丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法与流程

本发明涉及一种丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法，属于药品制剂制备方法技术领域。

背景技术：

木鳖子为葫芦科植物木鳖Momordica cochinchinensis(Lour.)Spreng.的干燥成熟种子，主要分布于长江流域及以南地区(江苏、安徽、江西、福建等)，中南半岛和印度半岛亦有分布。木鳖子味苦、微甘，性凉；有毒。归肝、脾、胃经。具有散结消肿，攻毒疗疮的作用。常用于疮疡肿毒，乳痈，瘰疠，痔漏，干癣，秃疮等。其所含化学成分主要为皂苷类，多属于五环三萜齐墩果烷型的双糖链三萜皂苷，具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒的多种药理作用。《中国药典》2015版一部中木鳖子含量测定成分为木鳖子皂苷的次级苷，丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(分子式C37H56O10)。

现有技术中高纯度丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的提取分离方法主要采用硅胶层析法，此类提取分离方法产率低，操作过程污染严重，基本无法实现大规模工业化生产。

本发明提供了一种丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法。

技术实现要素：

为克服现有技术的不足，本发明提出一种丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法，该方法对木鳖子提取物进行酸水解后，再经过大孔吸附树脂富集和制备液相分离，有利于大规模生产，并且生产过程污染少，产品纯度高。

为实现上述目的，本发明的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法，包括以下步骤：

S1：取木鳖子碾磨成粗粉，加石油醚在60℃-90℃条件下脱脂，弃去石油醚，木鳖子粗粉挥尽溶剂；

S2：取步骤S1得到的木鳖子粗粉，以20％-85％的乙醇溶液为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒以重量比1:5-15进行加热回流提取，加热回流提取1-4次，每次1-4h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏；

S3：取步骤S2中得到的浸膏与酸液以重量比1:15-30溶解，回流水解1-4h，过滤，得到滤液；

S4：取步骤S3中得到的滤液加于已处理好的大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲洗至无色，以10％-80％乙醇溶液作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液并减压浓缩至干；

S5：取步骤S4中的得到的固体加甲醇溶解，经制备液相色谱，以乙腈-甲酸水溶液为流动相进行洗脱分离，分离条件为柱温35℃，流速5.0ml/min,检测波长210mm，收集洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

进一步地，在步骤S2中，溶媒采用55％的乙醇溶液。

进一步地，在步骤S3中，酸液采用1％-10％的硫酸、1％-10％的盐酸或1％-10％的硼酸。

进一步地，酸液的浓度为5％。

进一步地，在步骤S3中，浸膏与酸液的重量比为1:20。

进一步地，在步骤S3中，回流水解时间为2h。

进一步地，在步骤S4中，大孔吸附树脂柱采用HPD-100大孔吸附树脂、HPD-300大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂或D-101大孔吸附树脂。

进一步地，在步骤S4中，洗脱剂采用60％的乙醇溶液。

进一步地，在步骤S5中，流动相采用乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)。

进一步地，在步骤S5中，制备柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶。

本发明的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法，在将木鳖子粗提取物经水解后获得更多次级皂苷，有利于后续进行提取分离，由大孔吸附树脂除去多糖等大分子成分，提升了丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的提取纯度，有利于通过制备液相色谱收集高纯度的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步描写和阐述。

图1是本发明首选实施方式的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法制得产品的¹H NMR图谱；

图2是本发明首选实施方式的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法制得产品的¹³C NMR谱图；

图3是本发明首选实施方式的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法制得产品的质谱(正离子)图谱；

图4是本发明首选实施方式的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法制得产品的质谱(负离子)谱图。

具体实施方式

下面将结合附图、通过对本发明的优选实施方式的描述，更加清楚、完整地阐述本发明的技术方案。

试验方法：

(1)质谱仪法：照《中国药典》2015版中通则0431：质谱法进行分析，谱图数据对照文献[质谱学报，2002,23(3)：135-140]，应基本一致。

(2)核磁共振波谱法：照《中国药典》2015版中通则0441：核磁共振波谱法中的¹H NMR法与¹³C NMR法进行定性分析。

(3)高效液相色谱：照《中国药典》2015版中通则0512：高效液相色谱法进行含量测定。

实施例一：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉2kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以50％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:8，加热回流3次，每次2h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加30倍量的5％硫酸水溶液溶解，回流水解2h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用60％乙醇3BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例二：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉2kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以85％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:12，加热回流2次，每次3h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加20倍量的8％盐酸水溶液溶解，回流水解1.5h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的HPD-100大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用80％乙醇2BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例三：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉3kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以30％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:6，加热回流3次，每次1.5h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加15倍量的4％硼酸水溶液溶解，回流水解4h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的D-101大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用50％乙醇5BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例四：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉2kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以55％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:5，加热回流4次，每次1h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加28倍量的5％硫酸水溶液溶解，回流水解1h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的HPD-300大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用10％乙醇7BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例五：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉2kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以20％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:15，加热回流4次，每次4h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加25倍量的10％硫酸水溶液溶解，回流水解3h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的X-5大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用70％乙醇3BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例六：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉2kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以40％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:10，加热回流4h，滤过，取提取液，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加23倍量的1％硫酸水溶液溶解，回流水解2.5h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用40％乙醇5BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例七：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉3kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以35％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:14，加热回流2次，每次2.5h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加27倍量的5％硫酸水溶液溶解，回流水解3.5h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用30％乙醇6BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例八：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉2kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以60％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:7，加热回流2次，每次3h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加17倍量的5％硫酸水溶液溶解，回流水解1h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用20％乙醇7BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例九：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉2kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以70％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:11，加热回流3次，每次2h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加19倍量的5％硫酸水溶液溶解，回流水解2h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用45％乙醇4BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

实施例十：丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备。

S1：取木鳖子粗粉3kg，加石油醚(60℃～90℃)脱脂，弃去石油醚，药渣挥尽溶剂。

S2：以80％乙醇作为溶媒，木鳖子粗粉与溶媒的重量比为1:13，加热回流3次，每次2h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇至浸膏。

S3：浸膏加22倍量的5％硫酸水溶液溶解，回流水解2h，过滤。

S4：滤液加于已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱上以1BV/h的流速进行吸附，流出液弃去，待上样饱和后先以水冲至无色，再用65％乙醇3BV作为洗脱剂，以0.5BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液减压浓缩至干。

S5：用适量甲醇溶解固体，经制备液相色谱，以乙腈：0.5％甲酸水溶液(75:25)为流动相，柱温35℃，流速5.0ml/min，检测波长210nm进行分离，根据对照品的保留时间，收集丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯部分洗脱液合并，减压回收溶剂，冻干，得白色粉末。

检测结果如下表所示：

本发明的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的制备方法，在将木鳖子粗提取物经水解后获得更多次级皂苷，有利于后续进行提取分离，由大孔吸附树脂除去多糖等大分子成分，提升了丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯的提取纯度，有利于通过制备液相色谱收集高纯度的丝石竹皂苷元3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯。

上述具体实施方式仅仅对本发明的优选实施方式进行描述，而并非对本发明的保护范围进行限定。在不脱离本发明设计构思和精神范畴的前提下，本领域的普通技术人员根据本发明所提供的文字描述、附图对本发明的技术方案所作出的各种变形、替代和改进，均应属于本发明的保护范畴。本发明的保护范围由权利要求确定。