本发明涉及一种新的化合物、其制备方法及应用，具体涉及一种2-(苯并呋喃-7-氧基)-n′–取代芳基/烷基乙酰腙衍生物及其制备方法与应用。
背景技术：
苯并呋喃是一类特殊的芳香杂环化合物，研究表明，苯并呋喃化合物具有多种生物活性，如杀虫、抗菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤等活性。目前，国内外学者已对此进行了很多研究，一些苯并呋喃类衍生物已被开发成药物。
酰腙类化合物是由酰肼与醛或酮缩合而成的一类特殊的席夫碱化合物，因具有多种配位方式而具有独特的生物活性和药物活性，在医药、农药等方面广泛掀起了一股研究热潮。酰腙类化合物的分子结构中同时含有氮原子和氧原子，因而可以参与生物体中氢键的形成，增加受体之间的亲和性，进而可能抑制生物体内诸多生理化学过程，如抗高血糖、抗肿瘤，在医药领域备受关注。
公开号为cn106749135a的专利申请公开了一种取代的苯并呋喃甲酰腙类衍生物及其制备方法，该类化合物具有潜在的药物活性，其制备可以为苯并呋喃甲酰腙类的药物活性研究提供支撑，但是，该专利申请并没有公开该类化合物具体有哪些活性效果。目前，对于苯并呋喃酰腙类衍生物在抗肿瘤方面的研究尚未见报道。
技术实现要素：
本发明的目的就是提供一种2-(苯并呋喃-7-氧基)-n′–取代芳基/烷基乙酰腙衍生物，其在低剂量下对人乳腺癌细胞(mcf-7)、人宫颈癌细胞(hela)、人胃癌细胞(mgc-803)、人肺腺癌细胞(a549)、人乳腺癌细胞(mda-mb-231)具有抑制活性，为抗肿瘤药物提供了新的选择。
本发明的目的是这样实现的：
一种式(i)所示的化合物或其药学上可以接受的盐，
其中，r选自4-cn-c6h4、4-f-c6h4，4-cl-c6h4、4-br-c6h4、3-f-c6h4、3-br-c6h4、4-no2-c6h4、3-no2-c6h4、2-br-c6h4、3-ch3-c6h4、4-ch3-c6h4、4-ome-c6h4、3-ome-c6h4、2-ome-c6h4、苯基、异丙基、环己烷基、苯乙烯基、呋喃基、噻吩基或萘基。
优选的，所述化合物选自：
所述化合物的药学上可接受的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、丁二酸盐或丁烯二酸盐。
本发明还提供了式(i)所示的化合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将化合物a溶于无水dmf，加入k2co3室温搅拌至溶解，加入氯乙酸乙酯，催化量ki，60℃下搅拌加热6-8h，tlc检测。反应结束后，加少量水搅拌5min，乙酸乙酯萃取，有机相用无水naso4干燥，旋干。石油醚∶乙酸乙酯＝40∶1柱层析，得中间产物b纯品。化合物a与氯乙酸乙酯的摩尔比为1∶1.5；
(2)将中间产物b溶于无水乙醇，冰浴条件下逐滴滴加水合肼(80％质量分数)，冰浴条件下搅拌5min。60℃搅拌加热2h，tlc监测。反应结束后，二氯甲烷萃取，将溶剂旋干，加水，有晶体析出，抽滤。乙醇重结晶，得中间产物c纯品。中间产物b与水合肼的摩尔比为1∶2.5；
(3)将中间产物c溶于无水乙醇，搅拌溶解后加入醛，60℃搅拌加热6-8h，tlc监测。反应完全后，抽滤，旋干后得淡黄色黏稠状固体。经柱层析(v二氯甲烷∶v甲醇＝160∶1)，旋蒸即得本发明化合物。中间产物c与醛的摩尔比为1∶1.2。
反应方程式如下：
另一方面，本发明提供所述化合物或其药学上可接受的盐在抗肿瘤药物中的应用，该药物对人乳腺癌细胞(mcf-7)、人宫颈癌细胞(hela)、人胃癌细胞(mgc-803)、人肺腺癌细胞(a549)、人乳腺癌细胞(mda-mb-231)具有抑制活性，为抗肿瘤药物提供了新的选择。
再一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成份，以及一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明提供的药物组合物含有式(i)所示的化合物或其药学上可以接受的盐、制药学上许可的载体或以该类化合物作为活性成分的混以药用赋形剂或稀释剂的组合。本发明提供的药物组合物的各种剂型可以按照药物领域的常规生产方法制备。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的阐述，在下述实施例中未详细描述的过程和方法是本领域公知的常规方法，实施例中所用原料或试剂除另有说明外均为市售品，可通过商业渠道购得。
实施例1
乙基-2-((2,2-二甲基-2,3-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酸乙酯(化合物b)的合成：
将化合物a溶于无水dmf，加入k2co3室温搅拌至溶解，加入氯乙酸乙酯，催化量ki，60℃下搅拌加热6-8h，tlc检测。反应结束后，加少量水搅拌5min，乙酸乙酯萃取，有机相用无水naso4干燥，旋干。石油醚∶乙酸乙酯＝40∶1柱层析，得中间产物b纯品。化合物a与氯乙酸乙酯的摩尔比为1∶1.5；ms-esi,m/z273.28，[m+na]+。hr-ms-eim/zcalcdforc14h18o4[m+h]+250.2925，found250.2940；1hnmr(600mhz,cdcl3)δ6.80(d,j＝7.1hz,1h),6.75–6.68(m,2h),4.71(s,2h),4.24(q,j＝7.1hz,2h),3.01(s,2h),1.50(s,6h),1.28(t,j＝7.1hz,3h)；13cnhr(150mhz,cdcl3)δ169.34,147.66,142.65,129.02,120.30,118.79,114.46,87.61,66.72,61.11,43.14,28.19,14.17。
实施例2
2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼(化合物c)的合成：
将中间产物b溶于无水乙醇，冰浴条件下逐滴滴加水合肼(80％质量分数)，冰浴条件下搅拌5min。60℃搅拌加热2h，tlc监测。反应结束后，二氯甲烷萃取，将溶剂旋干，加水，有晶体析出，抽滤。乙醇重结晶，得中间产物c，白色晶体，产率93％。中间产物b与水合肼的摩尔比为1∶2.5；ms-esi,m/z259.26[m+na]+。hr-ms-eim/zcalcdforc12h16n2o3[m+h]+236.2695,found236.2710；1hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.13(s,1h),6.86(d,j＝7.2hz,1h),6.77(t,j＝7.7hz,1h),6.73(d,j＝8.0hz,1h),4.65(s,2h),3.90(s,2h),3.05(s,2h),1.52(s,6h)。
实施例3
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-氟苯亚甲基)乙酰肼的制备：
2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼溶于50ml乙醇，搅拌溶解后加入2.88mmol对氟苯甲醛，油浴锅60℃加热搅拌6-8h，tlc监测，反应完全后，抽滤，旋干后得淡黄色黏稠状固体粗品，粗品经柱层析(v二氯甲烷∶v甲醇＝160∶1)，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-氟苯亚甲基)乙酰腙0.54g。m.p.145.9-146.5℃，收率90.1％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.92(s,1h),8.13(s,1h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.30(d,j＝8.4hz,2h),6.84–6.79(m,1h),6.73(d,j＝6.3hz,2h),4.67(s,2h),2.99(s,2h),1.46(s,6h)。
实施例4
2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-((1e，2e)-3-苯基亚芳基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol肉桂醛反应6-8h，得到2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-((1e，2e)-3-苯基亚芳基)乙酰腙黄色固体0.55g，m.p.142.3-144.2℃，收率92.1％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.87(s,1h),7.86(d,j＝9.2hz,1h),7.38(d,j＝7.3hz,2h),7.29(t,j＝7.4hz,2h),7.25(d,j＝7.2hz,1h),6.82(dd,j＝10.1,5.6hz,2h),6.73(d,j＝4.7hz,2h),4.66(s,2h),2.99(s,2h),1.46(s,6h)。
实施例5
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(萘-1-基亚甲基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol1-奈醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(萘-1-基亚甲基)乙酰肼黄色固体0.54g，m.p.145.1-146.4℃，收率90.4％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.91(s,1h),8.58(d,j＝8.5hz,1h),8.00(d,j＝7.1hz,1h),7.82(dd,j＝15.4,8.2hz,2h),7.53(t,j＝7.6hz,1h),7.44(dd,j＝16.7,8.6hz,2h),6.81(d,j＝6.9hz,1h),6.75(dt,j＝18.3,7.0hz,2h),4.68(s,2h),3.01(s,2h),1.50(s,6h)。
实施例6
(e)-n′-(4-氯亚苄基)-2–((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol对氟苯甲醛反应6-8h，得到(e)-n′-(4-氯亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼白色固体0.53g，m.p.141.7-143.5℃，收率88.3％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.07(s,1h),8.11(s,1h),7.60(d,j＝8.5hz,2h),7.27(d,j＝8.4hz,2h),6.82–6.77(m,1h),6.74–6.71(m,2h),4.65(s,2h),2.98(s,2h),1.45(s,6h)。
实施例7
(e)-n′-(4-溴亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol对溴苯甲醛反应6-8h，得到(e)-n′-(4-溴亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼白色固体0.57g，m.p.142.3-144.2℃，收率95.1％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.02(s,1h),8.11(s,1h),7.55(d,j＝8.4hz,2h),7.45(d,j＝8.4hz,2h),6.81(dd,j＝5.3,3.2hz,1h),6.74–6.71(m,2h),4.66(s,2h),2.99(s,2h),1.46(s,6h)。
实施例8
(e)-n′-(2-溴亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol2-溴苯甲醛反应6-8h，得到(e)-n′-(2-溴亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼白色固体0.57g，m.p.141.3-143.2℃，收率95.1％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.10(d,j＝6.6hz,1h),7.48(d,j＝7.9hz,1h),7.25(s,1h),7.21–7.10(m,2h),6.81(d,j＝6.5hz,1h),6.77–6.67(m,2h),4.68(s,2h),2.98(s,2h),1.47(s,6h)。
实施例9
(e)-n′-(3-溴亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol3-溴苯甲醛反应6-8h，得到(e)-n′-(3-溴亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼白色固体0.56g，m.p.143.3-145.2℃，收率94.6％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.99(s,1h),8.10(s,1h),7.87(s,1h),7.57(d,j＝7.7hz,1h),7.45(d,j＝8.0hz,1h),7.19(d,j＝2.0hz,1h),6.82(dd,j＝5.6,1.9hz,1h),6.75–6.72(m,2h),4.67(s,2h),2.99(s,2h),1.46(s,6h)。
实施例10
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-氟苯亚甲基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol3-氟苯甲醛反应6-8h，得(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-氟苯亚甲基)乙酰肼白色固体0.56g，m.p.144.9-146.5℃，收率94.6％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.02(d,j＝32.4hz,1h),8.13(s,1h),7.88(s,1h),7.58(d,j＝7.7hz,1h),7.44(t,j＝7.6hz,1h),6.85–6.78(m,1h),6.74–6.78(m,2h),4.67(s,2h),2.99(s,2h),1.46(s,6h)。
实施例11
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-硝基亚苄基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol3-硝基苯甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-硝基亚苄基)乙酰肼黄色固体0.57g，m.p.138.8-140.7℃，收率95.4％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.21(s,1h),8.41(s,1h),8.34(s,1h),8.16(dd,j＝8.5,1.6hz,1h),8.09(d,j＝7.8hz,1h),7.50(t,j＝8.0hz,1h),6.84–6.79(m,1h),6.75–6.72(m,2h),4.68(s,2h),2.99(s,2h),1.47(s,6h)。
实施例12
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-硝基苯亚甲基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol对硝基苯甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-硝基苯亚甲基)乙酰肼黄色固体0.57g，m.p.138.6-140.7℃，收率95.2％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.39(s,1h),8.40(s,1h),8.26(d,j＝8.7hz,2h),7.94(d,j＝8.7hz,2h),6.90(d,j＝6.0hz,1h),6.85–6.78(m,2h),4.75(s,2h),3.08(s,2h),1.55(s,6h)。
实施例13
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-甲基亚苄基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol3-甲基苯甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-甲基亚苄基)乙酰肼白色固体0.57g，m.p.131.9-133.8℃，收率95.2％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.07(s,1h),8.09(s,1h),7.58(s,1h),7.42(d,j＝7.6hz,1h),7.21–7.18(m,1h),7.14(d,j＝7.5hz,1h),6.80(dd,j＝5.3,3.1hz,1h),6.75–6.71(m,2h),4.65(s,2h),2.98(s,2h),2.29(s,3h),1.46(s,6h)。
实施例14
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-甲基亚苄基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol4-甲基苯甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-甲基亚苄基)乙酰肼0.56g，m.p.131.6-133.7℃，收率94.8％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.90(s,1h),8.08(s,1h),7.58(d,j＝8.0hz,2h),7.13(d,j＝7.9hz,2h),6.81(d,j＝6.5hz,1h),6.74–6.70(m,2h),4.66(s,2h),2.30(s,3h),1.46(s,6h)。
实施例15
(e)-2-(2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-甲氧基亚苄基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol4-甲氧基苯甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(4-甲氧基亚苄基)乙酰肼白色固体0.57g，m.p.133.5-134.8℃，收率95.4％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.12(s,1h),7.35–7.19(m,2h),7.16(d,j＝7.3hz,2h),6.91–6.85(m,1h),6.80(s,1h),6.73(s,1h),4.65(s,2h),3.76(s,3h),2.98(s,2h),1.45(s,6h)。
实施例16
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-甲氧基亚苄基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol3-甲氧苯甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(3-甲氧基亚苄基)乙酰肼白色固体0.57g，m.p.132.5-134.7℃，收率95.4％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.11(s,1h),7.29(s,1h),7.20(dd,j＝14.3,6.1hz,2h),7.16(d,j＝7.4hz,1h),6.87(d,j＝8.2hz,1h),6.80(d,j＝6.4hz,1h),6.72–6.67(m,1h),4.66(s,2h),3.75(s,3h),2.97(s,2h),1.45(s,6h)。
实施例17
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(2-甲氧基亚苄基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol2-甲氧苯甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(2-甲氧基亚苄基)乙酰肼白色固体0.57g，m.p.132.4-134.8℃，收率95％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.09(s,1h),8.46(s,1h),7.97(d,j＝7.7hz,1h),7.21(t,j＝7.8hz,1h),6.82(t,j＝7.5hz,1h),6.75(d,j＝7.7hz,2h),6.70(d,j＝7.9hz,1h),6.68–6.65(m,1h),4.62(s,2h),3.69(s,3h),2.91(s,2h),1.41(s,6h)。
实施例18
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(2-甲基亚丙基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol丙醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(2-甲基亚丙基)乙酰肼黏稠液体，m.p.121.5-123.2℃，收率94.6％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.66(s,1h),7.32(d,j＝6.3hz,1h),6.80(dd,j＝6.4,1.8hz,1h),6.74–6.69(m,2h),4.60(s,2h),2.98(s,2h),2.62(dd,j＝13.4,6.7hz,1h),1.45(s,6h),1.06(d,j＝6.9hz,6h)。
实施例19
(e)-n′-(4-氰基亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol4-氰基苯甲醛反应6-8h，得到(e)-n′-(4-氰基亚苄基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼黄色固体0.57g，m.p.131.9-133.9℃，收率95％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ10.10(s,1h),8.25(s,1h),7.79(d,j＝8.2hz,2h),7.62(d,j＝8.2hz,2h),6.82(dd,j＝8.1,4.6hz,1h),6.77–6.72(m,2h),4.68(s,2h),3.00(s,2h),1.47(s,6h)。
实施例20
(e)-n′-苄基-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol苯甲醛反应6-8h，得到(e)-n′-苄基-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼白色固体0.54g，m.p.132.2-134.5℃，收率91％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.14(s,1h),7.72–7.64(m,2h),7.33–7.30(m,3h),6.81(d,j＝6.6hz,1h),6.75–6.70(m,2h),4.66(s,2h),2.98(s,2h),1.46(s,6h)。
实施例21
(e)-n′–(环己基亚甲基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol环己烷甲醛反应6-8h，得到(e)-n′-(环己基亚甲基)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼白色固体0.57g，m.p.133.5-134.8℃，收率95.1％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.54(s,1h),6.84–6.77(m,1h),6.72(d,j＝4.7hz,2h),4.60(s,2h),2.98(s,2h),2.43–2.27(m,1h),1.77(d,j＝12.1hz,2h),1.72–1.66(m,2h),1.44(s,6h),1.26–1.14(m,6h)。
实施例22
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(呋喃-2-基亚甲基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol糠醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(呋喃-2-基亚甲基)乙酰肼棕色固体0.54g，m.p.138.0-139.5℃，收率91％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ9.89(s,1h),8.21(s,1h),7.46(d,j＝6.7hz,1h),6.84–6.80(m,1h),6.79(d,j＝3.4hz,1h),6.74–6.71(m,2h),6.45–6.40(m,1h),4.65(s,2h),2.99(s,2h),1.46(s,6h)。
实施例23
(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(噻吩-2-基亚甲基)乙酰肼的制备：
制备方法同实施例3，2.4mmol2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)乙酰肼和2.88mmol噻吩2-甲醛反应6-8h，得到(e)-2-((2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氧基)-n′-(噻吩-2-基亚甲基)乙酰肼棕色固体0.57g，m.p.139.5-141.3℃，收率95％，1hnmr(600mhz,cdcl3)δ8.52(s,1h),7.30(d,j＝21.6hz,1h),7.21(d,j＝19.2hz,1h),6.98–6.95(m,1h),6.82–6.77(m,1h),6.71(d,j＝4.5hz,2h),4.63(s,2h),2.97(s,2h),1.45(s,6h)。
实施例24
2-(苯并呋喃-7-氧基)-n′–取代芳基/烷基乙酰腙衍生物的抗肿瘤活性测定：
1、抗肿瘤活性原理
mtt法生物活性测试又称mtt比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。mtt分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazoliumbromide，mtt]为基础。mtt是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与nadp相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的mtt转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用dmso溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。
2、抗肿瘤活性实验
试样：实施例3～23所制备的2-(苯并呋喃-7-氧基)-n′–取代芳基/烷基乙酰腙衍生物，
细胞系：人乳腺癌细胞(mcf-7)、人宫颈癌细胞(hela)、人胃癌细胞(mgc-803)、人肺腺癌细胞(a549)、人乳腺癌细胞(mda-mb-231)，以上细胞株均由中国科学院药物研究所提供，由本实验室传代保存。
试剂：dmem(北京索莱宝生命科技有限公司)、rpmi1640(北京索莱宝生命科技有限公司)、新生牛血清(四季青生物科技有限公司)、胰蛋白酶、trypsin1：250(美国amersco公司)、mtt(美国amersco公司)、注射用顺铂(cisplatin，齐鲁制药有限公司)、二甲基亚砜、(北京索莱宝生命科技有限公司)。
仪器：zdm-300型倒置显微镜(上海宙山精密光学仪器有限公司)、hf90型二氧化碳培养箱(河南力康仪器设备有限公司)、tdz5-ws型低速自动平衡离心机(湖北湘智离心机仪器有限公司)、ls-c35l型立式压力蒸汽灭菌锅(江阴滨江医疗设备厂)、synergyht型酶标仪(美国bio-tek公司)、天寒th-86-150-wa-86℃超低温冰箱(北京天地精密仪器科技有限公司)、w-cj-zdf型超净台(上海贺德实验设备厂)、细胞培养瓶75ml(corningincorporated)、96孔板(costar)、移液器(eppendorf)。
实验操作：
1)供试药物配置
供试药物用培养基溶解成母液，浓度为1000μmol/l，用培养基逐级稀释成浓度梯度为200μmol/l，150μmol/l，100μmol/l，50μmol/l，20μmol/l。阳性对照顺铂取相同浓度梯度。经过分装后放置于-20℃冰箱保存，待用。
2)细胞培养
hela、mgc-803、mcf-7、a549、mda-mb-231均为贴壁肿瘤细胞，采用贴壁细胞培养方法。用rpmi1640或者dmem完全培养液(含10％-20％热灭活新生牛血清、hepes0.5958mg/ml，100u/ml青霉素、100u/ml链霉素)，置于37℃、饱和湿度、5％co2的孵箱环境下培养。正常换液，待细胞密度达到80％-90％时，0.25％胰酶消化细胞，按1∶2～1∶4比例传代，收集对数生长期的细胞进行实验。
3)mtt试验
取对数生长期的肿瘤细胞，用细胞计数板对细胞进行计数，然后将细胞悬液浓度调至105个/ml，将细胞接种到96孔板上，每孔加入100μl，细胞悬液均匀后放入到co2培养箱中培养，待细胞均匀生长铺满培养皿底后加入待试药物，设dmem培养液为阴性对照组(待试药物完全溶于培养液，未用dmso溶解)，顺铂为阳性对照组，每孔加入100μl，每个浓度设4个平行，培养48h后加入10μlmtt再培养4h，弃去上清液，加入分析纯的二甲基亚砜100μl，至于摇床上摇匀，待溶液完全均匀后用酶标仪在波长490nm处测其吸光度值。重复实验2次。测试结果见下表。
本发明化合物对肿瘤细胞的抑制活性结果
本发明所制备的化合物对肿瘤细胞具有与阳性对照同一数量级的抗肿瘤活性。