本发明属于多肽合成技术领域，具体涉及新型有机磷多肽缩合剂在多肽合成中的应用。
背景技术：
蛋白质在细胞的发育、生长、代谢等过程中发挥着十分重要的作用。肽是蛋白质结构中重要的组成部分。相对于蛋白质，肽在生物体中的作用也很重要，它影响着生物体内许多重要的生理功能，比如可以作为神经递质、神经调节因子和激素，参与受体介导的信号传导。
多肽合成的方法分为酶促法和化学法。作为形成肽键的一种方法，酶促合成有其独特的优点。由于酶的专一性，对氨基酸的侧链官能团无需保护，酶促合成是立体专一性的，不会发生消旋的现象，酶促合成还具有可以在水溶液中进行的优点。但是，酶促法还不太成熟，尚未达到一般应用的程度，仍需进一步的研究。目前在多肽化学法合成中，主要采用羧基活化法来完成接肽反应，最早使用的是将氨基酸活化为酰氯、叠氮、对称酸酐以及混合酸酐的方法，但是由于这些条件下存在氨基酸消旋、反应试剂危险和制备复杂等缺点，逐渐被后来的肽缩合试剂法取代。
理想的多肽缩合剂应该具有制备方便、活性高、无消旋及副反应少等特点。目前使用的多肽缩合剂按照其结构可分为二亚胺型、磷正离子型和脲正离子型。第一个多肽缩合剂是于1955年开发出来的n,n'-二环己基碳二亚胺(dcc)(j.am.chem.soc.,1955,77:1067.)。但是该多肽缩合剂在反应中生成的n,n'-二环己基脲(dcu)在大多数有机溶剂中溶解度很小，很难除尽。自1975年，castro等人设计合成了第一个基于hobt的磷正离子型缩合剂bop以来，1-羟基苯并三唑hobt为活化酯的磷正离子和碳正离子型肽缩合剂迅速发展，再后来这种以3-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮衍生化的碳正离子肽缩合剂n,n,n',n'-四甲基-o-(3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基)脲四氟硼酸盐(tdbtu)(organicsynthesis,1-3,2013；wo2005007634；tetrahedronletters,1989,30(15),1927-1930.)也得到了制备和应用。2014年，专利(zl20141010745.2)报道了3-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮的同分异构体，1-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮的制备方法，并应用在肽缩合中(zl201410107410.6)。有机磷缩合剂也是很重要的一种，基于3-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮的有机磷缩合剂主要有3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮和3-(2'-氧-1',3',2'-二氧杂磷杂环己烷基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮(dopbt)。dopbt的缺点是溶解性能差，只有在dmf中才能更好地溶解，限制了它的应用。目前，基于1-羟基-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮的有机磷肽缩合剂合成及应用尚未见相关报道。
技术实现要素：
本发明的目的是提供了新型有机磷多肽缩合剂在多肽合成中的应用。
本发明为实现上述目的采用如下技术方案，新型有机磷多肽缩合剂在多肽合成中的应用，其特征在于：该新型有机磷多肽缩合剂为1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，其结构式为
本发明所述的新型有机磷多肽缩合剂在多肽合成中的应用，其特征在于具体过程为：在有机溶剂中加入n-端保护的氨基酸或多肽片段、c-端保护的氨基酸或多肽片段、有机碱和有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于-5～30℃搅拌反应合成目标产物多肽，其中有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃或n,n-二甲基甲酰胺，有机碱为二异丙基乙胺、三乙胺、dbu或碳酸钾。
进一步优选，所述n-端保护的氨基酸或多肽片段为cbz-phe-oh、cbz-val-oh或cbz-ala-oh，所述c-端保护的氨基酸或多肽片段为h2n-leu-ome·hcl、h2n-val-ome·hcl、h2n-ala-ome·hcl、h2n-phe-ome·hcl或h2n-gly-oet·hcl。
进一步优选，所述n-端保护的氨基酸或多肽片段、c-端保护的氨基酸或多肽片段、有机碱与有机磷缩合剂的1:1:1-2:1-2。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果：使用新型有机磷多肽缩合剂合成的产物用youngtest方法进行测试，没有观察到氨基酸的消旋，进一步表明新型有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮能够很好地抑制缩合过程中氨基酸的消旋。
具体实施方式
通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
以cbz-phe-oh和h2n-leu-ome·hcl缩合生成z-phe-leu-ome为例(实施例1～5)。
实施例1
z-phe-leu-ome的合成
取10mmolcbz-phe-oh和10mmolh2n-leu-ome·hcl置于250ml圆底烧瓶，再加入50ml二氯甲烷、10mmol二异丙基乙胺和10mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于-5℃搅拌反应，反应结束后依次用水(100ml)、1mol/l的hcl溶液(100ml)、饱和na2co3溶液(100ml)和饱和食盐水溶液(100ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，精制后得白色固体4.26g，产率为95.1％，纯度为98.5％。ms(esi,m/z):449.2[m+na]+。
实施例2
z-phe-leu-ome的合成
取10mmolcbz-phe-oh和10mmolh2n-leu-ome·hcl置于250ml圆底烧瓶，再加入50ml三氯甲烷、20mmol二异丙基乙胺和20mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于30℃搅拌反应，反应结束后依次用水(100ml)、1mol/lhcl溶液(100ml)、饱和na2co3溶液(100ml)和饱和食盐水溶液(100ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体4.12g，产率为92.0％，纯度为99.0％。
实施例3
z-phe-leu-ome的合成
取10mmolcbz-phe-oh和10mmolh2n-leu-ome·hcl置于250ml圆底烧瓶，再加入50ml四氢呋喃、10mmol三乙胺和20mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(100ml)、1mol/lhcl溶液(100ml)、饱和na2co3溶液(100ml)和饱和食盐水溶液(100ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体4.29g，产率为95.8％，纯度为99.5％。
实施例4
z-phe-leu-ome的合成
取10mmolcbz-phe-oh和10mmolh2n-leu-ome·hcl置于250ml圆底烧瓶，再加入50mln,n-二甲基甲酰胺、20mmoldbu和20mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(100ml)、1mol/lhcl溶液(100ml)、饱和na2co3溶液(100ml)和饱和食盐水溶液(100ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体4.15g，产率为92.6％，纯度为99.2％。
实施例5
z-phe-leu-ome的合成
取10mmolcbz-phe-oh和10mmolh2n-leu-ome·hcl置于250ml圆底烧瓶，再加入50ml二氯甲烷、15mmol碳酸钾和15mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于3℃搅拌反应，反应结束后依次用水(100ml)、1mol/lhcl溶液(100ml)、饱和na2co3溶液(100ml)和饱和食盐水溶液(100ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体4.30g，产率为96.0％，纯度为99.5％。
实施例6
z-val-val-ome
取5mmolcbz-val-oh和5mmolh2n-val-ome·hcl置于100ml圆底烧瓶，再加入25ml二氯甲烷、10mmol三乙胺和10mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(10ml)、1mol/lhcl溶液(10ml)、饱和na2co3溶液(10ml)和饱和食盐水溶液(10ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体1.9g，收率为98.0％，纯度为99.5％。ms(esi,m/z):387.2[m+na]+。
实施例7
z-ala-ala-ome
取2mmolcbz-ala-oh和2mmolh2n-ala-ome·hcl置于50ml圆底烧瓶，再加入50ml二氯甲烷、2mmol三乙胺和4mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(10ml)、1mol/lhcl溶液(10ml)、饱和na2co3溶液(10ml)和饱和食盐水溶液(10ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体0.63g，产率为96％，纯度为99.5％。ms(esi,m/z):331.2(m+na]十。
实施例8
z-ala-phe-ome
取5mmolcbz-ala-oh和5mmolh2n-phe-ome·hcl置于100ml圆底烧瓶，再加入25ml二氯甲烷、10mmol三乙胺和5mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(10ml)、1mol/lhcl溶液(10ml)、饱和na2co3溶液(10ml)和饱和食盐水(10ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体1.98g，收率为97.5％，纯度为99.4％。ms(esi):407.2[m+na]十。
实施例9
z-ala-val-ome
取10mmolcbz-ala-oh和10mmolh2n-val-ome·hcl置于25ml圆底烧瓶，再加入50ml三氯甲烷、10mmol三乙胺，12mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(10ml)、1mol/lhcl溶液(10ml)、饱和na2co3溶液(10ml)和饱和食盐水溶液(10ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体3.40g，收率为95.0％，纯度为99.6％。ms(esi):359.2[m+na]十。
实施例10
z-ala-gly-oet
取5mmolcbz-ala-oh和5mmolh2n-gly-oet·hcl置于100ml圆底烧瓶，再加入50ml三氯甲烷、5mmol三乙胺和10mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(10ml)、1mol/lhcl溶液(10ml)、饱和na2co3溶液(10ml)和饱和食盐水溶液(10ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体1.62g，收率为98.0％，纯度为99.4％。ms(esi):331.2[m+na]+。
实施例11
z-phe-gly-oet
取10mmolcbz-phe-oh和10mmolh2n-gly-oet·hcl置于250ml圆底烧瓶，再加入50mln,n-二甲基甲酰胺、20mmoldbu和20mmol有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮，于0℃搅拌反应，反应结束后依次用水(100ml)、1mol/lhcl溶液(100ml)、饱和na2co3溶液(100ml)和饱和食盐水溶液(100ml)洗涤，有机相用无水na2so4干燥过夜，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗品精制后得白色固体3.87g，收率为95.0％，纯度为99.3％。ms(esi):407.2[m+na]十。
实施例1～11中使用有机磷多肽缩合剂合成的目标产物用youngtest方法进行测试，没有观察到氨基酸的消旋，进一步表明所使用的新型有机磷多肽缩合剂1-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮能够很好地抑制缩合过程中氨基酸的消旋。
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。