗涤多次，优选为4次，以去除脂肪组织；s2：在经s1处理后的猪软骨和/或牛软骨中加入摩尔浓度为0.5mol/l的醋酸，调整ph值为2.4～2.6，优选为2.5，然后加入胃蛋白酶，4℃消化60～84h，优选为72h；s3：将经s2处理得到的产物进行过滤，除去可见的杂质；s4：将经s3处理得到的产物进行离子交换，以消除金属离子和非金属离子的安全以及应用上的问题；s5：将经s4处理得到的产物的浓度提升至25％～30％，优选为30％；s6：将经s5处理得到的产物进行瞬时高温灭菌，将制备过程中产生或者带入的微生物杀灭；s7：将经s6处理得到的产物干燥造粒，得到活性胶原蛋白和弹性蛋白提取物。下面结合具体实施例对本发明提供的技术方案作进一步说明。实施例1本实施例提供一种利用猪牛软骨提取活性胶原蛋白和弹性蛋白的方法，包括如下步骤：s1：将猪软骨捣碎成片状，然后采用生理盐水和蒸馏水各洗涤2次，以去除脂肪组织；s2：在经s1处理后的猪软骨中加入摩尔浓度为0.5mol/l的醋酸，调整ph值为2.5，然后加入胃蛋白酶，4℃消化72h；s3：将经s2处理得到的产物进行过滤，除去可见的杂质；s4：将经s3处理得到的产物进行离子交换，以消除金属离子和非金属离子的安全以及应用上的问题；s5：将经s4处理得到的产物的浓度提升至30％；s6：将经s5处理得到的产物进行瞬时高温灭菌，将制备过程中产生或者带入的微生物杀灭；s7：将经s6处理得到的产物干燥造粒，得到活性胶原蛋白和弹性蛋白提取物。实施例2本实施例提供一种利用猪牛软骨提取活性胶原蛋白和弹性蛋白的方法，包括如下步骤：s1：将牛软骨捣碎成片状，然后采用生理盐水和蒸馏水各洗涤2次，以去除脂肪组织；s2：在经s1处理后的牛软骨中加入摩尔浓度为0.5mol/l的醋酸，调整ph值为2.5，然后加入胃蛋白酶，4℃消化72h；s3：将经s2处理得到的产物进行过滤，除去可见的杂质；s4：将经s3处理得到的产物进行离子交换，以消除金属离子和非金属离子的安全以及应用上的问题；s5：将经s4处理得到的产物的浓度提升至30％；s6：将经s5处理得到的产物进行瞬时高温灭菌，将制备过程中产生或者带入的微生物杀灭；s7：将经s6处理得到的产物干燥造粒，得到活性胶原蛋白和弹性蛋白提取物。实施例3本实施例提供一种利用猪牛软骨提取活性胶原蛋白和弹性蛋白的方法，包括如下步骤：s1：将质量相同的猪软骨和牛软骨捣碎成片状，然后采用生理盐水和蒸馏水各洗涤2次，以去除脂肪组织；s2：在经s1处理后的猪软骨和牛软骨中加入摩尔浓度为0.5mol/l的醋酸，调整ph值为2.5，然后加入胃蛋白酶，4℃消化72h；s3：将经s2处理得到的产物进行过滤，除去可见的杂质；s4：将经s3处理得到的产物进行离子交换，以消除金属离子和非金属离子的安全以及应用上的问题；s5：将经s4处理得到的产物的浓度提升至30％；s6：将经s5处理得到的产物进行瞬时高温灭菌，将制备过程中产生或者带入的微生物杀灭；s7：将经s6处理得到的产物干燥造粒，得到活性胶原蛋白和弹性蛋白提取物。实施例4将本发明实施例1、实施例2和实施例3制备得到的活性胶原蛋白和弹性蛋白提取物进行特性氨基酸含量的测定，得到的结果如下表1所示。表1特性氨基酸含量特性氨基酸实施例1实施例2实施例3desmosine锁链素0.1％0.1％0.1％isodesmosine异锁链素0.1％0.1％0.1％hydropoline羟脯氨酸8％8％8％本发明通过改进的酶解技术增强酶解法从猪软骨和/或牛软骨中提取ii胶原蛋白和弹性蛋白，该产品在针对肌肤健康，骨骼关节健康方面具有积极的临床作用；本发明经过大量的创造性实验，不断的优化整个方法中的各个参数，包括采用的试剂及加入量、消化温度和消化时间等，最终得到了本发明提供的具体方法，对参数的任意调整均将影响提取ii胶原蛋白和弹性蛋白的效果；本发明提供的方法效果好，且操作简单，可重复性强。需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对步骤、数字表达式和数值并不限制本发明的范围。在这里示出和描述的所有示例中，除非另有规定，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制，因此，示例性实施例的其他示例可以具有不同的值。在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个以上，除非另有明确具体的限定。最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的保护范围当中。当前第1页12