三萜皂苷类似物的制作方法

通过引用并入相关专利申请本申请基于2017年10月16日提交的美国临时申请u.s.ser.no.62/572,857和2017年10月17日提交的美国临时申请u.s.ser.no.62/573,501，并根据35u.s.c.§119(e)要求这些美国临时申请的优先权，所述美国临时申请的全部内容通过引用整体并入本文。政府支持本申请中主题的一些实施方案是在国家健康研究院(nationalinstitutesofhealth)授予的补助金grant11540722下由美国政府支持完成的。美国政府对本申请的主题拥有某些权利。发明领域本申请涉及三萜糖苷皂苷衍生的佐剂、其合成及其中间体。本申请还提供了包含本发明化合物的药物组合物以及使用所述化合物或组合物治疗感染性疾病的方法。背景针对感染性疾病的疫苗继续改善全世界的公共健康。随着对病因病原体和必要的免疫应答的知识的增加，产生了日益明确或靶向的疫苗。流感、乙型肝炎、dtap、hpv、肺炎球菌和其它广泛使用的疫苗需要使用免疫佐剂明矾。然而，80多年前引入的明矾是差的佐剂，限制了这些疫苗中的一些的效力并需要更高或更多剂量的其它疫苗。其它更现代的佐剂系统包括基于tlr的激动剂。然而，需要更有效的佐剂化合物，因为此类化合物减少产生所需免疫应答所需的佐剂和疫苗抗原两者的量。这种减少可导致节省大量疫苗，允许较低成本疫苗接种和更广泛的可用性。概述如申请人的共同未决申请pct/us2018/027462、pct/us2018/029314、pct/us2018/029333(其内容通过引用整体并入本文)中所讨论的，新颖的合成和半合成皂苷基佐剂系统显示出极大的希望以推动实现较低成本疫苗接种和更广泛的疫苗可用性的目标。本发明包括这样的认识，即基于皂苷的佐剂系统与基于tlr激动剂的系统的组合获得了令人惊讶的和显著的协同免疫刺激作用。附图简单说明图1描述了qs-21-api和qs-21-xyl的化学结构。百分比对应于qs-21的分离提取物中各异构体的天然丰度。图2描述了显示elispot测定结果的数据：实施例2中测试的各组的脾细胞中的gb208_1、_4、_8特异性infγ应答。图3描述了显示elispot测定结果的数据：实施例2中测试的各组的脾细胞中的gb208_1特异性infγ应答。图4描述了显示elispot测定结果的数据：实施例2中测试的各组的脾细胞中的gb208_4特异性infγ应答。图5描述了显示elispot测定结果的数据：实施例2中测试的各组的脾细胞中的gb208_8特异性inf应答。图6描述了显示elispot测定结果的数据：实施例2中测试的各组的对gb208_1、_4、_8olp的分选cd4或cd8应答。图7描述了显示实施例2中测试的各组的对gb208_1、_4、_8的总igg应答的终点滴度数据的数据。图8描述了获得用于化合物i-4(titerquil-1-0-5-5/tql-1055)的全合成中的中间体的一种合成途径。图9描述了获得用于化合物i-4(titerquil-1-0-5-5/tql-1055)的全合成中的中间体的一种合成途径。图10描述了获得化合物i-4(titerquil-1-0-5-5/tql-1055)的全合成。在该图中，“半纯化的树皮提取物”是来自皂树(quillajasaponaria)的半纯化的提取物。某些实施方案的详述抗癌、抗病毒和抗微生物疫苗的临床成功关键取决于确定和获得具有减少毒性的新型强效佐剂。在这种情况下，来自皂树(qs)树皮提取物的特定级分已被证明是免疫治疗中非常有效的佐剂。qs-21级分(kensil,c.r.；patel,u.；lennick,m.；marciani,d.j.immunol.1991,146,431-437)包含复合三萜糖苷皂苷的异构形式(soltysik,s.；wu,j.y.；recchia,j.；wheeler,d.a.；newman,m.j.；coughlin,r.t.；kensil,c.r.vaccine1995,13,1403-1410；kensil,c.r.crit.rev.ther.drugcarriersyst.1996,13,1-55)，之前已经被视为最有希望的免疫增强剂(kim,s.k.；ragupathi,g.；musselli,c.；choi,s.j.；park,y.s.；livingston,p.o.vaccine2000,18,597-603)，用于多种抗肿瘤(黑素瘤、乳腺癌、小细胞肺癌、前列腺癌)(livingston,p.o.；ragupathi,g.hum.vaccines2006,2,137-143)和感染性疾病(hiv,疟疾)疫苗疗法(sasaki,s.；sumino,k.；hamajima,k.；fukushima,j.；ishii,n.；kawamoto,s.；mohri,h.；kensil,c.r.；okuda,k.j.virol.1998,72,4931-4939；evans,t.g.等人vaccine2001,19,2080-2091；kashala,o.等人vaccine2002,20,2263-2277；carcaboso,a.m.；hernandez,r.m.；igartua,m.；rosas,j.e.；patarroyo,m.e.；pedraz,j.l.vaccine2004,22,1423-1432)。然而，qs-21在癌症患者中的耐受剂量通常不超过100-150μg，高于此剂量会出现明显的局部红斑和全身性流感样症状。qs-21固有的不稳定性会导致与其降解有关的毒性。也已知qs-21是溶血性的，并且此溶血活性之前已被设想为至少一些qs-21的佐剂活性与其溶血性质有关。通过用乳剂(as02，来自glaxosmithkline(gsk)，或脂质体(as01,gsk))配制，部分解决了qs-21的各种缺点中的一些，然而，这些溶液是次优的并且仍然强烈需要改良的佐剂，其显示良好的佐剂性能，同时保持高度的耐受性和/或减少的副作用。现在，令人惊讶的是，本主题的发明人已经发现，本申请的化合物(其在一些实施方案中为qs-21和其它qs萃取级分如qs-7的合成类似物)具有显著的独立佐剂活性，以及高度的耐受性和/或减少的副作用。这些新的佐剂化合物的生产比天然qs-21更具成本效益，更稳定，更有效且毒性更低，用于预防性和治疗性疫苗接种计划。一些实施方案在剂量接近可能的1000mcg人剂量下在小鼠的药理学/毒理学研究中没有可检测的毒性。一些实施方案令人惊讶地完全非溶血性，同时仍保留其佐剂性质。这是令人惊讶的，部分是因为最初认为qs-21的毒性和效力都与qs-21相关的溶血和其它细胞毒性有关。本申请的一些实施方案通过用非常稳定的酰胺键代替qs-21中酰基链的不稳定酯键而产生更高的稳定性和更低的溶血活性，从而产生qs-21的佐剂活性类似物。尽管与qs-21相比具有简化的结构，一些实施方案也保留了佐剂活性，导致与合成的qs-21相比更高的合成收率和显著减少的合成步骤和生产成本。本申请还提供了合成本申请化合物的有效半合成方法，由此显著减少了获得这种有效类型的佐剂所需的合成步骤的数量。本申请还包括包含本申请化合物以及免疫有效量的与细菌或病毒相关的抗原的药物组合物。包括在本申请主题中的细菌或病毒由与流感、乙型肝炎、肺炎球菌、白喉、破伤风、百日咳或莱姆(lyme)病有关的细菌或病毒组成，包括密切相关的疏螺旋体属(borrelia)的螺旋原虫，例如伯氏疏螺旋体(b.burgdorferi)、伽氏疏螺旋体(b.garinii)、b.afzelli和b.japonica。本申请还包括接种人类患者的方法，其包括施用免疫有效量的本申请的药物组合物或化合物。本申请还包括增加对疫苗的免疫应答的方法，其包括施用免疫有效量的本申请的药物组合物或化合物。本申请还提供了本申请的佐剂化合物与基于tlr激动剂的系统的协同组合。化合物本发明的化合物包括下文一般性描述的那些化合物，并且通过本文公开的类、亚类和种进一步说明。在一些实施方案中，提供的化合物是天然存在的三萜糖苷皂苷的类似物及其中间体。为了本发明的目的，化学元素根据元素周期表，cas版，handbookofchemistryandphysics，第75版确定。此外，有机化学的一般原理描述于organicchemistry,thomassorrell,universitysciencebooks,sausalito：1999,和march'sadvancedorganicchemistry,第5版：smith,m.b.和march,j.编辑,johnwiley&sons,newyork：2001，其全部内容通过引用结合于此。示例性化合物的描述在一些实施方案中，提供的化合物是皂树皂苷(quillajasaponins)的类似物。在一些实施方案中，提供的化合物是原皂苷元。在某些实施方案中，提供的化合物是qs-7和qs-21的类似物并且具有有效的佐剂活性。一方面，本申请提供了式i的化合物：或其药学上可接受的盐，其中是单键或双键；w是-cho；v是氢或orx；y是ch2、-o-、-nr-或-nh-；z是氢；环状或非环状、任选取代的选自以下的基团：酰基、脂族基团、杂脂族基团、芳基、芳基烷基、杂酰基和杂芳基；或具有以下结构的碳水化合物结构域：其中每次出现的r1是rx或具有以下结构的碳水化合物结构域：其中：每次出现的a、b和c独立地是0、1或2；d是1-5的整数，其中各d括号内的结构可以相同或不同；前提是d括号内的结构表示呋喃糖或吡喃糖基团，并且b和c的总和是1或2；r0是氢；选自以下的氧保护基：烷基醚、苄基醚、甲硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯；或任选取代的选自以下的基团：酰基、c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；每次出现的ra、rb、rc和rd独立地是氢、卤素、oh、or、orx、nr2、nhcor或任选取代的选自以下的基团：酰基、c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧、硫的杂原子的5-10元杂芳基；具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；r2是氢、卤素、oh、or、oc(o)r4、oc(o)or4、oc(o)nhr4、oc(o)nrr4、oc(o)sr4、nhc(o)r4、nrc(o)r4、nhc(o)or4、nhc(o)nhr4、nhc(o)nrr4、nhr4、n(r4)2、nhr4、nrr4、n3或任选取代的选自以下的基团：c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；r3是氢、卤素、ch2or1或任选取代的选自以下的基团：酰基、c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基，r4是-t-rz、-c(o)-t-rz、-nh-t-rz、-o-t-rz、-s-t-rz、-c(o)nh-t-rz、c(o)o-t-rz、c(o)s-t-rz、c(o)nh-t-o-t-rz、-o-t-rz、-t-o-t-rz、-t-s-t-rz或其中x是-o-、-nr-或t-rz；t是共价键或二价c1-26饱和或不饱和、直链或支链、脂族或杂脂族链；和rz是氢、卤素、-or、-orx、-or1、-sr、nr2、-c(o)or、-c(o)r、-nhc(o)r、-nhc(o)or、nc(o)or或任选取代的选自以下的基团：酰基、芳基烷基、杂芳基烷基、c1-6脂族基团、6-10元芳基、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；每次出现的rx独立地是氢或选自以下的氧保护基：烷基醚、苄基醚、甲硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯；每次出现的r独立地是氢、任选取代的选自以下的基团：酰基、芳基烷基、6-10元芳基、c1-6脂族基团或具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的c1-6杂脂族基团，或：相同氮原子上的两个r与该氮原子一起形成具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环。一方面，本申请提供了式ii的化合物：或其药学上可接受的盐，其中是单键或双键；w是me、-cho或v是氢或orx；y是ch2、-o-、-nr-或-nh-；z是氢；环状或非环状、任选取代的选自以下的基团：酰基、脂族基团、杂脂族基团、芳基、芳基烷基、杂酰基和杂芳基；或具有以下结构的碳水化合物结构域：其中每次出现的r1是rx或具有以下结构的碳水化合物结构域：其中：每次出现的a、b和c独立地是0、1或2；d是1-5的整数，其中各d括号内的结构可以相同或不同；前提是d括号内的结构表示呋喃糖或吡喃糖基团，并且b和c的总和是1或2；r0是氢；选自以下的氧保护基：烷基醚、苄基醚、甲硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯；或任选取代的选自以下的基团：酰基、c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；每次出现的ra、rb、rc和rd独立地是氢、卤素、oh、or、orx、nr2、nhcor或任选取代的选自以下的基团：酰基、c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧、硫的杂原子的5-10元杂芳基；具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；r2是氢、卤素、oh、or、oc(o)r4、oc(o)or4、oc(o)nhr4、oc(o)nrr4、oc(o)sr4、nhc(o)r4、nrc(o)r4、nhc(o)or4、nhc(o)nhr4、nhc(o)nrr4、nhr4、n(r4)2、nhr4、nrr4、n3或任选取代的选自以下的基团：c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；r3是氢、卤素、ch2or1或任选取代的选自以下的基团：酰基、c1-10脂族基团、c1-6杂脂族基团、6-10元芳基、芳基烷基、具有1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基，r4是-t-rz、-c(o)-t-rz、-nh-t-rz、-o-t-rz、-s-t-rz、-c(o)nh-t-rz、c(o)o-t-rz、c(o)s-t-rz、c(o)nh-t-o-t-rz、-o-t-rz、-t-o-t-rz、-t-s-t-rz或其中x是-o-、-nr-或t-rz；t是共价键或二价c1-26饱和或不饱和、直链或支链、脂族或杂脂族链；和rz是氢、卤素、-or、-orx、-or1、-sr、nr2、-c(o)or、-c(o)r、-nhc(o)r、-nhc(o)or、nc(o)or或任选取代的选自以下的基团：酰基、芳基烷基、杂芳基烷基、c1-6脂族基团、6-10元芳基、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基；每次出现的rx独立地是氢或选自以下的氧保护基：烷基醚、苄基醚、甲硅烷基醚、缩醛、缩酮、酯、氨基甲酸酯和碳酸酯；ry是-oh、-or或选自以下的羧基保护基：酯、酰胺和酰肼；rs是每次出现的rx′独立地是任选取代的选自以下的基团：6-10元芳基、c1-6脂族基团或具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的c1-6杂脂族基团；或：两个rx′一起形成具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-7元杂环；每次出现的r独立地是氢、任选取代的选自以下的基团：酰基、芳基烷基、6-10元芳基、c1-6脂族基团或具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的c1-6杂脂族基团，或：相同氮原子上的两个r与该氮原子一起形成具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环。一方面，本申请提供了式i的化合物：或其药学上可接受的盐，其中是单键或双键；w是-cho；v是-oh；y是-o-；其中z是具有以下结构的碳水化合物结构域：其中：r1独立地是h或r2是nhr4；r3是ch2oh；和r4是-t-rz、-c(o)-t-rz、-nh-t-rz、-o-t-rz、-s-t-rz、-c(o)nh-t-rz、c(o)o-t-rz、c(o)s-t-rz、c(o)nh-t-o-t-rz、-o-t-rz、-t-o-t-rz、-t-s-t-rz或其中：x是-o-、-nr-或t-rz；t是共价键或二价c1-26饱和或不饱和、直链或支链、脂族或杂脂族链；和rz是氢、卤素、-or、-orx、-or1、-sr、nr2、-c(o)or、-c(o)r、-nhc(o)r、-nhc(o)or、nc(o)or或任选取代的选自以下的基团：酰基、芳基烷基、杂芳基烷基、c1-6脂族基团、6-10元芳基、具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-10元杂芳基、具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。本领域普通技术人员将会理解，本申请的化合物包括但不一定限于包含在作为本部分的一部分阐述的种类定义中的那些化合物。本申请所涵盖的化合物包括作为整体在整个说明书中公开的至少所有化合物，包括每个种类内的所有各个种。在某些实施方案中，v是orx。在某些实施方案中，v是oh。在某些实施方案中，v是h。在某些实施方案中，y是-o-。在某些实施方案中，y是-nh-。在某些实施方案中，y是-nr-。在某些实施方案中，y是ch2。在某些实施方案中，z是氢。在某些实施方案中，z是环状或非环状、任选取代的基团。在某些实施方案中，z是酰基。在某些实施方案中，z是脂族。在某些实施方案中，z是杂脂族。在某些实施方案中，z是芳基。在某些实施方案中，z是芳基烷基。在某些实施方案中，z是杂酰基。在某些实施方案中，z是杂芳基。在某些实施方案中，z是具有以下结构的碳水化合物结构域：在一些实施方案中，z是具有以下结构的碳水化合物结构域：其中：r1独立地是h或r2是nhr4，r3是ch2oh，和r4选自：在一些实施方案中，r1是rx。在其它实施方案中，r1是具有以下结构的碳水化合物结构域：在一些方面，每次出现的a、b和c独立地是0、1或2。在一些实施方案中，d是1-5的整数。在一些实施方案中，各d括号内的结构可以相同。在一些实施方案中，各d括号内的结构可以不同。在一些实施方案中，d括号内的结构表示呋喃糖或吡喃糖基团。在一些实施方案中，b和c的总和是1或2。在一些实施方案中，r0是氢。在一些实施方案中，r0是选自下组的氧保护基。在一些实施方案中，r0是烷基醚。在一些实施方案中，r0是苄基醚。在一些实施方案中，r0是甲硅烷基醚。在一些实施方案中，r0是缩醛。在一些实施方案中，r0是缩酮。在一些实施方案中，r0是酯。在一些实施方案中，r0是氨基甲酸酯。在一些实施方案中，r0是碳酸酯。在一些实施方案中，r0是任选取代的基团。在一些实施方案中，r0是酰基。在一些实施方案中，r0是c1-10脂族。在一些实施方案中，r0是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，r0是6-10元芳基。在一些实施方案中，r0是芳基烷基。在一些实施方案中，r0是具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，r0是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，ra是氢。在一些实施方案中，ra是卤素。在一些实施方案中，ra是oh。在一些实施方案中，ra是or。在一些实施方案中，ra是orx。在一些实施方案中，ra是nr2。在一些实施方案中，ra是nhcor。在一些实施方案中，ra是酰基。在一些实施方案中，ra是c1-10脂族。在一些实施方案中，ra是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，ra是6-10元芳基。在一些实施方案中，ra是芳基烷基。在一些实施方案中，ra是具有1-4个独立选自氮、氧、硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，ra是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，rb是氢。在一些实施方案中，rb是卤素。在一些实施方案中，rb是oh。在一些实施方案中，rb是or。在一些实施方案中，rb是orx。在一些实施方案中，rb是nr2。在一些实施方案中，rb是nhcor。在一些实施方案中，rb是酰基。在一些实施方案中，rb是c1-10脂族。在一些实施方案中，rb是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，rb是6-10元芳基。在一些实施方案中，rb是芳基烷基。在一些实施方案中，rb是具有1-4个独立选自氮、氧、硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，rb是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，rb是氢。在一些实施方案中，rb是卤素。在一些实施方案中，rb是oh。在一些实施方案中，rb是or。在一些实施方案中，rb是orx。在一些实施方案中，rb是nr2。在一些实施方案中，rb是nhcor。在一些实施方案中，rb是酰基。在一些实施方案中，rb是c1-10脂族。在一些实施方案中，rb是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，rb是6-10元芳基。在一些实施方案中，rb是芳基烷基。在一些实施方案中，rb是具有1-4个独立选自氮、氧、硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，rb是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，rc是氢。在一些实施方案中，rc是卤素。在一些实施方案中，rc是oh。在一些实施方案中，rc是or。在一些实施方案中，rc是orx。在一些实施方案中，rc是nr2。在一些实施方案中，rc是nhcor。在一些实施方案中，rc是酰基。在一些实施方案中，rc是c1-10脂族。在一些实施方案中，rc是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，rc是6-10元芳基。在一些实施方案中，rc是芳基烷基。在一些实施方案中，rc是具有1-4个独立选自氮、氧、硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，rc是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，rd是氢。在一些实施方案中，rd是卤素。在一些实施方案中，rd是oh。在一些实施方案中，rd是or。在一些实施方案中，rd是orx。在一些实施方案中，rd是nr2。在一些实施方案中，rd是nhcor。在一些实施方案中，rd是酰基。在一些实施方案中，rd是c1-10脂族。在一些实施方案中，rd是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，rd是6-10元芳基。在一些实施方案中，rd是芳基烷基。在一些实施方案中，rd是具有1-4个独立选自氮、氧、硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，rd是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，r2是氢。在一些实施方案中，r2是卤素。在一些实施方案中，r2是oh。在一些实施方案中，r2是or。在一些实施方案中，r2是oc(o)r4。在一些实施方案中，r2是oc(o)or4。在一些实施方案中，r2是oc(o)nhr4。在一些实施方案中，r2是oc(o)nrr4。在一些实施方案中，r2是oc(o)sr4。在一些实施方案中，r2是nhc(o)r4。在一些实施方案中，r2是nrc(o)r4。在一些实施方案中，r2是nhc(o)or4。在一些实施方案中，r2是nhc(o)nhr4。在一些实施方案中，r2是nhc(o)nrr4。在一些实施方案中，r2是nhr4。在一些实施方案中，r2是n(r4)2。在一些实施方案中，r2是nhr4。在一些实施方案中，r2是nrr4。在一些实施方案中，r2是n3。在一些实施方案中，r2是c1-10脂族。在一些实施方案中，r2是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，r2是6-10元芳基。在一些实施方案中，r2是芳基烷基。在一些实施方案中，r2是具有1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，r2是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，r3是氢。在一些实施方案中，r3是卤素。在一些实施方案中，r3是ch2or1。在一些实施方案中，r3是酰基。在一些实施方案中，r3是c1-10脂族。在一些实施方案中，r3是c1-6杂脂族。在一些实施方案中，r3是6-10元芳基。在一些实施方案中，r3是芳基烷基。在一些实施方案中，r3是具有1-4个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，r3是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，r4是-t-rz。在一些实施方案中，r4是-c(o)-t-rz。在一些实施方案中，r4是-nh-t-rz。在一些实施方案中，r4是-o-t-rz。在一些实施方案中，r4是-s-t-rz。在一些实施方案中，r4是-c(o)nh-t-rz。在一些实施方案中，r4是c(o)o-t-rz。在一些实施方案中，r4是c(o)s-t-rz。在一些实施方案中，r4是c(o)nh-t-o-t-rz。在一些实施方案中，r4是-o-t-rz。在一些实施方案中，r4是-t-o-t-rz。在一些实施方案中，r4是-t-s-t-rz。在一些实施方案中，r4是在一些实施方案中，x是-o-。在一些实施方案中，x是-nr-。在一些实施方案中，x是t-rz。在一些实施方案中，t是共价键或二价c1-26饱和或不饱和、直链或支链、脂族或杂脂族链。在一些实施方案中，rz是氢。在一些实施方案中，rz是卤素。在一些实施方案中，rz是-or。在一些实施方案中，rz是-orx。在一些实施方案中，rz是-or1。在一些实施方案中，rz是-or1’。在一些实施方案中，rz是-sr。在一些实施方案中，rz是nr2。在一些实施方案中，rz是-c(o)or。在一些实施方案中，rz是-c(o)r。在一些实施方案中，rz是-nhc(o)r。在一些实施方案中，rz是-nhc(o)or。在一些实施方案中，rz是nc(o)or。在一些实施方案中，rz是酰基。在一些实施方案中，rz是芳基烷基。在一些实施方案中，rz是杂芳基烷基。在一些实施方案中，rz是c1-6脂族。在一些实施方案中，rz是6-10元芳基。在一些实施方案中，rz是具有1-4个独立选自氮、氧或硫的杂原子的5-10元杂芳基。在一些实施方案中，rz是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环基。在一些实施方案中，rx是氢。在一些实施方案中，rx是氧保护基。在一些实施方案中，rx是烷基醚类。在一些实施方案中，rx是苄基醚。在一些实施方案中，rx是甲硅烷基醚。在一些实施方案中，rx是缩醛。在一些实施方案中，rx是缩酮。在一些实施方案中，rx是酯。在一些实施方案中，rx是氨基甲酸酯。在一些实施方案中，rx是碳酸酯。在一些实施方案中，ry是-oh。在一些实施方案中，ry是-or。在一些实施方案中，ry是羧基保护基。在一些实施方案中，ry是酯。在一些实施方案中，ry是酰胺。在一些实施方案中，ry是酰肼。在一些实施方案中，rs是在一些实施方案中，rx′是任选取代的6-10元芳基。在一些实施方案中，rx′是任选取代的c1-6脂族。在一些实施方案中，rx′是任选取代的具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的c1-6杂脂族。在一些实施方案中，两个rx′一起形成具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的5-7元杂环。在一些实施方案中，r是氢。在一些实施方案中，r是酰基。在一些实施方案中，r是芳基烷基。在一些实施方案中，r是6-10元芳基。在一些实施方案中，r是c1-6脂族。在一些实施方案中，r是具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的c1-6杂脂族。在一些实施方案中，相同氮原子上的两个r与该氮原子一起形成具有1-2个独立选自氮、氧和硫的杂原子的4-7元杂环。在一些实施方案中，r1’具有与r1相同的实施方案。式i的示例性化合物如以下表1所述：表1.式i的示例性化合物应该理解，本主题的目的不是要求保护作为天然存在的原皂苷元或皂苷的分离或降解研究的结果的现有技术中公开的化合物。化合物的合成如授权为美国专利8,283,456的u.s.ser.no.12/420,803(及其母/子美国申请和公开)中所述，qs-21及其至少一些类似物的合成可部分通过从皂树获得半纯化提取物(可作为quil-a市售得到，accuratechemicalandscientificcorporation,westbury,ny)来进行，所述提取物包含至少50种不同的皂苷物质的混合物(vansetten,d.c.；vandewerken,g.；zomer,g.；kersten,g.f.a.rapidcommun.massspectrom.1995,9,660-666)。许多所述皂苷物质包括在免疫活性皂树皂苷中发现的三萜三糖亚结构，例如qs-21和qs-7。将这些皂苷物质暴露于碱水解，得到富含原皂苷元a、b和c(如下所示)的混合物。授权为美国专利8,283,456的u.s.ser.no.12/420,803(及其母/子美国申请和公开)提出了一种策略，其允许通过硅胶色谱法容易地分离衍生的原皂苷元a、b和c。应该理解的是，本申请的一些实施方案可以部分地使用授权为美国专利8,283,456的u.s.ser.no.12/420,803(及其母/子美国申请和公开)中所述的方法，特别是涉及容易分离衍生的原皂苷元a、b和c的方法来合成。在一个方面，分离的衍生的原皂苷元a、b和/或c然后可用于使用本文所述的方法合成qs-21或其类似物。佐剂大多数蛋白和糖蛋白抗原单独施用时免疫原性差或无免疫原性。对这种抗原的强适应性免疫应答通常需要使用佐剂。免疫佐剂是当施用于受试者时增加对抗原的免疫应答或增强来自免疫系统的细胞的某些活性的物质。佐剂还可以允许使用较低剂量的抗原以在受试者中获得有用的免疫应答。常见的佐剂包括明矾、弗氏佐剂(具有死分枝杆菌的水包油乳剂)、具有mdp的弗氏佐剂(具有胞壁酰二肽的水包油乳剂，胞壁酰二肽，即mdp，是分枝杆菌的组分)、明矾加百日咳博德特氏菌(具有灭活百日咳博德特氏菌的氢氧化铝凝胶)。这种佐剂被认为是通过延缓抗原的释放和增强巨噬细胞的摄取来起作用的。免疫刺激复合物(iscom)是通常具有约40nm直径的开放笼状复合物，其由胆固醇、脂质、免疫原和皂苷如quil-a(皂树皂苷提取物)构建。iscom将抗原递送至胞质溶胶，并且已被证明在多种实验动物模型中促进抗体应答和t辅助细胞的诱导以及细胞毒性t淋巴细胞应答。天然皂苷佐剂qs-21远比目前使用的佐剂如明矾更有效。已经证明qs-21相对于超过20种在临床前模型中测试的其它佐剂以及7种在临床中使用的其它佐剂的优越性。因此，尽管qs-21有三种主要缺点：剂量限制毒性、差的稳定性和优质产品有限的可获得性，qs-21仍已被广泛使用。qs-21作为佐剂的使用与显著的不利的生物学效应有关。在人类中，qs-21显示出局部和全身毒性。癌症患者的最大剂量为100-150μg，健康患者的最大剂量通常为50μg(免疫学次优剂量)。因此，非癌症疫苗的临床成功取决于确定更耐受的新型有效佐剂。本申请包括认识到qs-21和相关皂树皂苷的合成通道和结构修饰可以提供具有高佐剂效力和低毒性并且具有更高的稳定性和更具成本效益的化合物。疫苗本申请中的组合物可用作疫苗来诱导受试者对抗原的主动免疫。任何可能会经历本申请的组合物的有益效果的动物都在可以治疗的受试者的范围内。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物。在一些实施方案中，受试者是人。本申请的疫苗可用于通过被动或主动免疫赋予对感染的抗性。当本申请的疫苗用于通过主动免疫赋予抗性时，将本申请的疫苗施用于动物以引发保护性免疫应答，该应答防止或减轻增殖性或感染性疾病。当本申请的疫苗用于通过被动免疫赋予对感染的抗性时，将疫苗提供给宿主动物(例如人、狗或小鼠)，并且回收由该疫苗引发的抗血清并直接提供给怀疑具有感染或疾病或暴露于致病生物体的接受者。因此，本申请涉及并提供了用于预防或减轻由生物体引起的增殖性疾病的方式，该生物体具有被响应本申请疫苗中包含的免疫原性抗原产生的抗血清识别和结合的抗原。如本文所用，如果疫苗对动物的施用导致疾病的症状或状况的全部或部分减轻(即抑制)，或导致动物对疾病的全部或部分免疫，则称所述疫苗预防或减轻疾病。疫苗(或其引发的抗血清)的施用可以用于“预防”或“治疗”目的。当预防性地提供时，在增殖性疾病的任何症状之前提供疫苗。预防性施用疫苗用于预防或减轻任何随后的疾病表现。当治疗性提供时，在检测到指示动物可能感染病原体的症状时或之后提供疫苗。疫苗的治疗性施用用于减轻任何实际的疾病表现。因此，可以在疾病增殖开始之前(为了预防或减轻预期的感染)或开始实际增殖之后提供疫苗。因此，一方面，本申请提供了包含t细胞抗原的疫苗。在另一方面，此类t细胞抗原是患者和/或肿瘤特异性肽抗原。在一些实施方案中，可以使用新抗原筛选或类似方法衍生或鉴定此类t细胞抗原。在其它实施方案中，可以使用其它选择方法衍生或鉴定此类t细胞抗原。在进一步的实施方案中，此类t细胞抗原作为肿瘤特异性突变的结果而产生。在又另一方面，此类t细胞抗原是一类hla结合的肽。本申请的一个方面涉及佐剂和抗原疫苗组合物，其产生靶向肿瘤特异性新抗原的疫苗诱导的多功能cd4+和/或cd8+t细胞。具体而言，与其它类型的佐剂相比，根据本申请的佐剂组合物在此类疫苗中提供了优异的应答。在另一方面，本申请涉及施用佐剂和抗原疫苗组合物的方法，所述佐剂和抗原疫苗组合物产生靶向肿瘤特异性新抗原的疫苗诱导的多功能cd4+和/或cd8+t细胞。在又一个实施方案中，本申请涉及制备佐剂和抗原疫苗组合物的方法，所述佐剂和抗原疫苗组合物产生靶向肿瘤特异性新抗原的疫苗诱导的多功能cd4+和/或cd8+t细胞。本领域普通技术人员将会理解，疫苗可以任选地包含药学上可接受的赋形剂或载体。因此，根据另一方面，提供的疫苗可以包含一种或多种抗原，该抗原任选地与药学上可接受的赋形剂或载体结合。在一些实施方案中，所述一种或多种抗原共价结合至药学上可接受的赋形剂。在其它实施方案中，所述一种或多种抗原与药学上可接受的赋形剂非共价缔合。如上所述，佐剂可用于增加对抗原的免疫应答。根据本申请，所提供的疫苗在被施用于受试者时可用于引发免疫应答。在某些实施方案中，通过向受试者施用增强所述受试者对所述抗原的免疫应答有效量的提供的疫苗，可以增强针对抗原的免疫应答。制剂本申请的化合物可以与药学上可接受的赋形剂组合以形成药物组合物。在某些实施方案中，本申请的制剂包括可注射制剂。在某些实施方案中，药物组合物包含药学可接受量的本申请化合物。在某些实施方案中，本申请的化合物和抗原形成活性成分。在某些实施方案中，本申请的化合物单独形成活性成分。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据待治疗的宿主和特定的施用方式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治疗效果的化合物的量。通常，该量范围为约1％至约99％活性成分，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％，或约1％至99％，优选10％至90％，20％至80％，30％至70％，40％至60％，45％至55％，或约50％。润湿剂、乳化剂和润滑剂如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、脱模剂、涂层剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。药学上可接受的抗氧化剂的非限制性实例包括：水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚(bha)、丁基化羟基甲苯(bht)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。除活性化合物之外，悬浮液可含有助悬剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。可用于本申请的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的非限制性实例包括水、醇(包括但不限于甲醇、乙醇、丁醇等)、多元醇(包括但不限于甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)。例如，通过使用涂覆材料如卵磷脂，通过在分散体的情况下维持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂，可维持适当的流动性。这些组合物还可以含有添加剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等可以确保防止微生物对主题化合物的作用。将等渗剂例如糖、氯化钠等包含在组合物中也可能是合乎需要的。另外，可通过包含延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来引起可注射药物形式的延长吸收。在一些情况下，为了延长制剂的效果，期望减缓来自皮下或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用具有差的水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液来完成。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，其溶解速率继而可取决于晶体大小和结晶形式。无论选择何种施用途径，都通过本领域的技术人员已知的常规方法将本申请的化合物(其可以以合适的水合形式使用)和/或本申请的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。本申请的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以获得有效实现对于特定患者、组合物和施用方式的所需治疗反应而没有对患者的毒性的活性成分的量。所选的剂量水平将取决于多种因素，包括所用本申请的具体化合物或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，所用的具体化合物排泄或代谢的速率，治疗持续时间，与所用具体化合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质，所治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史，以及医学领域众所周知的类似因素。具有本领域普通技术的医生或兽医可以容易地确定和开出所需药物组合物的有效量。例如，医师或兽医可以低于达到所需治疗效果所需的水平开始药物组合物中使用的本申请化合物的剂量，然后逐渐增加剂量直至达到所需效果。在一些实施方案中，本申请的化合物或药物组合物被长期提供给受试者。长期治疗包括在延长的时间段重复施用的任何形式，例如重复施用一个或多个月，一个月至一年，一年或多年或更长时间。在许多实施方案中，长期治疗包括在受试者的整个生命周期中重复给予本申请的化合物或药物组合物。优选的长期治疗包括定期施用，例如一天一次或多次，一周一次或多次，或一个月一次或多次。通常，合适的剂量，例如本申请化合物的日剂量，将是有效产生治疗效果的最低剂量的化合物的量。这种有效剂量通常取决于上述因素。通常，本申请化合物用于患者的剂量当用于指定效果时，范围为约0.0001至约100mg每千克体重每天。优选地，日剂量范围为0.001至50mg化合物每千克体重，甚至更优选0.01至10mg化合物每千克体重。然而，可以使用更低或更高的剂量。在一些实施方案中，施用于受试者的剂量可以被修改，因为受试者的生理学由于年龄、疾病进展、体重或其它因素而改变。在一些实施方案中，提供的本申请的佐剂化合物作为药物组合物或疫苗施用。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-2000μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-1000μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-500μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-250μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为100-1000μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为100-500μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为100-200μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为250-500μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为10-1000μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为500-1000μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为50-250μg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为50-500μg。在一些实施方案中，提供的本申请的佐剂化合物作为药物组合物或疫苗施用。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-2000mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-1000mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-500mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为1-250mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为100-1000mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为100-500mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为100-200mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为250-500mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为10-1000mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为500-1000mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为50-250mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为50-500mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂化合物的量将为0.01-215.4mg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为1000-5000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为1000-4000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为1000-3000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为1000-2000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为2000-5000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为2000-4000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为2000-3000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为3000-5000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为3000-4000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为4000-5000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为1-500μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为500-1000μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为1000-1500μg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为1mg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为2mg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为3mg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为4mg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为5mg/kg。在某些实施方案中，预期所施用的佐剂的量将为0.0029-5mg/kg。在某些实施方案中，在雌性中施用的佐剂的量小于在雄性中施用的佐剂的量。在某些实施方案中，施用于婴儿的佐剂的量小于施用于成人的佐剂的量。在某些实施方案中，施用于小儿接受者的佐剂的量小于施用于成人的佐剂的量。在某些实施方案中，施用于免疫受损接受者的佐剂的量大于施用于健康接受者的佐剂的量。在某些实施方案中，施用于老年接受者的佐剂的量大于施用于非老年接受者的佐剂的量。如果需要，活性化合物的有效剂量可以在一整天内以适当的间隔分开施用的2、3、4、5、6或更多个亚剂量施用，任选以单位剂量形式施用。虽然本申请化合物可以单独施用，但在某些实施方案中，化合物作为如上所述的药物制剂或组合物施用。与其它药物类似，可以配制根据本申请的化合物用于以任何方便的方式施用，以用于人或兽医学。本申请提供了包含本申请化合物的药物制剂或组合物的药盒。在某些实施方案中，此类药盒包括式i和/或ii的化合物与抗原的组合。这些药剂可以分开包装或一起包装。该药盒任选包含开出该药物的说明书。在某些实施方案中，药盒包括多剂量的每种药剂。药盒可包含足够量的每种成分以治疗一个或多个受试者一周、两周、三周、四周或数月。该药盒可能包括完整的免疫治疗周期。在一些实施方案中，药盒包括含有一种或多种细菌或病毒相关抗原以及一种或多种所提供的化合物的疫苗。实施例实施例1：化合物i-4(tql-1055)的全合成化合物i-4(titerquil-1-0-5-5/tql-1055)的全合成在本申请的图9-11中示出。在该实施例中与化合物相关的编号并不意味着与在本申请的全部其余部分(包括其它附图、权利要求或实施例1-9)中出现的其它式或化合物编号相对应。实施例2：用于肽疫苗的化合物i-4(titerquil-1-0-5-5/tql-1055)佐剂的评估根据下表中的计划作为单一佐剂和与genoceabiosciencesgen-as2佐剂和sgenoceabiosciencesgen-as3佐剂组合在小鼠中测试了合成的tql-1055(化合物i-4)对针对肽的cd4和cd8t细胞应答的影响。gen-as2和gen-as3佐剂是基于tlr激动剂的佐剂系统。测试的特定肽包括genocea合成长肽(slp)gb208_1、gb208_4、gb208_8，它们是通过新抗原筛选鉴定出的肿瘤特异性t细胞抗原，但是预期结果会重复于其它类型的肽。根据下面的计划经由s.c.颈背对小鼠施用包括佐剂组合物与slp的组合。根据下表中的计划将注射施用于各组。在最后一次注射后七(7)或十四(14)天测量小鼠中的应答。表2.实施例2的实验设计通过以下elispot分析测量t细胞应答：1.总脾细胞：a.对gb208_1、_4、_8的组合应答；用10μg/ml的重叠肽(olp)重新刺激；b.对gb208_1的应答；以10μg/mlgb208_1重新刺激；c.对gb208_4的应答；以10μg/mlgb208_4重新刺激；d.对gb208_8的应答；以10μg/mlgb208_8重新刺激；2.富集的cd4：对gb208_1、_4、_8的组合应答；用20μg/ml的重叠肽重新刺激；和3.富集的cd8：对gb208_1、_4、_8的组合响应；用20μg/ml的重叠肽重新刺激。具体的结果数据在2-8中和在下表中示出。表3a-h.来自实施例2中的实验的结果表3a-f结果中的值是每800,000个细胞的斑点形成单位。如果斑点超过检测上限，则使用2000的值。除第1、2和3组外，所有组均具有n＝5，第1、2和3组中每组各有四只小鼠。表3a-仅培养基组#小鼠1小鼠2小鼠3小鼠4小鼠5100002000.5030202.50402.54.50.50.550004260000.50.5700.500081.50001.5900.500.50.510000.500.5110000012140137.5表3b-脾细胞中的slp1特异性infγ应答表3c–脾细胞中的slp4特异性infγ应答组#小鼠1小鼠2小鼠3小鼠4小鼠510000200003119120009482000200042801471391556053113521183726102704312216976823142934283037197678920002000200020002000101151598200050673911439631258791220002000200020002000表3d–脾细胞中的slp8特异性infγ应答表3e–脾细胞中对slp1、4、8的infγ应答组#小鼠1小鼠2小鼠3小鼠4小鼠510.510.5220.52.50.523200020002000200020004256.5116129112.561512.52011115536104.53933812.5167.57563213813959.5842.5221774.573920002000200020002000101046.5762.51346.599295711708532.5319.51121220002000200020002000表3f–脾细胞中对pma罗奴霉素对照的infγ应答表3g-h结果中的值为每500,000个单元的斑点形成单位。如果斑点超过检测上限，则使用2000的值。表3g显示了组合的cd4应答。表3f显示了组合的cd8应答。表3g–cd4应答表3f–cd8应答表4.实施例2中的tql-1055组合应答对比gen-as3基于上述和图2中所示的结果，当与gen-as2佐剂组合使用时，tql-1055引发有效的对肽的t细胞应答。具体而言，在gen-as2和tql-1055之间观察到了令人惊讶且显著的协同作用，其中与单独的gen-as2或单独的tql-1055相比，该组合引发≥8x更佳的t细胞(cd4和cd8)应答。迄今为止尚未观察到基于tlr激动剂的佐剂和tql-1055之间的这种作用，并且这种显著的协同相互作用是令人惊讶的，并且不会被本领域普通技术人员预期。基于上述和图3中所示的结果，tql-1055与gen-as2的组合刺激比gen-as3更好的肽1特异性t细胞应答。基于上述和图4中所示的结果，tql-1055与gen-as2的组合刺激比gen-as3更好的肽4特异性t细胞应答。基于上述和图5中所示的结果，tql-1055与gen-as2的组合刺激比gen-as3更好的肽8特异性t细胞应答。基于上述和图6中所示的结果，tql-1055与gen-as2的组合与gen-as3一致地刺激cd4并比gen-as3更好地刺激cd8。基于上述和图7中所示的结果，单独或与gen-as2组合的tql-1055可与gen-as3一致地或比其更好地刺激用于对gb208_1、_4和_8特异性的抗体的抗体应答。因此，用tql-1055和gen-as2组合施用的组在该测试中在所有t细胞分析中始终是表现最好的。与gen-as3相比，使用tql-1055+gen-as2时对免疫原性较低的肽(gb208_1、_8)的应答明显更好。tql-1055+gen-as2组合还可与gen-as3一致地或比其更好地增强抗体应答。当前第1页12