4-氨基嘧啶化合物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及4个化合物及含有这些化合物的药用组合 物，以及它们的医疗用途，特别是作为Polo样激酶I (PLKl)抑制剂的用途。
【背景技术】
[0002] 近年来，肿瘤已超越心血管疾病，成为全球第一大死亡疾病，抗肿瘤药物研究具有 重要的学术和现实意义。
[0003] 研究发现，几乎所有的肿瘤都与细胞周期调控机制紊乱所导致的细胞生长失控、 分化受阻、凋亡异常有关。肿瘤细胞分裂频率较正常细胞快，各种调控微管聚合、中心体复 制、纺锤体形成以及胞质分裂的蛋白常常过度表达，且活性增强。传统的抗肿瘤化疗药物中 重要的一类就是通过作用于微管蛋白，使微管蛋白聚合或解聚，从而达到干扰肿瘤细胞分 裂，抑制肿瘤生长的目的，如临床广泛使用的长春碱类药物和紫杉醇类药物。但是微管蛋白 在正常细胞中也具有极其重要的作用，还参与神经突触信号传导，因此传统的微管蛋白干 扰剂存在较大的毒副作用，如紫杉醇对外周神经系统有明显的毒性，另外它们的吸收分布 性能也不太理想。所以现在人们将目光投向那些在肿瘤细胞中过度表达且能调控微管蛋白 功能、影响纺锤体作用的特异性蛋白，如微管驱动蛋白（kinesin)、Aurora激酶、Polo-Iike 激酶（PLKs)等。
[0004] PLKs为丝/苏氨酸激酶，在多种有机体中结构保守。人类细胞内共包含3个 紧密相关的成员，即 PLK1、PLK2(也称为 Serum-Inducible Kinase，Snk)、PLK3(也称为 Fibroblast Growth Factor-Inducible Kinase，Fnk 或 Prk)，另外还有一个相对较远的成 员，即PLK4 (又称SNK akin Kinase，Sak)。通常PLKs具有高度保守的N端丝/苏氨酸蛋 白激酶域（约252个氨基酸残基），同时根据亚型不同包含1个（PLK4)或2个（PLK1-3)位 于C端保守的磷酸肽结合部位一polo-box (60-70个残基），两个串联起来的polo-box构成 了 polo-box domain (PBD)。迄今对PLKl的研究最多，其功能和调控机制较为清晰。
[0005] PLKl主要参与凋节中心体成熟；活化⑶Kl-cyclin B，以进入有丝分裂；募集Y 微管蛋白环状复合物，促进双极纺锤体形成、姐妹染色体分离；磷酸化分裂后期促进复合 物（anaphase-promoting complex/cyclosome，APC/C)，抑制早期有丝分裂抑制子（early mitotic inhibitor, EMI-1)，驱动有丝分裂进程。研究发现，PLKl能促进分裂细胞中膜形 成，磷酸化驱动蛋白样动力蛋白MKLPl和nuclear distribution gene C(NUDC),参与胞质 分裂。实际上在分裂后期PLKl能促进Rho GTP酶交换因子Ect2定位至纺锤体中部，启动 胞质分裂，Ect2在细胞皮质处激活RhoA，RhoA触发肌动球蛋白收缩环的聚集，同时促进细 胞中间凹陷缢缩。亚细胞区域定位实验表明，PLKl在不同时期定位于中心体、赤道板、着丝 粒及胞质分裂处。在GO期到S期之间，PLKl的表达量和活性停留在较低水平，从G2期开 始上升，于M期达到顶峰。但PLKl并不是从G2期到分裂前期的必需因子，而PLKl受到抑 制时，则会较大程度地延长过渡到前中期（prometaphase)所需的时间。
[0006] 许多证据表明，PLKl是一个很有吸引力的抗肿瘤治疗靶标。首先，PLKl在多种肿 瘤（乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、子宫内膜癌、脑肿瘤、皮肤癌、头颈癌、食道癌、 胃癌、前列腺癌）中均过度表达，它的表达在特定肿瘤中是不良预后的标志之一，而且在正 常细胞中（除胎盘、脾脏、卵巢、睾丸等生长增殖较快的细胞外）PLKl的表达水平很低，有时 甚至无法测出。第二，PLKl的组成性活化可诱导NIH3T3成纤维细胞的恶性转化。第三，PLKl 磷酸化P53,使后者丧失促肿瘤细胞凋亡作用。第四，无论是野生型还是失活型（LyS82Met mutant) ,PLKl的过度表达均引起多核化。第五，高活性PLKl (Thr210Asp mutant)的表达可 越过DNA损伤引起G2期停滞检查。重要的是，许多学者的工作表明，用反义技术、siRNA技 术或小分子抑制剂敲除肿瘤细胞中的PLKl能造成瘤细胞双极纺锤体形成受阻，生长抑制， 甚至凋亡。向Hela细胞中注射特异性抗体可明显抑制细胞的迷乱增殖，分裂细胞呈单极 纺锤体现象（指染色体聚集在示分离的中心体附近组成一个单中心核），在10种细胞系中 使病毒表达PLKl显性负基因，可致两种细胞系发生"有丝分裂灾难"。与此相反，敲除正常 细胞系中的PLKl并没有表现出明显的细胞周期受阻和生长抑制，如正常上皮细胞中表达 显性负性PLKl仅表现为生长缓慢，但中心体成熟正常，较少引发细胞凋亡，另外，抑制PLKl 活性可以抑制肿瘤细胞在软琼脂上形成细胞群落，还能抑制鼠肿瘤畸形嫁接模型的肿瘤生 成。
[0007] 目前，许多公司都开展了针对PLKl的抑制剂研究，对PLKs的分子生物学功能 的研究文献日益增多，相关专利也不断出现。Cyclacel、GlaxoSmithKline、Onconova、 Boehringer IngelheinuSuperGen和日本新药株式会社等公司均开发出了自己PLKl抑 制剂，其中B12536已进入临床II期研究。但总体而言，目前PLKl抑制剂及其结构类型 尚不多，而且许多报道的PLKl抑制剂为非特异性抑制剂，如Wortmannin、Scytonemin、 Staurosporine、morin、0N-01910 及 HMN-214,仅 BI2536、GSK-461364 和 LFM-A13 为 PLKl 选 择性抑制剂。由于PLKs其它亚型表现出部分抑制肿瘤发生的作用，如PLK3在DNA损伤时 促进检查修复，因此研究PLKl选择性抑制剂成为当前热点。
【发明内容】
[0008] 本发明根据14个PLKl抑制剂的晶体复合物构建了基于受体的药效团模型，包括4 个必需特征和5个非必需特征。必需特征代表了 PLKl抑制剂的最公共作用模式，非必需特 征对应于抑制剂的结构多样性。该模型能够很好地与PLKl的活性位点相匹配，充分地反映 受体对化合物结构与特征要求。而且该模型还具有较强的活性构象识别能力，可用于研究 新结构类型的PLKl抑制剂的作用模式。利用回顾性分析手段评估该模型的虚拟筛选能力， 发现4个必需特征加上3个非水分子相关的非必需特征的性能最好，富集因子高达29. 82， GH > 0. 6,充分证明其良好的虚拟筛选能力。使用该模型进行虚拟筛选后得到了 4个新的 PLKl抑制剂。
[0009] 本发明的目的在于，提供上述化合物或其药学上可接受盐及其药用组合物的医疗 用途，尤其是在预防、延缓或治疗PLKl参与或不参与介导的疾病，特别是肿瘤的药物中的 用途。
[0010] 为实现上述目的，本发明提供具有如下所示结构的化合物或其药学上可接受的 盐：
[0011]
[0012] 以上化合物的合成方法可以从已发表的相关文献和专利中获取。
[0013] 根据本发明，药学上可接受的盐包括化合物1~化合物4与下列酸形成的酸加成 盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、 丙酮酸、乙酸、马来酸或琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸、杏仁酸。此外还包括无机碱的