背景技术：
：：目前许多药物存在不良的吸收、分布、代谢和/或排泄(adme)性能的问题，这阻碍了其广泛应用或限制其在某些适应症中的用途。不良的adme性能也是候选药物在临床试验中失败的主要原因。尽管制剂技术和前药策略在某些情况中可以用于改善某些adme性能，但是这些途径往往不能解决许多药物和候选药物存在的根本性adme问题。一个这样的问题是快速代谢，其导致一些本应高效治疗疾病的许多药物过快地从体内清除。快速药物清除的可能的解决方案是频繁或大剂量服药以达到足够高的药物血浆水平。然而，这引入了许多潜在的治疗问题，如患者对给药方案的依从性差、较高剂量下变得更急剧的副作用以及治疗成本的增加。迅速代谢的药物还可能使病人暴露于不希望的毒性或反应性的代谢物。另一个影响许多药物的adme局限性是毒性或生物反应性代谢物的形成。因此，一些接受药物的患者可能发生中毒，或该药物的安全剂量可能受到限制以使得患者接受次最优量的活性剂。在某些情况下，改变给药间隔或制剂方式可以帮助减少临床不良反应，但通常这种不希望的代谢物的形成对于化合物的代谢是固有的。在某些选择的情况下，代谢抑制剂将与过快清除的药物共同施用。用于治疗hiv感染的蛋白酶抑制剂类药物就是这样的情况。fda(美国食品和药物管理局)推荐这些药物与细胞色素p450酶3a4(cyp3a4)(通常负责这些药物的代谢)的抑制剂利托那韦共同给药(参见kempf,d.j.等,antimicrobialagentsandchemotherapy,1997,41(3):654-60)。然而，利托那韦造成不良反应，并加重了原已必须已经服用组合的不同药物的hiv患者的药物负担。相似地，为了降低在治疗假性延髓情绪(pseudobulbaraffect)中右美沙芬的快速cyp2d6代谢，cyp2d6抑制剂奎尼丁被添加到右美沙芬中。然而，奎尼丁具有有害的副作用，这极大地限制了其在潜在联合治疗中的用途(参见wang,l等,clinicalpharmacologyandtherapeutics,1994,56(6pt1):659-67；以及在www.accessdata.fda.gov上的奎尼丁的fda标签)。一般而言，将药物与细胞色素p450抑制剂结合不是用于降低药物清除率的令人满意的策略。抑制cyp酶的活性可能影响由该同样的酶代谢的其他药物的代谢和清除。cyp抑制可能引起其他药物在体内蓄积到毒性水平。改进药物代谢性能的有潜在吸引力的一种策略是氘修饰。在这种途径中，人们试图通过用氘原子替代一个或多个氢原子来减慢cyp介导的药物代谢或减少不希望的代谢物的形成。氘是安全、稳定、非放射性的氢同位素。与氢相比，氘与碳形成更强的键。在选择的情况下，由氘赋予的键强度增加可以积极影响药物的adme性质，从而产生提高药物功效、安全性和/或耐受性的潜能。同时，因为氘的大小和形状与氢的大小和形状基本相同，与只包含氢的原始化学实体相比较，由氘替代氢预计将不会影响药物的生化效能和选择性。在过去的35年间，对非常少比率的批准药物报告了氘取代对代谢速率的影响(参见，例如，blake,mi等,jpharmsci,1975,64:367-91；foster,ab,advdrugres,1985,14:1-40(“foster”)；kushner,dj等,canjphysiolpharmacol,1999,79-88；fisher,mb等,curropindrugdiscovdevel,2006,9:101-09(“fisher”))。这些文献中的许多实例报道了局部的氘同位素效应(对在底物中特定氘代位点的代谢速率的影响)而不是氘化对于该药物总体代谢稳定性的影响，即经由代谢的总体底物消耗。所报道的对测量氘取代对总体代谢稳定性的影响的那些研究的结果是多变的和不可预知的。对一些化合物，氘化引起体内代谢清除率降低。对其他化合物，没有代谢变化。还有的化合物表现出代谢清除率的增加。氘效应的变异性也导致技术人员怀疑或放弃氘修饰作为抑制不利代谢的可行的药物设计策略(参见foster的35页和fisher的101页)。氘修饰对药物代谢性质的影响不是可预测的，即便在氘原子掺入已知的代谢位点的情况下。人们仅可能通过实际制备和测试氘化的药物来确定代谢速率是否和如何不同于其非氘化的对应物。参见，例如，fukuto等(j.med.chem.,1991,34,2871-76)。许多药物具有可能发生代谢的多个位点。需要进行氘取代的位点和看到对代谢的影响(如果有的话)所必需的氘化程度对于各种药物将是不同的。卢索替尼(ruxolitinib)磷酸盐是杂芳基取代的吡咯并[2,3-d]嘧啶，也称作3(r)-环戊基-3-[4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基]丙腈磷酸盐，以及(r)-3-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基)-3-环戊基丙腈磷酸盐，其抑制janus相关激酶(jak)jak1和jak2。这些激酶介导对于造血和免疫功能重要的多种细胞因子和生长因子的信号传导。jak信号传导涉及stat(信号转导物和转录激活物)对细胞因子受体的募集、激活以及随后stat对细胞核的定位，从而导致基因表达的调节。现已批准卢索替尼磷酸盐用于治疗中或高风险骨髓纤维化的患者，包括原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症后骨髓纤维化和原发性血小板增多症后骨髓纤维化。卢索替尼磷酸盐现还在临床试验中用于治疗原发性血小板增多症、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤和银屑病。在人体中由环戊基部分2-位上的羟基化、在环戊基部分3-位上的羟基化以及由环戊基部分3-位上的进一步氧化产生的酮而产生的三种代谢物已被认定为活性的(参见shilling,a.d.等,drugmetabolismanddisposition,2010,38(11):2023-2031；fda规定信息以及us20080312258)。与卢索替尼给药相关的最常见的血液学不良反应是血小板减少和贫血。最常见的非血液学不良反应是瘀伤、头晕和头痛。尽管卢索替尼具有有益的活性，但还是存在对治疗上述疾病和状况的新型化合物的持续需要。技术实现要素：本发明涉及新型的杂芳基取代的吡咯并[2,3-d]嘧啶以及其药学上可接受的盐。本发明还提供了含有本发明化合物的组合物，以及该组合物在治疗通过施用对亚型1和2(jak1/jak2)有选择性的janus相关激酶抑制剂而被有利治疗的疾病和状况中的用途。具体地，本发明涉及以下各项：1.式i的化合物：或其药学上可接受的盐,其中：y6、y7和y8各自为氢，并且所述化合物选自下表所列的任一化合物：其中任何不被指定为氘的原子以其天然同位素丰度存在。2.式i的化合物：或其药学上可接受的盐,其中：y6、y7和y8各自为氘，并且所述化合物选自下表所列的任一化合物：其中任何不被指定为氘的原子以其天然同位素丰度存在。3.包含第1项的化合物和药学上可接受载体的药物组合物。4.包含第2项的化合物和药学上可接受载体的药物组合物。5.包含化合物127和药学上可接受载体的药物组合物。6.第3-5项中任一项的组合物，进一步包含选自来那度胺、帕比司他、卡培他滨、依西美坦及其组合的治疗剂。7.抑制细胞中jak1或jak2中的一个或多个的活性的方法，包括使所述细胞与第1或2项的化合物或其药学上可接受的盐相接触。8.抑制细胞中jak1或jak2中的一个或多个的活性的方法，包括使所述细胞与化合物127或其药学上可接受的盐相接触。9.在需要的受试者中治疗骨髓纤维化、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、银屑病或其组合的方法，包括对所述受试者施用第3-5项任一项的药物组合物。10.第9项的方法，其中所述骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症后骨髓纤维化、原发性血小板增多症后骨髓纤维化、原发性血小板增多症或其组合。11.第9项的方法，进一步包括对需要的受试者施用选自来那度胺、帕比司他、卡培他滨、依西美坦及其组合的治疗剂。附图说明附图1显示所指化合物的代谢稳定性测试的结果。具体实施方式定义术语“治疗”是指降低、抑制、减轻、消除、遏制或稳定疾病(例如本文中概述的疾病或紊乱)的发展或进展，减轻疾病的严重程度或改善与疾病有关的症状。“疾病”是指损害或干扰细胞、组织或器官的正常功能的任何病症或紊乱。应认识到，取决于合成中使用的化学材料的来源，在合成的化合物中存在天然同位素丰度的一些变化。因此，卢索替尼的制品将固有地包含少量的氘化的同位素体(isotopologue)。尽管存在这种变异，但与本发明化合物的稳定同位素取代的程度相比较，这种天然丰度的稳定氢和碳同位素的浓度还是很低的和无关紧要的。参见例如wada,e等,seikagaku,1994,66:15；gannes,lz等.,compbiochemphysiolmolintegrphysiol,1998,119:725。在本发明的化合物中，没有特别指定为特定同位素的任何原子意味着表示该原子的任何稳定同位素。除非另有说明，当一个位置被特别地指定为“h”或“氢”时，该位置应理解为具有按照其天然丰度同位素组成的氢。同样，除非另有说明，当一个位置被特别地指定为“d”或“氘”时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少3000倍的丰度的氘(即，至少45％的氘掺入)。本文使用的术语“同位素富集系数”是指特定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。在其它实施方案中，本发明的化合物对于各个指定的氘原子的同位素富集系数为至少3500(在各个指定的氘原子处52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘掺入)、至少5000(75％的氘掺入)、至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000(90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。术语“同位素体”是指其中化学结构与本发明的特定化合物只在其同位素组成方面不同的物质。术语“化合物”，当涉及本发明的化合物时，是指除了在分子的组成原子当中可能有同位素变化之外具有相同化学结构的分子的集合。因此本
技术领域：
：的技术人员很清楚，由含有指明的氘原子的具体化学结构所表示的化合物也包含较少量的在该结构的一个或多个指定氘位置处具有氢原子的同位素体。在本发明化合物中这样的同位素体的相对量将取决于多种因素，包括用来制造所述化合物的氘化试剂的同位素纯度和在用来制备所述化合物的各个合成步骤中氘的掺入效率。然而，如上文所述，这样的同位素体的总体相对量将低于化合物的49.9％。在其他实施方式中，这样的同位素体的总体相对量将低于化合物的47.5％，低于40％，低于32.5％，低于25％，低于17.5％，低于10％，低于5％，低于3％，低于1％或低于0.5％。本发明还提供了本发明化合物的盐。本发明化合物的盐在酸与所述化合物的碱性基团(例如氨基官能团)之间或碱与所述化合物的酸性基团(例如羧基官能团)之间形成。根据另一种实施方式，所述化合物是药学上可接受的酸加成盐。本文使用的术语“药学上可接受的”是指在合理的医疗判断范围内，适合用于与人和其他哺乳动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、变态反应等等，并与合理的利益/风险比相称的组分。“药学上可接受的盐”是指在施用于接受者时能够直接或间接提供本发明化合物的任何非毒性盐。“药学上可接受的反离子”是在施用于接受者而从盐中释放时为非毒性的盐的离子部分。通常用来形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸如二硫化氢、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、重酒石酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸，以及相关的无机酸和有机酸。这样的药学上可接受的盐因此包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、已炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、羟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐及其他盐。在一个实施方案中，药学上可接受的酸加成盐包括与无机酸例如盐酸和氢溴酸形成的酸加成盐，尤其是与有机酸例如马来酸形成的酸加成盐。本发明的化合物(如式i或式a的化合物)可能由于例如氘取代或其他原因而含有不对称碳原子。因此，本发明的化合物可以作为单个对映异构体或两个对映异构体的混合物存在。因此，本发明的化合物可以作为外消旋混合物或非外消旋混合物(scalemicmixture)存在，或作为基本不含另一可能的立体异构体的相应的单个立体异构体而存在。本文使用的术语“基本不含其他立体异构体”指的是存在少于25％的其他立体异构体、优选少于10％的其他立体异构体、更优选少于5％的其他立体异构体和最优选少于2％的其他立体异构体。本领域已知获得或合成给定化合物的单个对映异构体的方法，且可以按照实际情况应用于最终的化合物或原料或中间体。除非另有说明，当公开的化合物由未指定立体化学的结构来命名或描述并具有一个或多个手性中心时，其被理解为代表该化合物所有可能的立体异构体。本文使用的术语“哺乳动物”包括人或非人类动物，如小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪、猴、黑猩猩、狒狒或猕猴。在一个实施方案中，所述哺乳动物是非人类动物。在另一实施方案中，所述哺乳动物是人。本文使用的术语“稳定的化合物”指的是具有足以允许它们制造的稳定性并保持所述化合物的完整性充分的时间以便可用于本文中详述的目的(例如，配制成治疗产品、供用于生产治疗化合物的中间体、可分离或可储存的中间体化合物、治疗响应于治疗剂的疾病或病症)的化合物。“d”和“d”都指代氘。“立体异构体”指代对映异构体以及非对映异构体。“tert”和“t-”都指“叔”。“us”指代美国。“用氘取代”指的是用相应数量的氘原子替代一个或多个氢原子。在整个本说明书中，变量可以是泛指(例如，“各个r”)或可以是特指(例如r1、r2、r3等)。除非另外指明，当变量泛指时，它意味着包括该具体变量的所有特定具体形式。治疗性化合物本发明的一种实施方案提供了式a的化合物：或其药学上可接受的盐，其中：y1选自氢和氘；各个y2独立地选自氢和氘，条件是连接到共同的碳上的各y2是相同的；各个y3独立地选自氢和氘，条件是连接到共同的碳上的各y3是相同的；y4选自氢和氘；各个y5是相同的并且选自氢和氘；并且y6、y7、y8、y9和y10各自独立地选自氢和氘；条件是当y1是氢、各个y2和各个y3是氢、y4是氢且y6、y7、y8、y9和y10各自是氢时，各个y5是氘。在式a的一个实施方案中，各个y2是相同的，各个y3是相同的，并且各个y5是相同的。在该实施方案的一个方面，各个y2是氘。在进一步的方面，各个y3是氘。在另一进一步的方面，各个y3是氢。在该实施方案的另一方面，各个y2是氢。在进一步的方面，各个y3是氘。在另一进一步的方面，各个y3是氢。在任一前述方面的一个实施例中，y1是氘。在任一前述方面的另一实施例中，y1是氢。在任一前述方面的更特定的实施例中，y1是氘，y4是氘，并且各个y5是氘。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氘，y4是氘，并且各个y5是氢。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氘，y4是氢，并且各个y5是氢。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氢，并且各个y5是氢。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氢，并且各个y5是氘。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氘，并且各个y5是氘。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氘，并且各个y5是氢。在一个实施方案中，y6是氘。在该实施方案的一个方面，y7和y8各自是氘。在该实施方案的另一方面，y7和y8各自是氢。在一个实施方案中，y6是氢。在该实施方案的一个方面，y7和y8各自是氘。在该实施方案的另一方面，y7和y8各自是氢。本发明的一种实施方案提供了一种式i的化合物：或其药学上可接受的盐，其中：y1选自氢和氘；各个y2独立地选自氢和氘，条件是连接到共同的碳上的各y2是相同的；各个y3独立地选自氢和氘，条件是连接到共同的碳上的各y3是相同的；y4选自氢和氘；各个y5是相同的并且选自氢和氘；并且y6、y7和y8各自独立地选自氢和氘；条件是当y1是氢、各个y2和各个y3是氢、y4是氢且y6、y7和y8各自是氢时，各个y5是氘。在一个实施方案中，各个y2是相同的，各个y3是相同的，并且各个y5是相同的。在该实施方案的一个方面，各个y2是氘。在进一步的方面，各个y3是氘。在另一进一步的方面，各个y3是氢。在该实施方案的另一方面，各个y2是氢。在进一步的方面，各个y3是氘。在另一进一步的方面，各个y3是氢。在任一前述方面的一个实施例中，y1是氘。在任一前述方面的另一实施例中，y1是氢。在任一前述方面的更特定的实施例中，y1是氘，y4是氘，并且各个y5是氘。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氘，y4是氘，并且各个y5是氢。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氘，y4是氢，并且各个y5是氢。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氢，并且各个y5是氢。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氢，并且各个y5是氘。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氘，并且各个y5是氘。在任一前述方面的另一更特定的实施例中，y1是氢，y4是氘，并且各个y5是氢。在一个实施方案中，y6是氘。在该实施方案的一个方面，y7和y8各自是氘。在该实施方案的另一方面，y7和y8各自是氢。在一个实施方案中，y6是氢。在该实施方案的一方面，y7和y8各自是氘。在该实施方案的另一方面，y7和y8各自是氢。在一个实施方案中，该化合物为式i的化合物，其中y6、y7和y8各自是氢，并且该化合物选自表1(如下)所列的任一化合物(cmpd)：表1:式i的示例性实施方案或其药学上可接受的盐，其中任何不被指定为氘的原子以其天然同位素丰度存在。在一个实施方案中，该化合物为式i的化合物，其中y6、y7和y8各自是氘，并且该化合物选自表2(如下)所列的任一化合物(cmpd)：表2:式i的示范实施方案或其药学上可接受的盐，其中任何不被指定为氘的原子以其天然同位素丰度存在。在另一组实施方案中，在上述任一实施方案中任何不被指定为氘的原子以其天然同位素丰度存在。下列化合物可用于制备本发明的各种化合物：以及或其盐，其中任何不被指定为氘的原子以其天然同位素丰度存在。式i或式a的化合物的合成可以容易地由普通技能的合成化学工作者参考本文中公开的示例性合成和实施例来实现。与用来制备式i化合物及其中间体的方法类似的相关方法公开在，例如美国专利7,598,257和organicletters,2009,11(9):1999-2009中。可以利用相应的氘化的和任选其他含同位素的试剂和/或中间体以合成本文中描述的化合物或援用本
技术领域：
：已知用于将同位素原子引入化学结构的标准合成方案来执行这样的方法。示例性合成式i或式a的化合物可以通过类似于美国专利7,598,257和organicletters,2009,11(9):1999-2009中展示的那些合成的方式使用合适的氘化原料来制备。式i或式a的化合物还可以通过如下所示的方案来制备。方案1：式i的化合物的制备方案1公开了式i的化合物的示例性制备，其中y1、各个y2和各个y3是氘，并且y4、各个y5、y6、y7和y8是氢。以类似于在wo2010/083283中描述的方式，市售的4-氯-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶11(aldrich)经氢化钠和氯化sem处理得到12，其与市售的13反应得到14。代替11，4-溴-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶也可以被用于第一步中以提供sem保护的4-溴-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶(类似于12)，其可以与13反应以得到14。14与如下面的方案2a中所公开的制备的15的反应是通过与lin,q.等org.lett.2009,11,1999中所描述的类似的方式来进行以得到16。该反应在如lin,q等描述的制备的手性配体27的存在下进行。16通过用nh4oh和i2处理而转化为17。17的sem保护基团随后用libf4和nh4oh去保护而给出式i的化合物。方案2a：化合物15的制备如方案2a所示，市售的18用鏻叶立德20和dcl/d2o处理以生成19,其用20和dibal-h处理以得到15。方案2b：化合物23的制备方案2c：化合物26的制备还可以制备类似15的化合物。例如，如方案2b所示，市售的21可以通过与方案2a中公开的类似方式转化为23。再如，如方案2c所示，市售的24可以通过与方案2a和方案2b中公开的类似方式转化为26。23可以通过与方案1中公开的类似方式转化为式i的化合物，其中y1和各个y3是氘，并且y4、各个y2、各个y5、y6、y7和y8是氢。同样地，26可以通过与方案1中公开的类似方式转化为式i的化合物，其中y1和各个y2是氘，并且y4、各个y3、各个y5、y6、y7和y8是氢。如上所示的特定途径和化合物并不意图是限制性的。不管是不是通过相同的变量名(即，r1、r2、r3等)进行标识，本文图解中的化学结构描绘了用本文化合物式中相应位置的化学基团定义(部分，原子等)在此进行适当限定的变量。在用于合成另一种化合物的化合物结构中化学基团的适合性在本领域普通技术人员的知识范围之内。合成式i或式a的化合物及其合成前体(包括在本文图解中没有明确显示的路径中的那些)的其他方法在本领域普通技能的化学工作者的手段范围之内。可用于合成可适用化合物的合成化学转化和保护基方法(保护和去保护)是本领域已知的，并包括，例如，描述在下列文献中的那些方法：larockr,comprehensiveorganictransformations,vchpublishers(1989)；greene,tw等,protectivegroupsinorganicsynthesis,3rded.,johnwileyandsons(1999)；fieser,l等,fieserandfieser’sreagentsfororganicsynthesis,johnwileyandsons(1994)；和paquette,l编著,encyclopediaofreagentsfororganicsynthesis,johnwileyandsons(1995)及其后续版本。本发明设想的取代基和变量的组合只是那些导致形成稳定化合物的组合。组合物本发明还提供无热原的药物组合物，包含有效量的式i或式a的化合物(例如包括本文所述式的任一种)或所述化合物的药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。所述载体在与制剂的其他成分相容以及，在药学上可接受的载体的情况下，在用于药物中的量下不会对其接受者有害的意义上是“可接受的”。可用于本发明的药物组合物的药学上可接受的载体、辅剂和介质包括但是不限于：离子交换剂，氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白例如人血清白蛋白、缓冲物质例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐，胶体氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。如果需要的话，可以通过本
技术领域：
：公知的方法提高药物组合物中本发明化合物的溶解度和生物利用度。一种方法包括在制剂中使用脂质赋形剂。参见“orallipid-basedformulations:enhancingthebioavailabilityofpoorlywater-solubledrugs(drugsandthepharmaceuticalsciences)”davidj.hauss主编，informahealthcare,2007；和“roleoflipidexcipientsinmodifyingoralandparenteraldrugdelivery:basicprinciplesandbiologicalexamples”kishorm.wasan主编，wiley-interscience,2006。提高生物利用度的另一种已知方法是使用任选与泊洛沙姆(例如lutroltm和pluronictm(basfcorporation))或氧化乙烯和氧化丙烯嵌段共聚物一起配制的无定形形式的本发明化合物。参见美国专利7,014,866及美国专利公布20060094744和20060079502。本发明的药物组合物包括适合于口服、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内和真皮内)施用的那些药物组合物。在某些实施方案中，本文结构式的化合物透皮施用(例如，使用透皮贴片或离子电渗技术)。其他制剂可以方便地提供为单位剂型，例如片剂、持续释放型胶囊和在脂质体中，并可以通过药学领域中公知的任何方法来制备。参见，例如，remington:thescienceandpracticeofpharmacy,lippincottwilliams&wilkins,baltimore,md(第20版，2000)。这样的制备方法包括将准备施用的分子与构成一种或多种辅助成分的成分(例如载体)进行结合的步骤。通常，通过将活性成分与液体载体、脂质体或细分的固体载体或两者均匀和紧密地结合，然后如有必要的话，对产物成形来制备组合物。在某些实施方式中，所述化合物口服施用。适合口服施用的本发明组合物可以以离散的单位例如各自含有预定量活性成分的胶囊、扁囊或片剂；粉末或颗粒；水性液体或非水性液体中的溶液或悬液；水包油型液体乳剂；油包水型液体乳剂；填充脂质体；或作为大丸剂等存在。软明胶胶囊可以用于包含这样的悬液，其可以有利地提高化合物吸收率。在口服使用的片剂情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。润滑剂例如硬脂酸镁也是通常添加的。对于以胶囊形式口服给药而言，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服施用水性悬液时，活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，可以添加某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。适合于口服施用的组合物包括在调味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含所述成分的糖锭剂和在惰性基质(例如明胶和甘油或者蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的软锭剂。适合胃肠外施用的组合物包括水性和非水性的无菌注射液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使得制剂与目标接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性的无菌悬液，其可以包含悬浮剂和增稠剂。所述制剂可以提供在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下，只需要在即将使用之前添加无菌的液体载体，例如注射用水。可以从无菌的粉末、颗粒和片剂制备即时注射溶液和悬液。这样的注射溶液可以是无菌的水性或油性注射悬液的形式。这种悬液可以按照本领域已知的技术，利用适当的分散或润湿剂(例如吐温80)和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在胃肠外可接受的非毒性稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受介质和溶剂包括甘露糖醇、水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。对此，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酸酯或甘油二酸酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物，可用于制备注射剂，以及天然的药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬液也可以包含长链醇稀释剂或分散剂。本发明的药物组合物可以采用供直肠给药的栓剂形式施用。这些组合物可以通过将本发明的化合物与适当的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固体但是在直肠温度下是液体，因此在直肠中熔化以释放出活性组分。这样的材料包括，但是不限于可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。本发明的药物组合物可以通过鼻用气溶胶或吸入进行施用。这样的组合物按照药物制剂
技术领域：
：公知的技术来制备，并可以使用苯甲醇或其他适合的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、氟烃和/或该
技术领域：
：已知的其他增溶或分散剂制备成盐水的溶液。参见，例如，rabinowitzjd和zaffaroniac，美国专利6,803,031，已转让给alexzamoleculardeliverycorporation。当所需的治疗涉及局部应用易达到的区域或器官时，本发明的药物组合物的局部施用尤其有用。对于皮肤局部的局部应用来说，药物组合物应该用含有悬浮或溶解在载体中的活性组分的适合的油膏来配制。用于局部施用本发明化合物的载体包括但是不限于：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯-聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，所述药物组合物可以用含有悬浮或溶解在载体中的活性化合物的洗液或乳霜配制。适合的载体包括但是不限于：矿物油、单硬脂酸失水山梨糖醇、聚山梨酸酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。本发明的药物组合物也可以通过直肠栓剂制剂或以适合的灌肠制剂局部应用于下部肠道。本发明还包括局部透皮贴片和离子电渗施用。本治疗剂的应用可以是局部的，以便在目的位点施用。可以使用各种技术在目的位点提供本组合物，例如注射、使用导管、套管针、抛射体、普卢兰尼克凝胶、支架、持续药物释放聚合物或提供用于到达内部的其他装置。因此，根据再另一个实施方案，本发明化合物可被加入组合物中以用于涂覆可植入的医疗装置，例如假体、人工瓣膜、血管移植物、支架或导管。经涂层的可植入装置的适当涂层和一般制备是本领域已知的并在美国专利6,099,562；5,886,026和5,304,121中例示说明。涂层通常是生物相容的聚合材料，例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己酸内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-乙酸乙烯酯及其混合物。所述涂层可任选进一步由适当的氟硅氧烷、多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合的外涂层覆盖，从而赋予组合物控制释放特性。用于侵入性装置的涂层被包括在药学上可接受的载体、辅剂或介质的定义内，如本文中所使用的那些术语。根据另一个实施方案，本发明提供涂覆可植入医疗装置的方法，包括使所述装置与上面描述的涂层组合物接触的步骤。本领域技术人员显而易见的是装置的涂覆在植入哺乳动物中之前发生。根据另一个实施方案，本发明提供浸渍可植入药物释放装置的方法，包括使所述药物释放装置与本发明的化合物或组合物接触的步骤。可植入药物释放装置包括但不限于可生物降解的聚合物胶囊或弹丸、不可降解的可扩散的聚合物胶囊和可生物降解的聚合物薄片。根据另一个实施方案，本发明提供涂有本发明化合物或含有本发明化合物的组合物的可植入医疗装置，以使得所述化合物具有治疗活性。根据另一个实施方案，本发明提供浸渍或含有本发明的化合物或包含本发明化合物的组合物的可植入药物释放装置，以使得所述化合物从所述装置中释放并且是治疗活性的。当器官或组织因为从患者移除而可接近时，这种器官或组织可以浸浴在含有本发明组合物的介质中，本发明的组合物可以涂布在器官上或本发明组合物可以以任何其他方便的方式施加。在另一个实施方案中，本发明的组合物进一步包含第二治疗剂。所述第二治疗剂可以选自任何已知当与具有和卢索替尼相同的作用机制的化合物一起施用时具有或显示有利性质的化合物或治疗剂。这些试剂包括显示为可与卢索替尼结合使用的那些。优选地，所述第二治疗剂是可用于治疗或预防选自以下的疾病或状况的试剂：骨髓纤维化(包括原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症、真性红细胞增多症后骨髓纤维化、慢性特发性骨髓纤维化、原发性血小板增多症后骨髓纤维化以及原发性血小板增多症)、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、银屑病和斑秃。在一个实施方案中，所述第二治疗剂选自来那度胺、帕比司他、卡培他滨、依西美坦及其组合。在另一个实施方案中，本发明提供本发明化合物和一种或多种上述任何第二治疗剂的单独剂型，其中该化合物与第二治疗剂彼此相关联。本文所使用的术语“彼此相关联”是指单独剂型被一起包装或者以另外的方式彼此相连从而容易理解该单独剂型意图一起销售和施用(彼此相隔少于24小时之内顺序地施用或同时地施用)。在本发明药物组合物中，本发明化合物以有效量存在。如本文所使用的，术语“有效量”是指当以正确的给药方案施用时足以治疗(治疗性或者预防性地)目标病症的量。用于动物和人的剂量(基于毫克每平方米体表面积)的相互关系被描述于freireich等,(1966)cancerchemother.rep50:219中。体表面积可从患者的身高和体重近似地确定。参见，例如，scientifictables,geigypharmaceuticals,ardsley,n.y.,1970,537。在一个实施方案中，本发明化合物的有效量范围可以从1mg到500mg，例如5mg到100mg，例如5mg到50mg。范围的实例为从40mg到50mg，从25mg到40mg，从25mg到50mg，从20mg到40mg，从20mg到50mg,从10mg到25mg,从10mg到20mg,从5mg到25mg,从5mg到20mg，以及从5mg到10mg。在一个实施方案中，10mg、20mg、40mg和50mg的剂量每天施用一次。在一个实施方案中，5mg、10mg、20mg、40mg和50mg的剂量每天施用两次。如本领域技术人员认识到的，有效剂量也会变化，这取决于所治疗的疾病、疾病的严重程度、给药的途径、受试者的性别、年龄和总体健康状况、赋形剂的使用、与其他治疗处理方法共用如使用其他试剂的可能性以及主治医生的判断。例如，选择有效剂量的指导可通过参考卢索替尼的规定信息来确定。对于包含第二治疗剂的药物组合物，第二治疗剂的有效量为通常用于仅使用该药剂的单一疗法的剂量的约20％到100％。优选地，有效量为正常单一疗法剂量的约70％到100％。这些第二治疗剂的正常单一疗法剂量是本领域技术人员公知的，例如参见wells等编著,pharmacotherapyhandbook,第2版,appletonandlange,stamford,conn.(2000)；pdrpharmacopoeia,tarasconpocketpharmacopoeia2000,deluxeedition,tarasconpublishing,lomalinda,calif.(2000)，该参考文献各以引用方式全文合并于此。预期以上提及的一些第二治疗剂将与本发明化合物协同发挥作用。当这种情况发生时，将允许第二治疗剂和/或本发明化合物的有效剂量相对于单一疗法所需的剂量降低。这具有使第二治疗剂或本发明化合物的毒性副作用最小化、效力的协同改善、改善的施用或使用方便性和/或化合物制备或制剂的整体费用降低的优点。治疗方法在另一个实施方案中，本发明提供了一种抑制细胞中janus相关激酶(jak)jak1和jak2中的一个或多个的方法，包括使细胞与一种或多种本文中式i或式a的化合物或其药学上可接受的盐相接触。根据另一个实施方案，本发明提供了在需要的受试者中治疗用卢索替尼有益地治疗的疾病的方法，包括对该受试者施用有效量的本发明的化合物或组合物的步骤。在一个实施方案中，该受试者是需要这种治疗的患者。这类疾病是本领域熟知的，并在下述(但不限于)专利中公开：美国专利7,598,257。这类疾病包括但不限于涉及免疫系统的疾病，包括例如器官移植排斥反应(例如同种异体移植排斥和移植物抗宿主病)；自身免疫性疾病如多发性硬化症、类风湿性关节炎、幼年型关节炎、i型糖尿病、狼疮、银屑病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、重症肌无力、免疫球蛋白肾病、自身免疫性甲状腺疾病；过敏性病症如哮喘、食物过敏、过敏性皮炎和鼻炎；病毒性疾病如爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、乙型肝炎、丙型肝炎、hiv、htlv1、水痘-带状疱疹病毒(vzv)和人乳头瘤病毒(hpv)；皮肤疾病如银屑病(例如寻常型银屑病)、过敏性皮炎、皮疹、皮肤刺激、皮肤致敏反应(例如接触性皮炎或过敏性接触性皮炎)；癌症，包括那些以实体肿瘤为特征的癌症(例如前列腺癌、肾癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、头颈部的癌症、甲状腺癌、胶质母细胞瘤、卡波济氏肉瘤、卡斯尔曼病、黑色素瘤)、血液癌症(如淋巴瘤、白血病如急性淋巴细胞性白血病或多发性骨髓瘤)和皮肤癌如皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)和皮肤b细胞淋巴瘤(其实例包括赛扎瑞综合症和蕈样真菌病；骨髓增生性疾病(mpd)如真性红细胞增多症(pv)、原发性血小板增多症(et)、髓样化生骨髓纤维化(mmm)、慢性粒单核细胞性白血病(cmml)、嗜酸性粒细胞增多综合征(hes)、系统性肥大细胞病(smcd)；炎症和炎性疾病如眼部炎症性疾病(例如虹膜炎、葡萄膜炎、巩膜炎、结膜炎或相关的疾病)、呼吸道的炎症性疾病(例如上呼吸道包括鼻、鼻窦的炎症性疾病，如鼻炎或鼻窦炎，或下呼吸道的炎症性疾病包括支气管炎、慢性阻塞性肺病等)、炎性肌病如心肌炎；全身炎症反应综合征(sirs)和脓毒性休克；缺血再灌注损伤或与炎性缺血性事件相关的疾病或状况如中风或心脏骤停；厌食症；恶病质；疲劳如由癌症引起的或与癌症相关的疲劳；再狭窄；硬化性皮炎(sclerodermitis)；纤维化；与缺氧或星形胶质细胞增生相关的状况，例如糖尿病性视网膜病变、癌症或神经退行性疾病；痛风；由于例如良性前列腺肥大或良性前列腺增生的前列腺增大。在一个特定实施方案中，本发明的方法被用来在需要的受试者中治疗选自骨髓纤维化，包括原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症后骨髓纤维化、原发性血小板增多症后骨髓纤维化，原发性血小板增多症或其组合；胰腺癌；前列腺癌；乳腺癌；白血病；非霍奇金淋巴瘤；多发性骨髓瘤；银屑病及其组合的疾病或状况。在另一个特定实施方案中，本发明的方法被用来在需要的受试者中治疗选自骨髓纤维化，包括原发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症后骨髓纤维化和原发性血小板增多症后骨髓纤维化的疾病或状况。需要这种治疗的受试者的鉴别可通过受试者或健康护理专业人员的判断进行，且可以是主观的(例如意见)或客观的(可通过检验或诊断方法测量的)。在另一个实施方案中，任何以上的治疗方法包括进一步的对需要的受试者共同施用一种或多种第二治疗剂的步骤。第二治疗剂可以选自任何已知可用于与卢索替尼共同施用的第二治疗剂。第二治疗剂的选择还取决于待治疗的特定疾病或状况。本发明方法中可采用的第二治疗剂的实例是上述的联合用于包含本发明的化合物和第二治疗剂的组合物中的那些。特别地，本发明的联合疗法包括对需要的受试者共同施用式i或式a的化合物和第二治疗剂来治疗下列状况(特定的第二治疗剂显示于该适应症后面的括号内)：骨髓纤维化(来那度胺或帕比司他)；胰腺癌(卡培他滨)和乳腺癌(依西美坦)。本发明所使用的术语“共同施用”是指第二治疗剂可作为单一剂型(例如含有本发明化合物和上面描述的第二治疗剂的本发明组合物)的部分与本发明化合物一起施用，或作为单独的多剂型与本发明化合物一起施用。或者，其他药剂可在施用本发明化合物之前、同时或之后施用。在这种联合疗法的治疗中，本发明化合物和第二治疗剂都通过常规方法施用。将含有本发明化合物和第二治疗剂的本发明组合物施用于患者不排除在治疗过程中的另一时间单独施用该相同的治疗剂、任何其他第二治疗剂或本发明的任何化合物。这些第二治疗剂的有效量是本领域技术人员所公知的，且给药指导可在本文中提及的专利和公开的专利申请以及wells等编著,pharmacotherapyhandbook,第2版,appletonandlange,stamford,conn.(2000)；pdrpharmacopoeia,tarasconpocketpharmacopoeia2000,deluxeedition,tarasconpublishing,lomalinda,calif.(2000)和其他医学文章中找到。然而，本领域技术人员很容易确定第二治疗剂的最佳有效量范围。在其中第二治疗剂施用于受试者的本发明实施方式中，本发明化合物的有效量小于不施用第二治疗剂的情况下的其有效量。在另一个实施方式中，第二治疗剂的有效量小于不施用本发明化合物的情况下的其有效量。以此方式，可最小化与任何一种药剂的高剂量相关的不希望的副作用。其他可能的优点(包括但不限于改进的给药方案和/或降低的药物成本)对本领域技术人员而言是显而易见的。在再另一方面，本发明提供了式i或式a的化合物单独或与一种或多种上述第二治疗剂一起在制备作为单一组合物或单独剂型用于在受试者中治疗或预防如上所述疾病、失调或症状的药物中的用途。本发明的另一方面是式i或式a的化合物用于在受试者中治疗或预防本文描述的疾病、失调或症状。实施例实施例1.(r)-3-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基)-3-(2,2,5,5-d4-环戊基)丙腈(化合物107)的合成。方案3.化合物107的制备步骤1.2,2,5,5-d4-环戊烷-1,1-二羧酸二乙酯(32)。在丙二酸二乙酯(6.57ml,43.3mmol)的乙醇(40ml)溶液中加入21重量％的乙醇钠的乙醇溶液(32.3ml,86.6mmol)，随后加入1,1,4,4-四氘-1,4-二溴丁烷(31,5.53ml,45.5mmol,cdnisotopes,98原子％氘)。所得溶液在回流下搅拌2小时，然后冷却至室温并用过量水稀释。随后通过蒸馏除去大部分乙醇，且所得水溶液用乙酸乙酯(3x75ml)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩以得到黄色油状物的32，其不经纯化而进入后续步骤(9.45g,100％)。步骤2.2,2,5,5-d4-环戊烷-1-羧酸(33)。向32(9.45g,43.3mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入5m的氢氧化钠溶液(20ml)。随后再加入另外的水(15ml)，反应在回流下搅拌3小时。冷却至室温后，该反应用过量水稀释并通过蒸馏除去大部分乙醇。用1n盐酸使该水溶液显酸性(ph<2)，随后用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩。所得浅橙色固体被转移到耐压烧瓶中，并加入水(140ml)。该耐压烧瓶被密封，反应在160℃下搅拌15小时，然后冷却至室温。该反应用1n盐酸稀释并用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩以得到琥珀色油状的33(4.37g,86％)，其不经纯化而使用。步骤3.2,2,5,5-d4-n-甲氧基-n-甲基环戊烷甲酰胺(34)。0℃下，向33(4.37g,37.0mmol)的乙腈(60ml)溶液中加入n,o-二甲基羟胺的盐酸盐(4.33g,44.4mmol)、tbtu(12.5g,38.9mmol)和n,n-二异丙基乙胺(19.0ml,111mmol)。反应在室温下搅拌15小时，然后用1n盐酸稀释并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机相合并，用饱和nahco3洗涤，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩。所得产物用柱色谱(sio2,0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化以得到透明油状的34(2.22g,37％)。ms(esi)162.3[(m+h)+]。步骤4.2,2,5,5-d4-环戊烷-1-甲醛(35)。0℃下，向34(2.22g,13.8mmol)的thf(50ml)溶液中逐滴加入1m的lialh4的thf(24.8ml,24.8mmol)溶液。反应在0℃下搅拌1小时，然后通过顺序滴加水(940μl)、15％的naoh(940μl)和水(2.82ml)来淬灭。淬灭的反应物在室温下搅拌30分钟，然后通过过滤并减压浓缩。所得油状物用1n盐酸稀释并用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩以得到透明油状物的35(850mg,60％)，其不经纯化而使用。步骤5.3-(2,2,5,5-d4-环戊基)丙烯腈(36)。0℃下，向1m的叔丁醇钾的thf(8.74ml,8.74mmol)溶液中逐滴加入氰甲基膦酸二乙酯(1.48ml,9.15mmol)的thf(12ml)溶液。反应被加温至室温，搅拌15分钟，再冷却至0℃。醛35(850mg,8.32mmol)作为thf(3ml)的溶液逐滴加入。反应在室温下搅拌48小时，然后用过量的水稀释并用二乙醚(1x50ml)和乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩以得到浅橙色油状的36(1.17g,>100％)，其不经纯化而使用。步骤6.(+/-)-(4-(1-(2-氰基-1-(2,2,5,5-d4-环戊基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯((+/-)38)。向37(400mg,1.34mmol,在lin,q.等org.lett.,2009,11,1999-2002中描述的制备)的乙腈(10ml)溶液中加入36(418mg,3.34mmol)，然后加入dbu(421μl,2.81mmol)。反应在室温下搅拌15小时，然后减压浓缩。所得粗混合物用水稀释并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机层合并，用1n盐酸洗涤,干燥(na2so4),过滤并减压浓缩。先用正相柱色谱(sio2,0-60％乙酸乙酯/己烷)纯化，再用反向柱色谱(c18,含有0.1％甲酸的5-70％乙腈/水)纯化得到白色泡沫的(+/-)38(68mg,12％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz)8.84(s,1h),8.79(s,1h),8.40(s,1h),7.74(d,j＝3.8hz,1h),7.12(d,j＝3.8hz,1h),6.24(s,2h),4.54(td,j＝9.7,4.3hz,1h),3.30-3.15(m,2h),2.39(d,j＝9.8hz,1h),1.68–1.36(m,4h),1.08(s,9h)；ms(esi)425.3[(m+h)+].步骤7.(r)-(4-(1-(2-氰基-1-(2,2,5,5-四氘代环戊基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯((r)-38)。外消旋化合物(+/-)38(62mg)以30mg/ml的浓度溶解于乙腈中，并以每次注射500μl的(+/-)38溶液在daicelchiralpakad柱(20x250mm,10μm)上使用等度方法通过制备型hplc进行手性拆分：30％异丙醇(+0.1％二乙胺)/70％己烷(+0.1％二乙胺)，流速为17ml/min。在这些情况下，以在15.0分钟处洗脱(s)-38和在20.2分钟处洗脱(r)-38实现基线分离。含有各对映异构体的级分合并和浓缩，产生28mg的(s)-38的无色薄膜和29mg的(r)-38的无色薄膜。步骤8.(r)-3-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基)-3-(2,2,5,5-四氘代环戊基)丙腈(化合物107)。化合物(r)-38(28mg,0.066mmol,1当量)在20ml的闪烁管中溶解于甲醇(1ml)中。加入氢氧化钠(0.13ml的1m溶液,0.13mmol,2当量)，且反应在室温下搅拌18小时。反应用水(10ml)和盐水(20ml)稀释。该水性混合物用乙酸乙酯(2x20ml)萃取。合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发。粗制物质用analogix自动化色谱系统纯化，用二氯甲烷中的0-6％甲醇洗脱。产物级分合并并蒸发，产生白色泡沫的化合物107。手性纯度为>99％ee(chiralpakod4.6x250mm,10um,70％(己烷+0.1％二乙胺)+30％(异丙醇+0.1％二乙胺),1ml/min,254nm保留时间＝8.85min)。实施例2.(r)-3-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基)-3-(3,3,4,4-d4-环戊基)丙腈(化合物103)的合成。方案4.化合物103的制备步骤1.3,3,4,4-d4-环戊烷-1,1-二羧酸二乙酯(40)。向丙二酸二乙酯(3.25ml,21.4mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入21重量％的乙醇钠的乙醇溶液(16.0ml,42.8mmol)，然后加入2,2,3,3-四氘代-1,4-二溴丁烷(39,4.95g,22.5mmol,cdnisotopes,98原子％氘)。所得溶液在回流下搅拌2小时，然后冷却至室温并用过量水稀释。随后通过蒸馏除去大部分乙醇，且所得水溶液用乙酸乙酯(3x75ml)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，干燥(na2so4),过滤并减压浓缩以得到黄色油状物的40，其不经纯化而进入后续步骤(4.67g,100％)。步骤2.3,3,4,4-d4-环戊烷-1-羧酸(41)。向40(4.67g,21.4mmol)的乙醇(10ml)溶液中加入5m的氢氧化钠溶液(10ml)。随后再加入另外的水(10ml)，且反应在回流下搅拌3小时。冷却至室温后，该反应用过量水稀释并通过蒸馏除去大部分乙醇。用1n盐酸使该水溶液呈酸性(ph<2)，随后用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4),过滤并减压浓缩。所得浅橙色固体被转移到耐压烧瓶中，并加入水(70ml)。该耐压烧瓶被密封，且反应在160℃下搅拌15小时，然后冷却至室温。该反应用1n盐酸稀释并用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4),过滤并减压浓缩以得到琥珀色油状的41(1.93g,76％)，其不经纯化而使用。步骤3.3,3,4,4-d4-n-甲氧基-n-甲基环戊烷甲酰胺(42)。0℃下，向41(1.93g,16.3mmol)的乙腈(30ml)溶液中加入n,o-二甲基羟胺盐酸盐(1.91g,19.6mmol)、tbtu(5.50g,17.1mmol)和n,n-二异丙基乙胺(8.52ml,48.9mmol)。反应在室温下搅拌15小时，然后用1n盐酸稀释并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机相合并，用饱和nahco3洗涤，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩。所得产物用柱色谱(sio2,0-40％丙酮/己烷)纯化以得到透明油状的42(1.47g,56％)。ms(esi)162.3[(m+h)+]。步骤4.3,3,4,4-d4-环戊烷-1-甲醛(43)。0℃下，向42(1.47g,9.12mmol)的thf(35ml)溶液中逐滴加入1m的lialh4的thf(16.4ml,16.4mmol)溶液。反应在室温下搅拌1小时，然后在0℃下通过顺序滴加水(623μl)、15％的naoh(623μl)和水(1.87ml)来淬灭。淬灭的反应在室温下搅拌30分钟，然后通过过滤并减压浓缩。所得油状物用1n盐酸稀释并用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩以得到透明油状的43(767mg,82％)，其不经纯化而使用。步骤5.3-(3,3,4,4-d4-环戊基)丙烯腈(44)。0℃下，向氰基甲基膦酸二乙酯(0.607ml,3.75mmol)的thf(10ml)溶液中逐滴加入1m的叔丁醇钾的thf(3.75ml,3.75mmol)溶液。反应在0℃下搅拌1小时。醛43(767mg,7.51mmol)的thf(3ml)溶液被逐滴加入。反应在室温下搅拌15小时，然后用过量的1:1水/盐水稀释并用mtbe(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩。所得油状物溶解在ch2cl2(100ml)中并用nahso3(3x25ml)洗涤。有机相被干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩后得到浅橙色油状的44(537mg,57％)，其不经纯化而使用。步骤6.(+/-)-(4-(1-(2-氰基-1-(3,3,4,4-d4-环戊基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯((+/-)45)。向37(514mg,1.72mmol,如lin,q.等org.lett.,2009,11,1999-2002中描述的制备)的乙腈(15ml)溶液中加入44(537mg,4.29mmol)，然后加入dbu(540μl,3.61mmol)。反应在室温下搅拌15小时，然后减压真空下浓缩。所得粗混合物用水稀释并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机层合并，用1n盐酸洗涤,干燥(na2so4),过滤并减压浓缩。用正相柱色谱(sio2,0-60％乙酸乙酯/己烷)纯化后得到白色泡沫的(+/-)45(368mg,50％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ8.84(s,1h),8.79(s,1h),8.40(s,1h),7.75(d,j＝3.7hz,1h),7.12(d,j＝3.7hz,1h),6.24(s,2h),4.53(td,j＝9.7,4.2hz,1h),3.32–3.14(m,2h),2.41(q,j＝8.7hz,1h),1.79(dd,j＝12.6,7.6hz,1h),1.36–1.11(m,3h),1.08(s,9h).；ms(esi)425.2[(m+h)+]。步骤7.(r)-(4-(1-(2-氰基-1-(3,3,4,4-d4-环戊基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯((r)-45)。外消旋化合物(+/-)45(151mg)以30mg/ml的浓度溶解于乙腈中，并以每次注射1000μl的(+/-)45溶液在daicelchiralpakad柱(20x250mm,10μm)上用等度方法通过制备型hplc进行手性拆分：30％异丙醇(+0.1％二乙胺)/70％己烷(+0.1％二乙胺)，流速为17ml/min。在这些情况下，以(s)-45在15.5分钟处洗脱和(r)-45在20.7分钟处洗脱实现基线分离。含有各个对映异构体的级分单独地合并和浓缩以产生51mg的(s)-45的无色薄膜以及53mg的(r)-45的无色薄膜。步骤8.(r)-3-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基)-3-(3,3,4,4-d4-环戊基)丙腈(化合物103)。(r)-45(53mg,0.13mmol,1当量)在20ml的闪烁管中溶解于甲醇(2ml)中。加入氢氧化钠(0.25ml的1m溶液,0.25mmol,2当量)，反应混合物在室温下搅拌18小时。该反应混合物用水(10ml)和盐水(20ml)稀释。该水性混合物用乙酸乙酯(2x20ml)萃取。合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗物质用analogix自动化色谱系统纯化，用二氯甲烷中的0-6％甲醇洗脱。产物级分合并和蒸发以产生白色泡沫的化合物103，纯度为～90％，未完全去保护的羟甲基中间体为主要杂质。进一步的色谱分析无法进一步提高其纯度。该90％纯的物质被溶解于thf(2ml)中，并用几滴10％的含水氢氧化钠在40℃下处理8小时，导致完全转化为化合物103。该反应混合物用水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(2x10ml)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩成白色泡沫。该泡沫被溶解于最少的乙腈中，用水稀释，并冻干以给出白色固体的化合物103(14mg,35％产率)。手性纯度为>99％ee(chiralpakod4.6x250mm,10um,70％(己烷+0.1％二乙胺)+30％(异丙醇+0.1％二乙胺),1ml/min,254nm保留时间＝7.56min)。实施例3.(r)-3-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基)-3-(环戊基-d9)丙腈(化合物127)的合成。方案5.化合物127的制备步骤1.2,2,3,3,4,4,5,5-d8-环戊烷-1,1-二羧酸二乙酯(47)。向丙二酸二乙酯(6.24ml,41.1mmol)的乙醇(40ml)溶液中加入21重量％的乙醇钠的乙醇溶液(30.7ml,82.2mmol)，然后加入1,1,2,2,3,3,4,4-八氘代-1,4-二溴丁烷(46,9.67g,43.2mmol,cdnisotopes,98原子％氘)。所得溶液在回流下搅拌2小时，然后冷却至室温并用过量水稀释。随后通过蒸馏除去大部分乙醇，且所得水溶液用乙酸乙酯(3x75ml)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，干燥(na2so4),过滤并减压浓缩以得到黄色油状的47(9.12g,100％)，其不经纯化而进入后续步骤。步骤2.全氘代环戊烷-1-羧酸(48)。向47(9.12g,41.1mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入5m的氢氧化钠溶液(20ml)。随后再加入另外的水(15ml)，反应在回流下搅拌3小时。冷却至室温后，反应用过量水稀释并通过蒸馏除去大部分乙醇。用1n盐酸使该水溶液呈酸性(ph<2)，随后用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4),过滤并减压浓缩。所得浅橙色固体被转移到耐压烧瓶中，并加入d2o(120ml)。该耐压烧瓶被密封，且反应在160℃下搅拌15小时，然后冷却至室温。反应用1n盐酸稀释并用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4),过滤并减压浓缩以得到黄色油状的48(4.58g,90％)，其不经纯化而使用。步骤3.n-甲氧基-n-甲基(环戊烷-d9)甲酰胺(49)。0℃下，向48(4.58g,37.2mmol)的乙腈(60ml)溶液中加入n,o-二甲基羟胺盐酸盐(4.35g,44.6mmol)、tbtu(12.5g,39.1mmol)和n,n-二异丙基乙胺(19.4ml,112mmol)。反应在室温下搅拌15小时，然后用1n盐酸稀释并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机相合并，用饱和nahco3洗涤，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩。所得产物用柱色谱(sio2,0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化以得到透明油状的49(3.41g,55％)。ms(esi)167.2[(m+h)+]。步骤4.全氘代环戊烷-1-甲醛(50)。0℃下，向49(3.41g,20.5mmol)的thf(80ml)溶液中逐滴加入1m的lialh4的thf(37.0ml,37.0mmol)溶液。反应在室温下搅拌1小时，然后在0℃下通过顺序滴加d2o(1.41ml)、15％的naod/d2o(1.41ml)和d2o(4.23ml)来淬灭。该淬灭的反应在室温下搅拌30分钟，然后通过过滤并减压浓缩。所得油状物用1ndcl/d2o稀释并用二乙醚(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(mgso4)，过滤并减压浓缩以得到透明油状的50(1.79g,82％)，其不经纯化而使用。步骤5.3-(全氘代环戊基)丙烯腈(51)。0℃下，向氰基甲基膦酸二乙酯(1.35ml,8.34mmol)的thf(25ml)溶液中逐滴加入1m的叔丁醇钾的thf(8.34ml,8.34mmol)溶液。反应在0℃下搅拌1小时。然后醛50(1.79g,16.7mmol)的thf(5ml)溶液被逐滴加入。反应在室温下搅拌15小时，然后用过量的1:1水/盐水稀释并用mtbe(3x50ml)萃取。有机层合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩。有机相合并，干燥(na2so4)，过滤并减压浓缩以得到浅橙色油状的51(1.61g,74％)，其不经纯化而使用。步骤6.(+/-)-(4-(1-(2-氰基-1-(环戊基-d9)乙基)-1h-吡唑-4-基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯((+/-)52)。向37(619mg,2.07mmol,在lin,q.等org.lett.,2009,11,1999-2002中描述的制备)的乙腈(15ml)溶液中加入51(673mg,5.17mmol)，然后加入dbu(650μl,4.35mmol)。反应在室温下搅拌15小时，然后减压浓缩。所得粗混合物用水稀释并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。有机层合并，用1n盐酸洗涤,干燥(na2so4),过滤并减压浓缩。用正相柱色谱(sio2,0-60％乙酸乙酯/己烷)纯化得到白色泡沫的(+/-)52(447mg,50％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ8.84(s,1h),8.79(s,1h),8.39(s,1h),7.75(d,j＝3.7hz,1h),7.12(d,j＝3.7hz,1h),6.24(s,2h),4.53(dd,j＝9.6,4.2hz,1h),3.32–3.13(m,2h),1.08(s,9h).；ms(esi)430.3[(m+h)+]。步骤7.(r)-(4-(1-(2-氰基-1-(环戊基-d9)乙基)-1h-吡唑-4-基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基新戊酸酯((r)-52)。外消旋化合物(+/-)52(162mg)以30mg/ml的浓度溶解于乙腈中，并以每次注射1000μl的(+/-)52溶液在daicelchiralpakad柱(20x250mm,10μm)上用等度方法通过制备型hplc进行手性拆分：30％异丙醇(+0.1％二乙胺)/70％己烷(+0.1％二乙胺)，流速为17ml/min。在这些情况下，以(s)-52在15.4分钟处洗脱和(r)-52在20.5分钟处洗脱实现基线分离。含有各个对映异构体的级分单独合并和浓缩以产生61mg的(s)-52的无色薄膜以及63mg的(r)-52的无色薄膜。步骤8.(r)-3-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1h-吡唑-1-基)-3-(环戊基-d9)丙腈(化合物127)。(r)-52(60mg,0.14mmol,1当量)在20ml的闪烁管中溶解于甲醇(2ml)中。加入氢氧化钠(0.28ml的1m溶液,0.28mmol,2当量)，且反应混合物在室温下搅拌18小时。该反应混合物用水(10ml)和盐水(20ml)稀释。该水性混合物用乙酸乙酯(2x20ml)萃取。合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗物质用analogix自动化色谱系统纯化，用二氯甲烷中的0-6％甲醇/洗脱。产物级分合并和蒸发以产生白色泡沫的化合物127(34mg)，纯度为～90％，未完全去保护的羟甲基中间体为主要杂质。进一步的色谱分析无法进一步提高其纯度。90％纯的物质溶解于thf(2ml)中，并用几滴10％的含水氢氧化钠在40℃下处理8小时，导致完全转化为化合物127。该反应混合物用水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(2x10ml)萃取。合并后的有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩成白色泡沫。该泡沫被溶解于最少的乙腈中，用水稀释，并冻干以给出白色固体的化合物127(19mg,42％产率)。手性纯度为>99％ee(chiralpakod4.6x250mm,10um,70％(己烷+0.1％二乙胺)+30％(异丙醇+0.1％二乙胺),1ml/min,254nm保留时间＝7.55min)。实施例4.cyp3a4supersomestm中代谢稳定性的评估人cyp3a4supersomestm中化合物103、107和127的代谢稳定性的评估supersomestm分析。在dmso中制备受试化合物，化合物103、107、127和卢索替尼的10mm储备溶液。该10mm储备溶液在乙腈(acn)中稀释至15.6μm。人cyp3a4supersomestm(1000pmol/ml,购自bdgentesttmproductsandservices)在0.1m的磷酸钾缓冲液(ph7.4，含有3mm的mgcl2)中稀释至62.5pmol/ml。稀释的supersomes被一式三份添加到96-孔聚丙烯板的孔中。该15.6μm受试化合物的10μl等份被添加到所述supersomes中，且混合物被预热10分钟。通过加入预热的nadph溶液以引发反应。最终的反应体积为0.5ml，并且包含在0.1m的磷酸钾缓冲液(ph7.4，3mm的mgcl2)中的50pmol/ml的cyp3a4supersomestm、0.25μm的受试化合物以及2mm的nadph。该反应混合物在37℃下温育，并在0、5、10、20和30分钟时移取50μl等份，并添加到含有50μl具有内标的冰冷can的96-孔板中以停止反应。该板在4℃下贮存20分钟，此后100ml水被添加到板的孔中，之后离心以使沉淀的蛋白质成球。上清液被转移至另一个96-孔板中，并通过使用appliedbio-systemsapi4000质谱仪的lc-ms/ms来分析残留的母体量。数据分析:从ln(％残留的母体)对温育时间关系的线性回归斜率计算受试化合物的体外半衰期(t1/2值)：体外t1/2＝0.693/k，其中k＝-[％残留母体(ln)对温育时间的线性回归的斜率]。该实验的结果显示在表3和图1中。如表3所示，计算得到卢索替尼的半衰期为14.5分钟。相反，各化合物103、107和127在所述supersomes中更稳定，所计算的半衰期分别为16.9、17.9和32.0分钟。这代表化合物103的半衰期提高了17％，化合物107的半衰期提高了23％，而化合物127的半衰期提高了121％。表3:在人cyp3a4supersomestm中化合物103、107和127相对卢索替尼的代谢稳定性*％δ＝[(氘代物质)-(非氘代物质)](100)/(非氘代物质)实施例5.在人体肝脏微粒体中的代谢稳定性评价微粒体分析:人肝脏微粒体(20mg/ml)获自xenotech,llc(lenexa,ks)。还原形式的β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadph)、氯化镁(mgcl2)和二甲亚砜(dmso)购自sigma-aldrich。代谢稳定性的测定:在dmso中制备7.5mm的受试化合物储备溶液。该7.5mm的储备溶液用乙腈(acn)稀释至12.5-50μm。20mg/ml的人肝脏微粒体在0.1m的磷酸钾缓冲液(ph7.4,含有3mmmgcl2)中稀释至0.625mg/ml。该稀释的微粒体被一式三份添加到96-孔深孔聚丙烯板的孔中。12.5-50μm的受试化合物的10μl等份被添加到微粒体中，且混合物被预热10分钟。加入预热的nadph溶液以引发反应。最终的反应体积为0.5ml，并且包含在0.1m的磷酸钾缓冲液(ph7.4，3mm的mgcl2)中的0.5mg/ml人肝脏微粒体、0.25-1.0μm的受试化合物以及2mm的nadph。该反应混合物在37℃下温育，并在0、5、10、20和30分钟时移取50μl等份，添加到含有50μl具有内标的冰冷can的浅孔96-孔板中以停止反应。该板在4℃下贮存20分钟，此后100μl水被添加到板的孔中，之后离心以使沉淀的蛋白质成球。上清液被转移至另一个96-孔板中，并通过用appliedbio-systemsapi4000质谱仪的lc-ms/ms来分析残留的母体量。对非氘代的式i或式a的化合物以及阳性对照7-乙氧基香豆素(1μm)遵循同样的程序。一式三份进行测试。数据分析:从％残留的母体(ln)对温育时间关系的线性回归斜率计算受试化合物的体外t1/2：体外t1/2＝0.693/kk＝-[％残留母体(ln)对温育时间的线性回归的斜率]用微软excel软件进行数据分析。无需进一步说明，据信本领域的普通技术人员能够利用前面的描述和说明性的实施例来制备和使用本发明的化合物并且实施请求保护的方法。应该理解，上述的讨论和实施例只是展示了某些优选实施方案的详细说明。各种改进和等价物可以在不脱离本发明的精神和范围下做出，这对于本领域的普通技术人员将是显而易见的。当前第1页12当前第1页12