本发明涉及化学药物合成领域，特别是难治性实体瘤中，trk受体亚型的体内显像剂，更特别涉及一种larotrectinib放射性碘标记化合物的制备方法及其中间体的合成方法。本发明提供基于新型的针对酪氨酸受体激酶(trk)的抑制剂larotrectinib的放射性碘化合物及其中间体。
背景技术：
larotrectinib是由loxooncology公司研发，作为一款广谱肿瘤药，用于所有表达有原肌球蛋白受体激酶(tropomyosinreceptorkinase，trk)的肿瘤患者，这种trk小分子抑制剂对trk有很强的选择性，通过抑制trk信号通路，larotrectinib可以抑制肿瘤的生长。larotrectinib是一种口服的强力trk抑制剂，在trk融合肿瘤中具有一致和持久的抗肿瘤活性，适用的患者年龄和肿瘤类型范围广，其适应症分布于13种不同肿瘤类型，并且具有良好的耐受性，对多种成人和儿童实体瘤有效，包括唾液腺癌(salivary)、婴儿纤维肉瘤癌(infantilefibrosarcoma)、肺癌(lung)、甲状腺癌(thyroid)、结肠癌(colon)、黑色素瘤(melanoma)、胆管癌(cholangio)、肠胃癌(gist)、乳腺癌、以及各种肉瘤癌(sarcoma)。美国fda(http://www.chemdrug.com/article/11/)已经授予larotrectinib孤儿药资格和突破性药物资格认定。larotrectinib有望成为第一个在成人和儿童中同时开发和批准的治疗药物，并且是第一种跨越所有传统定义的肿瘤类型、分子意义上的肿瘤靶向治疗药。larotrectinib的结构如下所示：
然而，文献cn201580073515.7中，对于larotrectinib化合物的作用基于尸体解剖或ct计算机断层扫描ct影像的结构变化来推测期功能。如何在活体内在线示踪larotrectinib在人体内分布以及实体瘤中的状况，直观判断larotrectinib在肿瘤中的生理功能，评判其疗效及其愈后效果，尚缺乏更为有效的技术手段。
技术实现要素：
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种放射性碘标记larotrectinib化合物及其制备方法。具体提供一种碘-123、124、125、130、131标记的123、124、125、130、131i-larotrectinib放射性标记化合物及其类似物，并提供一种碘-124、125、127、130、131标记的124、125、127、130、131i-larotrectinib放射性标记化合物的制备方法及其中间体的合成方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明的化合物是在larotrectinib化合物苯环结构上进行修饰。本发明的目的是提供一类吡唑并[1,5-a]嘧啶类化合物，即吡唑并[1,5-a]嘧啶卤代衍生物。
一种放射性碘标记larotrectinib化合物，其特征在于，包括具有以下结构式放射性碘标记larotrectinib化合物及其类似物：
其中，r1、r2分别为h、f、cl、br、123i、124i、125i、130i或131i，r1、r2中至少有一个为放射性碘元素。
本发明所述的长半衰期的放射性核素碘即[123/124/125/130/131]i,分别指123i、124i、125i、130i或131i。半衰期分别为123i:13.0小时；124i:4.2天；125i:60天；130i:12.3小时；131i:8.04天。
本发明的另一个目的是提供所述的吡唑并[1,5-a]嘧啶类制备方法，通过以下步骤实现：上述放射性碘标记larotrectinib化合物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
步骤一：关键中间体4及其合成
步骤二：关键中间体8及其合成
步骤三：卤代larotrectinib类似物9的制备
步骤四：标记前体10的合成
步骤五：目标产物的合成
步骤一采用的原料结构式1中
r1、r2分别为h、f、cl、br或i。
步骤一所述的关键中间体4包括以下化合物：2-(5-fluoro-2-iodophenyl)pyrrolidine，2-(2-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine，2-(2,5-diiodophenyl)pyrrolidine，2-(2,5-dibromophenyl)pyrrolidine，2-(2-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine，2-(3-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine，2-(4-bromo-3-fluorophenyl)pyrrolidine，2-(3-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine。
所述的2-(5-fluoro-2-iodophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(11)(e)-4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(12)4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(13)methyl4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4,4-dimethoxybutanoate的合成，反应式如下：
(14)4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(15)5-(5-fluoro-2-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(16)2-(5-fluoro-2-iodophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
所述的2-(2-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(21)(e)-4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(22)4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(23)methyl4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoate的合成，反应式如下：
(24)4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(25)5-(2-fluoro-5-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(26)2-(5-fluoro-2-iodophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
所述的2-(2,5-diiodophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(31)(e)-4-(2、5-diiodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(32)4-(2、5-diiodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(33)methyl4-(2、5-diiodophenyl)-4-oxobutanoate的合成，反应式如下：
(34)4-(2、5-diiodophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(35)5-(2、5-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(36)2-(2、5-diiodophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
所述的2-(2,5-dibromophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(41)(e)-4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(42)4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(43)methyl4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobutanoate的合成，反应式如下：
(44)4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(45)5-(2、5-bromophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(46)2-(2、5-diiodophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
所述的2-(2-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(51)(e)-4-(2-bromo-4-fluorohenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(52)4-(2-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(53)methyl4-(2-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoate的合成，反应式如下：
(54)4-(2-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(55)5-(2-bromo-4-fluorophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(56)2-(2-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
所述的2-(3-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(61)(e)-4-(3-bromo-4-fluorohenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(62)4-(3-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(63)methyl4-(3-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoate的合成，反应式如下：
(64)4-(3-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(65)5-(3-bromo-4-fluorophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(66)2-(3-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
所述的2-(4-bromo-3-fluorophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(71)(e)-4-(4-bromo-3-fluorohenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(72)4-(4-bromo-3-fluorophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(73)methyl4-(4-bromo-3-fluorophenyl)-4-oxobutanoate的合成，反应式如下：
(74)4-(4-bromo-3-fluorophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(75)5-(4-bromo-3-fluorophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(76)2-(4-bromo-3-fluorophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
所述的2-(3-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine的合成，包括以下方法：
(81)(e)-4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成，反应式如下：
(82)4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成，反应式如下：
(83)methyl4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoate的合成，反应式如下：
(84)4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanamide的合成，反应式如下：
(85)5-(3-fluoro-5-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成，反应式如下：
(86)2-(3-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine的合成，反应式如下：
步骤二所述的关键中间体8包括以下化合物：
(s)-n-(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide，该(s)-n-(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide的合成，包括以下步骤：
(1)5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-amine的合成，反应式如下：
(2)5-chloro-3-isocyanatopyrazolo[1,5-a]pyrimidine的合成，反应式如下：
(3)
(s)-n-(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide的合成，反应式如下：
步骤三所述的卤代larotrectinib类似物9的制备，是通过中间体4和中间体8反应，得到外消旋外消旋卤代larotrectinib类似物，然后通过手性lc分离纯化，得到手性卤代larotrectinib类似物9；具体包括以下方法：
(1)卤代larotrectinib化合物(r)-2-f-5-i-larotrectinib的合成，反应式如下：
(2)卤代larotrectinib化合物(r)-2-br-5-br-larotrectinib的合成，反应式如下：
(3)卤代larotrectinib化合物(r)-5-f-2-i-larotrectinib的合成，反应式如下：
(4)卤代larotrectinib化合物(r)-5-i-2-i-larotrectinib的合成，反应式如下：
(5)卤代larotrectinib化合物(r)-4-f-2-br-larotrectinib的合成，反应式如下：
(6)卤代larotrectinib化合物(r)-4-f-3-br-larotrectinib的合成，反应式如下：
(7)卤代larotrectinib化合物(r)-4-br-3-f-larotrectinib的合成，反应式如下：
步骤三所述的标记前体的制备，包括以下方法：
(1)标记前体(r)-2-氟-5-三丁基锡-larotrectinib的制备，反应式如下：
或者，
(2)标记前体(r)-5-f-2-snme3-larotrectinib的制备，反应式如下：
(3)标记前体(r)-3-f-5-snme3-larotrectinib的制备，反应式如下：
(4)标记前体(r)-4-f-2-snme3-larotrectinib的制备，反应式如下：
(5)标记前体(r)-2、5-双snme3-larotrectinib的制备，反应式如下：
(6)标记前体(r)-2-f-4-snme3-larotrectinib的制备，反应式如下：
(7)标记前体(r)-4-f-3-snme3-larotrectinib的制备，反应式如下：
步骤五所述的目标产物包括(r)-2、5-双-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，(r)-5-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，(r)-2-f-5-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，(r)-4-f-3-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，(r)-2-f-4-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，(r)-4-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib。
所述的目标产物的制备方法如下：
(1)放射性同位素碘标记制备(r)-2、5-双-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，反应式如下：
(2)放射性同位素碘标记制备(r)-5-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，反应式如下：
(3)放射性同位素碘标记制备(r)-2-f-5-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，反应式如下：
(4)放射性同位素碘标记制备(r)-4-f-3-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，反应式如下：
(5)放射性同位素碘标记制备(r)-2-f-4-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，反应式如下：
(6)放射性同位素碘标记制备(r)-4-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib，反应式如下：
本发明的再一个目的是提供所述的吡唑并[1,5-a]嘧啶类化合物，即放射性碘取代的larotrectinib衍生物在制备肿瘤放射性显像剂中的应用。本发明卤代larotrectinib衍生物可以作为肿瘤放射性显像剂前体，放化合成为相应的碘-123、124、125、130、131取代的放射性显像剂，该显像剂是以trk为靶点，进行特异性肿瘤显像。同时该显像剂高能放射性碘对肿瘤有放射治疗协同作用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益技术效果：
本发明合成了卤代的larotrectinib化合物及其类似物，作为放射性碘标记的前体，该合成方法具有以下优势：采用成熟的合成工艺，反应条件温和，操作简便；放射化学合成时间快捷，仅需要20-25min；分离简单方便，可以不用hplc分离，用一个sep-pakc-18小柱即可得到放射化学纯度超过98％的产物，同时除去标记前体，得到无载体产物；放射化学产率高，不校正产率可以达到50-60％，药物的放射性比活度高。此外，本发明提供一种碘-123、124、125、130、131标记的[123、124、125、130、131]i-larotrectinib化合物及其类似物具有发射正电子或单光子的特性，借助pet-ct正电子或spect单光子发射断层显像技术，直观显示larotrectinib化合物及其类似物在活体内，以及肿瘤中的分布状况，并为肿瘤早期诊断提供一种新的显像剂。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，该实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
第一步：关键中间体4的合成:
实施例一：关键中间体4的合成:2-(5-fluoro-2-iodophenyl)pyrrolidine的合成
实施例1a、(e)-4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入5-氟-2-碘苯乙酮(39.6g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入5％碳酸钾水溶液(300ml),用乙酸乙酯萃取2次，每次200ml,水层酸化(10％盐酸，300ml)后,乙酸乙酯萃取2次，每次200ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用乙酸乙酯萃取(300ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(26.89g,56％)黄色固体,m.p.146度。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.96(brs,1h),8.00-7.74(m,3h),7.30(t,1h,j＝8.5hz),6.64(d,1h,j＝15.4hz)。
ms(ei)m/z320(m+)。
实施例1b、4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在500ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(47.1g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应物过滤，滤饼用乙酸乙酯(300ml)漂洗,有机相用盐水洗涤3次，每次100ml,无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(29.8g,63％)。m.p.152度。
1hnmr(400mhz,cdcl3)12.00(1h,brs),7.91-7.71(3h,m),3.23(2h,t,j＝6.26),2.57(2h,t,j＝6.24).
ms(ei)m/z322(m+).。
实施例1c、methyl4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4,4-dimethoxybutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(32.2g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至65度反应4小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用异丙醚稀释(190ml),饱和碳酸氢钠淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(120ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物32.48g，收率85％，直接用于下一步。
1hnmr(400mhz,cdcl3)1.29-1.38(2h,m),2.25(2h,t,j＝7.2hz),3.11(3h,s),3.17(6h,s),7.24-7.28(1h,m),7.31-7.38(2h,m),7.46(1h,dt,j＝8.6,1.4hz)；
ms(esi)m/z383[m+h]+。
实施例1d、4-(5-fluoro-2-iodophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将1c步骤酯化产物(19.1g，0.05mol)，溶解在50ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至1c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:368.1(m+h)+.。
实施例1e、5-(5-fluoro-2-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在500ml反应器中，加入干燥的四氢呋喃(300ml)、1d步骤所得酰胺(18.36g,0.05mol)、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％naoh中和至中性，氯仿萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(5-氟-2-碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(11.27g，收率78％)。
所得产品核磁数据如下：
1hnmr,400mhz,cd3odδ:7.78(m,1h),7.43-7.34(m,2h),3.54(m,2h),2.12(dt,j＝10.3,2.0hz,2h),1.97(dt,j＝15.8,7.9hz,2h).
13cnmr,100mhz,cd3odδ:176.2,158.2(d,j＝260.3),155.0(d,j＝10.3),124.0(d,j＝3.1),119.4(d,j＝23.5),118.4(d,j＝23.5),62.3,36.5,21.0.
实施例1f、2-(5-fluoro-2-iodophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(5-氟-2-碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(7.23g，0.025mol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95g，0.025mol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用naoh处理后，异丙醚萃取，醚层经过无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物(6.23g，收率88.3％)，直接投下步反应。
1hnmr,400mhz,cdcl3δ:7.29(m,1h),7.02(m,1h)，6.96(m,1h),4.09(t,j＝7.8hz，1h),3.16(m，1h)，3.04(m，1h)，2.21-2.30(m，1h)，1.77-1.95(m，3h)，1.57-1.67(m，1h)。
lc-esi-ms(m/z)292[m+h]+。
实施例二：关键中间体4的合成:2-(2-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine的合成
实施例2a、(e)-4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入2-氟-5-碘苯乙酮(39.6g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入5％碳酸钠水溶液(300ml),用乙酸异丙酯萃取2次，每次200ml,水层酸化(10％盐酸，300ml)后,乙酸异丙酯萃取2次，每次200ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用乙酸异丙酯萃取(300ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物。(29.28g,61％).黄色固体,m.p.143-146度。
ms(ei)m/z320(m+)。
实施例2b、4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在50ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(37.5g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应物过滤，滤饼用乙酸乙酯(300ml)漂洗,有机相用盐水洗涤(3x100ml),无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物。(27.6g,58％).m.p.148-150度。
ms(ei)m/z:322(m+)。
实施例2c、methyl4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(32.2g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至65度反应4小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用甲基叔丁基醚稀释(190ml),饱和碳酸氢钠淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(120ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物32.87g，收率86％，直接用于下一步。
ms(esi)m/z383[m+h]+。
实施例2d、4-(2-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将2c步骤酯化产物溶解在30ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至2c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物，直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:368.1(m+h)+.。
实施例2e、5-(2-fluoro-5-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在500ml反应器中，加入干燥的1、4-二氧六环(300ml)、2d步骤所得酰胺(18.36g,0.05mol、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％koh中和至中性，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(2-氟-5-碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(11.7g，收率81％)。
ms(ei)m/z289[m]+
实施例2f、2-(5-fluoro-2-iodophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(5-氟-2-碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(7.23g,0.025mmol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95mg，0.025mmol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用koh处理后，甲基叔丁基醚萃取，醚层无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物，粗产物6.78g，收率89％，直接投下步反应。
lc-esi-ms(m/z)292[m+h]+。
实施例三：关键中间体4的合成:2-(2,5-diiodophenyl)pyrrolidine的合成
实施例3a、(e)-4-(2-碘-5-iodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入2,5-二碘苯乙酮(55.79g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入10％碳酸氢钠水溶液(300ml),用二氯甲烷萃取2次，每次300ml,水层酸化(10％盐酸，300ml)后,二氯甲烷萃取2次，每次300ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用二氯甲烷萃取(400ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物。(31.32g,48.8％).黄色固体,m.p.138-142度。
ms(ei)m/z427(m+)。
实施例3b、4-(2、5-diiodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在500ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(49.09g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应混合物加入二氯甲烷(300ml)萃取分层，有机相用盐水洗涤(3x100ml),无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(34.76g,55％).m.p.146-148度。
ms(ei)m/z:430(m+)。
实施例3c、methyl4-(2、5-diiodophenyl)-4-oxobutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(43.0g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至50度反应8小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用甲基叔丁基酮稀释(200ml),饱和碳酸氢钾淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(120ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物43.62g，收率89％，直接用于下一步。
ms(esi)m/z:490、491。
实施例3d、4-(2、5-diiodophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将4c步骤酯化产物溶解在30ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至4c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物，直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:475(m+h)+.。
实施例3e、5-(2、5-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在1000ml反应器中，加入干燥的甲基叔丁基醚(600ml)、3d步骤所得酰胺(23.75g,0.05mol、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％碳酸氢钠中和至中性，乙酸异丙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(2、5-二碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(13.5g，收率68％)。
所得产品核磁数据如下：
1hnmr,400mhz,cd3odδ:7.78(m,1h),7.43-7.34(m,2h),3.54(m,2h),2.12(dt,j＝10.3,2.0hz,2h),1.97(dt,j＝15.8,7.9hz,2h).
13cnmr,100mhz,cd3odδ:176.2,158.2(d,j＝260.3),155.0(d,j＝10.3),124.0(d,j＝3.1),119.4(d,j＝23.5),118.4(d,j＝23.5),115.6,62.3,36.5,21.0.
实施例3f、2-(2、5-diiodophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(2、5-二碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(9.93g,0.025mmol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95mg，0.025mmol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用nahco3处理后，二氯甲烷萃取，有机层无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物，粗产物8.87g，收率88.9％，直接投下步反应。
核磁数据如下：
1hnmr,400mhz,cdcl3δ:7.29(m,1h),7.02(m,1h)，6.96(m,1h),4.09(t,j＝7.8hz，1h),3.16(m，1h)，3.04(m，1h)，2.21-2.30(m，1h)，1.77-1.95(m，3h)，1.57-1.67(m，1h)。
lc-esi-ms(m/z)：400[m+h]+,计算值c10h11f2n：399.01。
实施例四：关键中间体4的合成:2-(2,5-dibromophenyl)pyrrolidine的合成
实施例4a、(e)-4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入2,5-二溴苯乙酮(41.69g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入10％碳酸氢钾水溶液(300ml),用氯仿萃取2次，每次300ml,水层酸化(10％盐酸，300ml)后,氯仿萃取2次，每次300ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用氯仿萃取(400ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(26.75g,53.4％).淡黄色固体,m.p.141-144度。
ms(ei)m/z:338、336。
实施例4b、4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在500ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(49.09g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应混合物加入氯仿(300ml)萃取分层，有机相用盐水洗涤(3x100ml),无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(26.07g,52.8％).m.p.145-148度。
ms(ei)m/z:340、338。
实施例4c、methyl4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(33.6g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至50度反应6小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用二氯甲烷稀释(150ml),饱和碳酸氢钾淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(100ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物35.25g，收率89％，直接用于下一步。
ms(esi)m/z:400、398。
实施例4d、4-(2、5-dibromophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将4c步骤酯化产物溶解在30ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至4c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物，直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:385(m+h)+.。
实施例4e、5-(2、5-bromophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在1000ml反应器中，加入干燥的异丙醚(6000ml)、4d步骤所得酰胺(19.05g,0.05mol、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％碳酸氢钾中和至中性，乙酸异丙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(2、5-二溴苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(10.3g，收率68％)。
1hnmr,400mhz,cd3odδ:7.78(m,1h),7.43-7.34(m,2h),3.54(m,2h),2.12(dt,j＝10.3,2.0hz,2h),1.97(dt,j＝15.8,7.9hz,2h).
实施例4f、2-(2、5-diiodophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(2、5-二溴苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(7.58g,0.025mmol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95mg，0.025mmol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用nahco3处理后，三氯甲烷萃取，有机层无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物，粗产物6.92g，收率90.7％，直接投下步反应。
lc-esi-ms(m/z)：309[m+h]+。
实施例五：关键中间体4的合成:2-(2-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成实施例5a、(e)-4-(2-bromo-4-fluorohenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入2-溴-4-氟苯乙酮(32.56g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入5％碳酸钠(100ml)和10％碳酸氢钠水溶液(200ml),用乙酸异丙酯萃取2次，每次200ml,水层酸化(10％盐酸，300ml)后,乙酸异丙酯萃取2次，每次200ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用乙酸异丙酯萃取(300ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物。(24.41g,59.6％).黄色固体,m.p.146-148度。
ms(ei)m/z:273(m+)。
实施例5b、4-(2-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在500ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(40.13g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应混合物加入乙酸异丙酯(300ml)萃取分层，有机相用盐水洗涤(3x100ml),无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(25.07g,62％).m.p.150-153度。
ms(ei)m/z:275(m+)。
实施例5c、methyl4-(2-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(27.6g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至60度反应5小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用氯仿稀释(150ml),5％碳酸钾淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(100ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物30.84g，收率92％，直接用于下一步。
ms(esi)m/z：337(m+h)+。
实施例5d、4-(2-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将5c步骤酯化产物溶解在30ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至5c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物，直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:322.1(m+h)+.。
实施例5e、5-(2-bromo-4-fluorophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在500ml反应器中，加入干燥的四氢呋喃(300ml)、5d步骤所得酰胺(16.0g,0.05mol、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％碳酸氢钾中和至中性，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(2-溴-4-氟苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(9.8g，收率81％)。
lc-esi-ms(m/z)：244[m+h]+。
实施例5f、2-(2-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(2-溴-4-氟苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(6.05g,0.025mmol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95mg，0.025mmol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用khco3处理后，乙酸乙酯萃取，有机层无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物，粗产物5.84g，收率95.7％，直接投下步反应。
lc-esi-ms(m/z)：246[m+h]+。
实施例六：关键中间体4的合成:2-(3-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成实施例6a、(e)-4-(3-bromo-4-fluorohenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入3-溴-4-氟苯乙酮(32.56g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入10％碳酸氢钠水溶液(300ml),用甲苯萃取2次，每次200ml,水层酸化(10％盐酸，300ml)后,甲苯萃取2次，每次200ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用甲苯萃取(300ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(24.78g,60.5％).黄色固体,m.p.143-146度。
ms(ei)m/z:275(m+)。
实施例6b、4-(3-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在500ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(40.13g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应混合物加入甲苯(300ml)萃取分层，有机相用盐水洗涤(3x100ml),无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(25.07g,62％).m.p.145-149度。
ms(ei)m/z:277(m+)。
实施例6c、methyl4-(3-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(27.6g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至60度反应5小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用乙酸乙酯稀释(180ml),5％碳酸钠淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(100ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物31.17g，收率93％，直接用于下一步。
ms(esi)m/z:337(m+h)+。
实施例6d、4-(3-bromo-4-fluorophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将6c步骤酯化产物溶解在30ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至6c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物，直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:322.1(m+h)+.。
实施例6e、5-(3-bromo-4-fluorophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在500ml反应器中，加入干燥的四氢呋喃(300ml)、6d步骤所得酰胺(16.0g,0.05mol、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％碳酸氢钾中和至中性，氯仿萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(3-溴-4-氟苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(9.56g，收率79％)。
lc-esi-ms(m/z)：244[m+h]+。
实施例6f、2-(3-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(3-溴-4-氟苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(6.05g,0.025mmol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95mg，0.025mmol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用nahco3处理后，乙酸异丙酯萃取，有机层无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物，粗产物5.83g，收率95.5％，直接投下步反应。
lc-esi-ms(m/z)：246[m+h]+。
实施例七：关键中间体4的合成:2-(4-bromo-4-fluorophenyl)pyrrolidine的合成实施例7a、(e)-4-(4-bromo-3-fluorohenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入4-溴-3-氟苯乙酮(32.56g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入5％氢氧化钠水溶液(300ml),用甲基叔丁基醚萃取2次，每次200ml,水层酸化(5％盐酸，300ml)后,甲基叔丁基醚萃取2次，每次200ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用甲基叔丁基醚萃取(300ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(23.96g,58.5％).黄色固体,m.p.144-146度。
ms(ei)m/z:275(m+)。
实施例7b、4-(4-bromo-3-fluorophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在500ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(40.15g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应混合物加入甲基叔丁基醚(300ml)萃取分层，有机相用盐水洗涤(3x100ml),无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(25.07g,62％).m.p.145-149度。
ms(ei)m/z:277(m+)。
实施例7c、methyl4-(4-bromo-3-fluorophenyl)-4-oxobutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(27.6g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至68度反应6小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用乙酸异丙酯稀释(180ml),5％碳酸钠淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(100ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物31.84g，收率95％，直接用于下一步。
ms(esi)m/z:337(m+h)。
实施例7d、4-(4-bromo-3-fluorophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将7c步骤酯化产物溶解在30ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至7c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物，直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:322.1(m+h)+。
实施例7e、5-(4-bromo-3-fluorophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在500ml反应器中，加入干燥的四氢呋喃(300ml)、7d步骤所得酰胺(16.0g,0.05mol、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％碳酸氢钠中和至中性，醋酸异丙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(4-溴-3-氟苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(10.04g，收率83％)。
lc-esi-ms(m/z)：244[m+h]+。
实施例7f、2-(4-bromo-3-fluorophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(4-溴-3-氟苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(6.05g,0.025mmol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95mg，0.025mmol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用nahco3处理后，乙酸异丙酯萃取，有机层无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物，粗产物5.86g，收率95.5％，直接投下步反应。
lc-esi-ms(m/z)：246[m+h]+。
实施例八：关键中间体4的合成:2-(3-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine的合成
实施例8a、(e)-4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobut-2-enoicacid的合成
在500ml反应器中，加入3-氟-5-碘苯乙酮(39.6g,150mmol),乙醛酸单水合物(13.9g,151mmol),加热反应并减压蒸出水(95度，0.1mpa),反应3小时，反应混合物冷却至室温，加入5％氢氧化钾水溶液(300ml),用甲基叔丁基酮萃取2次，每次200ml,水层酸化(5％盐酸，300ml)后,甲基叔丁基酮萃取2次，每次200ml,合并有机相，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到橘黄色固体。固体溶于冰醋酸(50ml),浓盐酸(36％,5ml)，混合物加热回流4小时，减压去醋酸，剩余物用甲基叔丁基酮萃取(300ml)，盐水洗涤3次，每次100ml,有机相无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(26.54g,55.3％).黄色固体,m.p.141-145度。
ms(ei)m/z:320(m+)。
实施例8b、4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoicacid的合成
在500ml反应瓶中，加入醋酸210ml，水75ml，起始物料(47.05g,147mmol),搅拌下，向反应混合物中分批次添加锌粉(10.9g，166mmol)，约1小时加完，混合物继续搅拌3小时，反应混合物加入甲基叔丁基酮(300ml)萃取分层，有机相用盐水洗涤(3x100ml),无水硫酸钠干燥，减压去溶剂，得到目标产物(27.55g,58.2％).m.p.147-150度。
ms(ei)m/z:322(m+)。
实施例8c、methyl4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanoate的合成
在250ml反应瓶中，加入起始物料(27.6g,0.1mol)，原甲酸三甲酯(c4h10o3＝106.12,31.84g，0.3mol),甲醇(90ml),滴加10滴硫酸，升温至60度反应8小时，tlc跟踪反应过程，至起始原料转化完全，减压蒸馏去溶剂，剩余物用乙酸异丙酯稀释(180ml),5％碳酸钠淬灭反应(100ml)，有机相分层，盐水洗涤2次，每次(100ml),无水硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到产物34.78g，收率91％，直接用于下一步。
ms(esi)m/z:383.1(m+h).。
实施例8d、4-(3-fluoro-5-iodophenyl)-4-oxobutanamide的合成
在250ml反应瓶中，加入甲醇100ml，降温至0度以下，通入氨气至饱和(大约10-12g)，将8c步骤酯化产物溶解在30ml甲醇中得到的液体，滴加到甲醇-氨的饱和溶液中，保持内温0度左右。滴加完毕，反应液在零度下继续反应16小时。tlc检测反应液至8c步骤酯化产物基本消失时，停止反应，减压去溶剂，得到油状物，直接用于下步反应。
ms(esi)m/z:368.1(m+h)+.。
实施例8e、5-(3-fluoro-5-iodophenyl)-3,4-dihydro-2h-pyrrole的合成
在500ml反应器中，加入干燥的四氢呋喃(300ml)、8d步骤所得酰胺(18.4g,0.05mol、硼氢化钠(29.26g，0.77mol)，搅拌均匀，并用冰浴冷却至零度，氮气保护下，滴加三氟化硼乙醚溶液(36.75ml，0.3mol),大约2小时左右滴加完毕，撤去冰浴，混合物升温至回流16小时，tlc检测原料转化完全，反应液冷却至5度，缓慢滴加6n盐酸(35ml),混合物升温至回流1小时，反应液冷却至40度，减压去溶剂，剩余物加水稀释，10％碳酸氢钠中和至中性，醋酸异丙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩得到油状的5-(3-氟-5-碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(11.27g，收率78％)。
所得产品核磁数据如下：
1hnmr,400mhz,cd3odδ:7.78(m,1h),7.43-7.34(m,2h),3.54(m,2h),2.12(dt,j＝10.3,2.0hz,2h),1.97(dt,j＝15.8,7.9hz,2h).
13cnmr,100mhz,cd3odδ:176.2,158.2(d,j＝260.3),155.0(d,j＝10.3),124.0(d,j＝3.1),119.4(d,j＝23.5),118.4(d,j＝23.5),62.3,36.5,21.0.
实施例8f、2-(3-fluoro-5-iodophenyl)pyrrolidine的合成
将油状5-(3-氟-5-碘苯)-3，4-二氢-2h-吡咯(7.23g,0.025mmol)溶解在100ml甲醇和水(4:1)的溶液中，降温至0度，分批添加硼氢化钠(0.95mg，0.025mmol),有氢气放出，反应液成黄色浊液，3小时后升至室温，蒸馏去溶剂，剩余物用nahco3处理后，二氯甲烷萃取，有机层无水硫酸钠干燥过夜，过滤去溶剂，得到淡黄色油状物，粗产物6.8g，收率93.5％，直接投下步反应。
1hnmr,400mhz,cdcl3δ:7.29(m,1h),7.02(m,1h)，6.96(m,1h),4.09(t,j＝7.8hz，1h),3.16(m，1h)，3.04(m，1h)，2.21-2.30(m，1h)，1.77-1.95(m，3h)，1.57-1.67(m，1h)。
lc-esi-ms(m/z)292[m+h]+。
第二步：关键中间体8的合成:
实施例九：
(s)-n-(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide的合成
实施例9a、5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-amine的合成
在1000ml反应瓶中，加入5-chloro-3-nitropyrazolo[1,5-a]pyrimidine化合物(25g,0.125mol)、乙醇(250ml)、和铁粉(75g，1.25mol)加入到反应瓶中，氮气保护下，加热至回流，同时滴加氯化铵(66.5g,1.25mol)水溶液(250ml)，大约1小时滴加完毕，继续回流反应6小时,tlc跟踪至反应完毕后，减压浓缩至糊状，加入水(100ml)稀释剩余物，添加二氯甲烷分层，萃取4-6次，每次200ml，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，减压浓缩得到
5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-amine化合物419.7g，收率为93.5％。
1hnmr,400mhz,cd3odδ:9.29(d,j＝7.2hz,1h),8.71(s,1h),8.16(d,j＝7.2hz,1h),5.92(s,2h)；
ms(esi)m/z:169.8[m+h]+。
实施例9b、5-chloro-3-isocyanatopyrazolo[1,5-a]pyrimidine的合成
将三光气(9.91g,33.38mmol)溶解于50ml四氢呋喃中，加入5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-amine(16.86g,0.1mol)和三乙胺(0.47g,4.64mmol),反应体系于25度搅拌反应1小时。得到5-chloro-3-isocyanatopyrazolo[1,5-a]pyrimidine的悬浮液，产物不经过纯化直接进行下一步反应。
实施例9c、
(s)-n-(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-yl)-3-hydroxypyrrolidine-1-carboxamide的合成
在250ml反应器中,加入碳酸氢钠溶液(80ml,0.5m，40mmol)，加入(s)-吡咯-3-醇(79g,55mmol),滴加步骤9b制备的异氰酸酯溶液(62ml,100mmol以5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-3-amine计),维持温度在0度左右，滴加完毕，混合物在0度下继续搅拌3小时后，加热至50度，继续反应5小时，冷却至室温，加入乙酸乙酯萃取3次，每次100ml。合并有机相，有机相用2n盐酸洗涤，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，剩余物经过硅胶柱层析，以乙酸乙酯/石油醚(5：5，v/v)洗脱，得产物22g，收率78％。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ：9.26(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),2.36(m,2h)；
ms(esi)m/z:282[m+h]+。
第三步：卤代larotrectinib类似物9的制备
实施例十卤代larotrectinib化合物(r)-2-f-5-i-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、2-f-5-i-吡咯化合物(30.8g，106mmol)和乙醇(200ml)加入反应烧瓶中，滴加n,n-二异丙基乙胺(27.3g，212mmol)，保持反应温度在30℃以内，滴加完毕后，继续反应5-8小时，tlc中控，反应完毕后，加入甲基叔丁基醚(300ml)，有固体析出，在此温度下继续搅拌30分钟，过滤，抽干得到外消旋混合物2-f-5-i-larotrectinib淡黄色固体38.6g，母液浓缩后经过硅胶柱层析，以乙酸乙酯/正己烷(5：5，v/v)洗脱，得到12.8g,收率为90.4％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-2-f-5-i-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-2-f-5-i-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:536.3,537.3。
实施例十一卤代larotrectinib化合物(r)-2-f-5-br-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、2-f-5-br-吡唑化合物(25.8g，106mmol)和乙腈(220ml)加入反应烧瓶中，滴加n,n-二异丙基乙胺(13.6g，106mmol)和三乙胺(5.3g，53mmol)的混合溶液，保持反应温度在30℃以内，滴加完毕后，继续反应5小时，tlc中控至反应完毕，后处理同实施例六，得到外消旋混合物2-f-5-br-larotrectinib类白色固体48.6g，收率93.6％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-2-f-5-br-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-2-f-5-br-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:491.3(m+h)+。
实施例十二卤代larotrectinib化合物(r)-2-br-5-br-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、2-br-5-br-吡唑化合物(32.3g，106mmol)和异丙醇(180ml)加入反应烧瓶中，滴加n-甲基吗啉(c5h11no＝101.15，21.4g，212mmol)，保持反应温度在25℃以内，滴加完毕后，继续反应8小时，tlc中控至反应完毕，后处理同实施例六，得到外消旋混合物2-br-5-br-larotrectinib类白色固体52.7g，收率90.3％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-2-br-5-br-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-2-br-5-br-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:554.2(m+h)+。
实施例十三卤代larotrectinib化合物(r)-5-f-2-i-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、5-f-2-i-吡咯化合物(30.9g，106mmol)和1，4-二氧六环(150ml)加入反应烧瓶中，滴加n，n-二甲基吡啶(c7h10n2＝122.17，25.9g，212mmol)，保持反应温度在30℃以内，滴加完毕后，继续反应6小时，tlc中控至反应完毕，后处理同实施例六，得到外消旋混合物5-f-2-i-larotrectinib类白色固体53.8g，收率94.6％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-5-f-2-i-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-5-f-2-i-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:536.3(m+h)+。
实施例十四卤代larotrectinib化合物(r)-5-i-2-i-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、2-i-5-i-吡咯化合物(32.3g，106mmol)和正丁醇(120ml)和叔丁醇(80ml)加入反应烧瓶中，加入四丁基碘化铵(c16h36in＝369.37，0.39g，0.01mmol),滴加吡啶(12.6g，159mmol)，保持反应温度在15℃以内，滴加完毕后，继续反应10小时，tlc中控至反应完毕，后处理同实施例六，得到外消旋混合物2-i-5-i-larotrectinib淡黄色固体58.4g，收率85.5％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-2-i-5-i-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-2-i-5-i-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:644.2(m+h)+。
实施例十五卤代larotrectinib化合物(r)-4-f-2-br-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、4-f-2-br-吡咯化合物(30.9g，106mmol)和四氢呋喃(150ml)加入反应烧瓶中，滴加n-甲基哌啶(c6h13n＝99.17，21.0g，212mmol)，保持反应温度在35℃以内，滴加完毕后，继续反应6小时，tlc中控至反应完毕，后处理同实施例六，得到外消旋混合物4-f-2-br-larotrectinib类白色固体45.3g，收率87.4％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-4-f-2-br-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-4-f-2-br-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:491.4(m+h)+。
实施例十六卤代larotrectinib化合物(r)-4-f-3-br-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、4-f-3-br-吡咯化合物(30.9g，106mmol)和甲苯(200ml)加入反应烧瓶中，滴加二甲基乙基胺(c4h11n＝73.14，15.5g，212mmol)，保持反应温度在40℃以内，滴加完毕后，继续反应6小时，tlc中控至反应完毕，后处理同实施例六，得到外消旋混合物4-f-3-br-larotrectinib类白色固体44.1g，收率85.1％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-4-f-3-br-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-4-f-3-br-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:491.3(m+h)+。
实施例十七卤代larotrectinib化合物(r)-4-br-3-f-larotrectinib的合成
将吡唑并(1，5a)嘧啶化合物(30g，106mmol)、4-br-3-f-吡咯化合物(30.9g，106mmol)和丙酮(200ml)加入反应烧瓶中，加入碳酸钠(11.3g，106mmol)，保持反应温度在35℃以内，继续反应8小时，tlc中控至反应完毕，后处理同实施例六，得到外消旋混合物4-br-3-f-larotrectinib类白色固体42.8g，收率82.5％。然后通过手性lc分离纯化，得到(r)-4-br-3-f-larotrectinib为手性纯白色固体、以及(s)-4-br-3-f-larotrectinib为手性纯白色固体。
1hnmr(300mhz,d6dmso)δ＝9.12(d,j＝7.2hz1h),8.73(s,1h),8.78(s,1h),8.07(d,j＝7.2hz,1h),6.8-7.3(m,3h),4.17(m,1h),4.02(m,1h),3.62(m,2h),3.48(m,2h),1.75-2.86(m,8h)；
ms(esi)m/z:491.3(m+h)+。
第四步、标记前体的制备
实施例十八、标记前体(r)-2-氟-5-三丁基锡-larotrectinib的制备
在5ml反应瓶中，依次加入干燥的thf(2.5ml)，(r)-2-f-5-i-larotrectinib(107mg,0.2mmol)，双三丁基锡(c24h54sn2＝580.12，417.9mg,0.72mmol),四(三苯基磷)钯(8.1mg,0.007mmol)，氮气保护下，混合物回流8小时，冷却后减压去溶剂，剩余粗产物用三氧化二铝柱层析(70-230目)纯化，以正己烷/二氯甲烷(20：80,v/v)洗脱，然后100％二氯甲烷冲洗得到目标产物，白色低熔点固体44.77mg,收率32％。熔点36-39度。
ms(esi)m/z:700.29,c33h49fn6o2sn＝699.50。
采用类似方法，在thf体系中，加入(r)-2-f-5-br-larotrectinib，合成(r)-2-氟-5-三丁基锡-larotrectinib标记前体。
实施例十九、标记前体(r)-5-f-2-snme3-larotrectinib的制备
在5ml反应瓶中，依次加入干燥的1，4-二氧六环(2.5ml)，(r)-5-f-2-i-larotrectinib(107mg,0.2mmol)，双三甲基锡(c6h18sn2＝327.63，235.9mg,0.72mmol),双(三苯基磷)二氯化钯(5mg,0.007mmol)，氮气保护下，混合物回流2小时，冷却后减压去溶剂，剩余粗产物用三氧化二铝柱层析(70-230目)纯化，以正己烷/二氯甲烷(20：80,v/v)洗脱，然后100％二氯甲烷冲洗得到目标产物白色低熔点固体(r)-5-f-2-snme3-larotrectinib48.2mg,收率42％。熔点41-43度。
ms(esi)m/z:574.15,c24h31fn6o2sn＝573.26
实施例二十、标记前体(r)-3-f-5-snme3-larotrectinib的制备
在5ml反应瓶中，依次加入干燥的1，4-二氧六环(2.5ml)，(r)-3-f-5-i-larotrectinib(107mg,0.2mmol)，双三甲基锡(c6h18sn2＝327.63，235.9mg,0.72mmol),双(三苯基磷)二氯化钯(5mg,0.007mmol)，氮气保护下，混合物回流2小时，冷却后减压去溶剂，剩余粗产物用三氧化二铝柱层析(70-230目)纯化，以正己烷/二氯甲烷(20：80,v/v)洗脱，然后100％二氯甲烷冲洗得到目标产物白色低熔点固体48.2mg,收率42％。熔点41-43度。
ms(esi)m/z:574.15,c24h31fn6o2sn＝573.26
实施例二十一、标记前体(r)-4-f-2-snme3-larotrectinib的制备
在5ml反应瓶中，依次加入(r)-4-f-3-br-larotrectinib(98mg,0.2mmol),溶剂1，4-二氧六环(1ml),双(三苯基磷)二氯化钯(5mg,0.007mmol,0.03eq),六甲基二锡(237mg,0.15ml,0.72mmol,3.6eq)。反应混合物加热至85度，搅拌反应30分钟，tlc(丙酮/氯仿＝1：19，v/v)跟踪标记前体的转化和产物的形成进程，至标记前体转化完全。混合物经过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，剩余物经过sep-pakc-18固相萃取短柱洗脱(乙酸乙酯/正己烷＝2：8,v/v)得到白色粘稠物标记前体64.2mg,收率56％。
ms(esi)m/z:574.15,c24h31fn6o2sn＝573.26
实施例二十二、标记前体(r)-2、5-双snme3-larotrectinib的制备
在25ml反应瓶中，依次加入(r)-4-br-3-br-larotrectinib(100mg,0.2mmol),溶剂甲苯(10ml),六甲基二锡(c6h18sn2＝327.63，472mg,0.3ml,1.44mmol,7.2eq)及四(三苯基磷)钯(pd(pph3)4，c72h60p4pd＝1155.56，16.2mg,0.014mmol),六甲基二锡(237mg,0.15ml,0.72mmol,3.6eq)。氮气保护下，反应混合物加热至回流，搅拌反应4小时，tlc(丙酮/氯仿＝1：19)跟踪标记前体的转化和产物的形成进程，至标记前体转化完全。混合物经过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，剩余粗产物用三氧化二铝柱层析(70-230目)纯化，以正己烷/二氯甲烷(20：80,v/v)洗脱，然后100％二氯甲烷冲洗得到目标产物淡黄色油状物66.1mg,收率46％。
ms(esi)m/z:718.13,c24h31fn6o2sn＝718.08
实施例二十三、标记前体(r)-2-f-4-snme3-larotrectinib的制备
在5ml反应瓶中，依次加入(r)-3-f-4-br-larotrectinib(98mg,0.2mmol),溶剂甲苯(3ml),(915.72g/mol+404.64＝1320.36)三(二亚苄基丙酮)二钯/双三叔丁基磷(9.3mg)(pd2(dba)3/p(t-bu))3，六甲基二锡(237mg,0.15ml,0.72mmol,3.6eq)。反应混合物加热至116度，搅拌反应3小时，tlc(丙酮/氯仿＝1：19，v/v)跟踪标记前体的转化和产物的形成进程，至标记前体转化完全。混合物经过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，滤液减压浓缩，剩余粗产物用三氧化二铝柱层析(70-230目)纯化，以正己烷/二氯甲烷(20：80,v/v)洗脱，然后100％二氯甲烷冲洗得到目标产物淡黄色油状物59.62mg,收率52％。
ms(esi)m/z:574.15,c24h31fn6o2sn＝573.26
实施例二十四、标记前体(r)-4-f-3-snme3-larotrectinib的制备
在10ml反应瓶中，依次加入(r)-4-f-3-br-larotrectinib(100mg,0.2mmol),溶剂1，4-二氧六环(1ml),双(三苯基磷)二氯化钯(5mg,0.007mmol,0.03eq),六甲基二锡(237mg,0.15ml,0.72mmol,3.6eq)。反应混合物加热至85度，搅拌反应15分钟，tlc(丙酮/氯仿＝1：19)跟踪标记前体的转化和产物的形成进程，至标记前体转化完全。混合物经过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，剩余物经过sep-pakc-18固相萃取短柱洗脱(乙酸乙酯/正己烷＝2：8)得到白色粘稠物标记前体64.2mg,收率56％。
ms(esi)m/z:574.15,c24h31fn6o2sn＝573.26
第五步、放射性碘标记物(r)-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib的制备
实施例二十五、放射性同位素碘标记制备(r)-2、5-双-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib
标记前体(r)-2-snme3-5-snme3-larotrectinib(6mg)加入到尖底v型反应瓶中，加入乙醇0.2ml,随后加入[123、124、125、130、131i]碘化钠(0.5ml，0.1m)、盐酸(0.5ml，0.1m)、氯胺t(1mg/ml,0.5ml),尖底v型反应瓶盖上盖子密封，室温25度下，漩涡震荡反应15min,随后添加焦硫酸钠(200mg/ml，1ml)、饱和碳酸氢钠(1ml)、盐水(1ml)。v型反应瓶在漩涡振荡器上震荡均匀，将其中液体注入sep-pakc-18固相萃取柱，并用水2.5ml淋洗。氮气吹干10min，产物用无水乙醇(4ml)洗脱至样品管中，收集洗脱液，减压浓缩。剩余物采用放射性反相c18制备hplc纯化，以乙腈-水(70:30，v/v)为流动相洗脱,收集放射性(r)-2、5-双-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib产物峰，合并含有产物的洗脱液，减压浓缩，剩余物过0.45um滤膜，收集到v型样品管中，得到(r)-2、5-双-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib产物，放射化学得率38％。化学纯度和放射化学纯度大于99％。就小动物spect肿瘤显像而言，荷瘤小鼠和对照组小鼠可分别注射0.76mci/ml和1.39mci/ml用于肿瘤显像试验。
实施例二十六、放射性同位素碘标记制备(r)-5-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib
在5ml反应管中，依次加入0.35ml水中溶解有[123、124、125、130、131i]碘化钠(70mci)的溶液，冰醋酸(0.3ml),h2so4(0.01ml)，然后超声震荡1min。加入1.5ml冰醋酸和过氧化氢(30％wt)的混合溶液(2：3，v/v)，超声震荡1min。添加二氯甲烷和有机锡标记前体(5mg)的混合溶液(0.3ml)，混合物在室温下超声震荡20min。添加na2s2o3(2m，0.8ml)淬灭反应。添加二氯甲烷(1ml)稀释反应混合物，分层，收集有机层，水层再次萃取2次，每次1ml。合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液注入预先用二氯甲烷处理过的氧化铝短柱，然后以二氯甲烷和甲醇(2：1，v/v)混合液(3ml)洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，剩余物采用放射性反相c18制备hplc纯化，以乙腈-水(80:20，v/v)为流动相洗脱,收集放射性(r)-5-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib产物峰。合并含有产物的洗脱液，减压浓缩，剩余物过0.45um滤膜，收集到v型样品管中，得到(r)-5-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib产物，放射化学得率56％。化学纯度和放射化学纯度分大于99％。
实施例二十七、放射性同位素碘标记制备(r)-2-f-5-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib
在50ml反应瓶中，依次加入[124i]nai(0.1m,1ml，7.8mg,0.052mmol,7.5eq),双蒸水(0.5ml)，超声2min。再添加5ml冰醋酸和30％双氧水(1：1.5，v/v)的溶液，再超声1min。再添加2ml二氯甲烷与有机锡标记前体(4mg,0.007mmol,1eq)的溶液，混合物超声反应20min。添加焦硫酸钠(0.1，10ml)淬灭反应，添加水(5ml)、二氯甲烷(10ml)，混合均匀合分层，收集有机层，过中性氧化铝柱，用(10ml)二氯甲烷合和甲醇混合溶液(2:1,v/v)洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，剩余物采用放射性反相c18制备hplc纯化，以乙腈-水(80:20，v/v)为流动相洗脱,收集放射性(r)-5-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib产物峰。合并含有产物的洗脱液，减压浓缩，剩余物过0.45um滤膜，收集到v型样品管中，得到(r)-2-f-5-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib产物，放射化学得率56％。化学纯度和放射化学纯度分大于99％。
实施例二十八、放射性同位素碘标记制备(r)-4-f-3-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib
取标记前体(r)-4-f-3-snme3-larotrectinib(4mg)加入到尖底v型反应瓶中，加入乙醇1.2ml,随后加入醋酸(1ml，0.1n)、5％过氧乙酸100微升,加入适量[123、124、125、130、131i]碘化钠(1ml，0.1m)，尖底v型反应瓶盖上盖子密封，室温25度下，漩涡震荡反应30min,后处理同实施例八，制得标题化合物。标记时长35min,放射化学得率42％，放射化学纯度大于99％。
实施例二十九、放射性同位素碘标记制备(r)-2-f-4-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib
取标记前体(r)-2-f-4-snbu3-larotrectinib(4mg)加入到尖底v型反应瓶中，加入乙醇1.2ml,随后加入醋酸(1ml，0.1n)、30％过氧化氢500微升,加入适量[123、124、125、130、131i]碘化钠(1ml，0.1m)，尖底v型反应瓶盖上盖子密封，室温25度下，漩涡震荡反应30min,后处理同实施例八，制得标题化合物。标记时长35min,放射化学得率42％，放射化学纯度大于99％。
实施例三十、放射性同位素碘标记制备(r)-4-f-2-[123,124,125,130,131]i-larotrectinib
取标记前体(r)-4-f-2-snbu3-larotrectinib(4mg)加入到尖底v型反应瓶中，加入乙醇1.2ml,随后加入醋酸(1ml，0.1n)、过氧叔丁酸500微升,加入适量[123、124、125、130、131i]碘化钠(1ml，0.1m)，尖底v型反应瓶盖上盖子密封，室温25度下，漩涡震荡反应30min,后处理同实施例八，制得标题化合物。标记时长35min,放射化学得率41％，放射化学纯度大于99％。