视黄酸受体相关的孤儿受体(ror)是被鉴定为很多疾病中的重要病理学调节剂的核受体(nr)超家族的成员。ror亚家族由rorα、rorβ和rorγ构成。小鼠和人rorγ基因产生两种同种型，γ1和γ2，后者最通常被称为γt。rorγt信号传导（通常响应于il-23/il-23受体信号传导）是原初cd4+t-细胞分化成不同于经典的th1和th2细胞的t-细胞指定的th17的亚组所需要的，并且支持它们的维持。th17细胞产生白介素-17a(il-17)和il-17f。另外，th17细胞产生已知驱动炎症反应的一定范围的其它因子，包括肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、白介素-6(il-6)、gm-csf、cxcl1和ccl20。nk细胞和先天淋巴样细胞例如淋巴组织诱导物(lti)样细胞表达il-23受体和rorγt并产生il-17(响应于刺激)以及il-23。存在实质证据：il-23-响应性rorγt和表达il-17的细胞与自身免疫性疾病(ai)、炎症疾病和癌症相关联。因此，rorγt的目标抑制可能对于降低那些疾病的发病机制是重要的。ai疾病为目前无法治愈的慢性病况。ai疾病的治疗典型地包括意图通过给予抗炎症、抗疼痛或免疫抑制剂药物而控制疾病进程并减少症状。不幸地，使用抗炎症和抗疼痛药物有时是无效的并且使用免疫抑制剂通常导致破坏性的长期副作用。免疫抑制剂药物的最严重的副作用是增加感染风险和较高的癌症风险。已经识别了rorγt的天然和合成配体。已经在关于ai的文献中报道了对抗rorγt的小分子抑制剂。参见wo2015/017335和wo2014/179564。然而，ai疾病的盛行结合目前治疗的无效性或破坏性的副作用使得为患者提供更多的治疗选择成为必要。通过使治疗益处最大化（借由靶向致病性免疫细胞）同时最小化抑制宿主防御的风险，靶向rorγt可能相对于目前的ai疗法具有优势。本发明提供了作为rorγt抑制剂的新化合物。此类新化合物能够满足对葡萄膜炎、多发性硬化、类风湿性关节炎、移植物抗宿主病、克罗恩病、其它炎症肠病、癌症、银屑病和血清阴性脊椎关节病如中轴型脊椎关节炎、强直性脊柱炎和银屑病性关节炎的强有力的有效治疗的需要。本发明提供具有下式的化合物,其中n为0、1或2；x独立地为–n–或–ch–；r1为–c1-3烷基；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h、–ch3或–ch2ch3；r4为或任选地被–cf3取代的噻唑基；r5为卤素、–cn、–cf3、噁二唑基或任选地被ch3取代的噁二唑基；r6为–h、–ome、卤素、–ch3或–cf3；条件是当n为0、x为–n、–r1为–ch2ch3、r2为与–o–邻位的–ch3、r3a和r3b为–h和–ch3时，r5不能为–cf3；或其药学上可接受的盐。本发明还提供了用于治疗患者的银屑病的方法，其包括给予需要其的患者本发明的化合物或其药学上可接受的盐。此外，本发明提供了用于治疗患者的血清阴性脊椎关节病的方法，其包括给予需要其的患者本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在所述实施方案中，血清阴性脊椎关节病为中轴型脊椎关节炎、强直性脊柱炎或银屑病性关节炎。本发明提供了药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在进一步的实施方案中，所述组合物还包含一种或多种其它治疗剂。在进一步的实施方案中，本发明提供了用于治疗银屑病的药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在又进一步的实施方案中，本发明提供了用于治疗血清阴性脊椎关节病的药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在所述实施方案中，血清阴性脊椎关节病为中轴型脊椎关节炎、强直性脊柱炎或银屑病性关节炎。此外，本发明提供了用于治疗，特别是用于治疗银屑病的本发明化合物或其药学上可接受的盐。此外，本发明提供了用于治疗银屑病的本发明化合物或其药学上可接受的盐。在进一步的实施方案中，本发明提供了本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗银屑病的药物的用途。此外，本发明提供了用于治疗，特别是用于治疗血清阴性脊椎关节病的本发明化合物或其药学上可接受的盐。此外，本发明提供了用于治疗血清阴性脊椎关节病的本发明化合物或其药学上可接受的盐。在进一步的实施方案中，本发明提供了本发明化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗血清阴性脊椎关节病的药物的用途。在所述实施方案中，血清阴性脊椎关节病为中轴型脊椎关节炎、强直性脊柱炎或银屑病性关节炎。本发明还包括可用于合成本发明化合物的中间体和方法。本文中使用的术语“治疗（“treating”或“treat”或“treatment”）”是指抑制、减缓、阻止或逆转存在的症状、病况或病症的进展或严重度。术语“脊椎关节病”是指通常涉及脊柱以及韧带和肌腱连接骨骼的区域的多种慢性关节疾病。脊椎关节病有时也称为脊椎关节病或脊椎关节炎。术语“血清阴性”是指对于类风湿因子(reheumatoidfactor)为阴性的疾病。本发明化合物可以反应以形成药学上可接受的盐。药学上可接受的盐和制备它们的常规方法是本领域熟知的。参见例如p.stahl等人.handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selectionanduse,第二修订版(wiley-vch,2011);s.m.berge等人,“pharmaceuticalsalts,”journalofpharmaceuticalsciences,vol.66,no.1,1977年1月。技术人员理解，以(i)示出的本发明化合物或其药学上可接受的盐由包含至少两个由下文中的*表示的手性中心的核心构成：尽管本发明涉及所述化合物的全部个体对映异构体以及对映异构体混合物，包括外消旋体，但本发明的优选化合物由以下的(ii)：或其药学上可接受的盐表示。技术人员还理解，所有手性中心的cahn-ingold-prelog(r)或(s)命名都取决于具体化合物的取代方式而变化。单一对映异构体或非对映异构体可以由手性试剂开始制备或通过立体选择性或立体特异性的合成技术制备。或者，单一对映异构体或非对映异构体可以通过标准手性色谱或结晶技术在本发明化合物的合成中的任何方便的点从混合物中分离。本发明化合物的单一对映异构体为本发明的优选实施方案。本发明化合物优选作为通过各种路径给药的药物组合物配制。此类药物组合物和制备它们的方法是本领域中熟知的。参见例如remington:thescienceandpracticeofpharmacy(a.gennaro等人编,第22版,pharmaceuticalpress,2012)。更特别优选的为包含下式化合物：,或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。尽管本发明的所有化合物都为rorγt的有用抑制剂，但优选某些类型的化合物。以下段落描述了此类优选的类型：a)r1为乙基；b)r1为甲基；c)r2为–ch3；d)r2为在与氧相邻碳上的–ch3；e)r3a和r3b独立地为–h或–ch3；f)r3a和r3b为–h和–h；g)r3a和r3b为–h和–ch3；h)n为0；i)n为1；j)r4为其中r5为–ch3或–cf3；k)r4为其中r5为–ch3或–cf3，n为1和r6为–ch3；l)r4为其中r5为–cf3；m)r4为其中r5为–cf3，n为1和r6为卤素或–ch3；n)r4为其中r5为卤素、氰基、–cf3、噁二唑基或任选地被–ch3取代的噁二唑基；o)r4为其中r5为卤素、氰基、–cf3、噁二唑基或任选地被–ch3取代的噁二唑基，n为1和r6为–h、–och3、卤素、–ch3或–cf3；p)r4为其中r5为卤素、氰基、–cf3、噁二唑基或任选地被–ch3取代的噁二唑基，n为2和r6为–h、–och3、卤素、–ch3或–cf3；q)r4为任选地被–cf3取代的噻唑基；本发明化合物的优选实施方案涉及具有下式的化合物，其中n为0、1或2；x独立地为–n–或–ch–；r1为–c1-3烷基；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h、–ch3或–ch2ch3；r4为或任选地被–cf3取代的噻唑基；r5为卤素、–cn、–cf3、噁二唑基或任选地被ch3取代的噁二唑基；r6为–h、–ome、卤素、–ch3或–cf3；条件是当n为0、x为–n、–r1为–ch2ch3、r2为与–o–邻位的–ch3、r3a和r3b为–h和–ch3时，r5不能为–cf3；或其药学上可接受的盐。本发明化合物的另一优选实施方案涉及具有下式的化合物，其中n为0或1；x独立地为–n–或–ch–；r1为–c1-3烷基；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h、–ch3或–ch2ch3；r6为卤素或–ch3；条件是当n为0、x为–n、–r1为–ch2ch3、r2为与–o–邻位的–ch3时，r3a和r3b不能为–h和–ch3；或其药学上可接受的盐。本发明化合物的另一优选实施方案涉及具有下式的化合物，其中n为0或1；x为–n–或–ch–；r1为–c1-3烷基；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h或–ch3；r6为–ch3；条件是当n为0、x为–n、–r1为–ch2ch3、r2为与–o–邻位的–ch3时，r3a和r3b不能为–h和–ch3；或其药学上可接受的盐。本发明化合物的又另一优选实施方案涉及具有下式的化合物，其中n为0或1；x为–n–或–ch–；r1为–c1-3烷基；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h、–ch3或–ch2ch3；r6为卤素或–ch3；或其药学上可接受的盐。本发明化合物的另一优选实施方案涉及具有下式的化合物，其中n为0、1或2；x为–n–或–ch–；r1为–c1-3烷基；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h或–ch3；r5为卤素、–cn、–cf3、噁二唑基或任选地被ch3取代的噁二唑基；r6为–ome、卤素、–ch3或–cf3；或其药学上可接受的盐。本发明化合物的另一优选实施方案涉及具有下式的化合物，其中x为–n–或–ch–；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h或–ch3；或其药学上可接受的盐。本发明化合物的另一优选实施方案涉及具有下式的化合物，其中x为–n–或–ch–；r2为–h或–ch3；r3a和r3b独立地为–h或–ch3；或其药学上可接受的盐。本发明的特别优选的实施方案涉及化合物：(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{(1r)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺：或其药学上可接受的盐。本发明的另一特别优选的实施方案涉及化合物：。本发明的另一特别优选的实施方案涉及化合物：(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺：或其药学上可接受的盐。本发明的另一特别优选的实施方案涉及化合物：。本发明化合物一般而言在宽的剂量范围内有效。例如，每日剂量落入约1mg至1g的范围内。在一些实例中，低于前述范围下限的剂量水平可能多于足量，而在其它情况下，可能仍然使用更大剂量，同时保持有利的益处/风险特征，并因此上述剂量范围并非意在以任何方式限制本发明的范围。理解为，实际给予化合物的量由医师根据相关情况确定，所述情况包括待治疗的病况、所选择的给药途径、所给予的实际的一种或多种化合物、个体患者的年龄、体重和反应、以及患者症状的严重度。本发明化合物或其盐可以通过本领域中已知的各种程序制备，它们中的一些在下文的方案、制备例和实施例中示例。所述的每个路径的特定合成步骤可以不同的方式组合，或与来自不同方案的步骤结合，从而制得本发明的化合物或盐。以下方案中的各步骤的产物可以通过本领域熟知的常规方法回收，所述方法包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研磨和结晶。在下文的方案中，除非另外指明，否则全部取代基都如上文定义。试剂和起始材料是本领域普通技术人员容易获得的。另外，在下文方案中描述的某些中间体可能包含一个或多个氮或氧保护基。取决于特定反应条件和待进行的特定转化，可变的保护基在每次出现时可以相同或不同。保护和脱保护条件是技术人员熟知的并描述于文献(参见例如“greene’sprotectivegroupsinorganicsynthesis”,第四版,peterg.m.wuts和theodoraw.greene,johnwileyandsons,inc.2007)中。某些立体化学中心没有被指明并且某些取代基在下文的方案中被省去了（为了清楚起见）并且并非意在以任何方式限制方案的教导。单一对映异构体或非对映异构体可以由手性试剂起始制备或通过立体选择性或立体特异性的合成技术制备。或者，单一对映异构体或外消旋体可以通过标准手性色谱或结晶技术在本发明化合物的合成中的任何方便的点通过例如选择性结晶技术或手性色谱法的方法从混合物中分离(参见例如j.jacques等人,"enantiomers,racemates,andresolutions",johnwileyandsons,inc.,1981和e.l.elielands.h.wilen,”stereochemistryoforganiccompounds”,wiley-interscience,1994)。一些本发明的中间体或化合物可以具有一个或多个手性中心。本发明涉及所有个体对映异构体或非对映异构体以及所述化合物的对映异构体和非对映异构体的混合物（包括外消旋体）。优选的是作为单一对映异构体或非对映异构体存在的包含至少一个手性中心的本发明化合物。单一对映异构体或非对映异构体可以由手性试剂起始制备或通过立体选择性或立体特异性的合成技术制备。或者，单一对映异构体或非对映异构体可以通过标准手性色谱或结晶技术从混合物中分离。技术人员理解，在一些情况下，对映异构体或非对映异构体的洗脱顺序可以由于不同的色谱柱和流动相而不同。命名“异构体1”和“异构体2”是指从手性色谱中分别第一个和第二个洗脱的化合物，并且如果手性色谱在合成的早期启动，将同样的命名法应用于随后的中间体和实施例。某些缩写定义如下：“acn”是指乙腈；“auc”是指曲线下方的面积；“bpr”是指背压调节器；“bsa”是指牛血清白蛋白；“dba”是指淡棕色非刺鼠(dilutebrownnon-agouti)；“dcc”是指1,3-二环己基碳二亚胺；“dcm”是指二氯甲烷；“de”是指非对映异构体过量；“dft”是指密度泛函理论；“dic”是指二异丙基碳二亚胺；“dipea”是指二异丙基乙胺、n-乙基-n-异丙基-丙-2-胺，或n,n-二异丙基乙胺；“dmap”是指4-二甲基氨基吡啶；“dmem”是指达尔伯克(氏)改良伊格尔(氏)培养基；“dmf”是指二甲基甲酰胺；“dmso”是指二甲亚砜；“dna”是指脱氧核糖核酸；“dpbs”是指达尔伯克(氏)磷酸盐缓冲盐水；“edci”是指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；“ec50”是指最大响应一半处的有效浓度；“ee”是指对映异构体过量；“elisa”是指酶连接的免疫测定；“etoac”是指乙酸乙酯；“etoh”是指乙醇或乙基醇；“et2o”是指乙醚；“ex”是指实施例；“fbs”是指胎牛血清；“g”是指重力；“gal”是指β-半乳糖苷酶dna结合域；“gpi”是指葡萄糖-6-磷酸异构酶；“hbtu”是指(2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)；“hec”是指羟乙基纤维素；“hek”是指人胚肾；“hepes”是指4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸；“hoat”是指1-羟基-7-偶氮苯并三唑；“hobt”是指1-羟基苯并三唑水合物；“ic50”是指针对试剂可能产生的最大抑制响应的50%的试剂浓度；“il”是指白介素；“离子交换色谱”是指使用isolute®flashscx-2离子交换色谱采用2mnh3在meoh中的溶液洗脱的纯化；“ipa”是指异丙基醇或异丙醇；“ipam”是指异丙胺；“kd”是指离解常数；“ki”是指抑制常数；“min”是指分钟；“mem”是指最低基础培养基；“meoh”是指甲醇或甲基醇；“ms”是指质谱法；“mtbe”是指甲基叔丁基醚；“nbs”是指n-溴代琥珀酰亚胺；“pbmc”是指外周血单核细胞；“pbs”是指磷酸盐缓冲盐水；“pem”是指光弹性调节剂；“prep”是指制备例；“rar是指视黄酸受体；“rpmi”是指洛斯维·帕克纪念研究所；“rt”是指室温；“rt”是指保留时间；“scx”是指强阳离子交换；“sfc”是指超临界流体色谱法；“t3p®”是指1-丙烷磷酸酐溶液、2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物溶液或ppaca；“tea”是指三乙胺；“thf”是指四氢呋喃；“vcd”是指震动性循环二色性，和“xrd”是指x射线粉末衍射。在下文的方案中，除非另外说明，否则所有取代基如上文定义。试剂和起始材料是本领域普通技术人员容易获得的。其它物质可以通过类似于已知的结构类似化合物的合成的有机和杂环化学的标准技术和下文中制备例和实施例中所述的程序(包括任何新程序)制备。方案1在方案1中，rx为合适的胺保护基和ry为合适的胺保护基或氢。胺保护基是在本领域中被很好地知晓和理解的，并可以包括氨基甲酸酯和酰胺。本领域技术人员会意识到替代试剂和程序来添加和除去所述保护基。rz为卤素，例如溴或氯。技术人员会意识到存在替代试剂和程序来引入卤素。本领域技术人员意识到存在各种制备取代的羟乙基噻吩的方法。例如，可以通过在例如-78至-60℃的温度下在强碱例如仲丁基锂或正丁基锂存在下用取代的环氧化物置换溴化物，然后通过路易斯酸例如三氟化硼乙醚配合物开环来从3-溴噻吩制备化合物(1)。在步骤1中，可以在酸例如三氟乙酸存在下合并取代的羟乙基噻吩(1)和保护的或未保护的4-酮基哌啶(2)以产生螺噻吩基吡喃并哌啶(3)。在步骤1期间除去保护基rx的情况下，或在ry为氢的情况下，可以使用标准胺保护基例如叔丁氧基羰基保护化合物(3)中的胺。在步骤2a中，化合物(3)可以被卤化；例如化合物(3)可以采用nbs和催化剂例如二甲基氨基吡啶来溴化以提供化合物(4)。或者，在步骤2b中，化合物(3)可以在强碱例如丁基锂存在下通过二氧化碳羧酸化以提供化合物(5)。在步骤3中，化合物(4)可以在有机金属配体(例如4,5-双-(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨)、催化剂(例如乙酸钯(ii))和碱(例如dipea)存在下与一氧化碳和胺(6)反应以提供化合物(7)。技术人员理解，存在替代配体和催化剂。或者，在步骤3中，可以在标准偶联条件下将化合物(5)转化成酰胺(7)。可以在合适的偶联试剂(例如t3p®)和合适的胺碱(例如dipea)存在下实现羧酸(5)和胺(6)的偶联。替代的偶联试剂包括hobt、hbtu和hoat，以及碳二亚胺例如dcc、dic、edci。替代的碱包括三甲胺和tea。本领域技术人员意识到，存在许多用于由羧酸和胺的反应获得的酰胺形成的其它方法和试剂。添加剂例如dmap可以用于改善反应。或者，可以在碱(例如tea或吡啶)存在下使用化合物(5)的取代的酰氯酰化化合物(6)。在步骤4中，可以按照本领域已知的合适条件将化合物(7)脱保护。例如，可以用hcl除去叔丁氧基羰基保护基。可以在有机碱(例如dipea)或无机碱(例如碳酸钾)存在下用r4的适当取代的基团烷基化游离胺（其中ry为离去基例如卤素或磺酸酯），以提供式(i)化合物。可以例如在本领域熟知的标准条件下在合适的溶剂例如et2o中通过本发明化合物的合适游离碱、合适的药学上可接受的酸例如盐酸的反应形成本发明化合物的药学上可接受的盐，例如盐酸盐。另外，此类盐的形成可以在氮保护基脱保护的同时发生。此类盐的形成是本领域中被很好地知晓和理解的。参见例如gould,p.l.,“saltselectionforbasicdrugs,”internationaljournalofpharmaceutics,33:201-217(1986)；bastin,r.j.,等人“saltselectionandoptimizationproceduresforpharmaceuticalnewchemicalentities,”organicprocessresearchanddevelopment,4:427-435(2000)；和berge,s.m.,等人,“pharmaceuticalsalts,”journalofpharmaceuticalsciences,66:1-19,(1977)。本发明化合物或其盐可以通过本领域中已知的各种程序制备，它们中的一些在下文的制备例和实施例中示例。所述的每个路径的特定合成步骤可以不同的方式组合以制备本发明化合物或其盐。下文中各步骤的产物可以通过本领域中熟知的常规方法回收，所述方法包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研磨和结晶。试剂和起始材料是本领域普通技术人员容易获得的。下文的制备例和实施例进一步示例本发明并且代表本发明化合物的典型合成。制备例和实施例制备例11-(3-噻吩基)丙-2-酮将2-(3-噻吩基)乙酸(26.5g,146.5mmol)悬浮在乙酸酐(87.9ml,913mmol,)中，并加入1-甲基咪唑(7.57g,91.3mmol)。在室温下在氮气下搅拌该反应混合物4小时。将该反应混合物冷却至0℃，加入水(150ml)并搅拌1小时。用etoac(300ml)稀释该溶液并依次用2mnaoh(2×200ml)、水(200ml)和盐水(200ml)洗涤。经硫酸钠干燥有机萃取物，过滤并浓缩至干以提供作为黄色油的标题化合物(28.16g,77%)。1hnmr(400.13mhz,cdcl3)δ2.14(s3h),3.7(s,2h),6.94(d,j=5.1hz,1h),7.08(bs,1h),7.29-7.26(m,1h)。制备例21-(3-噻吩基)丙-2-醇将硼氢化钠(1.61g,41.67mmol)和干燥meoh(63ml)一起加入，并在加入meoh的同时将该反应混合物冷却至-10℃。进一步冷却至-20℃，并经40分钟逐滴加入1-(3-噻吩基)丙-2-酮(4.92g,33.34mmol)在干燥meoh(26.7ml)中的溶液，并在-20℃下搅拌1.5小时，然后在室温下搅拌17小时。将该溶液冷却至-5℃(内部温度)并用氯化铵饱和溶液(15ml)然后用1nhcl(15ml)淬灭。加入水(30ml)和etoac(100ml)。在减压下将该混合物浓缩至总体积的1/3。用etoac(2×100ml)萃取该混合物。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥，过滤并浓缩至干以提供标题化合物(4.74g,100%)。质谱(m/z):125(m-oh+h),164.8(m+na)。替代制备例2a在0℃下经30分钟逐份地将硼氢化钠(7.06g,182.8mmol)加入1-(3-噻吩基)丙-2-酮(28.16g,140.6mmol)在meoh(282ml)中的溶液中并在室温下搅拌过夜。浓缩至干，用etoac(200ml)稀释并用氯化铵饱和溶液(150ml)洗涤。用etoac(2×200ml)萃取水层。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过采用meoh:dcm(0:100至5:95)洗脱的硅胶快速色谱法纯化残余物以提供作为浅红色油的标题化合物(12.85g,64%)。质谱(m/z):125(m-oh+h)。制备例3(2s)-1-(3-噻吩基)丙-2-醇将3-溴噻吩(6.88g,42.2mmol)溶解在无水thf(10ml)和甲苯(100ml)中。冷却至-78℃。经15分钟通过注射器向其中加入仲丁基锂(1.3mol/l在环己烷中,34ml,44mmol)。保持温度为<-60℃，搅拌10分钟，然后逐滴加入(2s)-2-甲基环氧乙烷(4.9g,84.4mmol)。在5分钟之后，通过滴液漏斗经15分钟加入三氟化硼乙醚配合物(5.3ml,42mmol)。保持温度为<-55℃。加料完毕后，在-78℃下搅拌2小时。在-78℃下用饱和碳酸氢钠淬灭，加入et2o，并温热至环境温度。用饱和碳酸氢钠(2×)，然后用饱和盐水洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩。通过采用15%etoac/己烷洗脱的硅胶快速色谱法纯化以提供标题化合物(3.85g,64.2%)。再次纯化混合的级分以提供作为无色液体的标题化合物的总量(4.29g,71.5%)。1hnmr(400.13mhz,cdcl3)δ7.28-7.26(dd,j=2.9,5.0,1h),7.03-7.01(m,1h),6.96(dd,j=1.2,4.9,1h),4.04-3.95(m,1h),2.83-2.68(m,2h),1.63(s,1h),1.22(d,j=6.2,3h),or[α]20d+25.50(c1.00,chcl3)。基本上通过制备例3的方法制备以下化合物。表1制备例编号化学名称结构1hnmr(400.13mhz,cdcl3)δ4(2r)-1-(3-噻吩基)丙-2-醇7.28-7.26(dd,j=2.9,5.0,1h),7.03-7.01(m,1h),6.96(dd,j=1.2,4.9,1h),4.04-3.95(m,1h),2.83-2.68(m,2h),1.63(s,1h),1.22(d,j=6.2,3h)制备例5(4s)-4-苄基-3-[(2s)-2-(3-噻吩基)丙酰基]噁唑烷-2-酮在-78℃下在氮气气氛下将双(三甲基甲硅烷基)氨基钠在thf中的溶液(1mol/l,40ml,40.0mmol)加入(4s)-4-苄基-3-[2-(3-噻吩基)乙酰基]噁唑烷-2-酮(10.20g,33.86mmol)在thf(75ml)中的溶液并搅拌1小时。将纯碘甲烷(2.5ml,40mmol)加入该反应混合物，并在-78℃下搅拌1.5小时，然后使其温热至室温。在1小时后，用饱和氯化铵水溶液(75ml)淬灭并浓缩至干。将残余物溶解在etoac中并依次用0.5nhcl水溶液、nahco3饱和水溶液、水和盐水洗涤有机相。用etoac再次萃取碱性层(basiclayer)，收集有机萃取物并与盐水洗液合并。分离有机层并合并所有有机萃取物。经硫酸镁干燥该材料，过滤并浓缩至干。通过采用etoac/异己烷梯度(0:100至50:50)洗脱的硅胶快速色谱法纯化粗材料以提供标题化合物(8.62g,69%)。质谱(m/z):316(m+h),338(m+na)。制备例6(5's)-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]将4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.50g,32.6mmol)和(2s)-1-(3-噻吩基)丙-2-醇(4.64g,32.6mmol)溶解在dcm(100ml)中。加入三氟乙酸(20ml,264.5mmol)。在环境温度下搅拌该混合物18小时。在减压下浓缩该混合物，然后加入水和et2o。用水洗涤有机层，合并水性洗液，并用固体碳酸钠将ph调节成碱性。用固体氯化钠使水层饱和，然后用etoac(5×)洗涤水层。合并etoac层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供作为浅黄色油的标题化合物(4.61g,63%)。质谱(m/z):224.2(m+h)。基本通过制备例6的方法制备以下化合物。表2制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+1)7(5'r)-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]224.2(m+h)制备例8(5’s)-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯将(5's)-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃](10.39g,46.53mmol)溶解在dcm(100ml)中。逐滴加入二碳酸二叔丁酯(11.52ml,51.18mmol)，并在环境温度下搅拌该混合物1.5小时。加入另外的二碳酸二叔丁酯(2.00ml,9.17mmol)并搅拌30分钟，然后在减压下浓缩。加入咪唑(2.21g,32.5mmol)以破坏过量的二碳酸二叔丁酯(synthesis,2001,no.4,550)。加入et2o并用盐水洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩。通过用10%etoac/己烷洗脱的硅胶快速色谱法纯化。通过采用15%etoac/己烷洗脱的硅胶快速色谱法再次纯化以提供作为无色油的标题化合物(12.92g,86%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ7.33(d,j=5.1,1h),6.77(d,j=5.1,1h),3.92-3.72(m,3h),3.15-2.91(s,2h),2.62(dd,j=15.8,3.0,1h),2.30(dd,j=15.8,10.6,1h),2.1(m,1h),1.76-1.63(m,2h),1.51-1.40(m,1h),1.38(s,9h),1.24(d,j=6.2,3h),100%ee：基于sfc色谱,luxamylose-2,5ml/min,225nm,rt=1.75min,or[α]20d+82.1(c1.00,chcl3)。基本上通过制备例8的方法制备以下化合物。表3制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+1)9(5’r)-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯224(m-boc+h)制备例105’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯在0℃下将三氟乙酸(34.16ml,451.8mmol)逐滴加入1-(3-噻吩基)丙-2-醇(12.85g,90.35mmol)和4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(23.40g,117.5mmol)在干燥dcm(135ml)中的溶液中并在室温下保持搅拌17小时。将该混合物浓缩至干，用meoh稀释残余物，然后在减压下除去溶剂。将残余物溶于(takeup)meoh中并通过离子交换色谱法纯化。合并含期望产物的级分并在与甲苯(3×)减压共蒸发下浓缩以提供作为浅橙色固体的粗5-甲基螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]。将dmap(2.23g,18.07mmol)和tea(37.8ml,271.1mmol)逐滴加入5-甲基螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶](20.18g,90.35mmol)在冷却至0℃的干燥dcm(90.35ml)中的溶液中。向其中逐滴加入二碳酸二叔丁酯(30.49g,135.5mmol,)在干燥dcm(27.1ml)中的溶液。在室温下搅拌过夜。加入水(100ml)，用dcm(3×100ml)萃取水层，用盐水(100ml)洗涤，并在减压下浓缩。通过采用etoac:异己烷(0:100至20:80)洗脱的硅胶快速色谱法纯化。将残余物与dcm(3×)共蒸发以提供作为白色固体的标题化合物(27.64g,92.7%)。质谱(m/z):346(m+na)。替代制备例10a5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯在0℃下将三氟乙酸(20.17ml,266.72mmol)逐滴加入1-(3-噻吩基)丙-2-醇(4.74g,33.34mmol)和4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.80g,38.34mmol)在干燥dcm(100ml)中的溶液中并在室温下搅拌过夜。将该混合物浓缩至干并用meoh稀释残余物。通过离子交换色谱法纯化粗材料。合并含期望产物的层并在与dcm(3×)减压共蒸发下浓缩以提供粗5-甲基螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶](8.17g)。将dmap(0.831g,6.67mmol)和tea(9.29ml,66.68mmol)加入5-甲基螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶](8.17g)在冷却至0℃的干燥dcm(66.7ml)中的溶液中。向其中逐滴加入二碳酸二叔丁酯(18.19g,83.35mmol,)在干燥dcm(16.7ml)中的溶液。在室温下搅拌3天。加入水(60ml)，用dcm(3×50ml)萃取水层，用盐水(20ml)洗涤，通过相分离器过滤，并在减压下浓缩。通过采用etoac:异己烷(0:100至20:80)洗脱的硅胶快速色谱法纯化残余物。将残余物与dcm(2×)共蒸发以提供标题化合物(9.41g,80%)。质谱(m/z):346(m+na)。基本上通过替代制备例10a的方法制备以下化合物。表4制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)114'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯346(m+na)12(4's)-4'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯346(m+na)制备例132-溴-4-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯将4'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(4.73g,13.2mmol)在acn(112ml)中的溶液冷却至0℃，然后逐份加入dmap(0.162g,1.32mmol)和nbs(2.60g,14.5mmol)，保持搅拌2.5小时。将mtbe/异己烷的混合物(1:1,100ml)加入该反应混合物中并搅拌50分钟，然后浓缩至干。将残余物溶于dcm(100ml)中，用na2s2o3饱和水溶液(45ml)，然后用盐水(25ml)洗涤。通过相分离器筒过滤并浓缩至干以提供作为黄色油的标题化合物(5.69g,88.1%)。质谱(m/z):424/426(m+na)。基本上通过制备例13的方法制备以下化合物。表5制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+h)14(5's)-2'-溴-5'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯302/304m-boc制备例151-(叔丁氧基羰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸将5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(7.16g,21.71mmol)溶解在thf(108.5ml)中并冷却至-78℃。经20分钟向其中逐滴加入丁基锂(2.5m在己烷中,13ml,32.56mmol)，并在加料完毕后再搅拌该混合物30分钟。通过插管以co2鼓泡并在连续加入co2的过程中在这个温度下保持搅拌。在连续加入co2下经2小时使反应温热至0℃并用水(80ml)小心地淬灭。将该反应混合物倾倒入水中并用et2o(100ml)萃取水层。用2nnaoh(3×15ml)和水(50ml)洗涤有机相。用2nhcl(3×)将水层酸化成ph=6并用etoac萃取。合并有机萃取物，用盐水(50ml)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以提供作为灰白色固体的标题化合物(7.89g,97%)。质谱(m/z):390(m+na)。制备例161-(叔丁氧基羰基)-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酸将4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(如j.med.chem.,2011,54,(8),第2687-2700页和wo2011060035中所述制备)(10g,32.32mmol)溶解在thf(100ml)中并冷却至-78℃。经15分钟向其中逐滴加入丁基锂(22.22ml,35.55mmol)并在加料完毕后再搅拌该混合物15分钟。通过插管以co2鼓泡并在连续加入co2的情况下使该混合物温热至室温。在2小时后，将该混合物冷却至0℃，并加入水然后加入et2o。用1nnaoh将水层的ph调节成碱性ph并用1nnaoh(3×)洗涤有机层。合并碱洗液并用5nhcl酸化至ph2。用etoac(3×)萃取水层，合并有机萃取物，并用盐水洗涤。经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供作为白色固体的标题化合物(11.11g,97.27%)。质谱(m/z):352.2(m-h)。基本上通过制备例16的方法制备以下化合物。表6制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m-1)17(5'r)-1-(叔丁氧基羰基)-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酸366(m-h)制备例18(5’s)-1-叔丁氧基羰基)-5’-甲基-4’,5’二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸将(5’s)-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(11.19g,34.60mmol)溶解在无水thf(200ml)中并冷却至-78℃。经20分钟逐滴加入正丁基锂(21ml,34.64mmol)。加料完毕后，在-78℃下搅拌20分钟，然后通过插管在co2气体中鼓泡60分钟。在连续加入co2下将该混合物温热至室温。在室温下搅拌1小时后，用水(3ml)淬灭并在减压下浓缩至25%体积。加入et2o和水。用水(2×)洗涤并合并水性洗液。用1nhcl将ph调节成酸性ph。用氯化钠使水层饱和并用etoac(2×)萃取。合并etoac萃取物，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供作为白色泡沫的标题化合物(13.40g,100%)。质谱(m/z):366(m-h)。制备例19螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-1',2-二甲酸o1'-叔丁酯o2-甲酯将1-(叔丁氧基羰基)-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酸(40.0g,129.27ml)溶解在thf(750ml)中并冷却至-78℃。经45分钟逐滴加入正丁基锂(1.6m在己烷中,88.8ml,142.2mmol)使得t<-60℃。在加料后，搅拌15分钟并冷却至-78℃。经15分钟逐滴加入氯甲酸甲酯(15.0ml,193.9mmol)使得t<-50℃。在加料后，搅拌60分钟并冷却至-78℃。用碳酸氢钠饱和水溶液(100ml)缓慢淬灭并温热至环境温度。在减压下浓缩至约25%体积并加入et2o和水。分离各层并用碳酸氢钠饱和水溶液然后用盐水洗涤有机层。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩。通过用0-100%etoac在己烷中的溶液洗脱的硅胶快速色谱法纯化残余物以提供作为无色泡沫的标题化合物(37.39g,79%)。1hnmr(400.13mhz,cdcl3)δ7.46(s,1h),3.97(m,2h),3.91(t,j=5.5hz,2h),3.84(s,3h),3.12(m,2h),2.69(t,j=5.5hz,2h),1.97(m,2h),1.76(m,2h),1.46(s,9h)。制备例204’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸甲酯盐酸盐将螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-1',2-二甲酸o1'-叔丁酯o2-甲酯(5.0g,13mmol)、1,4-二噁烷(50ml)、meoh(70ml)和hcl(4mol/l)合并在1,4-二噁烷(70ml,280mmol)中。搅拌45分钟。在减压下浓缩该反应以提供作为灰白色固体的标题化合物(4.25g,100%粗物质)，其不经进一步纯化即使用。质谱(m/z):268(m-hcl+h)。制备例211-(2,4-二氯苄基)-4’,5’-二氢苄基)-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸甲酯合并4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸甲酯盐酸盐(4.25g,14.0mmol)、乙腈(70ml)、2,4-二氯苄基氯(2.2ml,16mmol)和dipea(10ml,57.3mmol)。将该反应温热至75℃并搅拌1.75小时。将该反应冷却至环境温度并在减压下浓缩。通过用0-35%etoac在己烷中的溶液洗脱的硅胶色谱法纯化以提供作为黄褐色泡沫的标题化合物(5.5g,92%)。质谱(m/z):426/428/430(m+h)。制备例221'-[(2,4-二氯苯基)甲基]螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-2-甲酸合并1-(2,4-二氯苄基)-4’,5’-二氢苄基)-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸甲酯(5.5g,13mmol)、meoh(22ml)、thf(45ml)和水(13ml)。将氢氧化锂(1g,41.76mmol)加入该反应并在环境温度下搅拌6小时。用1nhcl将ph调节至4。加入水和etoac并滤去白色固体。在真空干燥箱中在50℃下干燥2天以提供作为白色固体的标题产物(5.25g,99%)。质谱(m/z):412/414/416(m+h)。制备例235-(乙基硫烷基)吡啶-2-甲腈将5-溴吡啶-2-甲腈(49.42g,270.1mmol)和碳酸钾(113.5g,821.2mmol)溶解在1-甲基-2-吡咯烷酮(280ml)中并经30分钟逐份加入乙硫醇(26.4ml,356mmol)从而使温度保持低于50℃。将该反应冷却至室温并搅拌过夜。用etoac(1200ml)和水(2200ml)稀释。收集有机层并用盐水(3×300ml)洗涤，经硫酸钠干燥有机层，过滤并在减压下浓缩以提供作为灰白色固体的标题化合物(44.87g,100%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ8.63(s,1h),7.93(s,2h),3.17(q,j=7.3,2h),1.29(t,j=7.3,3h)。制备例245-(乙基磺酰基)吡啶-2-甲腈将5-(乙基硫烷基)吡啶-2-甲腈(44.36g,270.1mmol)溶解在无水dcm(540ml)中并冷却至-20℃。经1小时以10-12g份加入3-氯过氧苯甲酸(130g,565.0mmol)，保持内部温度为0℃至-10℃。在冷浴中搅拌反应混合物，以使其温热至室温过夜。用1nnaoh(1l)、水、1nnaoh(2×500ml)和盐水洗涤。经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩以提供作为白色固体的标题化合物(49.52g,93%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ9.20(d,j=1.9,1h),8.56(dd,j=2.0,8.1,1h),8.36(d,j=8.1,1h),3.52(q,j=7.3,2h),1.16(t,j=7.5,3h)。制备例241-[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲胺盐酸盐将5-(乙基磺酰基)吡啶-2-甲腈(49.52g,252.4mmol)分成三个16.5g份。在n2下在2250mlparr瓶中，将10%pd/c(1.65g,15.5mmol)加入容器中并用meoh(750ml)润湿。加入溶解在meoh(750ml)中的5-(乙基磺酰基)吡啶-2-甲腈(16.5g,84.09mmol)。加入hcl(6n水溶液,17.1ml,102.6mmol)。密封所述瓶，用n2吹扫，用h2吹扫，并在氢气下在室温下加压至68.9kpa保持3小时。用n2吹扫，然后过滤该混合物。对剩余份的5-(乙基磺酰基)吡啶-2-甲腈重复。合并所有滤液并在减压下浓缩以提供作为米色固体的标题化合物(59.61g,99%)。质谱(m/z):201(m+h-hcl)。制备例251-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙醇将2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲醛(11.31mmol,1.992g)溶解在冷却至0℃的thf(56.56ml)中，并缓慢加入甲基溴化镁(3m在et2o中)(33.94mmol,11.31ml)。使该反应温热至室温并搅拌2.5小时。用1nhcl淬灭该反应。加入etoac并用1nhcl洗涤。经硫酸钠干燥有机物，过滤，并在减压下浓缩以提供标题化合物(1.663g,76.5%)。质谱(m/z):193.0(m+h)。制备例265-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)嘧啶将1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙醇(1.663g,8.655mmol)和三苯基膦(3.405g,12.98mmol)溶解在dcm(86.55ml)中并在室温下加入nbs(12.98mmol,2.311g)。在3小时后，在减压下浓缩该反应。通过用10%etoac/己烷洗脱的硅胶色谱法纯化所得残余物以提供标题化合物(1.641g,74.34%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ9.26(s,2h),5.63(q,j=7.0hz,1h),2.09(d,j=7.0hz,3h)。制备例273-(1-溴丙基)-2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶将2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲醛(0.25g,1.32mmol)溶解在thf(6ml)中并冷却至0℃。缓慢加入乙基溴化镁(3.0m在et2o中,1.32ml,3.96mmol)。在0℃下搅拌该混合物90分钟并温热至环境温度。用1nhcl洗涤该混合物，经硫酸钠干燥有机物，过滤，并在减压下浓缩。通过用30%etoac/己烷洗脱的硅胶色谱法纯化所得残余物以提供中间体1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-醇(0.13g,0.61mmol)。将1-[6-(三氟甲基)-3-吡啶基]丙-1-醇(0.13g,0.61mmol)和三苯基膦(0.27g,1.03mmol)溶解在dcm(6ml)中，然后加入n-溴琥珀酰胺(0.18g,0.18mmol)。在环境温度下搅拌16小时。在减压下浓缩并通过用30%etoac/己烷洗脱的硅胶色谱法纯化所得残余物以提供标题化合物(0.13g,76%)。1hnmr(400.13mhz,cdcl3)δ7.96(d,j=8.2hz,1h),7.58(d,j=8.2hz,1h),5.09(m,1h),2.70(s,3h),2.34(m,1h),2.21(m,1h),1.09(t,j=7.3,3h)。制备例281-[2-(三氟甲基)噻唑-5-基]乙醇将2-(三氟甲基)噻唑-5-甲醛(2.00g,11.0mmol)溶解在thf(55ml)中并冷却至0℃，然后缓慢加入甲基溴化镁(3.0m在et2o中,5.50ml,17.0mmol)。使其温热至环境温度并搅拌2小时。用1nhcl淬灭。加入etoac并用1nhcl洗涤。经硫酸钠干燥有机萃取物，并过滤以提供作为油的标题化合物(2.24g,100%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ7.97(s,1h),6.08(d,j=4.8hz,1h),5.12(m,1h),1.48(d,j=6.4,3h)。制备例295-[1-溴乙基]-2-(三氟甲基)-1,3-噻唑将1-[2-(三氟甲基)噻唑-5-基]乙醇(2.24g,11.39mmol)和三苯基膦(4.79g,17.08mmol)溶解在dcm(113ml)中然后加入n-溴琥珀酰胺(3.04g,17.08mmol)。在环境温度下搅拌18小时。在减压下浓缩并通过用0-20%etoac/己烷洗脱的硅胶色谱法纯化所得残余物以提供作为黄色油的标题化合物(2.35g,79%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ8.26(s,1h),5.98(q,j=6.8hz,1h),2.10(d,j=6.8,3h)。制备例30[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲醇将4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸乙酯(4.05g,17.32mmol)溶解在干燥甲苯(87ml)中。使该混合物冷却至-10℃并逐滴加入二异丁基氢化铝(1.0m在己烷中,39.8ml)。将该混合物搅拌过夜，使该混合物温热至室温。将该反应冷却至0℃并逐份加入十水合硫酸钠(17.75g,121.2mmol)。将该混合物温热至室温，搅拌3小时，并通过用甲苯冲洗的硅藻土过滤该混合物。在减压下浓缩合并的滤液以提供作为黄色油的标题化合物(2.55g,69%)。1hnmr(400.13mhz,cdcl3)δ8.82(s,1h),4.83(s,2h),2.62(s,3h)。制备例31甲磺酸[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲酯将[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲醇(1.25g,5.86mmol)溶解在dcm(12.5ml)中，并加入甲磺酰氯(0.2ml,3mmol)，然后加入三甲胺(1ml,7.10mmol)。在2.5小时后，加入另外的甲磺酰氯(0.2ml,3mmol)和三甲胺(1ml,7.10mmol)，然后搅拌30分钟。用dcm(30ml)稀释，并用水然后用盐水洗涤。干燥有机层并在减压下浓缩以提供标题化合物(1.76g,100%)。质谱(m/z):271(m+h)。制备例324-(羟基甲基)-2-甲氧基-5-甲基-苯甲腈将4-甲酰基-2-甲氧基-5-甲基-苯甲腈(204mg,1.16mmol)溶解在etoh(6ml)中并逐份加入硼氢化钠(135mg,3.49mmol)。在环境温度下搅拌1小时并在减压下浓缩。加入etoac并用氯化铵饱和水溶液洗涤。用etoac洗涤水层，合并有机层，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩以提供标题化合物(186mg,1.05mmol)。质谱(m/z):178(m+h)。制备例33甲磺酸(4-氰基-5-甲氧基-2-甲基-苯基)甲酯将4-(羟基甲基)-2-甲氧基-5-甲基-苯甲腈(0.19g,1.05mmol)和三甲胺(0.4ml,3.0mmol)溶解在thf(3.5ml)中并加入甲磺酰氯(0.1ml,1.0mmol)并在环境温度下搅拌2小时。在减压下浓缩该混合物并再次溶解于etoac中。用水洗涤，经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩以提供标题化合物(0.25g,78%)，其不经进一步纯化即使用。质谱(m/z):271(m+h+h2o)。制备例34甲磺酸[2-甲基-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]甲酯将[2-甲基-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]甲醇(170mg,0.82mmol)溶解在dcm(2.5ml)中并冷却至0℃。逐滴加入三甲胺(0.23ml,1.64mmol)，然后逐滴加入甲磺酰氯(0.076ml,0.98mmol)，温热至环境温度并搅拌30分钟。加入水和dcm。用水洗涤有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供标题化合物(0.17g,77%)，其不经进一步纯化即使用。该材料为标题化合物和3-(氯甲基)-2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶的混合物。质谱(m/z):270(m+h)。制备例351-[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙酮将5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶(0.84ml,6.1mmol)溶解在1,4-二噁烷(31ml)中，并加入四(三苯基膦)钯(0)(0.36g,0.31mmol)，然后加入三甲胺(1.3ml,9.3mmol)。通过在n2中鼓泡10分钟将该混合物脱气，然后加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(2.7ml,8.0mmol)并加热至100℃保持4小时。将该反应冷却至环境温度，加入1nhcl(25ml,25mmol)，并搅拌过夜。用碳酸氢钠饱和水溶液淬灭该混合物，然后用etoac萃取，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过采用etoac和己烷洗脱的硅胶快速色谱法纯化。将该材料再次溶解于dcm中，加入氟化钾饱和水溶液(25ml)并搅拌1小时。分离各层并用盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供标题化合物(1.3g,100%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ9.05(s,1h),8.49(d,j=10.8hz,1h),2.69(s,3h)。制备例361-[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙醇将1-[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙酮(1.4g,6.8mmol)溶解在meoh(35ml)中，并经15分钟逐份加入硼氢化钠(100mg,2.6mmol)，然后在环境温度下搅拌1小时。加入饱和氯化铵(50ml)和水(50ml)，然后用dcm(2×100ml)萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供标题化合物(1.2g,88%)。质谱(m/z):210(m+h)。制备例37甲磺酸1-[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙酯将1-[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]乙醇(1.3g,6.2mmol)溶解在thf(31ml)和三甲胺(2.2ml,16mmol)中。加入甲磺酰氯(0.54ml,6.8mmol)在thf(31ml)中的溶液并在环境温度下搅拌2小时。在减压下浓缩以提供标题化合物(4.4g,77%)，其仍然含有三甲胺盐。在不经进一步纯化下使用该材料。质谱(m/z):288(m+h)。制备例385-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸甲酯将5-溴-3-氟-2-(三氟甲基)吡啶(1.00g,3.97mmol)溶解在无水meoh(12ml)/acn(18ml)中。加入三甲胺(1.5ml,11mmol)、乙酸钯(ii)(93mg,0.39mmol)和1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(276mg,0.48mmol)，然后密封并用co(气体)吹扫。用co加压至689kpa并加热至85℃保持1.5小时并冷却至环境温度。通过硅藻土过滤并在减压下浓缩滤液。通过采用0-100%etoac在己烷中的溶液洗脱的硅胶快速色谱法纯化以提供作为白色固体的标题化合物(0.67g,73%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ9.05(s,1h),8.50(d,j=10.5hz,1h),3.93(s,3h)。制备例39[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]甲醇将5-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(0.60g2.69mmol)溶解在甲苯(30ml)中，冷却至0℃并加入二异丁基氢化铝(1.0m在己烷中,5.4ml,5.40mmol)。在0℃下搅拌2小时，然后使其温热至环境温度并搅拌16小时。冷却至0℃并加入另外的二异丁基氢化铝(1.0m在己烷中,5.4ml,5.40mmol)。在4小时后，使该反应温热至环境温度并加入硫酸钠(300mg,2.11mmol)。搅拌1小时，过滤，并在减压下浓缩以提供作为白色固体的标题化合物(0.27g,51%)。质谱(m/z):196(m+h)。制备例40甲磺酸[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]甲酯将[5-氟-6-(三氟甲基)-3-吡啶基]甲醇(268mg,1.37mmol)和三甲胺(0.35ml,2.50mmol)溶解在thf(15ml)中并加入甲磺酰氯(0.12ml,2.30mmol)。在环境温度下搅拌2小时并在减压下浓缩以提供作为白色固体的粗标题化合物(987mg,99%)。质谱(m/z):274(m+h)。制备例414-(1-溴乙基)-2-氟-苯甲腈将2-氟-4-(1-羟基乙基)苯甲腈(0.62g,3.77mmol)和三苯基膦(1.48g,5.66mmol)溶解在dcm(37ml)中并加入nbs(1.01g,5.66mmol)。在环境温度下搅拌该混合物过夜，在减压下浓缩，并通过采用0-40%梯度的etoac在己烷中的溶液洗脱的硅胶快速色谱法纯化以提供作为浅黄色油的标题化合物(0.63g,73%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ7.95(m,1h),7.73(d,j=10.6hz,1h),7.57(d,j=8.1hz,1h),5.54(q,j=6.8hz,1h),1.99(d,j=6.8hz,3h)。制备例424-[(z)-n'-羟基甲脒基]-2-甲基-苯甲酸甲酯将4-氰基-2-甲基-苯甲酸甲酯(1.00g,5.71mmol)和羟胺盐酸盐(0.59g,8.56mmol)合并在meoh(29ml)中，加入dipea(1.6ml,9.13mmol)并在70℃下加热过夜。冷却至环境温度，在减压下浓缩，加入水，并用1nhcl将ph调节至5。用10%异丙醇/dcm(2×)萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供标题化合物(1.19g,100%)。质谱(m/z):209(m+h)。制备例432-甲基-4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯甲酸甲酯将4-[(z)-n'-羟基甲脒基]-2-甲基-苯甲酸甲酯(0.34g,1.66mmol)和乙酸酐(5.4g,51.10mmol)合并在螺帽小瓶中，密封，并加热至100℃过夜。冷却至环境温度，加入et2o，用水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过采用20-50%梯度的etoac在己烷中的溶液洗脱的硅胶快速色谱法纯化以提供标题化合物(0.37g,97%)。质谱(m/z):233(m+h)。制备例44[2-甲基-4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]甲醇将2-甲基-4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯甲酸甲酯(0.37g,1.61mmol)合并在dcm(16ml)中，冷却至0℃并加入二异丁基氢化铝(1.0m在thf中,6.2ml,6.2mmol)。在0℃下搅拌10分钟，温热至环境温度，并搅拌过夜。用饱和氯化铵淬灭，加入1nhcl并用etoac(2×)萃取。合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩以提供标题化合物(0.13g,40%)。质谱(m/z):205(m+h)。制备例45甲磺酸[2-甲基-4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]甲酯将[2-甲基-4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]甲醇(0.13g,0.64mmol)和三甲胺(0.18ml,1.28mmol)合并在thf(2.5ml)中，冷却至0℃，并加入甲磺酸酐(0.14g,0.77mmol)。搅拌过夜，使该反应温热至环境温度。加入et2o，用水然后用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供标题化合物(0.18g,51%)。质谱(m/z):283(m+h)。制备例46[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲醇将4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲酸(1.5g,7.3mmol)溶解在1,2-二甲氧基乙烷(36ml)中并冷却至-15℃。加入4-甲基吗啉(0.81ml,7.3mmol)，然后加入氯甲酸异丁酯(0.95ml,7.3mmol)并搅拌15分钟。过滤该溶液并将该滤液冷却至0℃。加入硼氢化钠(0.41g,10.8mmol)在水(5ml)中的溶液。搅拌5分钟，加入水(35ml)和etoac。分离并收集有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并浓缩至干以提供作为黄色油的标题化合物(1.16g,83%)。质谱(m/z):193(m+h)。制备例474-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲醛将[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲醇(1.16g,6.04mmol)溶解在dcm(60ml)中并冷却至0℃。加入二氧化锰(2.67g,30.7mmol)，温热至环境温度，并搅拌18小时。通过硅藻土过滤所得混合物并在减压下浓缩滤液。通过采用0-5%梯度的meoh在dcm中的溶液洗脱的硅胶色谱法纯化以提供作为透明油的标题化合物(0.26g,22%)。1hnmr(400.13mhz,d6-dmso)δ10.32(s,1h),9.31(s,1h),2.87(s,3h)。制备例481-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙醇将4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-甲醛(700mg,3.68mmol)溶解在et2o(37ml)中并冷却至0℃。逐滴加入甲基溴化镁溶液(3.0m在et2o中,1.2ml,3.6mmol)并在0℃下搅拌2小时。用饱和氯化铵淬灭并加入水。用et2o(4×)萃取水层，合并有机萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供作为黄色油的标题化合物(0.68g,89%)。质谱(m/z):207(m+h)。制备例49甲磺酸1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙酯将1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙醇(0.68g,3.3mmol)和tea(1.2ml,8.6mmol)溶解在thf(17ml)中。加入甲磺酰氯并在环境温度下搅拌1小时。在减压下浓缩该混合物以提供粗标题化合物(2.2g,30%纯度,71%收率)，其不经进一步纯化即使用。质谱(m/z):285(m+h)。制备例50(5’s)-2’-{[4-(乙基磺酰基)苄基)氨基甲酰基}-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯将dipea(7.4ml,42mmol)、hobt(1.80g,13mmol)和edci(3.13g,16.3mmol)加入(5’s)-1-(叔丁氧基羰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸(4.44g,12.1mmol)和4-(乙基磺酰基苯基)甲胺(3.42g,14.5mmol)在dcm(100ml)中的浆液中并在环境温度下搅拌16小时。加入水并用dcm(3×100ml)萃取。合并dcm萃取物，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过用50-100%etoac在己烷中的溶液洗脱的硅胶快速色谱法纯化残余物以提供作为白色固体的标题化合物(4.24g,64%)。质谱(m/z):548(m+h),571(m+na)。基本上通过制备例50的方法使用合适的胺制备以下化合物。表7制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+1)512'-{[4-(甲基磺酰基)苄基]氨基甲酰基}-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯519.2(m-h)522'-{[4-(乙基磺酰基)苄基]氨基甲酰基}-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯53(5'r)-2'-{[4-(乙基磺酰基)苄基]氨基甲酰基}-5'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯制备例54(5's)-2'-({[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酰基)-5'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯将1-[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲胺盐酸盐(2.86g,10.5mmol)、(5’s)-1-叔丁氧基羰基)-5’-甲基-4’,5’二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸(3.50g,9.52mmol)和hobt(1.44g,10.5mmol)溶解在无水thf(100ml)和dmf(50ml)中。加入dipea(4.98ml,28.6mmol)，然后加入edci(2.01g,10.5mmol)并使其在室温下搅拌过夜。在减压下浓缩至大约40%体积，然后加入etoac。用饱和碳酸氢钠(2×)、水(2×)、盐水(2×)洗涤，经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩。在采用80%etoac/己烷的硅胶上色谱处理以提供作为灰色泡沫的标题化合物(4.51g,86%)。质谱(m/z):550(m+h)。制备例552’-{[4-(乙基磺酰基)苄基)氨基甲酰基}-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯在0℃下将t3p®(1.67mol/l在etoac中,15ml,26mmol)加入(4-乙基磺酰基苯基)甲胺,盐酸盐(4.8g,20mmol)、1-(叔丁氧基羰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸(6.6g,17mmol)和tea(9.5ml,68mmol,)在dcm(66ml)中的溶液中并在室温下搅拌16小时。将过量的(4-乙基磺酰基苯基)甲胺,盐酸盐(0.80g,3.4mmol)和t3p®(1.67mol/l在etoac中,2.0ml,3.4mmol)加入在0℃冷却的反应混合物中并在室温下搅拌30分钟。用dcm(100ml)稀释，并用nahco3饱和溶液(100ml)淬灭。搅拌15分钟，然后通过相分离器过滤有机层并在减压下浓缩。通过用meoh:dcm(0:100至5:95)洗脱的硅胶快速色谱法纯化残余物以提供作为灰白色固体的标题化合物(7.45g,76%)。质谱(m/z):548(m+h),571(m+na)。制备例562’-({[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯将1-[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲胺盐酸盐(3.1g,13mmol)、1-(叔丁氧基羰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸(3.9g,10mmol)溶解在无水dcm(52ml)中。冷却至0℃并逐滴加入三甲胺(10ml,73mmol)，然后加入1.67mt3p®(8.6g,14mmol)在etoac中的溶液。使该混合物温热至室温并搅拌过夜。小心加入水(50ml)并在室温下搅拌10分钟。用dcm(2×)萃取水层，然后合并有机层。用盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过采用50%至100%etoac/己烷梯度洗脱的硅胶色谱法纯化粗材料以提供作为黄色泡沫的标题化合物(4.89g,83%)。质谱(m/z):550(m+h)。制备例57(5’s)-2’-({[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯将1-[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲胺盐酸盐(2.86g,10.5mmol)、(5’s)-1-叔丁氧基羰基)-5’-甲基-4’,5’二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酸(3.50g,9.52mmol)和hobt(1.44g,10.5mmol)溶解在无水thf(100ml)和二甲基甲酰胺(50ml)中。加入dipea(4.98ml,28.6mmol)，然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐并使其在室温下搅拌过夜。在减压下浓缩至大约40%体积，然后加入etoac。采用饱和碳酸氢钠(2×)、水(2×)、盐水(2×)洗涤，经硫酸钠干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩。在采用80%etoac/己烷的硅胶上色谱处理以提供作为灰色泡沫的标题化合物(4.51g,86%)。质谱(m/z):550(m+h)。制备例582-[(5-乙基磺酰基-2-吡啶基)甲基氨基甲酰基]-4-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯将2-溴-4-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(5.68g,11.6mmol)、1-[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲胺盐酸盐(3.29g,13.9mmol)和dipea(5.05ml,28.9mmol)一起加入甲苯(56.8ml)中，然后加入乙酸钯(ii)(85.8mg,0.382mmol)和4,5-双-(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.429g,0.741mmol)。将该反应脱气并用co(434kpa)再次填充，然后加热至90℃过夜。通过硅藻土垫过滤，用etoac(2×120ml)洗涤并浓缩溶剂以提供棕色泡沫。通过用dcm/meoh(100:0至95:5)洗脱的硅胶快速色谱法纯化以提供作为棕色泡沫的标题产物(5.33g,71%)。质谱(m/z):572(m+na)。基本上通过制备例58的方法使用合适的胺制备以下化合物。表8制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+1)59(5's)-5'-甲基-2'-{[4-(甲基磺酰基)苄基]氨基甲酰基}-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯535(m+h)制备例60(4's)-2'-({[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酰基)-4'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯使(4's)-4'-甲基-4',5'-二氢-1h-螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(2.78g,8.59mmol)在acn(56ml)中的溶液冷却至0℃，然后加入nbs(2.2g,12.35mmol)和dmap(107mg,0.865mmol)并在室温下搅拌。在1小时后，浓缩至干并将残余物溶于dcm中。用硫代硫酸钠饱和水溶液然后用盐水洗涤。收集有机物，用硫酸钠干燥，过滤，并浓缩至干以提供粗(4s)-2-溴-4-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯。质谱424/426(m+na)。向压力容器中装入(4s)-2-溴-4-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(3.46g,8.59mmol)、(5-乙基磺酰基-2-吡啶基)甲胺;盐酸盐(2.44g,10.3mmol)和dipea(3.75ml,21.5mmol)在甲苯(34.6ml)中的溶液，然后装入乙酸钯(ii)(63.6mg,0.283mmol)和4,5-双-(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.328g,0.55mmol)。将该反应脱气并用一氧化碳(434kpa)再次填充，然后加热至85℃过夜。通过硅藻土垫过滤，用etoac(2×120ml)洗涤并在减压下浓缩溶剂。通过用dcm/meoh(100:0至95:5)洗脱的硅胶快速色谱法纯化以提供作为棕色泡沫的标题化合物(2.64g,56%)。质谱(m/z):494(m-叔丁基),572(m+na)。制备例61n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5’-甲基-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺二盐酸盐将2’-({[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(0.95g,1.68mmol)溶解在meoh(10ml)中并加入4mhcl在二噁烷(4.5ml,18mmol)中的溶液。在室温下搅拌1小时，然后在减压下浓缩以提供作为白色固体的标题化合物(0.86g,100%)。质谱(m/z):450(m+h-2hcl)。制备例62(5’s)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5’-甲基-4’,5’,二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-2’-甲酰胺二盐酸盐将(5’s)-2’-({[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}氨基甲酰基)-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(1.14g,2.0mmol)溶解在1,4二噁烷(10ml)和meoh(5ml)中。加入4mhcl在二噁烷(5.0ml,20mmol)中的溶液并在室温下搅拌2小时。浓缩至大约10ml，然后加入et2o并剧烈搅拌过夜。加入己烷，过滤，并用己烷冲洗以提供作为浅黄色固体的标题化合物(0.99g,91%)。质谱(m/z):450(m+h-2hcl)。制备例63(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐将hcl(4mol/l在1,4-二噁烷中,15.6ml,62.4mmol)加入(5’s)-2’-{[4-(乙基磺酰基)苄基)氨基甲酰基}-5’-甲基-4’,5’-二氢-1h-螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-1-甲酸叔丁酯(8.54g,15.57mmol)在干燥dcm(50ml)中的溶液中，并在环境温度下加热该混合物1.5小时。过滤所得固体并用dcm冲洗。在真空下干燥固体以提供标题化合物(6.57g,87%粗物质)。质谱(m/z):449(m+h-hcl)。基本上通过制备例63的方法制备以下化合物。表9制备例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+1)64n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐421.0(m+h-hcl)65n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐435(m+h-hcl)66n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺盐酸盐449(m+h-hcl)67(5'r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐449(m+h-hcl)68n-[(5-乙基磺酰基-2-吡啶基)甲基]-4-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-2-甲酰胺;盐酸盐450(m+h-hcl)69*(4's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺70*(5's)-5'-甲基-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺*用离子交换色谱法纯化残余物。制备例71(5s)-n-[(4-乙基磺酰基苯基)甲基]-1'-[1-[3-氟-4-[(e)-n'-羟基甲脒基]苯基]乙基]-5-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-2-甲酰胺将(5's)-1-[1-(4-氰基-3-氟苯基)乙基]-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺(0.17g,0.28mmol)和羟胺盐酸盐(0.029g,0.42mmol)悬浮在meoh(1.5ml)中并加入dipea(0.079ml,0.45mmol)，然后加热至60℃保持15小时。冷却至环境温度，加入另外的羟胺盐酸盐(0.029g,0.42mmol)和dipea(0.079ml,0.45mmol)，然后在60℃下继续加热3小时。冷却至环境温度并在减压下浓缩。将残余物再次溶解在etoac中并用水洗涤。用meoh再次溶解所得固体，然后在减压下浓缩以提供被琥珀酰胺盐污染的标题化合物(0.25g,138%)。在不经进一步纯化的情况下即使用该材料。质谱(m/z):629(m+h)。制备例721-[1-(4-氰基苯基)乙基]-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺将n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐(1g,2.19mmol)和dipea(0.68g,4.81mmol)一起加入acn(25ml)中，加入4-(1-溴乙基)苯甲腈(0.59g,2.41mmol)并在室温下搅拌该混合物过夜。用etoac稀释该溶液并用水(2×)、碳酸氢盐(2×)、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并浓缩至干。通过采用0至5%meoh/dcm梯度洗脱的硅胶色谱法纯化残余物以提供标题化合物(1.05g,100%粗物质)。实施例1(5’s)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5’-甲基-1-{[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-2’-甲酰胺实施例2(5’r)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5’-甲基-1-{[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-2’-甲酰胺将[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲醇(0.53g,2.22mmol)溶解在dcm(5ml)中，并加入tea(1.0mlml,7.10mmol)，然后加入甲磺酰氯(0.2ml,3mmol)。搅拌该混合物45分钟。用dcm稀释并用水洗涤，然后将反应混合物通过相分离器并在减压下浓缩以提供中间体甲磺酸[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲酯。向分离容器中，将acn(20ml)加入n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺二盐酸盐(1.08g,2.23mmol)中并加入dipea(2.0ml,11.5mmol)并搅拌该混合物直到全部处于溶液中。加入甲磺酸[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲酯并在50℃下加热该混合物1.5小时，然后冷却至室温，并在减压下浓缩。加入dcm，用饱和碳酸氢钠洗涤，然后将该混合物通过相分离器。在减压下浓缩有机层并在用0%至10%etoh/氯仿梯度洗脱的硅胶上色谱处理以提供外消旋标题化合物。通过借由sfc[ad-ic柱(30x250mm,5µ)和用50%ipa(20mmnh3)以125ml/min洗脱,每16分钟注射8.5ml(200mg);温度=35℃,背压=100巴,260nm下uv检测]的手性色谱法分离外消旋混合物。分析条件：sfc(220nmuv)，柱：ad-ic30x250mm,5µ,流动相：50%ipa(20mmnh3)。将分离的产物溶解在acn(0.6ml)中，然后使其在室温下结晶。在n2流下除去过量溶剂以提供标题化合物，实施例1：0.41g,44%,>99%ee,rt=1.85分钟,质谱(m/z):624(m+h)和实施例2：0.41g,44%,97.9%ee,rt=2.59分钟,质谱(m/z):624(m+h))。基本上通过实施例1的方法制备以下化合物。反应温度可以为约50℃至65℃。表10实施例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+h)3*(5's)-5'-甲基-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-1-{[2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺608.3*使用手性起始材料在室温下搅拌反应过夜并用硅胶纯化。替代合成实施例1(5’s)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5’-甲基-1-{[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-2’-甲酰胺将(5’s)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5’-甲基-4’,5’,二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3,c]吡喃]-2’-甲酰胺二盐酸盐(3.0g,4.9mmol)和甲磺酸[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]甲酯(1.58g,5.86mmol)溶解在无水acn(65ml)中，然后加入dipea(5.1ml,29mmol)并加热至65℃保持1.75小时。冷却至室温并在减压下浓缩。加入dcm，用水然后用盐水洗涤，然后将该混合物通过相分离器。在减压下浓缩有机层并在用0%至5%meoh/dcm梯度洗脱的硅胶上色谱处理。从acn中重结晶出该材料，过滤，用et2o冲洗，并在真空干燥箱中干燥所得固体以提供标题化合物(1.65g,54%)。质谱(m/z):624(m+h)。基本上通过替代实施例1的方法制备以下化合物。反应温度可以从室温变化至约40-70℃并且反应时间可以从约1小时变化至3天。表11实施例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+h)4*1-(4-氰基-5-甲氧基-2-甲基苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺594.2(m+h)5*(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{[2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺622.3(m+h)6*(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[5-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺640.2(m+h)7*(5'r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[5-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺640.2(m+h)8(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-[2-甲基-4-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺635.2(m+h)9*(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{[5-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺626.2(m+h)10*(5'r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{[5-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]甲基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺626.2(m+h)11*(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1637(m+h)12*(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2638(m+h)*加入ki(1当量)和适当的甲磺酸酯。实施例13(5’r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-1-{(1s)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺实施例14(5’s)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-1-{(1s)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺实施例15(5’r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-1-{(1r)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺实施例16(5’s)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-1-{(1r)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺将n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺盐酸盐(14.09g,26.44mmol)和5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)嘧啶(8.767g,34.37mmol)悬浮在acn(5ml/g,55.2g,1340mmol,70.47ml)中并加入dipea(27.7ml,158.6mmol)，然后在60℃下加热该反应混合物75分钟。将该混合物浓缩至干，用dcm(200ml)稀释，用水(200ml)和盐水(200ml)洗涤。用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩残余物。通过用meoh:dcm(0:100至5:95)洗脱的硅胶快速色谱法纯化残余物以提供外消旋混合物(11.1g)。采用借由sfc[ad-h柱(30×250mm,5µ`ng采用35%ipa(20mmnh3)，以280ml/分钟,每8分钟注射8ml(每次注射175mg),温度=35℃,背压=100巴,260nm下uv检测]的手性色谱法分离对映异构体。在acn/水(1:2)中冻干以获得标题化合物。分析条件：sfc(220nmuv),柱：ad-h100×4.6mm,5µ,流动相：27%ipa(1%的2mnh3在meoh中的溶液)/73%co2,等度,柱温35℃,流速=5ml/分钟,背压=100巴]。实施例13的标题化合物(2.66g,15%,100%ee,rt=1.70分钟),质谱(m/z):623(m+h),实施例14的标题化合物(2.78g,16%,98.64%ee,97.3%de,rt=2.10分钟),质谱(m/z):623(m+h)和实施例15的标题化合物(2.74g,16%,98%ee,96.5%de,rt=2.60分钟),质谱(m/z):623(m+h)。采用借由sfc的手性色谱法使用同样条件再次纯化实施例16以除去次要异构体，并在acn/水中冻干以提供实施例16的标题化合物(2.60g,16%,100%ee),rt=4.02分钟,质谱(m/z):623(m+h)。通过vcd分配这些材料的绝对构型。vcd-分光仪=采用dualpem的chirallr-2x;8.9mg/100µl,4.6mg/100µl;分辨率=cm-1;pem=1400cm-1;72000次扫描,24小时;baf2池,路径长度=100µm。molmec计算中使用的力场=mmf94s、mmff、sybyl。用于dft计算的方法和基组=scrf-b3lyp/6-31g(d)。置信水平=99%。实施例14的替代制备例(5’s)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-1-{(1s)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺替代制备实施例16(5’s)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5’-甲基-1-{(1r)-1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4’,5’-二氢螺[哌啶-4,7’-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2’-甲酰胺将(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐(10.73g,22.11mmol)和5-(1-溴乙基)-2-(三氟甲基)嘧啶(6.85g,26.85mmol)悬浮在acn(100ml)中并加入碳酸钾(5.00g,36.17mmol)。将该反应混合物加热至回流持续2小时。将混合物冷却至环境温度，加入碳酸钾(10.00g,72.34mmol)并搅拌18小时。加入碳酸钾(2.50g,18.08mmol)并加热至回流持续1小时，然后冷却至环境温度。过滤该混合物并用etoac冲洗，然后在减压下浓缩该混合物。用etoac(100ml)稀释该混合物，用水(100ml)，然后用盐水(100ml)洗涤。用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩残余物以产生粗产物(14.74g)。采用借由sfc[ad-h柱(5×15cm,采用27%ipa(20mmnh3)以300ml/分钟,每8分钟注射8ml(每次注射175mg),温度=35℃,背压=100巴,280nm下uv检测]的手性色谱法分离对映异构体。分析条件：sfc(220nmuv),柱：ad-h100×4.6mm,5µ,流动相：40%ipa/60%co2,等度。将分离的产物溶解在acn(5ml)中，然后使其在室温下结晶。在n2流下除去过量溶剂以提供实施例14的标题化合物(5.35g,39%,>99%ee,>99%de,rt=0.95分钟),质谱(m/z):623(m+h)和实施例16的标题化合物(5.49g,40%,>99%ee,>99%de,rt=1.68分钟),质谱(m/z):623(m+h)。实施例17n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-1-[4-(三氟甲基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺将n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐(0.95g,2.08mmol)和4-三氟甲基苄基溴(0.55g,2.29mmol)悬浮在acn(42ml/g,40ml)中，并加入dipea(0.80ml,4.57mmol)，然后在环境温度下搅拌18小时。将该混合物浓缩至干，用etoac稀释，用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水洗涤。经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩残余物。通过采用meoh:dcm(0:100至5:95)梯度洗脱的硅胶快速色谱法纯化残余物并冻干以提供作为白色固体的标题化合物(0.84g,70%收率)。质谱(m/z):579(m+h)。基本上通过实施例17的方法使用合适的苄基溴或苄基氯起始材料并在室温至约75℃范围的温度下搅拌1-23小时或更长时间(如果合适的话)制备以下化合物。表12实施例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+h)18n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺622.2(m+h)19n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺623.2(m+h)20(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]丙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺650.2(m+h)21(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺628.2(m+h)22(5'r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺628.2(m+h)23(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺629.2(m+h)24(5'r)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺629.2(m+h)25(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-1-[2-氟-4-(1,2,4-噁二唑-3-基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺626.2(m+h)26n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺609.2(m+h)271-(4-氰基-2,6-二氟苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺586.0(m+h)281-(4-氰基-3-甲氧基苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺594.2(m+h)29n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-[4-氟-3-(三氟甲基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺611.2(m+h)301-(2,4-二氯苄基)-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺579.2,581.2(m+h)311-(4-氰基-2,6-二甲基苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺578.2(m+h)321-(4-氰基苄基)-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺536(m+h)331-(4-氯苄基)-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺545,547(m+h)34(5's)-1-[1-(4-氰基-3-氟苯基)乙基]-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺596.2(m+h)351-[1-(4-氰基苯基)乙基]-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺565.2(m+h)361-[1-(4-氰基苯基)乙基]-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺564.2(m+h)实施例37(5'r)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1和实施例38(5'r)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2将(5'r)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺(137mg)溶解在meoh(1.5ml)、dcm(0.2ml)的混合物中并用meoh(1ml)冲洗。采用借由hplc[chiralpakia柱(30×250mm)采用20%acn:80%ipa(w/0.2%ipam)以20ml/min,2.7ml总体积,注射0.2ml(每次注射大约10.1mg),225nm下uv检测(在250nm下监控)]的手性色谱法分离(5'r)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺的异构体。分析条件：4/1ipa(0.2%ipam)/acn1.0ml/min,chiralpak柱[ia(4.6x150mm)]，以225nm检测。获得实施例37,异构体1(47.78mg,de>99%,rt=3.22分钟)和实施例38,异构体2(42mg)。使用同样条件再次处理实施例38,异构体2以获得实施例38,异构体2(26.23mg,de91.4%,rt=4.24分钟)。冻干以提供标题化合物：实施例37,异构体1(43mg,30.7%)。质谱(m/z):629.2(m+h)和实施例38,异构体2(23mg,16.4%)。质谱(m/z):629.2(m+h)，为灰白色固体。基本上通过实施例37和38的方法使用hplc手性色谱法或sfc手性色谱法纯化以下化合物。典型的sfc系统为柱：chiralpakad-h,20×150mm；流动相：40%etoh(w/0.2%ipam)：60%co2；流速：80ml/min；bpr设定点：100巴；bpr温度：20℃；柱温：40℃；检测：280nm。表13实施例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+h)39(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[5-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1640.2(m+h)40(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[5-氟-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2640.2(m+h)41n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1622.2(m+h)42n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2622.2(m+h)43n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体3622.2(m+h)44n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体4622.2(m+h)45n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1623.2(m+h)46n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2623.2(m+h)47n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体4623.2(m+h)48(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]丙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1650.2(m+h)49(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]丙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2650.2(m+h)50(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1628.2(m+h)51(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2628.2(m+h)52(5'r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1628.2(m+h)53(5'r)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2628.2(m+h)54(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1629.2(m+h)55(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2629.2(m+h)56n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1609.2(m+h)57n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2609.2(m+h)581-(4-氰基-3-甲氧基苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1594.2(m+h)591-(4-氰基-3-甲氧基苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2594.2(m+h)60(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基]丙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1651.2(m+h)61n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1607.2(m+h)621-[1-(4-氰基苯基)乙基]-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2565.2(m+h)631-[(1s)-1-(4-氰基苯基)乙基]-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺550.2(m+h)641-[(1s)-1-(4-氰基苯基)乙基]-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺564.2(m+h)651-[(1r)-1-(4-氰基苯基)乙基]-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺564.2(m+h)66(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1637(m+h)67(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2637(m+h)68(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体1638(m+h)69(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{1-[4-甲基-2-(三氟甲基)嘧啶-5-基]乙基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体2638(m+h)实施例701-(2,4-二氯苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺合并1'-[(2,4-二氯苯基)甲基]螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-2-甲酸(600mg,1.455mmol)、(4-乙基磺酰基苯基)甲胺盐酸盐(0.377g,1.60mmol)、hbtu(686mg,1.75mmol)、tea(1ml,7.17mmol)和dcm(15ml)并搅拌4小时。用水淬灭该反应并用etoac(3×)萃取。合并有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供无色残余物。将乙腈加入残余物并进行声处理。过滤残余物并在真空干燥箱中在50℃下干燥过夜以提供标题化合物(627mg,72.6%)。质谱(m/z):593.2/595.2(m+h)。实施例711-(3-溴-2,4-二氟苄基)-n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺将n-[4-(甲基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐(0.30g,0.66mmol)和3-溴-2,4-二氟-苯甲醛(0.43g,1.97mmol)溶解在dcm(0.05m,13ml)中，并加入dipea(0.34ml,1.97mmol)，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.69g,3.28mmol)，然后密封容器并在40℃下加热18小时。冷却至环境温度并加入水。用dcm(3×)萃取水层并合并有机萃取物。在减压下浓缩该材料并通过采用2m氨在meoh:dcm(3:97-5:95)中的溶液洗脱的旋转硅胶色谱法纯化残余物以提供作为白色泡沫的标题化合物(0.368g,90%)。质谱(m/z):627(m+h)。基本上通过实施例71的方法制备以下化合物。反应时间可以从大约3小时变化至过夜。表14实施例编号化学名称结构es/ms(m/z)(m+h)72(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{[5-(三氟甲基)-1,3-噻唑-2-基]甲基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺615.1(m+h)73(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-5'-甲基-1-{[5-(三氟甲基)-1,3-噻唑-2-基]甲基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺614.0(m+h)74(5's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-5'-甲基-1-{[2-(三氟甲基)-1,3-噻唑-5-基]甲基}-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺615.2(m+h)实施例751-(4-氰基-3-甲基苄基)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺在微波小瓶中，将n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺盐酸盐(0.25g,0.53mmol)和4-甲酰基-2-甲基-苯甲腈(0.12g,0.83mmol)溶解在dmf(8ml)和水(2ml)中。密封该容器并在微波中加热至100℃保持5分钟。冷却至环境温度并加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.23g,1.06mmol)在dmf(5ml)中的溶液中。搅拌该反应12小时并用dcm萃取。在氮气流下浓缩有机层并通过采用etoac/己烷的硅胶快速色谱法纯化以提供作为白色泡沫的标题化合物(0.14g,47%)。质谱(m/z):564(m+h)。实施例761-[1-(4-氰基苯基)乙基]-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺实施例77(4's)-1-[(1s)-1-(4-氰基苯基)乙基]-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺实施例781-[1-(4-氰基苯基)乙基]-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺异构体4将n-[(5-乙基磺酰基-2-吡啶基)甲基]-4-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-2-甲酰胺;盐酸盐(1.02g,1.57mmol)和4-(1-溴乙基)苯甲腈(0.439g,1.98mmol)悬浮在干燥acn(11ml)中，并加入dipea(2.75ml,15.7mmol)，然后在60℃下将该反应混合物加热2.5小时。加入过量的4-(1-溴乙基)苯甲腈(0.226g,1.02mmol)并在50℃下加热过夜。浓缩至干并使用scx筒和用meoh(150ml)然后用2nnh3在meoh(150ml)中的溶液洗脱来纯化残余物。进一步通过采用meoh/dcm(0:100至10:90)洗脱的硅胶快速色谱法纯化以提供作为橙色泡沫的实施例76的标题化合物(0.898mg,91%)。采用借由sfc[ad-h柱(30×250mm,5µ)，采用60%ipa(20mmnh3)以100ml/分钟,每8分钟注射2ml,温度=35℃,背压=100巴,260nm下uv检测]的手性色谱法分离异构体以获得实施例78,异构体4和实施例77的不纯混合物。采用借由sfc[od-h柱(21.2×250mm,5µ)，采用35%meoh(20mmnh3)以70ml/分钟,每384秒注射2.4ml,温度=35℃,背压=100巴,260nm下uv检测]的手性色谱法再次处理实施例77。在acn/水(1:2)中冻干以提供实施例77的标题化合物。分析条件：sfc(220nmuv),柱：ad-h100×4.6mm,5µ,流动相：40%ipa(1%的2mnh3在meoh中的溶液)/73%co2,等度,柱温35℃,流速=5ml/分钟,背压=100巴。实施例77的标题化合物(0.144g,18%,rt=2.66分钟),质谱(m/z):579(m+h)，和实施例78的标题化合物(0.173g,20%,100%ee,rt=6.58分钟),质谱(m/z):579(m+h)。替代制备实施例77(4's)-1-[(1s)-1-(4-氰基苯基)乙基]-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺将(4's)-n-{[5-(乙基磺酰基)吡啶-2-基]甲基}-4'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺(1.28g,2.672mmol)加入甲磺酸[(1r)-1-(4-氰基苯基)乙基]酯(1.34g,4.94mmol)和碳酸钾(1.48g,10.69mmol)在acn(12.8ml)中的悬浮液中并在室温下搅拌。在大约22小时后加入过量的碳酸钾(0.369g,2.67mmol)并保持搅拌超过24小时。用meoh稀释，过滤无机物并浓缩至干。通过离子交换色谱法和通过在二氧化硅上的快速色谱法(dcm/meoh:0:100至5:95)纯化残余物。冻干残余物以提供标题化合物(649.75mg,42%)。将剩余残余物溶解在dcm中，除去溶剂并冻干以获得合计收率(810.13mg,52%)的第二批标题化合物。分析条件：sfc(220nmuv),柱：od-h100×4.6mm,5µ,流动相：27%meoh(1%的2mnh3在meoh中的溶液)/73%co2,等度,柱温35℃,流速=5ml/分钟,背压=100巴],100%ee,rt=3.86分钟。质谱(m/z):579(m+h),601(m+na)。实施例79(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[3-氟-4-(1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺在含(5s)-n-[(4-乙基磺酰基苯基)甲基]-1'-[1-[3-氟-4-[(e)-n'-羟基甲脒基]苯基]乙基]-5-甲基-螺[4,5-二氢噻吩并[2,3-c]吡喃-7,4'-哌啶]-2-甲酰胺(0.24g,0.39mmol)和原甲酸三甲酯(0.95g,9.0mmol)的螺帽小瓶中加入三氟化硼乙醚配合物(0.005g,0.039mmol)，然后密封该小瓶并加热至100℃过夜。冷却至环境温度并通过采用meoh(3%)/etoac(50-80%)/己烷洗脱的硅胶快速色谱法纯化所得残余物以提供标题化合物(0.11g,44%)。质谱(m/z):639(m+1)。实施例80(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[3-氟-4-(1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺,异构体1实施例81(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[3-氟-4-(1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺,异构体2采用手性色谱法[chiralpakia柱(30×250mm,采用40%acn/60%etoh(含20mmnh3)以30ml/分钟,注射0.3ml(每次注射70mg)]分离(5's)-n-[4-(乙基磺酰基)苄基]-1-{1-[3-氟-4-(1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙基}-5'-甲基-4',5'-二氢螺[哌啶-4,7'-噻吩并[2,3-c]吡喃]-2'-甲酰胺,实施例67的对映异构体。分析条件：chiralpacia(4.6x150mm,225nm),采用3/2etoh/acn0.2%ipam洗脱，流速1.0ml/分钟，并分离标题化合物：实施例80(39mg,37%,rt=2.35,100%de),质谱(m/z):639(m+1)和实施例81(33mg,31%,rt=4.25,>99%de),质谱(m/z):639(m+1)。生物测定rorα、β和γ结合抑制剂his-标记的人rar-相关的孤儿受体α(hrorα)、人rar-相关的孤儿受体β(hrorβ)和人rar-相关的孤儿受体γ(hrorγ)用于受体-配体竞争结合测定以确定ki值。在下文中提供典型的程序。受体竞争结合测定在由dpbs(1l)(hyclone#sh30028.03)、2.2gbsafractionv(roche#9048-46-8)、100ml甘油(fischer#56-81-5)和40mldmso(试剂级)构成的缓冲液中进行。最终的孔含有20μg/ml抑肽酶和20μg/ml亮抑酶肽和10µmpefabloc。典型地，在每孔中，受体结合测定包括放射性标记的配体，例如用于α结合的7nm[3h]-25-羟基胆固醇、用于β结合的20nm[3h]-3-[[4-[[3-(2,6-二氯苯基)-5-异丙基-异噁唑-4-基]甲氧基]-n,2-二甲基-苯胺基]甲基]苯甲酸和用于γ结合的6nm[3h]-25-羟基胆固醇，以及0.5µgrorα受体、0.03μgrorβ受体或0.13μgrorγ受体。典型地，测定在96-孔模式中进行。竞争测试化合物以约0.4nm至25μm范围内的各种浓度添加。非特异性结合在250nm25-羟基胆固醇(用于rorα和rorγ结合)、250nm3-[[4-[[3-(2,6-二氯苯基)-5-异丙基-异噁唑-4-基]甲氧基]-n,2-二甲基-苯胺基]甲基]苯甲酸(用于rorβ结合)存在下确定。将样品、标记和受体溶液合并在96孔测定板(costar3632)中并在室温下温育过夜，然后向各反应中添加25µl珠粒(amershamysi(2-5微米)铜his-tagspabeads,#rpnq0096)以达到1mg/孔的最终珠粒浓度。在室温下在定轨摇床上混合板30分钟。在温育4小时后，在wallacmicrobeta®计数器中读板。该数据用于使用四参数逻辑斯谛拟合计算估计的ic50。通过饱和结合确定[3h]-25-羟基胆固醇(用于rora和rorg)和[3h]-3-[[4-[[3-(2,6-二氯苯基)-5-异丙基-异噁唑-4-基]甲氧基]-n,2-二甲基-苯胺基]甲基]苯甲酸(用于rorb结合)的kd。使用cheng-prushoff方程式将化合物的ic50值转化成ki。在下表15中示出以下示例性化合物的结果。表15实施例编号roraki(nm)rorbki(nm)rorgki(nm)163111+828,n=4>12,5005.885+3.406,n=5251048+2588,n=21144+103,n=26.04+1.19,n=242>20,400>12,5004.42+2.70,n=346>20,400484010.8+6.3,n=25519340>125003.27+1.09,n=2643271+4105,n=2>2273015.77+7.43,n=966698.5+130.4,n=2151.0+107.1,n=26995324473平均值+标准偏差。这些结果表明表15中的化合物对于rorγ(相对于rorα和rorβ)是选择性的。hek293rorggal4受体-报告基因测定作为反向激动剂活性的指示剂，在hek293细胞中进行rar-相关的孤儿受体γ(rorg)受体-报告基因测定(rorg-gal4/pgl4.31)。使用fugenetm试剂共转染hek293细胞。将包含gal4结合域和萤火虫荧光素酶基因上游的最小腺病毒启动子的报告基因质粒与组成型表达融合至酵母gal4dna结合域的人rorg配体结合域的质粒共转染。在t150cm2烧瓶中在无fbs的mem培养基中转染细胞。在温育18小时后，将转染的细胞胰蛋白酶化，在96-孔微量滴定板中铺板在含10%fbs的3:1dmem-f12培养基中，温育4小时，然后暴露于约0.05nm至10μm范围内的各种浓度的测试化合物。在与化合物温育18小时后，使细胞裂解并使用标准技术量化荧光素酶活性。将数据拟合至四参数拟合逻辑斯谛以确定ic50值。在下表16中示出以下示例性化合物的结果。表16实施例编号hic50(nm)1610.92+12.64,n=62516.2±9.7,n=44219.9±10.7,n=246144±34,n=25540.9+41.8,n=26417.09+9.14,n=56631.4+11.2,n=26915.4+13.4,n=2平均值+标准偏差。这些结果表明表16的化合物是人rorg受体的反相激动剂。pbmcil-17分泌elisa和细胞titerglo活力测定通过首先合并新鲜的血沉棕黄层(buffycoat)与等体积的磷酸盐缓冲盐水从全血血沉棕黄层中分离pbmc。然后，在50ml圆锥形管中，将35ml的pbs/血沉棕黄层溶液温和地覆盖在15ml的ficoll上。在以500×g离心30分钟(伴随缓慢加速和减速)之后，丢弃上层血浆并收集和合并(pooled)细胞层和ficoll界面。用室温rpmi-1640培养基填充各250ml管至顶部。以500×g旋转管10分钟(伴随缓慢加速和减速)，通过抽吸除去培养基，并重复洗涤步骤。将细胞再次悬浮在冰上的冰冷的来自lifetechnologies的recovery细胞培养冷冻培养基(目录号12648-010)中。将细胞浓度调节至6670万个细胞/ml。在含1亿个细胞的小瓶中以-1℃/分钟缓慢冷冻细胞并存储在液氮中。刺激il-17分泌和化合物添加通过用1ml完全培养基(含30mmhepes、100个单位/ml盘尼西林、100µg/ml链霉素、3.25mml-谷氨酰胺、0.2µmβ-巯基乙醇和10%fbs的rpmi-1640)再次悬浮，然后在温和涡旋下逐滴加入2ml、4ml、8ml和16ml的完全培养基将pbmc解冻。将细胞旋转5分钟，并将细胞沉淀再次悬浮在完全培养基中。通过23号注射器针头和40µm细胞过滤网运行细胞溶液来破坏细胞团块。将每孔10万个细胞添加至384孔聚苯乙烯组织培养物处理的平底板中，总共30µl。将包含抗人cd3抗体、抗人cd28抗体、il-23和化合物（在完全培养基中制备）的刺激混合物（总体积为30µl）同时添加至细胞。对于抗-cd3抗体、抗-cd28抗体和il-23，添加的刺激物的最终浓度分别为160ng/ml、500ng/ml和5ng/ml，并且对于dmso，为0.3%。用aeraseal®密封膜密封板并在37℃、95%湿度和5%co2下温育48小时。在温育期之后，以200×g旋转板5分钟。将上清液用等体积1%bsa/pbs以1:1稀释并根据试剂盒提供的方案用来自r&dsystem的人il-17elisa试剂盒(目录号d317e)针对il-17进行测试，其中有一个例外—使用比色底物opd(邻亚苯基二胺二盐酸盐,sigmacat#p6912)替代试剂盒中提供的底物。采用envision多标记板读数器测量492nm下的吸光度。基于如下所示的il-17标准曲线，将a492值转化成il-17的浓度：pg/mlil-17=ec50*[[(top-bottom)/(a492-bottom)]-1](1/-hill)。使用标准四参数拟合基于转化值计算il-17分泌的抑制的ic50，其中由不添加刺激物和化合物的各孔的平均值确定最大抑制，和由只添加刺激物而不添加化合物的各孔的平均值确定最小抑制。将等体积的celltiterglo®细胞活力测试试剂(promegacat#g7573)添加至保留在板中的细胞，并在室温下在温和摇动下温育15分钟之后采用envision多标记板读数器测量发光。通过将100%活性(细胞死亡)设定至零发光单位且将最小活性(最大数量活细胞)设定为只含刺激物而不添加化合物的各孔的平均发光单位来计算细胞死亡百分比。使用标准四参数拟合计算ic50。下表17中示出以下示例性化合物的结果。表17实施例编号hpbmcil-17elisa(ec50,nm)细胞titerglo活力(ec50,μm)1610.6+6.5,n=20>1.02530.8+25.7,n=6>1.0428.3+3.8,n=6>1.04624.5+11.9,n=6>1.05512.6+8.1,n=6>1.06421.7+11.3,n=9>3.06613.3+4.7,n=5>1.06930.0+18.5,n=5>1.0平均值+标准偏差。这些结果示出表17中的化合物抑制pbmc中抗-cd3/抗-cd28/il-23刺激的il-17分泌而没有可测量的细胞毒性效果。葡萄糖-6-磷酸异构酶(gpi)诱发的关节炎模型：gpi诱发的关节炎模型改造自k.iwanami等人arthritisrheumatism58,754–763,2008和d.schubert等人jimmunology172,4503-4509,2004。基于在免疫接种当天(第0天)收集的体重将小鼠(8-9周龄雄性dba/1小鼠)(harlan)随机分配至治疗组。在免疫接种的当天(第0天)，在冷房间内以高速均质器(omni)混合重组人gpi(在pbs中稀释至4mg/ml,gibco)和完全弗氏佐剂(cfa,sigma)的1:1(v:v)混合物40分钟。在乳液中实现2mg/mlgpi的最终浓度。采用gpi乳液在尾巴基部注射小鼠(注射2个位点，皮下，100µl各位点)。在与免疫接种同一天(第0天)开始口服给予测试化合物。在第0天开始，基于0至3评分系统(参见k.iwanami等人arthritisrheumatism58,754–763,2008)，为各爪的关节肿胀严重度计分。临床分数代表全部4个爪的总分(最大分数=12)。在第0、2、4、7、8、9、10、11、12、14、16、18和21天评价临床分数。通过梯形法针对从免疫接种的当天(第0天)至第21天随时间推移的临床分数计算auc。由学生t-检验获得测试p-值。在第0天开始实施例55(100mg/kg)和媒介物(在纯水中的1%hec、0.25%聚山梨酯80和0.05%消泡剂)治疗(n=8/组)并每日一次口服给予。实施例55降低爪肿胀的严重度并在疾病进程中相比于媒介物组保持较低的平均临床分数。这个结果导致相比于媒介物组为统计学上显著的临床分数auc(爪肿胀随时间推移的累积量度)的94%降低，如表18中所示。表18治疗临床分数auc(平均值±sem)媒介物79.57±8.71实施例557.50±2.08*值作为平均值±sem示出。*p<0.05vs.媒介物(学生t-检验)。sem=均值的标准误差。当前第1页12