一种柚皮素-O-烷基胺类化合物、制备方法和应用与流程

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种柚皮素-o-烷基胺类化合物、制备方法和应用。

背景技术：

阿尔茨海默氏症(alzheimer’sdisease，ad，老年痴呆症)是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，随着全球人口的急速老龄化，老年人群的健康问题已经成为当前迫切需要解决的社会重大问题。阿尔茨海默症(alzheimer’sdisease，ad)是老年人中发病率和致死率最高的疾病之一。阿尔茨海默症国际协会(alzheimer’sdiseaseinternational，adi)发布的《2015全球阿尔茨海默症报告》指出，2015年全球已有超过4600万人患上痴呆症，据预测，到2050年，全球将有1.315亿人口受到痴呆的困扰，其中中国痴呆症患者的发病率已达到6.61％。随着人均生存年龄的延长，本病已发展为社会和医疗保健系统的主要负担，并且为社会、患者及家属带来了沉重的精神和经济压力。目前已批准用于治疗轻/中度ad的药物有乙酰胆碱酯酶(ache)抑制剂，以及用于重度ad治疗的n-甲基-d-天冬氨酸(nmda)受体拮抗剂，但临床使用表明，这些药物可通过提高患者体内乙酰胆碱水平或者抑制兴奋性氨基酸的兴奋毒性来缓解ad症状，但不能有效阻止或逆转病程，而且还会引起幻觉、意识混沌、头晕、头痛、恶心、肝脏毒性、食欲不振以及大便频繁等严重毒副作用，因而长期疗效不甚理想。因此，临床上迫切需要研发具有新型作用机制的ad治疗药物。

ad属多种因素引起的疾病，发病机理复杂，至今还未完全阐明其发病机制，但研究表明，患者脑内乙酰胆碱水平的下降，β-淀粉样蛋白的过度生成与沉积、tau-蛋白过度磷酸化导致的神经纤维缠结、氧化应激产生大量的活性氧(ros)和自由基以及神经验证反应等多种因素在ad的发病过程中扮演重要角色。针对上述发病因素，研究人员采用传统“一药一靶”药物设计策略，发现了大量对某一靶点具有高活性和高选择性的药物。如：胆碱酯酶抑制剂和n-甲基-d-天冬氨酸受体拮抗剂等，但这些药物存在作用靶点单一。临床使用毒副作用较多，对ad患者的长期疗效欠佳等问题。

近年来，随着对ad致病机理的不断阐明，发现ad的发生和发展具有多机制、多因素作用的特点，不同机制之间又相互关联相互影响，构成了ad发生和发展过程中复杂的网络调控系统。基于上述结果，研究人员提出了“多靶点导向药物”(multitarget-directedligands，mtdls)策略来研发抗神经退行性疾病药物。所谓“多靶点导向药物”是指单一化学实体同时作用于疾病网络中的多个靶点，对各靶点的作用可产生协同效应，使总效应大于各单效应之和，此类药也称为“multifunctional”或“multipotential”药物。多靶点药物与多药联合应用以及复方药物的主要区别在于：可减少服药量，提高治疗效果、避免药物之间的相互作用及由此带来的副作用，均一的药代动力学特性，便于使用等。因此，研发具有新型化学结构、新型作用机制，且具有多靶点作用、低毒副作用的抗阿尔茨海默病药物不仅符合社会老龄化进程的迫切需求，而且具有良好的市场前景。

技术实现要素：

为克服上述缺陷，本发明的第一目的在于提供一种柚皮素-o-烷基胺类化合物。

本发明的第二目的在于提供一种柚皮素-o-烷基胺类化合物的制备方法。

本发明的第三目的还在于提供一种柚皮素-o-烷基胺类化合物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。

本发明的第四目的还在于提供一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，包括柚皮素-o-烷基胺类化合物或者其与酸合成的药物学上可接受的盐。

一种柚皮素-o-烷基胺类化合物，其化学结构通式如(i)所示：

其中：n为2～12；

r1表示h或者c1～c12烷基；r2表示c1～c12烷基、苄基、取代苄基、1,2,3,4-四氢吖啶-9-基、6-氯-1,2,3,4-四氢吖啶-9-基、8-氯-1,2,3,4-四氢吖啶-9基或者6,8-二氯-1,2,3,4-四氢吖啶-9-基；

或者nr1r2表示n-脱甲基-加兰他敏基、四氢吡咯基、吗啉基、哌啶基、4-位被c1～c12烷基所取代的哌啶基、4-位被苄基或取代苄基所取代的哌啶基、哌嗪基、4-位被c1～c12烷基所取代的哌嗪基、4-位被苄基或取代苄基所取代的哌嗪基；1,2,3,4-四氢异喹啉基、任意位置被c1～c12烷基所取代的1,2,3,4-四氢异喹啉基或者任意位置被苄基或取代苄基所取代的1,2,3,4-四氢异喹啉基；

或者o(ch2)nnr1r2表示m表示0-10，r3表示h、c1～c12烷基、苄基或取代苄基。

优选地，所述的取代苄基是指被苯环上被1-4个选自下列的基团所取代的苄基：f、cl、br、i、c1-4烷基、c1-4烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、二甲氨基、硝基、氰基，这些取代基可在苯环的任意可能位置。

一种柚皮素-o-烷基胺类化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)以柚皮素和二溴烷烃br(ch2)nbr为起始原料，在第一溶剂和第一碱性条件下反应，得相应的2,7-二溴烷氧基柚皮素；

(2)2,7-二溴烷氧基柚皮素在第二溶剂和第二碱性条件下与不同仲胺nr1r2反应得到目标化合物柚皮素-o-烷基胺类化合物。

优选地，所述的第一碱性条件或者第二碱性条件所用碱为：碱土金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱土金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、碱土金属碳酸氢盐、c1-8醇的碱金属盐、有机叔胺类和季胺碱类中一种或几种。

优选地，所述的第一溶剂或者第二溶剂为乙醚、四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、氯仿、c3-8脂肪酮、苯、甲苯、乙腈和c5-8烷烃中的一种或几种。

优选地，步骤(1))中所述的柚皮素：二溴烷烃br(ch2)nbr：碱的摩尔比投料比为1.0：2.0～10.0：2.0～10.0，反应温度为25～150℃，反应时间为10～48h。

优选地，步骤(2))中所述的2,7-二溴烷氧基柚皮素：仲胺nr1r2：碱的摩尔投料比为1.0：1.0～10.0：1.0～10.0，反应温度为25～150℃，反应时间为10～48h。

本发明化学反应结构通式如下：

其中：n、r1、r2的定义与柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)的化学结构通式相同。

一种柚皮素-o-烷基胺类化合物在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。

优选地，所述的神经退行性疾病为阿尔茨海默症、血管痴呆、帕金森症、亨廷顿症、hiv相关痴呆症、多发性硬化症、进行性脊髓侧索硬化症、神经性疼痛或者青光眼。

一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，包括柚皮素-o-烷基胺类化合物或者其与酸合成的药物学上可接受的盐。

本发明药物组合物包括治疗有效量的一种或多种柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)或其药学上可接受的盐，该药物组合物可进一步含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，所述“治疗有效量”是指引起研究者或医生所针对的组织、系统或动物的生物或医药反应的药物或剂量；所述“组合物”是指通过将一种以上物质或组份混合而成的产品；所述“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的物质、组合物或载体，如：液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊物质，它们携带或转运某种化学物质；本发明所提供的药物组合物其理想的比例是柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)或其药学上可接受的盐作为活性成分占总重量比为2％～99.0％。

本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)分子中含有氨基，该氨基呈碱性，可与任何合适的酸通过药学上常规的成盐方法制得其药物学上可接受的盐。

优选地，所述的酸为盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、c1-6脂肪羧酸、草酸、苯甲酸、水杨酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、c1-6烷基磺酸、樟脑磺酸、苯磺酸或者对甲苯磺酸。

本发明的积极有益效果：

1.本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物在柚皮素骨架上引入了胺烷氧基片段，设计并发现同时具有较强抗乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶、抗氧化应激、金属离子络合活性、改善alcl3诱导斑马鱼ad的运动功能、h2o2诱导的pc12细胞损伤具有明显的神经保护功能、抑制aβ的过度生成与沉积、且活性均衡的多靶点ad治疗药物，可广泛用于预防或者治疗阿尔茨海默症、血管痴呆、帕金森症、亨廷顿症、hiv相关痴呆症、多发性硬化症、进行性脊髓侧索硬化症、神经性疼痛或者青光眼等神经退行性疾病。

2.本发明本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物对乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶均具有显著抑制活性，其ic50为0.004～8.1μm和0.003～21.9μm；本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物在25.0μm浓度下对aβ1-42自身聚集的抑制率均大于46.8％，对aβ1-42自身聚集均具有显著抑制活性；本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物的抗氧化活性为trolox的1.1-1.6倍，说明该类化合物具有强抗氧化活性；本发明化合物在10^-5mol/l～10^-6mol/l浓度下对过氧化氢诱导的pc12细胞损伤均有显著的保护作用；本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物均表现出对金属离子有强络合作用。

3.本发明化合物能够显著的改善alcl3诱导斑马鱼ad的运动功能，与模型对照组比较均具有统计学差异；本发明化合物柚皮素-o-烷基胺类化合物对东莨菪碱所致小鼠记忆障碍有显著的改善作用。

附图说明

图1为本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)对h2o2诱导的pc12细胞损伤的保护作用测定结果图；

图2为本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)对alcl3诱导斑马鱼阿尔茨海默症模型的防治作用测定结果图；

图3为本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的影响测定结果图。

具体实施方式

下面结合一些具体实施例对本发明进一步说明。

实施例1

本发明实施例1-128的柚皮素-o-烷基胺类化合物的化学结构通式如下：

其中，n、r1、r2见表1。

表1本发明实施例1-128的柚皮素-o-烷基胺类化合物

i-43:lightyellowoil,50.6％yield,98.2％hplcpurity.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.02(s,1h,oh),7.52(d,j＝8.0hz,1h,ar-h),7.48(d,j＝7.2hz,1h,ar-h),7.36(d,j＝8.4hz,2h,2×ar-h),7.31-7.24(m,2h,2×ar-h),6.96(t,j＝7.6hz,2h,2×ar-h),6.91(d,j＝8.8hz,2h,2×ar-h),6.89(d,j＝3.2hz,1h,ar-h),6.87(d,j＝3.2hz,1h,ar-h),6.01(dd,j1＝6.4hz,j2＝2.4hz,2h,2×ar-h),5.36(dd,j1＝10.0hz,j2＝2.8hz,1h,ar-h),3.99-3.93(m,4h,2×och2),3.87(s,2h,phch2),3.84(s,3h,och3),3.83(s,3h,och3),3.81(s,2h,phch2),3.09(dd,j1＝13.2hz,j2＝4.0hz,1h,1/2coch2),2.79(dd,j1＝14.0hz,j2＝3.2hz,1h,1/2coch2),2.78-2.63(m,8h,4×nch2)1.84-1.81(m,4h,2×ch2),1.78-1.76(m,4h,2×ch2),1.24-1.16(m,6h,2×ch3).hr-esi-ms:calcd.forc43h54n2o7[m+h]⁺:711.3965,found:711.3997。

i-49：lightyellowoil,58.3％yield,98.1％hplcpurity.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.03(s,1h,oh),7.35-7.22(m,12h,12×ar-h),6.92(d,j＝8.4hz,2h,2×ar-h),6.02(dd,j1＝9.2hz,j2＝2.4hz,2h,2×ar-h),5.33(dd,j1＝10.4hz,j2＝2.8hz,1h,ar-h),3.99-3.94(m,4h,2×och2),3.51(s,2h,phch2),3.50(s,2h,phch2),3.08(dd,j1＝12.8hz,j2＝4.4hz,1h,1/2coch2),2.76(dd,j1＝14.4hz,j2＝2.8hz,1h,1/2coch2),2.49-2.30(m,20h,10×nch2),1.83-1.73(m,4h,2×ch2),1.71-1.58(m,4h,2×ch2).hr-esi-ms:calcd.forc45h56n4o5[m+h]⁺:733.4284,found:733.4314。

i-53:lightyellowoil,63.7％yield,98.0％hplcpurity.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.01(s,1h,oh),7.32(d,j＝8.0hz,2h,2×ar-h),6.88(d,j＝8.4hz,2h,2×ar-h),6.04(d,j＝9.6hz,2h,2×ar-h),5.34(dd,j1＝10.8hz,j2＝2.0hz,1h,ch),3.95(t,j＝6.4hz,2h,och2),3.40(t,j＝6.8hz,2h,brch2),3.08(d,j1＝5.2hz,j2＝4.0hz,1h,1h,1/2ch2),2.78(dd,j1＝14.8hz,j2＝2.4hz,1h,1/2ch2),1.88-1.80(m,2h,ch2),1.77-1.72(m,2h,ch2),1.43-1.38(m,4h,2×ch2),1.29-1.27(m,12h,6×ch2).hr-esi-ms:calcd.forc47h58n2o5[m+h]⁺:731.4379,found:731.4403。

i-54:lightyellowoil,68.9％yield,98.1％hplcpurity.¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.04(s,1h,oh),7.36(d,j＝8.8hz,2h,2×ar-h),7.13-7.11(m,5h,5×ar-h),7.03-7.01(m,2h,2×ar-h),6.95(d,j＝8.4hz,2h,2×ar-h),6.06(s,1h,ar-h),6.03(s,1h,ar-h),5.35(dd,j1＝10.8hz,j2＝2.0hz,1h,ch),4.03(t,j＝6.0hz,2h,och2),4.01(t,j＝6.4hz,2h,och2),3.67(s,2h,phch2n),3.65(s,2h,phch2n),3.10(dd,j1＝13.2hz,j2＝3.6hz,1h,1/2coch2),2.93-2.90(m,4h,2×phch2),2.80-2.73(m,5h,1/2coch2+2×nch2),2.63-2.56(m,4h,2×nch2),1.93-1.69(m,8h,4×ch2).¹³cnmr(100mhz,cdcl3)δ181.4,167.4,164.1,162.9,159.5,134.2(2c),130.2,128.7(3c),127.8(3c),126.6(3c),126.2(2c),125.7(2c),114.8(3c),103.1,95.5,94.6,79.0,68.2,67.8,57.8,57.7,56.0(2c),50.8(2c),43.2(2c),28.9(2c),27.2(2c),26.9(2c),23.6,23.5.hr-esi-ms:calcd.forc41h46n2o5[m+h]⁺:647.3440,found:647.3477。

实施例1所述的柚皮素-o-烷基胺类化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)在反应瓶中加入5.0mmol的柚皮素，15mmol相应的二溴烷烃br(ch2)nbr、10mmol碳酸钾和50ml乙腈，搅拌均匀后，65℃搅拌反应24h；反应结束后，减压蒸干溶剂，残余液中加入100ml去离子水，用300ml二氯甲烷分三次萃取，有机层合并后用饱和氯化钠水溶液洗涤，减压蒸干溶剂，残余物经柱层析纯化(洗脱液中石油醚：丙酮＝100：1v/v)，得相应的2，7-二溴烷氧基柚皮素；

(2)在反应瓶中加入3.0mmol的2，7-二溴烷氧基柚皮素，4.0mmol相应的仲胺nr1r2、4.5mmol碳酸钾和30ml乙腈，搅拌均匀后，65℃搅拌反应24h；反应结束后，减压蒸干溶剂，残余液中加入100ml去离子水，用300ml二氯甲烷分三次萃取，有机层合并后用饱和氯化钠水溶液洗涤，减压蒸干溶剂，残余物经柱层析纯化(洗脱液中石油醚：丙酮＝50：1v/v)，得相应的柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)，其化学结构均经¹hnmr、¹³cnmr和esi-ms确证。

实施例2-128所述的柚皮素-o-烷基胺类化合物的制备方法与实施例1基本相同，相同之处不重述，不同之处见表2和3。

表2本发明实施例1-10的柚皮素-o-烷基胺类化合物制备方法参数之一

表3本发明实施例1-10的柚皮素-o-烷基胺类化合物制备方法参数之二

生物活性测试

1.柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)的乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶抑制活性

向96孔板中依次加入1.0mmol/l碘化硫代乙酰胆碱或硫代丁酰胆碱(均购自sigma公司)30μl，ph＝8.0的pbs缓冲液40μl，待测化合物溶液20μl(dmso含量小于1％)和10μl电鳗乙酰胆碱酯酶(eeache)或丁酰胆碱酯酶(equineserumbuche，eqbuche)(0.045u，均购自sigma公司)，加完混匀后，37℃孵育15min，向各孔中加入质量分数为0.2％的5,5'-二硫代-双(2-硝基)苯甲酸(dtnb，购自sigma公司)溶液30μl显色，用酶标仪测定405nm处各孔的光密度(od)值，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[酶抑制率＝(1-样品组od值/空白组od值)×100％]；选择化合物的五至六个浓度，测定其酶抑制率，并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶的抑制率线性回归，求得50％抑制率时的摩尔浓度即为该化合物的ic50，以卡巴拉汀(rivastigmine)和多奈哌齐(donepezil)为阳性对照，检测结果见表4。

表4本发明化合物的胆碱酯酶抑制活性、抗氧化活性、自身诱导aβ1-42聚集抑制活性和cu²⁺诱导的aβ1-42自身聚集抑制活性

测定结果表明，本发明化合物的母核——柚皮素对乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶抑制的ic50均大于500μm，本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物对乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶均具有显著抑制活性，其ic50为0.004～8.1μm和0.003～21.9μm，与阳性对照rivastigmine/donepezil检测结果相当或者更好。

2.柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)对aβ1-42自身聚集的抑制活性

参照文献(sang，z.p.etal.eur.j.med.chem.2015，94，348-366)所报道的方法进行测定，即：预处理后的aβ1-42用dmso配成储备液，使用前用ph7.4的pbs缓冲液稀释至50μm；待测化合物用dmso配成2.5mm储备液，使用前用ph7.4的pbs缓冲液稀释至相应浓度，取20μl的aβ1-42溶液+20μl的待测化合物溶液、20μlaβ1-42溶液+20μlpbs缓冲液(含2％dmso)、20μlpbs缓冲液(含2％dmso)+20μlpbs缓冲液(含25％dmso)于黑色96孔板中，化合物和aβ1-42的最终浓度均为25μm。37℃孵育24h，然后加入160μl含有5μm硫黄素t的50mm的甘氨酸-naoh缓冲液(ph＝8.5)，振摇5s后立即用varioskanflashmultimodereader多功能酶标仪在446nm激发波长和490nm发射波长下测定荧光值；aβ1-42+待测化合物的荧光值记录为ifi，aβ1-42+pbs缓冲液的荧光值记录为ifc，只含有pbs缓冲液的荧光值记录为if0，由化合物抑制aβ1-42自身聚集的抑制率计算公式为：100-(ifi-if0)/(ifc-if0)×100；每个化合物每个浓度测定两个复孔；以姜黄素为阳性对照，检测结果见表4。

测定结果表明，姜黄素在相同浓度下的抑制率为43.1％，广泛使用的抗ad药多奈哌齐在25.0μm浓度下对aβ1-42自身聚集的抑制率小于20.0％；本发明所提供的柚皮素-o-烷基胺类化合物，在25.0μm浓度下对aβ1-42自身聚集的抑制率均大于46.8％，对aβ1-42自身聚集均具有显著抑制活性。

3.柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)的抗氧化活性测定(orac-fl法)

试剂与仪器：6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸(trolox，购自梯希爱(上海)化成工业发展有限公司)用75mm的pbs缓冲液(ph7.4)配成10-80μmol/l的溶液；荧光素(fluorescein，购自梯希爱(上海)化成工业发展有限公司)用75mm的pbs缓冲液(ph7.4)配成250nmol/l的溶液；2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(aaph，购自韶远化学科技(上海)有限公司)在使用前用75mm的pbs缓冲液(ph7.4)配成40mmol/l的溶液；酶标仪为varioskanflashmultimodereader(thermoscientific)。

测定实验方法：向黑色96孔板中加入50或10μmol/l的化合物溶液20μl和荧光素溶液120μl，混匀，37℃孵育15min，加入aaph溶液60μl，使每孔总体积为200μl，混匀，立即置于varioskanflashmultimodereader仪器中，在485nm激发波长和535nm发射波长下每分钟测定一次荧光值，连续测定90min，通过仪器自动计算出荧光衰减曲线下面积auc。其中以1-8μmol/l的trolox作为标准，以不加待测样品为空白。化合物的抗氧化活性结果表达为trolox的当量，计算公式为：[(aucsample-aucblank)/(auctrolox-aucblank)]×[(concentrationoftrolox/concentrationofsample)]。每个化合物每次测定3个复孔，检测结果见表4。

测定结果表明，本发明所提供的柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)的抗氧化活性为trolox的1.1-1.6倍，说明该类化合物具有强抗氧化活性。

4.柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)对h2o2诱导的pc12细胞损伤的保护作用

pc12细胞用含10％小牛血清的dmem培养液，以1×10⁵个/ml密度接种于96孔培养板上，接种体积为100ml/孔，随后放入含5％co2的37℃恒温培养箱内培养。培养24小时后，给药组中加相应浓度的化合物(终浓度为10^-5mol/l，10^-6mol/l)10ml/孔，预孵育2小时(对照组与损伤组分别加10μl/孔pbs，使其体积保持相等)。pc12细胞孵育2小时后，在给药组与损伤组中分别加入100μμh2o2损伤剂10μl/孔(对照组加10μl/孔pbs)，30分钟后，将各组的培养液均换成无小牛血清的rpmi1640培养液继续放入恒温培养箱内培养24小时，培养液体积认为100μl/孔。继续培养24小时后，各组加入5mg/ml，mtt100μl/孔，进行活细胞染色。待3小时后，各组中加入100％dmso终止液100μl/孔，充分溶解混匀。在490nm的波长下测定各组的od值，测试结果重复3次，用duncan’stest方法统计，各组数值表示为均数±s.e.m.，以对照组为100％，给药组及损伤组值以对照组的百分比表示，检测见图1。

测定结果表明，本发明化合物在10^-5mol/l～10^-6mol/l浓度下对过氧化氢诱导的pc12细胞损伤均有显著的保护作用。

5.柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)与金属离子络合作用的测定

用甲醇溶解cucl2·2h2o、zncl2、feso4·7h2o、alcl3及待测化合物，配成75μmol/l的溶液，向96孔板中加入100μl待测化合物溶液和100μl金属离子溶液，混匀，室温静置30分钟，在多功能酶标仪上记录200-600nm范围内的紫外吸收曲线，并以100μl待测化合物溶液和100μl甲醇混合液为对照，观察金属离子与待测化合物混合液的最大吸收峰的红移现象及最大吸收峰的强度。

测定结果表明，本发明柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)均表现出对金属离子有强络合作用。

6.本发明制备的柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)对alcl3诱导斑马鱼阿尔茨海默症模型的防治作用(以化合物i-43为例)。

随机选取3dpf野生型ab系斑马鱼于六孔板中，用三氯化铝(alcl3)诱发斑马鱼阿尔兹海默症模型(以下简称ad斑马鱼)，分别水溶给予i-43化合物1μg/ml、3μg/ml和10μg/ml浓度，阳性对照药多奈哌齐8μm，同时设置正常对照组(未处理)和模型对照组(alcl3组)，每实验浓度组30尾斑马鱼。给药3天后，用行为分析仪分别观察记录各实验组斑马鱼在60min内3个明暗周期(即：黑暗10min、光照10min交替3个周期)的运动距离，分析斑马鱼60min的运动距离，以运动距离与模型对照组进行统计分析，以统计学意义评价化合物对斑马鱼阿尔兹海默症模型的防治作用，检测结果见图2。

测试结果表明，与正常对照组(7303mm)相比，模型对照组的运动距离为5203mm显著降低，表明模型建立成功；而阳性对照组多奈哌齐则能使运动距离增加至6358mm(p<0.01)，与阳性对照多奈哌齐组相比，药物i-43的高、中、底剂量组的运动距离较多奈哌齐组显著增长，说明化合物i-43能够显著的改善alcl3诱导斑马鱼ad的运动功能，与模型对照组比较均具有统计学差异。

7.本发明制备的柚皮素-o-烷基胺类化合物(i)对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的影响(跳台被动回避实验)(以化合物i-43为例)。

spf级icr雄性小鼠，25-30g，随机分为：正常组、模型组、受试药高(20mg/kg)、中(10mg/kg)、低剂量组(5.0mg/kg)，每组10只动物。一次性灌胃给予受试药物，空白组和模型组给予溶媒0.5％cmc-na，给药体积均为0.1ml/10g；药后45min，正常组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组动物均注射东莨菪碱3mg/kg；造模后20min进行跳台法训练，将动物放入反应箱内适应3min，然后立即通以36v交流电。训练5min，并记录每次小鼠受到电击的次数(错误次数)，并由此作为学习成绩。24h后进行测试，每只小鼠测定5min，记录受到电击的动物数及第一次跳下平台的潜伏期以及5min内的错误次数。结果进行统计学分析。所有数据均用均值±标准误差(standerror，s.e.)表示。采用spss11.5软件分析。方差齐的选择单因素方差分析(one-wayanova)。计量资料比较采用单因素方差分析，各组均数的比较采用t检验，检测结果见图3。

测定结果表明，与对照组相比，模型组跳台被动回避实验测试的潜伏期明显缩短(p<0.01)，表明模型建立成功；药物中剂量组和多奈哌齐组与痴呆模型组相比潜伏期有显著的延长趋势(p<0.01)，本发明化合物柚皮素-o-烷基胺类化合物对东莨菪碱所致小鼠记忆障碍有显著的改善作用。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。