专利名称：一种多肽缩合剂及其合成方法
技术领域：
本发明涉及一种多肽縮合剂及其合成方法，具体地说涉及一种基于3_( 二乙氧基 磷酰氧基)-l，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)的新型多肽縮合剂的合成。 多肽化合物是重要的生命活性物质，在生物医药领域有广泛的产业应用。多肽合 成的关键试剂之一是用于构造多肽酰胺键的縮合试剂。目前已报道的多肽縮合试剂种类 非常繁多，从分子结构的角度上主要分为碳化二亚胺类型、磷正离子或磷酸酯类型和脲正 离子类型。最常用的碳化二亚胺类縮合试剂是二环己基碳二亚胺(DCC)。由于反应生成的 二环己基脲(DCU)在大多数有机溶剂中溶解度很小，难以除去，人们对DCC的结构进行了改 进，发展了副产物的脂溶性很好的N， N' -二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)等和副产物水溶性 很好的卜(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)。由于这类縮合试剂活性很 高，往往会导致产物有较大程度的消旋。脲正离子型縮合试剂种类繁多，常见的有0 苯并 三氮唑-N，N，N' ，N'-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)、(苯并三氮唑+基氧基)二吡咯垸碳 鎗六氟磷酸盐(HBPyU) 、2- (7-偶氮苯并三氮唑)-N， N， N， ， N，-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU) 等。此类縮合剂结构较为复杂，反应选择性不高。磷正离子或磷酸酯类型多肽縮合试剂由 于反应条件简单，反应速度快，产率较高而颇受关注,其中较典型的縮合剂3-( 二乙氧基磷 酰氧基)-l，2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBT)是碳化二亚胺类型縮合剂3-羟基_1，2， 3-苯并三嗪-4 (3H)-酮(H00Bt)的磷酸酯，其特点是产物的消旋较小，但此縮合剂存在反 应速度比较慢，选择活性低的缺点，从而导致多肽縮合的产率低，成本高。(J.M. Humphrey, A. R. Chamber]-in, Chem. Rev. 1997,97,2243)
发明内容
本发明目的是发明一种新型多肽縮合剂,其结构以DEPBT为基础，在保持三氮六 元环体系不变条件下，对现有的苯环结构用芳香氮杂环取代，并增加不同取代基将原有的
结构进行优化改造，从而使分子毒性下降,縮合反应速度增快,选择活性大幅度提高。以及 提供其合成方法。 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下
—种多肽縮合剂，它有如下结构通式 其中R1-基团可以是氢、给电子基团或吸电子基团，其可以在6-位，也可以在 7-位，R2-可以是甲基或乙基。 上述的多肽縮合剂，所述的给电子基团可以是垸基、烷氧基或氨基。 上述的多肽縮合剂，所述的吸电子基团可以是氟、氯、溴、碘、硝基、氰基、醛基、酮
背景技术：
3基、三氟甲基或羧基。
-种制备上述多肽縮合剂的方法，其反应式如下
COOMe
1)NH2OH.HCI,MeOH,NaOH
-0H sSS氯
N P
2)NaN02,HCI 、M^"N''N 有机溶剂,碱
环合反应 縮合反应
它包括下列步骤 步骤1.将5-位或6-位有....匕述R1-取代基的2-氨基烟酸甲酯或乙酯与羟胺盐 酸盐在过量碱存在下室温反应12-60小时，反应结束后，浓縮反应液，静置，有沉淀析出，过 滤，用乙醚洗涤沉淀，步骤2.将步骤1所得的沉淀溶于盐酸中，冷却，于0-5。C下滴加亚硝酸钠水溶 液，滴加完后在室温继续搅拌反应30-120分钟后，过滤出沉淀，用乙醇重结晶，的白色晶体 6-位7-位R1取代的3-羟基-1 ， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮， 步骤3.将步骤2得到的3-羟基-1,2,3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮溶于二氯甲烷 中，加入三乙胺，在冰浴冷却下滴加二乙氧基磷酰氯或二甲氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完 后继续在_10-90°(:搅拌卜24小时，过滤除去三乙胺盐酸盐,浓縮，加入150mL乙酸乙酯,分 别用水、饱和NaCl溶液洗涤，千燥，浓縮，加入石油醚得晶体产物肽縮合剂。
上述的制备多肽縮合剂的方法,在步骤1中，所述的碱可以是有机碱或无机碱，所 述有机碱可以为三乙胺、吡啶、三乙烯二胺、醇钠、苯胺或N-甲基吡咯垸,所述的无机碱为 氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠或乙酸钠。 上述的制备多肽縮合剂的方法，在歩骤3中，所述的6-位7-位R1取代的3-羟 基-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮与二乙氧基磷酰氯的物质的量之比为1 : l至l : 15。
上述的制备多肽縮合剂的方法，在步骤3中，所述的6-位7-位R1取代的3-羟 基-l，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮与三乙胺的物质的量之比为1 : l至l : 10。
上述的制备多肽縮合剂的方法，在步骤3中，所述的溶剂的用量为6-位7-位R1取 代的3-羟基-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)—酮质量的2-50倍。 上述的制备多肽縮合剂的方法,在步骤1中，所述的过滤出沉淀后，滤液加浓盐酸 酸化至pH = 6，静置,有沉淀析出，过滤出沉淀，与第一次滤出的沉淀合并，然后重结晶。
本发明的目标化合物具有以下优点 1.本发明的多肽縮合剂对多肽縮合的效果已经超过DEPBT，同样条件下的多肽縮
合产率比DEP:BT等常见多肽縮合剂高出10 50%，縮合反应操作简单。 2.本发明的多肽縮合剂的合成方法，所需设备简单，没有特殊工艺要求，投资较
小，操作简便； 3.本发明的多肽縮合剂的合成方法原料简单易得,成本低； 4.本发明的多肽縮合剂的合成方法对环境友好。本发明反应腐蚀小，三废处理负 担小，达到清洁生产目的，易于工业化生产；
具体实施例方式
下面通过实施例详述本发明，然而，本发明不限于下述的实施例。
实施例1 3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮的合成
0。C下将5()g盐酸羟胺缓慢加入360raL 4raol/L的Na()H:溶液中,搅拌至溶解。往此溶液中 加入54. 4g 2-氨基烟酸甲酯和20QmL甲醇，室温反应12h。减压浓縮至三分之一体积时有沉淀析 出，过滤，沉淀用乙醚充分洗涤(20QmLX 3)，滤液用浓盐酸酸化至pH = 6，放置，有固体析出，过滤。 将两部分固体合并溶于720mL lmol/L盐酸中，冷却至0 5°C,于搅拌下滴加60mL 4. 7mol/L的亚 硝酸钠水溶液。室温反应45min后过滤得到微黄色固体，乙醇重结晶得到白色晶体，产率85%。
将8. 25g 3-羟基_1 ， 2， 3_吡啶并三嗪+ (3H)-酮溶于30mL 二氯甲垸及7mL三 乙胺中，在冰浴冷却下，滴加15mL 3. 7mol/L的二乙氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完后继续 搅拌2h，过滤除去三乙胺盐酸盐，浓縮，加入150mL乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl溶液洗 涤，无水N S()4干燥,蒸去大部分二氯甲垸至小体积(约5mL)，加入石油醚得晶体产物，产率 87%。(熔点205。C ;m,Zz(M+l)+301 ;SH(400MHz， DMSO) 1. 30 (t， 6H) ， 4. 06 (m， 4H) ， 7. 77 (d， 1H) ，8. 35(d， 1H)) 实施例2 6-溴-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮的合成
(rC下将25g盐酸羟胺缓慢加入180raL 4raol/L的Na()H溶液中，搅拌至溶解。往此 溶液中加入41. 3g 2-氨基-5-溴烟酸甲酯和120mL甲醇，室温反应24h。减压浓縮至三分 之一体积时有沉淀析出，过滤，沉淀用乙醚充分洗涤(lOOmLX 3)，滤液用浓盐酸酸化至pH =6,放置，有固体析出，过滤。将两部分固体合并溶于360mL 1mol/L盐酸中，冷却至0 5°C，于搅拌下滴加30raL 4. 7mol/L的亚硝酸钠水溶液。室温反应65min后过滤得到黄色固 体，乙醇重结晶得到白色晶体，产率78%。 将12. 2g 6-溴-3-羟基-l，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮溶于30mL乙酸乙酯及 7mL三乙胺中，在冰浴冷却下，滴加15mL 3. 7mol/L的二乙氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完 后继续搅拌2. 5h,过滤除去三乙胺盐酸盐，浓縮，加入15(ML乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl 溶液洗涤，无水Na2S04干燥,蒸去大部分乙酸乙酯至小体积(约5mL)，加入石油醚得晶体产 物，产率88%。(熔点161。C ;m/z(M+l)十379 ; S H(400MHz， DMSO) 1. 30 (t， 6H) ， 4. 06 (m， 4H)， 7. 77(d， IH) ，8. 35(d, 1H)) 实施例3 7-溴-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3:H)-酮的合成
(TC下将25g盐酸羟胺缓慢加入180mL 4mol/L的NaOH溶液中，搅拌至溶解。往此 溶液中加入41. 3g 2-氨基-6-溴烟酸甲酯和120mL甲醇，室温反应24h。减压浓縮至三分 之一体积时有沉淀析出，过滤,沉淀用乙醚充分洗涤(lOOmLX 3)，滤液用浓盐酸酸化至pi-I =6,放置，有固体析出，过滤。将两部分固体合并溶于360raL lraol/L盐酸中，冷却至0 5°C ，于搅拌下滴加30mL 4. 7mol,/L的亚硝酸钠水溶液。室温反应65min后过滤得到黄色固 体，乙醇重结晶得到白色晶体，产率75% 。 将12. 2g 7-溴-3-羟基-1 ， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)—酮溶于30mL乙酸乙酯及 7raL三乙胺中，在冰浴冷却下，滴加15mL 3. 7raol/L的二乙氧基磷酰氯二氯甲烷溶液，加完 后继续搅拌2. 5h,过滤除去三乙胺盐酸盐，浓縮，加入150mL乙酸乙酯，分别用水、饱和NaCl 溶液洗涤，无水Na2S04千燥，蒸去大部分乙酸乙酯至小体积(约5mL)，加入石油醚得晶体产 物，产率81%。(熔点148。C ;m/z (M+l)+379 ; S H(400MHz， DMSO) 1. 31 (t,6H),4. 07 (m，4H)，
58. 66(d， lH) ，8. 77 (d， IH)) 实施例4 6-硝基-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2， 3-吡啶并三嗪_4_ (3H)-酮的合成以2 氨基 5-硝基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为81%禾卩80%。(熔点:155。C ;m/z(M+l)+346 ; SH(40()M:Hz, DMS()) 1. 35 (t, 6:H), 4. 14(ni，4H)，8. 34(d， IH) ，8. 85 (d， IH)) 实施例5 7-硝基-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2， 3-吡啶并三嗪_4_ (3H)-酮的合成 以2-氨基-6-硝基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为81%和80%。(熔点137。C ;m/z(M+l)+346 ; SH(400MHz, DMSO) 1. 41 (t.， 6H) ， 4. 34 (m，4H) ，9. 16(d， IH) ，9. 53(d， 1H)) 实施例6 6-氯-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮的合成
以2-氨基-5-氯烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为77%禾口 85%。(熔点153。C ;m/z(M+l)+335 ; S H(400MHz， DMSO) 1. 27(t，6H) ，4. 15(m，4H) ，7. 55(d， m) ，8. 47(d， 1H)) 实施例7 7-氯-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-氯烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为80%和80%。(熔点:141。C ;m/z(M+l)+335 ; S H(400MHz, DMSO) 1. 35 (t.， 6H) ， 4. 21 (m，4H) ，8. 47(d， IH) ，8. 77(d， 1H)) 实施例8 6-氟-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮的合成
以2-氨基-5-氟烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为69%和78%。(熔点144。C ;m/z(M+l)+319 ; SH(400MHz， DMSO) 1. 25 (t， 6H) ， 4. 01 (m，4H) ，7. 44(d， IH) ，8. 58(d， 1H)) 实施例9 7-氟-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成
以2-氨基-6-氟烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为70%和77%。(熔点136。C ;m/z(M+l)+319 ; SH(400MHz, DMSO) 1. 33 (t.， 6H) ， 4. 01 (m，4H) ，7. 94(d， IH) ，8. 32(d， 1H)) 实施例10 6-碘-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成 以2-氨基-5-碘烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为66%和76%。(熔点182。C ;m/z(M+l)+427 ; S H(400MHz， DMSO) 1. 29(t，6H) ，4. 04(m，4H) ,7. 66(d， ，7. 95(d, 1H)) 实施例11 7-碘-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成 以2-氨基-6-碘烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为60%和80%。(熔点169。C ;m/z (M+l)'427 ; SH(400MHz, DMSO) 1. 34(t,6H),4. 11 (m，4H) ，8. 61 (d， 1H) ，9. 16(d, 1:H)) 实施例12 6-氰基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-l,2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的合成 以2-氨基-5 氰基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为72%和82%。(熔点139。C ;m/z(M+l)+326 ; SH(400MHz, DMSO) 1. 33 (t.， 6H) ， 4. ll(m， 4H) ，7. 92(d， IH) ，8. 56(d， 1H)) 实施例13 7-氰基-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的 合成 以2-氨基-6-氰基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分 别为68%和75%。(熔点121。C ;m/z(M+l)+326 ; SH(400MHz， DMSO) 1. 39 (t， 6H) ， 4. 21 (m， 4H) ,8. 95(d， ，9. 24(d, 1H)) 实施例14 6-醛基-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3:H)-酮的 合成 以2-氨基-5-醛基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分 别为65%禾口 76%。(熔点145。C ;m/z (M+l)'329 ; SH(400MHz, DMSO) 1. 29(t,6H),4. 11 (m， 4H) ， 8. 52 (d， 1H) ， 8. 60 (d, 1:H), 9. 75 (s， 1H)) 实施例15 7-醛基_3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2，3_吡啶并三嗪_4_(3H)-酮的 合成 以2-氨基-6 醛基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分 别为70%禾口 79%。(熔点129。C ;m/z(M+l)+329 ; S :H(4()()MHz，固S()) 1. 31 (t，6H) ，4. 20 (ra， 4H) ， 8. 65 (d， 1H) ， 8. 87 (d， 1H) ， 9. 73 (s， 1H)) 实施例16 6-三氟甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-l，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮 的合成 以2-氨基-5-三氟甲基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物 产率分别为63%和77%。(熔点141。C ;m/z(M+l)+369 ; S H(400MHz， DMSO) 1. 40(t，6H)， 4. 23 (m， 4H) ， 7. 55 (d， 1H) ， 8. 17 (d， 1H)) 实施例17 7-三氟甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(31-1)-酮 的合成 以2-氨基-6-三氟甲基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物 产率分别为71%禾口 73%。(熔点130 。C ;m/z(M+l)十369 ; SH(400MHz， DMSO) 1. 43 (t.， 6H)， 4. 26 (m， 4H) ， 8. 41 (d, 1H), 8. 66 (d， ) 实施例18 6-甲基-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的 合成 以2-氨基-5-甲基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分 别为77%和84%。(熔点129。C ;m/z(M+l)'315 ; SH(400MHz, DMSO) 1. 31 (t, 6H), 2. 53 (s， 3:H) 4. 13 (m， 4H) ， 7. 45 (d， 1H) ， 8. 17 (d, 1:H)) 实施例19 7-甲基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-l，2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮的 合成 以2 氨基-6-甲基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分 别为76X禾P 79%。(熔点ll.rC ;m/z(M+l)+315 ; S H(40()M:Hz, DMS()) 1. 32(t,6:H) ,2. 31 (s， 3H) 4. 15 (m， 4H) ， 8. 34 (d， 1H) ， 8. 57 (d， 1H)) 实施例20 6-甲氧基_3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3_吡啶并三嗪_4_(3H)-酮 的合成
以2-氨基-5-甲氧基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为80%和82%。(熔点:131。C;m/z(M+l)+331 ; S H(400MHz，DMS0) 1. 29 (t， 6H) ， 3. 80 (s，3H) 4. 05 (m, 4H), 6. 79 (d， ， 8. 18 (d, 1H)) 实施例21 7-甲氧基-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3:H)-酮的合成 以2-氨基-6-甲氧基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为77%和82%。(熔点:116。C;m/z(M+l)'331 ; S H(400MHz,DMSO) 1. 33 (t, 6H), 3. 83 (s，3:H) 4. 09 (m， 4H) ， 7. 86 (d， 1H) ， 8. 44 (d, 1:H)) 以2-氨基-5-氨基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为81%禾口 82%。(熔点126。C ;m/z(M+l)+316 ; S H(40()M:Hz, DMS()) 1. 34(t,6:H) ,4. 13(ni，4H) ， 6. 95 (d， m) ， 7. 74 (s， 2H) ， 7. 87 (d， 1H)) 实施例23 7-氨基-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)_1 ， 2， 3_吡啶并三嗪_4_ (3H)-酮的合成 以2-氨基-6-氨基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为78%和81%。(熔点115。C ;m/z(M+l)+316 ; SH(400MHz, DMSO) 1. 29 (t.， 6H) ， 4. 09 (m，4H) ， 6. 27 (s， 2H) ， 7. 74 (d， 1H) ， 7. 90 (d， 1H)) 实施例24 6-羧基-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮的合成 以2-氨基-5-羧基烟酸甲酯为原料,操作过程参见实施例2，中间体和产物产率分别为81%禾口 82%。(熔点244。C ;m/z(M+l)+345 ; S H(400MHz， DMSO) 1. 34(t，6H) ，4. 13(m，4H), 6. 45 (d， III) ， 8. 64 (s, 2H), 11. 0 (d， 1H)) 实施例25 7-羧基-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3:H)-酮的合成 以2-氨基-6-羧基烟酸甲酯为原料，操作过程参见实施例3，中间体和产物产率分别为78%禾口 81%。(熔点232。C ;m/z (M+l) '345 ; S H(400MHz, DMSO) 1. 29(t,6H) ,4. 09(m，4H) ， 8. 65 (s， 2H) ， 8. 90 (d, 1:H), 11. 12 (d, 1:H)) 实施例26 N-叔丁氧羰基-13 _苄酯天冬氨脯氨酸甲酯的合成 方法1 :使用7-溴_3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-吡啶并三嗪-4-(3H)_酮为
縮合剂 将L-脯氨酸甲酯4. 5g和N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-P -节酯9. ()4g加入到150mL DMF中，室温下滴加三乙胺3. 4g及7-溴-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)_1 ， 2, 3-吡啶并三嗪_4-(3H)-酮19. 3g。室温反应5h，减压除去溶剂，加入乙酸乙酯稀释，有机相依次用5%柠檬酸溶液、饱和NaCl水溶液、5% NaHC03水溶液、饱和NaCl水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。减压除去乙酸乙酯，得到油状物，产率98%。 方法2 :使用6-硝基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-l，2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮为縮合剂 操作同方法1,产物产率为96%
8
方法3 :使用DEPBT为縮合剂 操作方法同方法l，产物产率为81 % 。可见，使用本发明设计的多肽縮合剂的反应 产率比使用DEPBT有明显提高。 实施例27 Fmoc-Cys(Acm)-Thr(o:l.)的合成 方法1 :使用6-硝基-3-(二乙氧基磷酰氧基)-l，2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮 为縮合剂将Thr (ol) (2. lg, 20mmol)及Fmoc-Cys (Acm) -OH(8. 3g, 20mmol)溶于lOOmL无水
T:HF中。加入Et3N(2. 8mL，2()鹏o1)及6-硝基-3-( 二乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2， 3-吡啶并三
嗪-4-(3H)-酮(7.6g，22mmo1)。室温反应5h，减压除去THF。加入乙酸乙醋稀释。有机相
依次用5%柠檬酸溶液，饱和NaCl水溶液，5% NaHC03水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤。用无
水MgS(^干燥。减压除去乙酸乙醋，得白色固体。用乙酸乙醋重结晶，产率88% 方法1 :使用6-氨基-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4- (3:H)-酮
为縮合剂将Thr(ol) (2. lg，20翻l)及Fmoc-Cys (Acm) _0H(8. 3g，20翻l)溶于100mL无水
THF中。加入Et3N (2. 8mL， 20,1)及6-氨基-3- ( 二乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2， 3-吡啶并三 嗪-4-(3H)-酮(7. 5g，22鹏o1)。室温反应5h,减压除去T:HF。加入乙酸乙醋稀释。有机相 依次用5%柠檬酸溶液，饱和NaCl水溶液，5% NaHC03水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤。用无 水MgS(V千燥。减压除去乙酸乙醋，得白色固体。用乙酸乙醋重结晶，产率84%
方法3 :使用DEPBT为縮合剂 将Thr (o:[) (2. 1g， 2()mniol)及Fraoc-Cys (Acm) -OH (8. 3g, 2()mrao:l)溶于l()()mL无水 THF中。加入Et3N(2. 8mL， 20翻1)及DEPBT (6. 6g， 22,1)。室温反应5h，减压除去THF。 加入乙酸乙醋稀释。有机相依次用5%柠檬酸溶液，饱和NaCl水溶液，5% NaHC03水溶液， 饱和NaCl水溶液洗涤。用无水MgS(^干燥。减压除去乙酸乙醋,得白色固体。用乙酸乙醋 重结晶，产率68%。可见，使用本发明的新型縮合剂的产物产率比I)EPBT提高20%。
实施例28 Fmoc-D-Phe-Thr(ol)的合成 操作过程同实施例5，以Fmoc-D-Phe-OH和Thr(ol)为原料，7_甲基-3-(二乙氧基
磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮为縮合剂,产物产率76 %;以7-氰基-3- ( 二乙
氧基磷酰氧基)-1,2,3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮为縮合剂，产物产率70%;以7-碘-3- ( 二
乙氧基磷酰氧基)-1 ， 2, 3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮为縮合剂，产物产率80% 。 若以DEPBT为縮合剂，产物产率为48 % 。 可见新型多肽縮合剂对反应产率的提高是显而易见的。
权利要求
一种多肽缩合剂，其特征是它有如下结构通式其中R1-基团是氢、给电子基团或吸电子基团，其在6-位或在7-位，R2-是甲基或乙基。F2009102126821C0000011.tif
2. 根据权利要求1所述的多肽縮合剂，其特征是所述的给电子基团是烷基、垸氧基或氨基。
3. 根据权利要求1所述的多肽縮合剂，其特征是所述的吸电子基团是氟、氯、溴、碘、硝基、氰基、醛基、酮基、三氟甲基或羧基。
4. 一种制备权利要求1所述多肽縮合剂的方法,其特征是它包括下列步骤步骤1.将5-位或6-位有上述R1-取代基的2-氨基烟酸甲酯或乙酯与羟胺盐酸盐在 过量碱存在下室温反应12-60小时，反应结束后，浓縮反应液，静置，有沉淀析出，过滤,用 乙醚洗涤沉淀，步骤2.将步骤1所得的沉淀溶于盐酸中，冷却，于o-5t;下滴加亚硝酸钠水溶液，滴 加完后在室温继续搅拌反应30-120分钟后，过滤出沉淀，用乙醇重结晶，的白色晶体6-位 7-位R1取代的3-羟基-1， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)—酮，步骤3.将步骤2得到的3-羟基-1,2， 厂吡啶并三嗪-4- (3H)-酮溶于二氯甲烷中，加 入三乙胺，在冰浴冷却下滴加二乙氧基磷酰氯或二甲氧基磷酰氯二氯甲烷溶液,加完后继 续在-10-9(TC搅拌卜24小时，过滤除去三乙胺盐酸盐，浓縮，加入150mL乙酸乙酯，分别用 水、饱和NaCl溶液洗涤,干燥，浓縮,加入石油醚得晶体产物肽縮合剂。
5. 根据权利要求4所述的制备多肽縮合剂的方法，其特征是在步骤1中，所述的碱是 有机碱或无机碱，所述有机碱为三乙胺、吡啶、三乙烯二胺、醇钠、苯胺或『甲基吡咯烷，所 述的无机碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠或乙酸钠。
6. 根据权利要求4所述的制备多肽縮合剂的方法,其特征是在步骤3中，所述的6-位 7-位R1取代的 厂羟基-1,2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮与二乙氧基磷酰氯的物质的量之比为i : i至i : 15。
7. 根据权利要求4所述的制备多肽縮合剂的方法，其特征是在步骤3中，所述的6-位 7-位Ri取代的3-羟基-1,2,3-吡啶并三嗪-4-(3H)-酮与三乙胺的物质的量之比为1 : 1至i : i()。
8. 根据权利要求4所述的制备多肽縮合剂的方法，其特征是在步骤3中，所述的溶剂 的用量为6-位7-位R1取代的3-羟基-1， 2， 3-吡啶并三嗪-4- (3H)-酮质量的2-50倍。
9. 根据权利要求4、5、6、7或8所述的制备多肽縮合剂的方法，其特征是在步骤1中， 所述的过滤出沉淀后，滤液加浓盐酸酸化至pH: = 6,静置，有沉淀析出，过滤出沉淀，与第一 次滤出的沉淀合并，然后重结晶。
全文摘要
一种多肽缩合剂，它有如下结构通式其中R1-基团可以是氢、给电子基团或吸电子基团，其可以在6-位，也可以在7-位，R2-可以是甲基或乙基。本发明的多肽缩合剂对多肽缩合的效果超过了DEPBT，同样条件下的多肽缩合产率比DEPBT等常见多肽缩合剂高出10～50％，缩合反应操作简单。本发明公开了其制法。
文档编号C07F9/6561GK101701031SQ20091021268
公开日2010年5月5日 申请日期2009年11月12日 优先权日2009年11月12日
发明者冯亚兵, 岳邦毅, 庄韦, 王喆, 陈强 申请人:常州南京大学高新技术研究院