本发明属于药物化学领域，具体地，本发明涉及一类嘧啶并五元芳香环类化合物或其药学上可接受的盐、制备方法及其应用。本发明的嘧啶并五元芳香环类化合物可用于制备治疗与果蝇zeste基因增强子同源物1/2(ezh1/2)相关的疾病如恶性肿瘤等的药物。
背景技术：
表观遗传是指基因的核苷酸序列不发生改变，但基因表达却发生了可遗传的改变。这种现象在调节包括细胞增殖，分化，存活以及凋亡等过程中扮演着重要角色。表观遗传调控的一个重要机制是组蛋白共价修饰。在真核细胞中，dna包绕在组蛋白周围形成染色质的基本结构核小体。每一个核小体中各有两分子的h2a，h2b，h3和h4形成组蛋白八聚体。每个组蛋白的n端氨基酸末端会发生多种共价修饰，例如甲基化，乙酰化，磷酸化，泛素化等，从而控制基因的表达。催化组蛋白甲基化的酶被称为组蛋白甲基转移酶(hmts)。
多梳抑制复合物2，即prc2(polycombrepressivecomplex2)，是一种多蛋白复合体，具有催化组蛋白h3的27位赖氨酸(h3k27)甲基化的功能，从而造成相关基因的沉默。prc2的催化亚基为ezh1或ezh2，单独存在ezh1或ezh2没有催化功能，必须与eed(embryonicectodermdevelopment)和suz12(suppressorofzeste12homolog)结合之后才能发挥转甲基作用。ezh2在多种肿瘤(例如乳腺癌，结直肠癌，子宫内膜瘤，胃癌，肝癌，肾癌，肺癌，黑色素瘤，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌和膀胱癌等)细胞中高度表达，与肿瘤细胞的增殖，入侵，耐药和迁移等过程密切相关。
近年来，发现8-24％的非霍奇金淋巴瘤中ezh2发生了突变，如y641f，y641n，y641s，y641h，a677g和a687v等。与野生型的ezh2相比，这些突变体对组蛋白h3的27位赖氨酸的二甲基化和三甲基化催化功能增强。ezh2过度表达或者发生突变，均会引起h3的27位赖氨酸三甲基化产物(h3k27me3)水平的升高，高水平的h3k27me3对肿瘤细胞的增殖和存活起着重要作用。异常的ezh2活性导致肿瘤的发生发展，ezh2调控的多个目标基因是抑瘤基因，抑瘤基因的沉默可能是其中一个重要机制。通过sirna或者shrna下调ezh2或者用sah水解酶抑制剂3-deazaneplanocina(3-dznep)间接抑制ezh2可以明显降低肿瘤细胞的体外增殖和入侵以及体内肿瘤的生长。
ezh2在t细胞分化过程中也起到重要作用。ezh2降低th1/th2细胞因子的表达，如ifn-γ，il-4，il-5等，抑制th1/th2依赖的t细胞迁移，活化调节性t细胞。在肿瘤微环境中，通过ezh2抑制th1细胞中趋化因子如cxcl9和cxcl10的分泌，是肿瘤免疫逃逸的一个重要机制。
综上所述，目前本领域尚迫切需要研发出能够抑制野生型和/或突变型的ezh1/2的有效药物。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种嘧啶并五元芳香杂环类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药。
本发明的另一目的是提供一种制备嘧啶并五元芳香杂环类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药的方法。
本发明的另一目的是提供一种包含所述的嘧啶并五元芳香杂环类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药的药物组合物。
本发明的另一目的是提供所述的嘧啶并五元芳香杂环类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药的药物组合物在制备作为ezh1/2抑制剂的药物中的应用。
本发明第一方面，提供一种式i所示的嘧啶并五元芳香杂环类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药，
其中，
y和z各自独立地选自ch和n；
r1选自h、卤素、-nh2、-no2、取代或未取代的c1-c6烷基和取代或未取代的c1-c4烷氧基；
r2选自h、卤素、氰基和取代或未取代的c1-c6烷基；
w选自-o-、-s-、-nh-、-nch3-和-nch2ch3-；
a环为取代或未取代的4-7元饱和或不饱和碳环、或取代或未取代的4-7元饱和或不饱和杂环；所述的杂环包含1-2个选自o、n、s和p的杂原子；
x为cr4或氮原子；
r3和r4各自独立地选自：h、卤素、-cooh、-cn、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的6-10元芳基、取代或未取代的5-16元杂芳基、取代或未取代的4-16元饱和或不饱和环烃基、取代或未取代的4-20元饱和或不饱和杂环基、取代或未取代的c1-c6烷基羰基、取代或未取代的-c(o)(c1-c6烷氧基)、-c(o)(nrarb)、-nrarb、硼酸基、取代或未取代的c2-c8烯基、取代或未取代的c2-c8炔基、取代或未取代的c1-c6烷基砜基、取代或未取代的c1-c6烷基亚砜基和取代或未取代的c1-c6烷基巯基；其中，所述的杂芳基或杂环基包含1-3个选自n、o、s和p的杂原子；
ra、rb各自独立地选自：h、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的5-8元环烃基、取代或未取代的5-8元杂环基、取代或未取代的5-10元芳基和取代或未取代的5-10元杂芳基；或ra与rb与相连的n一起形成取代或未取代的4-8元杂环基；其中所述的杂环包含1-3个选自n、o、s和p的杂原子。
在另一优选例中，
y和z各自独立地选自ch和n；
r1选自h、卤素、-nh2、-no2、取代或未取代的c1-c6烷基和取代或未取代的c1-c4烷氧基；所述取代的取代基选自卤素、-nh2和-no2；
r2选自h、卤素、氰基和取代或未取代的c1-c6烷基；所述取代的取代基选自卤素；
w选自-o-、-s-、-nh-、-nch3-和-nch2ch3-；
a环为取代或未取代的4-7元饱和或不饱和碳环、或取代或未取代的4-7元饱和或不饱和杂环；所述的杂环包含1-2个选自o、n、s和p的杂原子；所述取代的取代基选自：被1-3个rx取代的c1-c4烷基、卤素、氰基、羟基、叔丁基氧羰基(boc)、被1-3个rx取代的c1-c4烷氧基、被1-3个rx取代的c1-c4烷基磺酰基、氨基、被1-3个rx取代的c1-c4烷基氨基、被1-3个rx取代的二c1-c4烷基氨基、被1-3个rx取代的c1-c4烷氧基羰基和被1-3个rx取代的c0-c4烷基羰基；其中rx选自h、卤素、羟基、c1-c4烷氧基、氨基、甲氨基、乙氨基和二甲氨基；
x为cr4或氮原子；r3和r4各自独立地选自：h、卤素、-cooh、-cn、取代或未取代的c1-c6烷基、取代或未取代的6-10元芳基、取代或未取代的5-16元杂芳基、取代或未取代的4-16元饱和或不饱和环烃基、取代或未取代的4-20元饱和或不饱和杂环基、取代或未取代的c1-c6烷基羰基、取代或未取代的-c(o)(c1-c6烷氧基)、-c(o)(nrarb)、-nrarb、硼酸基、取代或未取代的c2-c8烯基、取代或未取代的c2-c8炔基、取代或未取代的c1-c6烷基砜基、取代或未取代的c1-c6烷基亚砜基和取代或未取代的c1-c6烷基巯基；其中，所述的杂芳基或杂环基包含1-3个选自n、o、s和p的杂原子；所述取代的取代基选自卤素、氰基、-nrsrt、r41c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c3-c8环烃基、4-8元杂环基、r41c1-c4烷基砜基、r41(c1-c6)烷氧基c(o)-、-cooh和-c(o)(nrsrt)；r41为h、-oh、c1-c4烷氧基、氨基、二甲胺基、甲氨基、二乙胺基、甲乙氨基、乙胺基、c3-c8环烷基、
rs和rt各自独立地选自h、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、
在另一优选例中，
r1选自：c1-c4烷基、被卤素取代的c1-c4烷基、c1-c4烷氧基和被卤素取代的烷氧基；
r2选自：h、卤素、氰基、c1-c4烷基和被卤素取代的c1-c4烷基；
w选自-o-、-nh-、-nch3-和-nch2ch3-；
a环为取代或未取代的4-7元饱和或不饱和碳环、取代或未取代的4-7元饱和或不饱和杂环；其中，所述的杂环包含1-2个选自o、n、s杂原子；a环所述取代基选自：c1-c4烷基、被卤素取代的c1-c4烷基、卤素、氰基、羟基、c1-c4烷氧基、被卤素取代的c1-c4烷氧基、氨基、甲氨基、二甲氨基和被1-3个rx取代的c0-c4烷基羰基；其中rx选自：h、卤素、羟基、c1-c4烷氧基、氨基、甲氨基和二甲氨基；
x为cr4或氮原子；
r3和r4各自独立地选自：h、卤素、-cooh、-cn、取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的6-10元芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基、取代或未取代的5-10元饱和或不饱和环烃基、取代或未取代的5-10元饱和或不饱和杂环基、-nrarb、取代或未取代的c1-c4烷基砜基、取代或未取代的c1-c4烷基亚砜基、取代或未取代的c1-c4烷基巯基、取代或未取代的c1-c6烷基羰基、取代或未取代的-c(o)-(c1-c6烷氧基)、-c(o)(nrarb)和取代或未取代的c1-c3烷基炔基；其中，所述的杂芳基或杂环基包含1-3个选自n、o和s的杂原子；r3和r4中所述取代的取代基选自：卤素、氰基、-nrsrt、r41c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c3-c8环烃基、4-8元杂环基、r41c1-c4烷基砜基、r41(c1-c6)烷基oc(o)-、-cooh和-c(o)(nrsrt)；
r41为h、卤素、-oh、c1-c4烷氧基、氨基、二甲胺基、甲氨基、二乙胺基、甲乙氨基、乙胺基、c3-c8环烷基、
ra、rb各自独立地选自：h、c1-c4烷基、卤代c1-c4烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的5-10元杂芳香基，或ra与rb与相连的n一起形成取代或未取代的4-8元杂环基，所述杂环基包含1-2个选自n、o的杂原子；ra和rb中所述取代基选自：卤素、氰基、-nrsrt、c1-c4烷基、羟基和c1-c4烷氧基；
rs和rt各自独立地选自：h、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、
在另一优选例中，r2为取代或未取代的c1-c4烷基；较优地，r2为c1-c4烷基或卤素取代的c1-c4烷基；更优地，r2为甲基。
在另一优选例中，
w选自-o-、-nh-、-nch3-和-nch2ch3-；
a环为取代或未取代的4-7元饱和碳环或取代或未取代的4-7元饱和杂环；其中，所述的杂环包含1-2个选自o和n的杂原子；所述取代的取代基选自：取代或未取代的c1-c4烷基、取代或未取代的c1-c4烷氧基、取代或未取代的c1-c4烷基羰基、取代或未取代的c1-c4烷氧基羰基、取代或未取代的c1-c4烷基磺酰基和boc，所述取代的取代基选自：卤素、羟基、c1-c4烷氧基、氨基、甲氨基、乙氨基和二甲胺基；
较优地，
a环选自下组：
所述的ri选自：h、c1-c4烷基、被卤素取代的c1-c4烷基、c1-c4烷基羰基、被卤素或羟基取代的c1-c4烷基羰基和boc；较佳地，所述的ri选自：三氟甲基c1-c2烷基、二氟甲基c1-c2烷基、被卤素或羟基取代的c1-c4烷基羰基；
更优地，w选自-o-、-nch3-和-nch2ch3-；
a环选自
ri选自：三氟乙基、二氟乙基和2-羟基丙酰基。
在另一优选例中，x为cr4或氮原子；
r3和r4各自独立地选自h、氰基、卤素、-nrarb、-cooh、-c(o)(nrarb)、c1-c4烷基、c1-c4烷基羰基、c1-c4烷氧基羰基、
rs和rt各自独立地选自：h、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、
较优地，
x为cr4或氮原子；
r3和r4各自独立地选自h、取代或未取代的c1-c2烷基、-cn、-nrarb、-c(o)(nrarb)、取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的c1-c2烷基砜基、取代或未取代的c1-c2烷基亚砜基和取代或未取代的c1-c2烷基巯基；所述取代的取代基选自：卤素、-nrsrt、c1-c2烷基和卤代c1-c2烷基；
ra、rb各自独立地选自：h、c1-c2烷基、卤代c1-c2烷基、苯基、卤代苯基，或ra与rb与相连的n一起形成吗啉环、哌啶环或哌嗪环；
rs和rt各自独立地选自：h、c1-c2烷基和c1-c2卤代烷基。
在另一优选例中，
y和z各自独立地选自：ch和n；优选地，y为ch；z为n；
r1选自甲基、乙基、异丙基、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基、乙氧基；优选为甲基，乙基或甲氧基。
在另一优选例中，
y为ch；z为n；
r1选自甲基，乙基和甲氧基；
r2为甲基；
w选自-o-、-nch3-和-nch2ch3-；
a环为选自下组：
ri选自氟代c1-c2烷基和2-羟基丙酰基；
x为cr4或氮原子；
r3和r4各自独立地选自：h、c1-c2烷基、-cn、-c(o)(nrarb)、-nrarb、任选取代的吡啶基、c1-c2烷基砜基和c1-c2烷基巯基；所述取代选自下组的取代基：c1-c2烷基和-nrsrt；rs和rt各自独立地选自h、c1-c2烷基和c1-c2卤代烷基；
ra、rb各自独立地选自：h、c1-c2烷基、卤代c1-c2烷基、苯基、卤代苯基，或ra与rb与相连的n一起形成吗啉环。
在另一优选例中，
y和z各自独立地选自ch或n，且不同时为ch；
r1选自甲氧基、甲基和乙基；
r2为甲基；
x为cr4或氮原子；
w选自-o-和-nch2ch3-；
a环为四氢吡喃基、三氟乙基取代的哌啶基、羟基丙酰基取代的哌啶基；优选为4-四氢吡喃基、2,2,2-三氟乙基哌啶基、(r)-2-羟基丙酰基哌啶基；
r3和r4各自独立地选自：h、氰基、甲基、ch3s-、ch3s(o)2-、ph-nh-、吗啉基、-c(o)nh2、二甲氨基取代的吡啶基、甲基氨基取代的吡啶基；优选为h、氰基、甲基、ch3s-、ch3s(o)2-、ph-nh-、吗啉基、-c(o)nh2、2-二甲氨基-4-吡啶基、2-甲基氨基-4-吡啶基。
在另一优选例中，所述的化合物选自下组：
本发明第二方面，提供一种制备如上所述的式i嘧啶并五元芳香杂环类化合物的方法，包括以下步骤：
(1)在酸或碱存在下，化合物a与化合物b反应生成化合物c；
(2)在氯代试剂的存在下，化合物c发生氯代反应生成化合物d；
(3)在碱的存在下，化合物d与化合物e发生芳香亲核取代反应，生成化合物f；
(4)化合物f水解生成化合物g；
(5)化合物g与胺h发生缩合反应，生成化合物i，
其中，
rk和rl分别独立地选自c1-c4直链或支链烷基；并且r2、r3、r4、w、x、a环、y和z的定义如上所述。
优选地，
步骤(1)中，
所述的酸选自下组：醋酸、对甲苯磺酸、磷酸、硫酸、盐酸、甲磺酸、三氟甲磺酸中的一种或几种的组合；
所述的碱选自下组：氢化钠、叔丁醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、醋酸钠、醋酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺、三乙烯二胺、吡啶、n-甲基吗啉、四甲基乙二胺、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯、1,5-二氮杂双环壬-5-烯中的一种或几种的组合；
步骤(2)中，
所述的氯代试剂选自下组：三氯氧磷、三氯化磷、五氯化磷、二氯亚砜中的一种或几种的组合；
步骤(3)中，
所述的碱选自下组：氢化钠、叔丁醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、醋酸钠、醋酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺、三乙烯二胺、吡啶、n-甲基吗啉、四甲基乙二胺、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯、1,5-二氮杂双环壬-5-烯中的一种或几种的组合；
步骤(4)中，所述的水解反应在碱或酸的水溶液中发生，所述的碱选自氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾和碳酸钾；所述的酸选自盐酸、磷酸、多聚磷酸、硫酸、醋酸、三氟醋酸、甲磺酸、对甲苯磺酸和三氟甲磺酸；
步骤(5)中，所述的缩合反应在碱和缩合剂的存在下发生，所述的碱选自氢化钠、叔丁醇钾、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、醋酸钠、醋酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺、三乙烯二胺、吡啶、n-甲基吗啉、四甲基乙二胺、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯、1,5-二氮杂双环壬-5-烯中、4-二甲氨基吡啶、4-环戊氨基吡啶的一种或几种的组合；所述的缩合剂选自1-羟基苯并三唑(hobt)、1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(hoat)、n-羟基琥珀酰亚胺(hosu)、n-羟基邻苯二甲酰亚胺(nhpi)、2-羟基-3a,4,7,7a-四氢-1h-4,7-亚甲基异吲哚-1,3(2h)-二酮(nhni)、五氟苯酚(pfpoh)、二环己基碳二亚胺(dcc)、二异丙基碳二亚胺(dic)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(hbtu)、6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(hctu)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧亚乙基氨基氧)二甲氨基-吗啉基-碳鎓六氟磷酸盐(comu)、o-苯并三氮唑-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸酯(tbtu)、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸盐(bop)、1h-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(pybop)、六氟磷酸(7-氮杂苯并三唑-1-氧基)三吡咯烷磷(pyaop)的一种或几种。
在一优选实施方案中，所述的制备式i所示的嘧啶并五元芳香杂环类化合物的方法还包括，
当r3或者r4为br时，化合物d通过与相应的有机硼酸或有机硼酸酯、有机锡试剂、烯烃、炔烃、格氏试剂、有机锌试剂、有机硅试剂、伯胺或仲胺发生偶联反应进行衍生化，得到f；
所述的偶联反应非限制性的包括suzuki偶联、stille偶联、heck偶联、sonogashira偶联、negishi偶联、hiyama偶联或buchwald偶联。
本发明第三方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包括，
(1)如本发明第一方面所述的式i所示的嘧啶并五元芳香环类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药；和
(2)药学上可接受的载体。
优选地，该药物组合物还进一步包括其他药学上可接受的治疗剂，特别是其他抗肿瘤药物。所述治疗剂包括但不限于：作用于dna化学结构的药物抗肿瘤药如顺铂，影响核酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤(mtx)、5-氟尿嘧啶(5fu)等，影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、光辉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等，芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、兰特隆、来曲唑、瑞宁德等，细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂伊马替尼(imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)等。
本发明第四方面，提供一种如本发明第一方面所述的式i所示的嘧啶并五元芳香环类化合物、其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药的用途，所述用途选自下组：
(a)制备预防或治疗与ezh1/2突变、活性或表达量相关的疾病的药物；
(b)体外非治疗性地抑制ezh1/2及其突变体的活性；和/或
(c)体外非治疗性地抑制肿瘤细胞的增殖。
在另一优选例中，所述与ezh1/2突变、活性或表达量相关的疾病选自下组：肿瘤或自身免疫性疾病。
在另一优选例中，所述与ezh1/2突变、活性或表达量相关的疾病选自下组：b细胞淋巴瘤、恶性横纹肌瘤、滑膜肉瘤、乳腺癌，结直肠癌、子宫内膜瘤、胃癌、肝癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、鼻咽癌或膀胱癌。
本发明的主要优点在于：
1.提供了一种如式i所示的嘧啶并五元芳香杂环类化合物及其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药。
2.提供了一种结构新颖的用于预防和治疗与ezh1/2突变相关的疾病的药物组合物。
具体实施方式
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
术语说明
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”或“由…构成”。
基团定义
可在参考文献(包括careyandsundberg"advancedorganicchemistry4thed."vols.a(2000)andb(2001),plenumpress,newyork)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、nmr、ir和uv/vis光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。
当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，-ch2o-等同于-och2-。
本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本申请中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。
在本文中定义的某些化学基团前面通过简化符号来表示该基团中存在的碳原子总数。例如，c1-c6烷基是指具有总共1至6个碳原子的如下文所定义的烷基。简化符号中的碳原子总数不包括可能存在于所述基团的取代基中的碳。
除前述以外，当用于本申请的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
在本申请中，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
“羟基”是指-oh基团。
“羟基烷基”是指被羟基(-oh)取代的如下文所定义的烷基。
“羰基”是指-c(＝o)-基团。
“硝基”是指-no2。
“氰基”是指-cn。
“氨基”是指-nh2。
“取代的氨基”是指被一个或两个如下文所定义的烷基、烷基羰基、芳烷基、杂芳烷基取代的氨基，例如，单烷基氨基、二烷基氨基、烷基酰氨基、芳烷基氨基、杂芳烷基氨基。
“羧基”是指-cooh。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分(例如用在卤素取代的烷基等基团中)，术语“烷基”是指完全饱和的直链或支链的烃链基，仅由碳原子和氢原子组成、具有例如1至12个(优选为1至8个，更优选为1至6个)碳原子，且通过单键与分子的其余部分连接，例如包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、辛基、壬基和癸基等。就本发明而言，术语“烷基”指含有1至6个碳原子的烷基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“烯基”意指仅由碳原子和氢原子组成、含有至少一个双键、具有例如2至14个(优选为2至10个，更优选为2至6个)碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团，例如但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“环烃基”意指仅由碳原子和氢原子组成的稳定的非芳香族单环或多环烃基，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系，具有3至15个碳原子，优选具有3至10个碳原子，更优选具有3至8个碳原子，且其为饱和或不饱和并可经由任何适宜的碳原子通过单键与分子的其余部分连接。除非本说明书中另外特别指明，环烃基中的碳原子可以任选地被氧化。环烃基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、1h-茚基、2,3-二氢化茚基、1,2,3,4-四氢-萘基、5,6,7,8-四氢-萘基、8,9-二氢-7h-苯并环庚烯-6-基、6,7,8,9-四氢-5h-苯并环庚烯基、5,6,7,8,9,10-六氢-苯并环辛烯基、芴基、二环[2.2.1]庚基、7,7-二甲基-二环[2.2.1]庚基、二环[2.2.1]庚烯基、二环[2.2.2]辛基、二环[3.1.1]庚基、二环[3.2.1]辛基、二环[2.2.2]辛烯基、二环[3.2.1]辛烯基、金刚烷基、八氢-4,7-亚甲基-1h-茚基和八氢-2,5-亚甲基-并环戊二烯基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂环基”意指由2至14个碳原子以及1至6个选自氮、磷、氧和硫的杂原子组成的稳定的3元至20元非芳香族环状基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂环基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，其可包括稠合环体系、桥环体系或螺环体系；其杂环基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化；且杂环基可为部分或完全饱和。杂环基可以经由碳原子或者杂原子并通过单键与分子其余部分连接。在包含稠环的杂环基中，一个或多个环可以是下文所定义的芳基或杂芳基，条件是与分子其余部分的连接点为非芳香族环原子。就本发明的目的而言，杂环基优选为包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至11元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团，更优选为包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的4元至8元非芳香性单环、双环、桥环或螺环基团。杂环基的实例包括但不限于：吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、硫代吗啉基、2,7-二氮杂-螺[3.5]壬烷-7-基、2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷-2-基、氮杂环丁烷基、吡喃基、四氢吡喃基、噻喃基、四氢呋喃基、噁嗪基、二氧环戊基、四氢异喹啉基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、喹嗪基、噻唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、二氢吲哚基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、吡咯烷基、吡唑烷基、邻苯二甲酰亚氨基等。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“芳基”意指具有6至18个碳原子(优选具有6至10个碳原子)的共轭烃环体系基团。就本发明的目的而言，芳基可以为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、2,3-二氢-1h-异吲哚基、2-苯并噁唑啉酮、2h-1,4-苯并噁嗪-3(4h)-酮-7-基等。
在本申请中，术语“芳基烷基”是指被上文所定义的芳基所取代的上文所定义的烷基。
在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分，术语“杂芳基”意指环内具有1至15个碳原子(优选具有1至10个碳原子)和1至6个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至16元共轭环系基团。除非本说明书中另外特别指明，否则杂芳基可为单环、双环、三环或更多环的环体系，还可以与上文所定义的环烷基或杂环基稠合，条件是杂芳基经由芳香环上的原子通过单键与分子的其余部分连接。杂芳基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季铵化。就本发明的目的而言，杂芳基优选为包含1至5个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至12元芳香性基团，更优选为包含1至4个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定的5元至10元芳香性基团或者包含1至3个选自氮、氧和硫的杂原子的5元至6元芳香性基团。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噁二唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、吲哚基、呋喃基、吡咯基、三唑基、四唑基、三嗪基、吲嗪基、异吲哚基、吲唑基、异吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、二氮萘基、萘啶基、喹噁啉基、蝶啶基、咔唑基、咔啉基、菲啶基、菲咯啉基、吖啶基、吩嗪基、异噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、噁三唑基、噌啉基、喹唑啉基、苯硫基、中氮茚基、邻二氮杂菲基、异噁唑基、吩噁嗪基、吩噻嗪基、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩基、萘并吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,2-b]哒嗪、咪唑并[1,2-a]吡嗪等。
在本申请中，术语“杂芳基烷基”是指被上文所定义的杂芳基所取代的上文所定义的烷基。
在本申请中，“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。例如，在没有明确列出取代基的情况下，本文所用的术语“被取代的”或“被……取代”意指给定的原子或基团上的一个或多个氢原子独立地被一个或多个、例如1、2、3或4个取代基取代，所述取代基独立地选自：氘(d)、卤素、-oh、巯基、氰基、-cd3、-c1-c6烷基(优选-c1-3烷基)、c2-c6烯基、c2-c6炔基、环烷基(优选3-8元环烷基)、芳基、杂环基(优选3-8元杂环基)、杂芳基、芳基-c1-c6烷基-、杂芳基-c1-c6烷基-、c1-c6卤代烷基-、-oc1-c6烷基(优选-oc1-c3烷基)、-oc2-c6烯基、-oc1-c6烷基苯基、-c1-c6烷基-oh(优选-c1-c4烷基-oh)、-c1-c6烷基-sh、-c1-c6烷基-o-c1-c6烷基、-oc1-c6卤代烷基、-nh2、-c1-c6烷基-nh2(优选-c1-c3烷基-nh2)、-n(c1-c6烷基)2(优选-n(c1-c3烷基)2)、-nh(c1-c6烷基)(优选-nh(c1-c3烷基))、-n(c1-c6烷基)(c1-c6烷基苯基)、-nh(c1-c6烷基苯基)、硝基、-c(o)-oh、-c(o)oc1-c6烷基(优选-c(o)oc1-c3烷基)、-conririi(其中ri和rii是h、d和c1-6烷基，优选c1-3烷基)、-nhc(o)(c1-c6烷基)、-nhc(o)(苯基)、-n(c1-c6烷基)c(o)(c1-c6烷基)、-n(c1-c6烷基)c(o)(苯基)、-c(o)c1-c6烷基、-c(o)杂芳基(优选-c(o)-5-7元杂芳基)、-c(o)c1-c6烷基苯基、-c(o)c1-c6卤代烷基、-oc(o)c1-c6烷基(优选-oc(o)c1-c3烷基)、-s(o)2-c1-c6烷基、-s(o)-c1-c6烷基、-s(o)2-苯基、-s(o)2-c1-c6卤代烷基、-s(o)2nh2、-s(o)2nh(c1-c6烷基)、-s(o)2nh(苯基)、-nhs(o)2(c1-c6烷基)、-nhs(o)2(苯基)和-nhs(o)2(c1-c6卤代烷基)，其中所述的烷基、环烷基、苯基、芳基、杂环基和杂芳基中的每一个任选被一个或多个选自以下的取代基进一步取代：卤素、-oh、-nh2、环烷基、3-8元杂环基、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基-、-oc1-c4烷基、-c1-c4烷基-oh、-c1-c4烷基-o-c1-c4烷基、-oc1-c4卤代烷基、氰基、硝基、-c(o)-oh、-c(o)oc1-c6烷基、-con(c1-c6烷基)2、-conh(c1-c6烷基)、-conh2、-nhc(o)(c1-c6烷基)、-nh(c1-c6烷基)c(o)(c1-c6烷基)、-so2(c1-c6烷基)、-so2(苯基)、-so2(c1-c6卤代烷基)、-so2nh2、-so2nh(c1-c6烷基)、-so2nh(苯基)、-nhso2(c1-c6烷基)、-nhso2(苯基)和-nhso2(c1-c6卤代烷基)。当一个原子或基团被多个取代基取代时，所述取代基可以相同或不同。
在本申请中，术语“c0-c4烷基羰基”是指直链或支链的烷基羰基，其在烷基部分中具有0至4个碳原子，例如，醛基、甲基羰基、乙基羰基、正丙基羰基、异丙基羰基、正丁基羰基、异丁基羰基或叔丁基羰基。
本文所用术语“部分”、“结构部分”、“化学部分”、“基团”、“化学基团”是指分子中的特定片段或官能团。化学部分通常被认为是嵌入或附加到分子上的化学实体。
“立体异构体”是指由相同原子组成，通过相同的键键合，但具有不同三维结构的化合物。本发明将涵盖各种立体异构体及其混合物。
当本发明的化合物中含有烯双键时，除非另有说明，否则本发明的化合物旨在包含e-和z-几何异构体。
“互变异构体”是指质子从分子的一个原子转移至相同分子的另一个原子而形成的异构体。本发明的化合物的所有互变异构形式也将包含在本发明的范围内。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可能含有一个或多个手性碳原子，且因此可产生对映异构体、非对映异构体及其它立体异构形式。每个手性碳原子可以基于立体化学而被定义为(r)-或(s)-。本发明旨在包括所有可能的异构体，以及其外消旋体和光学纯形式。本发明的化合物的制备可以选择外消旋体、非对映异构体或对映异构体作为原料或中间体。光学活性的异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术进行拆分，例如采用结晶以及手性色谱等方法。
制备/分离个别异构体的常规技术包括由合适的光学纯前体的手性合成，或者使用例如手性高效液相色谱法拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)，例如可参见geraldgübitzandmarting.schmid(eds.),chiralseparations,methodsandprotocols,methodsinmolecularbiology,vol.243,2004；a.m.stalcup,chiralseparations,annu.rev.anal.chem.3:341-63,2010；fumissetal.(eds.),vogel’sencyclopediaofpracticalorganicchemistry5.sup.thed.,longmanscientificandtechnicalltd.,essex,1991,809-816；heller,acc.chem.res.1990,23,128。
在本申请中，术语“药学上可接受的盐”包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、2,2-二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十一碳烯酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、癸二酸盐、己二酸盐、戊二酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、肉桂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、焦谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、萘二磺酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐及镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下的盐：伯胺类、仲胺类及叔胺类，被取代的胺类，包括天然的被取代胺类、环状胺类及碱性离子交换树脂，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶、聚胺树脂等。优选的有机碱包括异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱及咖啡因。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
在本申请中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本文所用术语“药学上可接受的”是指不影响本发明化合物的生物活性或性质的物质(如载体或稀释剂)，并且相对无毒，即该物质可施用于个体而不造成不良的生物反应或以不良方式与组合物中包含的任意组分相互作用。
在本申请中，“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
本发明所述“肿瘤”包括但不限于神经胶质瘤、肉瘤、黑色素瘤、关节软骨瘤、胆管瘤、白血病、胃肠间质瘤、组织细胞性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、肺鳞癌、肺腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮肤癌、上皮细胞癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌、鼻咽癌、脑癌、骨癌、食道癌、黑色素瘤、肾癌、口腔癌等疾病。
本文所用术语“预防的”、“预防”和“防止”包括使病患减少疾病或病症的发生或恶化的可能性。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括以下含义：
(i)预防疾病或病症在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或病症，但尚未被诊断为已患有该疾病或病症时；
(ii)抑制疾病或病症，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或病症，即，使该疾病或病症的状态消退；或者
(iv)减轻该疾病或病症所造成的症状。
本文所使用术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指服用后足以在某种程度上缓解所治疗的疾病或病症的一个或多个症状的至少一种药剂或化合物的量。其结果可以为迹象、症状或病因的消减和/或缓解，或生物系统的任何其它所需变化。例如，用于治疗的“有效量”是在临床上提供显著的病症缓解效果所需的包含本文公开化合物的组合物的量。可使用诸如剂量递增试验的技术测定适合于任意个体病例中的有效量。
本文所用术语“服用”、“施用”、“给药”等是指能够将化合物或组合物递送到进行生物作用的所需位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、经十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、动脉内注射或输注)、局部给药和经直肠给药。本领域技术人员熟知可用于本文所述化合物和方法的施用技术，例如在goodmanandgilman,thepharmacologicalbasisoftherapeutics,currented.；pergamon；andremington’s,pharmaceuticalsciences(currentedition),mackpublishingco.,easton,pa中讨论的那些。在优选的实施方案中，本文讨论的化合物和组合物通过口服施用。
本文所使用术语“药物组合”、“药物联用”、“联合用药”、“施用其它治疗”、“施用其它治疗剂”等是指通过混合或组合不止一种活性成分而获得的药物治疗，其包括活性成分的固定和不固定组合。术语“固定组合”是指以单个实体或单个剂型的形式向患者同时施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同药剂。术语“不固定组合”是指以单独实体的形式向患者同时施用、合用或以可变的间隔时间顺次施用至少一种本文所述的化合物和至少一种协同制剂。这些也应用到鸡尾酒疗法中，例如施用三种或更多种活性成分。
本领域技术人员还应当理解，在下文所述的方法中，中间体化合物官能团可能需要由适当的保护基保护。这样的官能团包括羟基、氨基、巯基及羧酸。合适的羟基保护基包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苄基等。合适的氨基、脒基及胍基的保护基包括叔丁氧羰基、苄氧羰基等。合适的巯基保护基包括-c(o)-r”(其中r”为烷基、芳基或芳烷基)、对甲氧基苄基、三苯甲基等。合适的羧基保护基包括烷基、芳基或芳烷基酯类。
保护基可根据本领域技术人员已知的和如本文所述的标准技术来引入和除去。保护基的使用详述于greene,t.w.与p.g.m.wuts,protectivegroupsinorganisynthesis,(1999),4thed.,wiley中。保护基还可为聚合物树脂。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
各实施例中，1hnmr由varianmercury-400型核磁共振仪记录，核磁共振仪记录，化学位移以δ(ppm)表示；质谱由finnigan/mat-95(ei)与finniganlcq/decaandmicromassultraq-tof(esi)型质谱仪记录；正相分离用硅胶为200-300目。
其中，化学式或英文字母缩写代表的试剂中文名称表如下：
etoh：乙醇；dcm：二氯甲烷；tfa：三氟乙酸；meoh：甲醇；naoh：氢氧化钠；hcl：氯化氢；tea：三乙胺；1,4-dioxane：1,4-二氧六环；nah：氢化钠；h2o：水；hatu：2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸酯；dmf：n,n-二甲基甲酰胺；thf：四氢呋喃；dipea：n,n-二异丙基乙胺；acoh：醋酸；ethylacetate：乙酸乙酯；k2co3：碳酸钾；cs2co3：碳酸铯；pd(dppf)cl2：[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯；lioh：氢氧化锂。
中间体4～6的合成
化合物1：在盛有100毫升的干燥的dmf溶剂的500毫升的三口瓶中依次加入丙二腈(20克)，碳酸钾(50克)，室温搅拌30分钟。再往反应液中缓慢加入二硫化碳(46克)，室温搅拌2.5小时。再将溶液冷却到0℃，缓慢加入碘甲烷(86克)再室温下搅拌5-6小时。tlc检测反应结束后，将反应液倒入碎冰中，过滤，固体用冷水洗，旋干得粗品化合物1(50克，收率：99％)。
化合物2：在氮气保护的100毫升干燥单口瓶中，将化合物1(3.40克)和苯胺(1.86克)，溶于60毫升乙醇中，加热回流反应6小时。冷却浓缩后，将得到的固体用正已烷洗涤后得到白色固体(3.45克，产率为80％)。ms(esi)m/z210[m+h]+。
化合物3：在氮气保护的100毫升干燥单口瓶中，将化合物1(6.80克)和吗啡啉(3.48克)，溶于80毫升乙醇中，加热回流反应6小时。冷至室温后，析出固体，将过滤得到的固体烘干后得到产品(7.52克，产率为90％)。ms(esi)m/z216[m+h]+。
化合物4：将化合物1(10克)溶于100毫升甲醇中，往反应液中滴加70％水合肼(3.5克)，加热回流30分钟。冷却后，反应液倒入冷水中，有固体析出，过滤，用冷水洗，干燥，往固体中加入1,4-二氧六环20毫升，过滤得黄色固体(4克，收率：44％)。ms(esi)m/z155[m+h]+。
化合物5：在氮气保护的25毫升干燥单口瓶中，将化合物2(3.0克)溶于20毫升无水乙醇中，往反应液中缓慢滴加70％水合肼(2.50克)，加热至回流，过夜反应。浓缩后，加入乙酸乙酯和水，有机相浓缩后，得到白色固体(2.15克，产率为78％)。ms(esi)m/z200[m+h]+。
化合物6：在氮气保护的25毫升干燥单口瓶中，将化合物2(6.27克)溶于20毫升无水乙醇中，往反应液中缓慢滴加70％水合肼(5.36克)，加热至回流，反应2小时后。浓缩后，加入乙酸乙酯和水，有机相浓缩得到白色固体(4.15克，产率为72％)。ms(esi)m/z194[m+h]+。
通用路线1的操作步骤：
步骤1：在化合物a(26毫摩尔)溶于10毫升的乙醇中，依次加入2-甲基-3-氧代琥珀酸二乙酯(26毫摩尔)，醋酸(0.5毫升)，加热回流反应过夜，冷却至室温，过滤，得到固体化合物c。
步骤2：将上一步产品化合物c(17毫摩尔)溶于50毫升三氯氧磷中，回流过夜。冷却后减压浓缩，反应液倒入冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液将ph调至中性。加入乙酸乙酯(50毫升×3)萃取，减压浓缩，经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6:1，v/v)得到黄色固体化合物d。
步骤3：将上一步产品化合物d(0.65毫摩尔)溶于2毫升的n-乙基四氢-2h-吡喃-4-胺中，100℃反应过夜，经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4:1，v/v)得到黄色固体化合物f。
步骤4：将上一步产品化合物f(0.08毫摩尔)溶于10毫升(四氢呋喃：水1:1，v/v)溶液中，加入5毫升2m氢氧化锂水溶液，60℃反应2小时，冷却至室温，经反相柱柱层析(水：乙腈＝7:3，v/v)得到白色固体化合物g。
步骤5：将上一步产品化合物g(0.08毫摩尔)溶于5毫升的无水dmf中，依次加入hatu(0.12毫摩尔)、三乙胺(0.24毫摩尔)搅拌5分钟，再往反应液中加入3-(氨基甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(0.08毫摩尔，其合成参照文献：wo2015023915)，室温搅拌2小时，经反相制备hplc分离得到白色固体化合物i。
实施例1-7按照通用路线1。
实施例1：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-(甲硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-1)的制备：
步骤1：以化合物4为起始原料，制得3-氰基-7-羟基-6-甲基-2-(甲硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为27％。ms(esi)m/z293[m+h]+。
步骤2：7-氯-3-氰基-6-甲基-2-(甲硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为57％。ms(esi)m/z311[m+h]+。
步骤3：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基-2-(甲硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为50％。ms(esi)m/z404[m+h]+。
步骤4：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基-2-(甲硫基)吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸，产率为99％。ms(esi)m/z376[m+h]+。
步骤5：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-(甲硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺，产率为19％。1h-nmr(dmso-d6,400mhz)δ8.47(s,1h),6.12(s,1h),4.28(d,j＝4.0hz,2h),3.87(brs,1h),3.83(s,4h),3.71-3.69(m,2h),3.49-3.47(m,4h),2.67(s,3h),2.27(s,3h),2.19(s,3h),1.79-1.74(m,3h),0.84(t,j＝8.0hz,3h)；ms(esi)m/z526[m+h]+。
实施例2：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n5-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-(苯胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3,5-二甲酰胺(i-2)的制备：
步骤1：以化合物5为起始原料，制得3-氰基-7-羟基-6-甲基-2-(苯胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为19％。ms(esi)m/z338[m+h]+。
步骤2：7-氯-3-氰基-6-甲基-2-(苯胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为65％。ms(esi)m/z356[m+h]+。
步骤3：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基-2-(苯胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为42％。ms(esi)m/z449[m+h]+。
步骤4：将氢氧化锂替换为氢氧化钠，制得3-氨基甲酰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-氨基-2-(苯胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸，产率为64％。ms(esi)m/z439[m+h]+。
步骤5：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n5-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-(苯胺基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3,5-二甲酰胺，产率为32％。1hnmr(meod-d4)δppm7.70(d,j＝8.0hz,2h),7.37(t,j＝8.0hz,2h),7.02(t,j＝8.0hz,1h),6.39(s,1h),4.56(s,2h),4.03-3.98(m,3h),4.01(s,3h),3.69-3.67(m,2h),3.49-3.46(m,2h),2.49(s,3h),2.39(s,3h),1.88-1.85(m,4h),1.00(t,j＝7.2hz,3h)；ms(esi)m/z589[m+h]+。
实施例3：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-吗啡啉基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-3)的制备：
步骤1：以化合物6为起始原料，制得3-氰基-7-羟基-6-甲基-2-吗啡啉基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为16％。ms(esi)m/z332[m+h]+。
步骤2：7-氯-3-氰基-6-甲基-2-吗啡啉基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为60％。ms(esi)m/z350[m+h]+。
步骤3：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基-2-吗啡啉基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为53％。ms(esi)m/z443[m+h]+。
步骤4：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基-2-吗啡啉基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸，产率为60％。ms(esi)m/z415[m+h]+。
步骤5：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-吗啡啉基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺，产率为43％。1hnmr(meod-d4)δppm8.27(s,1h),6.39(s,1h),4.60(s,2h),4.08(s,3h),4.00-3.97(m,2h),3.87-3.85(m,4h),3.67-3.62(m,5h),3.47-3.32(m,4h),2.58(brs,2h),2.52(s,3h),2.18(s,3h),1.85-1.78(m,2h),0.88(t,j＝6.4hz,3h)；ms(esi)m/z565[m+h]+。
实施4：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-4)的制备：
步骤1：7-羟基-6-甲基-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为9％。ms(esi)m/z223[m+h]+。
步骤2：7-氯-6-甲基-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为20％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),4.52(q,j＝7.2hz,2h),2.64(s,3h),1.47(t,j＝7.2hz,3h)；ms(esi)m/z241[m+h]+。
步骤3：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为24％。ms(esi)m/z334[m+h]+。
步骤4：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸，产率为70％。ms(esi)m/z306[m+h]+。
步骤5：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-[1,2,4]三氮唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺，产率为14％。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ8.64-8.63(m,1h),8.39(s,1h),5.94(s,1h),4.58(d,j＝8.0hz,2h),3.99-3.96(m,2h),3.89(s,3h),3.75-3.72(m,1h),3.56(d,j＝4hz,2h),3.40-3.34(m,2h),2.63(s,3h),2.44(s,3h),1.87-1.82(m,2h),1.75-1.72(m,2h),0.91-0.87(m,3h)；ms(esi)m/z456[m+h]+。
实施例5：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-5)的制备：
步骤1：7-羟基-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为40％。ms(esi)m/z222[m+h]+。
步骤2：7-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为25％。ms(esi)m/z240[m+h]+。
步骤3：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为43％。ms(esi)m/z333[m+h]+。
步骤4：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸，产率为66％。ms(esi)m/z305[m+h]+。
步骤5：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺，产率为30％。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ12.65(brs,1h),8.56(t,j＝5.6hz,1h),8.04(d,j＝2.0hz,1h),6.59(d,j＝2.0hz,1h),5.95(s,1h),4.60(d,j＝5.6hz,2h),3.91(brs,5h),3.74-3.71(m,1h),3.39-3.32(m,2h),2.63(s,3h),2.37(s,3h),1.64(s,4h).0.87(t,j＝7.2hz,3h)；ms(esi)m/z455[m+h]+。
实施例6：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-6)的制备：
步骤1：3-氰基-7-羟基-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为71％。ms(esi)m/z247[m+h]+。
步骤2：将通用路线1步骤2做一些微小改进，加入3当量的四丁基氯化铵，其余条件不变，制得7-氯-3-氰基-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为49％。ms(esi)m/z265[m+h]+。
步骤3：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为46％。ms(esi)m/z358[m+h]+。
步骤4：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸，产率为55％。ms(esi)m/z330[m+h]+。
步骤5：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺，产率为37％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.06(s,1h),8.50(t,j＝5.5hz,1h),8.30(s,1h),5.94(s,1h),4.56(d,j＝4.9hz,2h),4.00-3.94(m,2h),3.89(s,3h),3.74-3.63(m,1h),3.57–3.46(m,2h),3.35(td,j＝11.7,2.1hz,1h),2.62(s,3h),2.40(s,3h),1.89–1.76(m,2h),1.76–1.66(m,3h),0.88(t,j＝7.2hz,3h)；ms(esi)m/z480[m+h]+。
实施例7：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-7)的制备：
步骤1：7-羟基-2,6-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为54％。ms(esi)m/z236[m+h]+。
步骤2：7-氯-2,6-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为53％。ms(esi)m/z254[m+h]+。
步骤3：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-2,6-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯，产率为13％。ms(esi)m/z347[m+h]+。
步骤4：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-2,6-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸，产率为96％。ms(esi)m/z319[m+h]+。
步骤5：7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺，产率为2％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.32(brs,1h),8.52(t,j＝5.5hz,1h),6.33(s,1h),5.94(s,1h),4.60(d,j＝5.7hz,2h),3.96-3.91(m,2h),3.90(s,3h),3.78-3.68(m,1h),3.61-3.30(m,4h),2.60(s,3h),2.48(s,3h),2.36(s,3h),1.77-1.50(m,4h),0.85(t,j＝7.2hz,3h)；ms(esi)m/z469[m+h]+。
实施例8：3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-(甲砜基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-8)的制备：
将3-氰基-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-2-(甲硫基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(40毫克)溶于10毫升的二氯甲烷中，冰浴下，缓慢加入间氯过氧苯甲酸(13毫克)。移至室温搅拌过夜，用饱和亚硫酸氢钠溶液淬灭，加50毫升二氯甲烷萃取，水洗三次，有机相经浓缩后经经反相制备hplc分离得到6毫克白色固体，产率为14％。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ8.54(s,1h),5.98(s,1h),4.59(d,j＝4.4hz,2h),4.02-3.99(m,2h),3.93(s,3h),3.69-3.65(m,2h),3.55(q,j＝6.4hz,2h),3.39-3.36(m,2h),3.33(s,3h),2.60(s,3h),2.40(s,3h),2.01-1.63(m,4h),0.92(t,j＝6.4hz,3h)；ms(esi)m/z558[m+h]+。
实施例9：(r)-7-((1-(2-羟基丙酰基)哌啶-4-基)氧基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-9)的制备：
步骤1：7-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯的制备：4-羟基-1-羧酸叔丁酯(1.3克)溶于20毫升四氢呋喃中，冰水浴降温至0℃，往溶液中缓慢加入氢化钠(210毫克)，搅拌30分钟。往反应液中加入7-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯(700毫克)，搅拌5分钟后移至室温搅拌1小时，反应完毕后，加0.5毫升水淬灭反应，反应液直接浓缩，粗产物经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4:1，v/v)得到500毫克白色固体，产率为42％。ms(esi)m/z405[m+h]+。
步骤2：7-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氧基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸的制备：将上一步产品(250毫克)溶于4毫升四氢呋喃/水(3:1，v/v)的溶液中，往溶液中加入氢氧化锂(104毫克)，室温搅拌2.5小时，反应完毕后，调节ph值至中性，混合液用50毫升乙酸乙酯萃取三次，水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥后直接浓缩得到180毫克无色油状物，产率为77％。ms(esi)m/z377[m+h]+。
步骤3：4-((5-(((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备：将上一步产品(180毫克)溶于3毫升无水n,n-二甲基甲酰胺中，依次往溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(144毫克)、hatu(181毫克)，搅拌5分钟后，往反应液中加入3-(氨基甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(116毫克)，室温搅拌2小时。反应液用50毫升乙酸乙酯萃取，用水洗涤三次，有机相浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30：1，v/v)得到120毫克无色油状物，产率为47％。ms(esi)m/z527[m+h]+。
步骤4：n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-7-(哌啶-4-基氧基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺的制备：将上一步产品(120毫克)溶于2毫升二氯甲烷中，待溶解后，往溶液中加入2毫升三氟醋酸，室温搅拌1.5小时，反应完毕后，反应液经浓缩，粗产品重新溶于30毫升二氯甲烷中，并加入饱和碳酸氢钠溶液20毫升，保留有机相，有机相依次用水洗涤，饱和食盐水洗涤，经干燥后，有机相经浓缩，粗产品经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20：1，v/v)得到60毫克无色油状物，产率为61％。ms(esi)m/z449[m+na]+。
步骤5：(r)-7-((1-(2-羟基丙酰基)哌啶-4-基)氧基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺的制备：将上一步产品(60毫克)溶于2毫升无水n,n-二甲基甲酰胺中，依次往溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(43毫克)、hatu(53毫克)，搅拌5分钟后，往反应液中加入(r)-2-羟基丙酸(15毫克)，室温搅拌2小时。经反相制备hplc分离得到6毫克白色固体，产率为8％。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ8.49(s,1h),8.08(d,j＝4.0hz,1h),6.66(s,1h),6.99(s,1h),5.58(s,1h),4.57(d,j＝4.4hz,2h),4.52-4.49(m,1h),4.15-4.02(m,2h),3.91(s,3h),3.75(s,3h),3.80-3.72(m,1h),3.45-3.43(m,2h),2.60(d,j＝4.0hz,3h),2.35(s,3h),2.02-2.00(m,4h),1.32(d,j＝8.0hz,3h)；ms(esi)m/z499[m+h]+。
实施例10：(r)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-((1-(2-羟基丙酰基)哌啶-4-基)氧基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-10)的制备：
将3-(氨基甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐替换为3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(其合成参照文献：wo2015023915)，其余与实施例9相同。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ12.78(brs,1h),8.60(s,1h),8.08(d,j＝2.0hz,1h),6.60(d,j＝2.0hz,1h),5.96(s,1h),5.61-5.58(m,1h),4.56(d,j＝6.0hz,2h),4.50-4.48(m,1h),4.25-3.97(m,2h),3.78-3.75(m,1h),3.47-3.25(m,1h),3.15-3.11(m,1h),2.60(d,j＝6.0hz,3h),2.39(s,3h),2.32(s,3h),2.01-1.99(m,4h),1.34(d,j＝6.8hz,3h)；ms(esi)m/z483[m+h]+。
实施例11：(r)-n-((4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-7-((1-(2-羟基丙酰基)哌啶-4-基)氧基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-11)的制备：
将3-(氨基甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐替换为3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(其合成参照文献：wo2013067296)，其余与实施例9相同。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ12.78(brs,1h),8.58(s,1h),8.08(s,1h),6.61(d,j＝2.0hz,1h),5.96(s,1h),5.59(brs,1h),4.57(d,j＝5.6hz,2h),4.50(s,1h),4.02-4.00(m,2h),3.75-3.51(m,1h),3.42-3.37(m,1h),2.61(s,6h),2.41(s,3h),2.02-1.94(m,4h),1.38-1.31(m,3h)；ms(esi)m/z497[m+h]+。
实施例12：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-2,3-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-12)的制备：
步骤1：3-溴-7-羟基-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯的制备：在4-溴-1h-吡唑-5-胺(1.2克)溶于20毫升的乙醇中，依次加入2-甲基-3-氧代琥珀酸二乙酯(1.6克)，醋酸(0.5毫升)，加热回流反应过夜，冷却至室温，过滤，得到1.53克黄色固体，产率为69％。ms(esi)m/z300[m+h]+。
步骤2：3-溴-7-氯-6-甲基吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯的制备：将1.18克上一步产物溶于20毫升1,4-二氧六环中，待溶解后，往溶液中加入7.3克三氯氧磷，90℃搅拌5小时，冷却至室温，反应液经减压蒸馏，残留物重新溶于100毫升乙酸乙酯中，依次用水和饱和食盐水洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋蒸，粗产物经硅胶柱层析分离(石油醚：乙酸乙酯＝10：1，v/v)得到668毫克黄色固体，产率为53％。ms(esi)m/z318[m+h]+。
步骤3：3-溴-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯的制备：往溶有上一步产品(450毫克)的二甲亚砜溶液(5毫升)中，依次加入n-乙基四氢-2h-吡喃-4-胺(366毫克)，碳酸钾(392毫克)，微波120℃反应30分钟，反应液用乙酸乙酯(20毫升)稀释，依次用水(20毫升)和饱和食盐水(20毫升)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1，v/v)纯化，得到浅黄色固体(220毫克，收率：38％)。ms(esi)m/z411[m+h]+。
步骤4：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯的制备：在干燥的氮气保护的50毫升单口瓶中加入化合物3-溴-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯(220毫克)溶于2毫升1,4-二氧六环中，往溶液中依次加入6-(二甲基氨基)-3-吡啶硼酸频那醇酯(263毫克)，碳酸铯(345毫克)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(39毫克)和2滴水，110℃搅拌反应过夜，反应液用乙酸乙酯萃取(20毫升)，用水(20毫升×2)洗涤，饱和食盐水(20毫升)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1，v/v)纯化，得到黄色固体(159毫克，收率：67％)。ms(esi)m/z453[m+h]+。
步骤5：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸的制备：往溶有3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯(159毫克)甲醇溶液(2毫升)中，加入5毫升氢氧化钠水溶液(2摩尔每升)，40℃下搅拌反应过夜，反应液用稀盐酸中和至ph为5，二氯甲烷(50毫升)萃取，依次用水(20毫升)洗涤，饱和食盐水(20毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩经反相柱层析得到淡黄色固体(132毫克，收率：88％)ms(esi)m/z425[m+h]+。
步骤6：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺的制备：将3-溴-7-(乙基(四氢-2h-吡喃-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸(132毫克)溶于2毫升n,n-二甲基甲酰胺中，依次往溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(69毫克)、hatu(115毫克)，搅拌5分钟后，往反应液中加入3-(氨基甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(60毫克)，室温搅拌2小时。反应液用50毫升乙酸乙酯萃取，用水洗涤三次，有机相浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30：1，v/v)得到11毫克淡黄色固体，产率为7％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.81(s,1h),8.58(t,j＝5.0hz,1h),8.24(s,1h),8.10(d,j＝5.2hz,1h),7.38(s,1h),7.33(d,j＝5.3hz,1h),6.14(s,1h),4.33(d,j＝5.0hz,2h),3.83(s,3h),3.77-3.47(m,4h),3.03(s,6h),3.01(brs,2h),2.41(s,3h),2.21(s,3h),1.71-1.55(m,4h),0.82(t,j＝7.2hz,3h)；ms(esi)m/z575[m+h]+。
实施例13：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-13)的制备：
步骤1：3-溴-7-((1-(叔丁基氧羰基)哌啶-4-基)(乙基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯的制备：往溶有3-溴-7-氯-6-甲基吡咯并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯(900毫克)的二甲亚砜溶液(5毫升)中，依次加入4-(乙氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(972毫克)，碳酸铯(1.39克)，微波120℃反应30分钟，反应液用乙酸乙酯(20毫升)稀释，依次用水(20毫升)和饱和食盐水(20毫升)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品。经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1，v/v)纯化，得到浅黄色固体(89毫克，收率：6％)。ms(esi)m/z510[m+h]+。
步骤2：3-溴-7-(乙基(哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸乙酯的制备：在250毫升单口瓶中，将化合物3-溴-7-((1-(叔丁基氧羰基)哌啶-4-基)(乙基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯(89毫克)溶于2毫升二氯甲烷，0.5毫升三氟乙酸中，室温搅拌反应2小时，浓缩得到粗产品。ms(esi)m/z410[m+h]+。
步骤3：3-溴-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸乙酯的制备：在100毫升单口瓶中加入化合物3-溴-7-(乙基(哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸乙酯和2毫升四氢呋喃，并加入三氟乙基甲磺酸酯(79毫克)和n,n-二异丙基乙胺(34毫克)。室温下搅拌过夜，反应液用乙酸乙酯萃取，用水(20毫升)洗涤，饱和食盐水(20毫升)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1，v/v)纯化，得到浅黄色固体(50毫克，收率：30％)。ms(esi)m/z492[m+h]+。
步骤4：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯的制备：在干燥的氮气保护的50毫升单口瓶中加入化合物3-溴-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸乙酯(50毫克)溶于2毫升1,4-二氧六环与2滴水中，往溶液中依次加入6-(二甲基氨基)-3-吡啶硼酸频那醇酯(50毫克)，碳酸铯(65毫克)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(3.6毫克)，110℃搅拌反应过夜，反应液用乙酸乙酯萃取(20毫升)，用水(20毫升×2)洗涤，饱和食盐水(20毫升)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗产品。经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝4：1，v/v)纯化，得到黄色固体(37毫克，收率：69％)。ms(esi)m/z534[m+h]+。
步骤5：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸的制备：往溶有化合物3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-羧酸乙酯(37毫克)的甲醇溶液(2毫升)中，加入5毫升氢氧化钠水溶液(2摩尔每升)，40℃下搅拌反应过夜，反应液用稀盐酸中和至ph为5，二氯甲烷(50毫升)萃取，依次用水(20毫升)洗涤，饱和食盐水(20毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩经反相柱层析得到淡黄色固体(31毫克，收率：89％)。ms(esi)m/z506[m+h]+。
步骤6：3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺的制备：将3-(2-(二甲氨基)吡啶-4-基)-7-(乙基(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酸(31毫克)溶于2毫升n,n-二甲基甲酰胺中，依次往溶液中加入n,n-二异丙基乙胺(23毫克)、hatu(23毫克)，搅拌5分钟后，往反应液中加入3-(氨基甲基)-4-甲氧基-6-甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(12毫克)，室温搅拌2小时。反应液用50毫升乙酸乙酯萃取，用水洗涤三次，有机相浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30：1，v/v)得到11毫克淡黄色固体，产率为27％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.51(s,1h),9.06(s,1h),8.67(t,j＝4.9hz,1h),8.00(d,j＝6.7hz,1h),7.82(s,1h),7.71(s,1h),6.14(s,1h),4.32(d,j＝4.9hz,2h),3.83(s,3h),3.21(s,6h),3.15(q,j＝10.2hz,2h),2.95-2.85(m,2h),2.37(s,3h),2.21(s,3h),1.71(brs,4h),1.20-1.30(m,5h),0.83(t,j＝7.1hz,3h)；ms(esi)m/z656[m+h]+。
实施例14：7-(乙基(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)氨基)-n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-6-甲基-3-(2-(甲氨基)吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-甲酰胺(i-14)的制备：与实施例13类似。
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.29(brs,1h),8.80(brs,1h),8.36(s,1h),8.05(d,j＝5.2hz,1h),7.82(s,1h),6.84(d,j＝4.6hz,1h),5.87(s,1h),4.55(d,j＝6.0hz,2h),3.84(s,3h),3.52–3.36(m,4h),3.01(s,3h),2.86(q,j＝9.7hz,2h),2.62(s,3h),2.37–2.25(m,1h),2.23(s,3h),1.82–1.62(m,2h),1.28–1.12(m,4h),0.80(t,j＝7.0hz,3h)；ms(esi)m/z642[m+h]+。
实施例15：生物活性测定
1、化合物对prc2复合物(ezh2y641f)活性测定：
检测方法：均相时间分辨荧光法(homogeneoustime-resolvedfluorescence，htrf)
材料：实验中所用prc2复合物(ezh2y641f/eed/suz12/rbap48/aebp2)组蛋白甲基转移酶购自cisbio公司；底物h3(1-50)k27me1为glbiochem公司产品；甲基供体s-(5’-adenosyl)-l-methioninechloridedihydrochloride(sam)购自sigma-aldrich；eu标记的h3k27me3、streptavidin-xl665及反应所需缓冲液均购自cisbio。
实验方法：每孔加入prc2复合物(ezh2y641f/eed/suz12/rbap48/aebp2)、h3(1-50)me1底物、甲基供体sam及化合物，总反应体系为10μl，室温避光反应4h。每孔加入5μleu标记的h3k27me3抗体和5μlstreptavidin–xl665，混匀，室温孵育1h后，用多标记微孔板分析系统(perkinelmerenvision)测量620nm和665nm处的荧光值，并计算每孔的htrf信号比(665nm/620nm)。用softmaxpro5.4.1软件计算化合物的ic50值。
2、化合物对prc2复合物(ezh2wildtype)活性测定：
检测方法：酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay,elisa)
材料：实验中所用prc2复合物(ezh2/eed/suz12/rbap48/aebp2)组蛋白甲基转移酶购自bps公司；底物biotinh3(21-44)me0为anaspec公司产品；sam购自sigma，为glbiochem公司产品；甲基供体sam购自sigma-aldrich；h3k27me3抗体购自bps。
实验方法：采用终浓度为100nm中性亲和素100μl/孔包被96孔板，置于湿盒中摇床过夜，随后每孔加入100μl3％bsa室温封闭1h。封闭好的96孔板中，每孔加入prc2复合物(ezh2/eed/suz12/rbap48/aebp2)、h3(21-44)me0底物、甲基供体sam及化合物，总反应体系为100μl，放置入湿盒内，室温摇床上反应1h。tbs-t[20mmtris-hcl(ph7.2-7.4，室温)，150mmnacl，0.1％(v/v)tween-20]洗板3次，3％bsa封闭10min，加入抗h3k27me3抗体室温摇床湿盒孵育1h。再用tbs-t洗板3次，每孔3％bsa封闭10min。随后加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温摇床湿盒内反应1h。最后继续tbs-t洗3次，加入2mg/mlopd显色液(100μl/孔)显色，并用2mh2so4(50μl/孔)终止反应，酶标仪490nm读值，用softmaxpro5.4.1软件计算化合物的ic50。
其结果如下：
表1显示了本发明中部分化合物的ic50值。
字母a代表ic50≤100nm；
字母b代表ic50为＞100nm至≤500nm；
字母c代表ic50为＞500nm至≤1μm；
表1
注：“/”表示未测定
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。