1.一种用于筛选靶基因的剪接变异体或事件的方法,该方法包括:
(a)提供能够在靶基因上诱导第一剪接事件以表达第一剪接变异体的第一反义寡核苷酸以及能够在靶基因上诱导第二剪接事件以表达第二剪接变异体的第二反义寡核苷酸;
(b)使第一反义寡核苷酸和第二反义寡核苷酸与靶基因的前体mrna杂交;以及
(c)表征剪接事件的效应。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,第一反义寡核苷酸和第二反义寡核苷酸与靶基因的前体mrna的杂交在板模板中的单独孔中进行。
3.根据权利要求2所述的方法,其中,第一剪接事件和第二剪接事件是相反事件,第一反义寡核苷酸诱导剪接事件,而第二反义寡核苷酸逆转剪接事件。
4.根据权利要求1所述的方法,还包括:
(a)提供细胞组,该细胞组具有靶基因的两个或更多个剪接变异体或事件;以及
(b)使第一反义寡核苷酸与所表达的靶基因的前体mrna杂交,并且使第二反义寡核苷酸与所表达的靶基因的前体mrna杂交。
5.根据权利要求4所述的方法,其中,第一反义寡核苷酸将表达第一剪接变异体的靶基因的剪接事件转换为表达第二剪接变异体的剪接事件,并且第二反义寡核苷酸将表达第二剪接变异体的靶基因的剪接事件转换为表达第一剪接变异体的剪接事件,第一反义寡核苷酸和第二反义寡核苷酸与靶基因的前体mrna的杂交在板模板的单独孔中进行。
6.根据权利要求1所述的方法,其中,该方法还包括:
(a)提供第一细胞组和第二细胞组,每个细胞组具有靶基因的不同剪接变异体或事件;以及
(b)将第一反义寡核苷酸与在第一细胞组中表达的靶基因的前体mrna杂交,并且将第二反义寡核苷酸与在第一细胞组中表达的靶基因的前体mrna杂交。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,第一反义寡核苷酸将在第一细胞组中表达的靶基因的剪接事件转换为第二细胞组的剪接事件,并且第二反义寡核苷酸将在第二细胞组中表达的靶基因的剪接事件转换为第一细胞组的剪接事件。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,确定剪接变异体的效应的步骤包括:鉴定由靶基因表达的剪接变异体。
9.根据权利要求8所述的方法,其中,通过检测由剪接变异体表达的细胞的表型并且将剪接事件与它们在至少两个细胞组中的相对表达相关联来鉴定剪接变异体或事件。
10.根据权利要求9的方法,其中,细胞的表型包括检测选自由以下各项组成的组的细胞的特点:细胞形态、细胞活力、细胞增殖、细胞死亡、细胞周期、细胞迁移、侵袭性或衰老、对药用制剂或生物制剂的敏感性、或细胞标记物、分子标记物、生化标记物、代谢标记物、表观遗传学标记物、或生物能学标志物。
11.根据权利要求1所述的方法,还包括:提供靶基因,并且使靶基因与第三反义寡核苷酸或抑制试剂接触以抑制、压抑或敲除靶基因。
12.根据权利要求1的方法,其中,每个反义寡核苷酸诱导一个或多个剪接事件。
13.根据权利要求12所述的方法,其中,通过由反义寡核苷酸施加的空间位阻来诱导剪接事件。
14.根据权利要求12所述的方法,其中,剪接事件是由以下各项组成的任一个:
o)一个或多个(连续或非连续)外显子排除;
p)一个或多个(连续或非连续)外显子包含;
q)选择一对互斥外显子之间的近端外显子;
r)选择一对互斥外显子之间的远端外显子;
s)使用一个或多个外显子的近端选择性5'剪接位点;
t)使用一个或多个外显子的远端选择性5'剪接位点;
u)使用一个或多个外显子的近端选择性5'剪接位点和远端选择性5'剪接位点之间的剪接位点;
v)使用一个或多个外显子的近端选择性3'剪接位点;
w)使用一个或多个外显子的远端选择性3'剪接位点;
x)使用一个或多个外显子的近端选择性3'剪接位点和远端选择性3'剪接位点之间的剪接位点;
y)保留一个或多个内含子;
z)恢复一个或多个内含子;
aa)环状剪接或反向剪接一个或多个连续外显子;以及
bb)线性剪接包含一个或多个连续外显子的环状rna。
15.根据权利要求1所述的方法,还包括:提供多个反义寡核苷酸,该多个反义寡核苷酸能够在一个或多个靶基因上诱导至少一个剪接事件。
16.根据权利要求15所述的方法,其中,该方法在96孔板、192孔板或384孔板中进行,并且能够高通量筛选10至1,000,000,000,000,000或更多个剪接变异体和选择性剪接事件。