本发明涉及化合物制备
技术领域：
：，具体涉及一种双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的制备方法。
背景技术：
：：双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱，简称bis-dienpc，是一类二烯酰基磷脂，其作为药物传递系统的载体受到广泛关注，可用于包封药物，例如抗癌剂，蛋白质和其他生物活性物质。此外，双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱容易形成聚(脂质)囊泡和平面支撑的双层，能显著提高对表面活性剂，溶剂，长期储存的稳定性，该类磷脂可发生交联聚合，相比于线性聚合能够显著增强膜的稳定性，改变离子和小分子的渗透性。所以研发出一条经济实惠，操作简便的制备方法有着非常重要的意义和价值。关于磷脂酰胆碱中间体的合成已有相关文献报道。目前文献报道双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成路线有两种。文献jpnes,i.w.andhalljr.h.k..demonstrationofaconvergentapproachtouv-polymerizablelipidsbisdenpcandbissorbpc[j].tetrahedronletters,2011,52,3699–3701，其记载的路线一如图1所示，十八碳-2,4-二烯酸与(r)-3-苄氧基-1,2-丙二醇在dmap的作用下得到化合物(2)，然后，在三氯化硼作用下低温(-78℃)脱苄基，再与环磷杂环戊烷反应，继而通三甲胺气体，得到目标化合物(3)。文献heitzb.a.,jonesi.w.,hallh.k.,etal.fractionalpolymerizationofasuspendedplanarbilayercreatesafluid,highlystablemembraneforionchannelrecordings[j].j.am.chem.soc.,2010,132,7086–7093和dornk.,klingbielr.t.,spechtd.p..permeabilitycharacteristicsofpolymericbilayermembranesfrommethacryloylandbutadienelipids[j].j.am.chem.soc.,1984,106,1627-1633中记载的路线二如图2所示，以化合物(1)为起始原料，在dcc作用下，缩合得到相应的酸酐(4)，然后在dmap作用下与甘油磷脂酰胆碱(gpc)缩合得到目标化合物(3)。该方案中合成化合物(4)的收率只有25％，并且与gpc缩合时要损失一分子的化合物(1)，原子经济性差，收率低，成本高。技术实现要素：本发明解决的技术问题在于现有的双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成方法收率低、成本高。如图3所示，图3为本发明双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成路线图。本发明是采用以下技术方案解决上述技术问题的：本发明提供一种双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的制备方法，包括以下步骤：(1)将化合物ⅰ，即3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙二醇与2,4-十八烷二烯酸发生酯化反应生成化合物ⅱ；(2)将步骤(1)中合成的化合物ⅱ与2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌(ddq)混合，发生醚的脱保护反应生成化合物ⅲ；(3)将步骤(2)中合成的化合物ⅲ与b-溴乙基磷酰二氯发生磷酰化反应生成化合物ⅳ；(4)将将步骤(3)中合成的化合物ⅳ与三甲胺气体发生水解反应后，生成终产物ⅴ，即双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱。优选的，所述步骤(1)的酯化反应过程中使用的溶剂包括二氯甲烷(dcm)，所述酯化反应过程中使用的缩合剂为二环己基碳二亚胺(dcc)或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci)；所述酯化反应过程中使用的催化剂为4-二甲氨基吡啶(dmap)。优选的，所述步骤(1)化合物ⅰ与缩合剂的摩尔比为2:2.5。优选的，所述步骤(1)中的反应温度为10-20℃，反应时间为7-9h。优选的，对步骤(1)中生成的化合物ⅱ进行纯化，所述纯化步骤包括抽滤、酸化、萃取、干燥、蒸干。优选的，所述步骤(2)中脱保护反应使用的溶剂为二氯甲烷(dcm)，所述化合物ⅱ与2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌(ddq)的当量比为1.0:1.0～1.5。优选的，所述步骤(2)中的反应温度为10℃，反应时间为3-5h。优选的，对步骤(2)中生成的化合物ⅲ进行纯化，所述纯化步骤包括采用亚硫酸钠水溶液洗涤、萃取、干燥、蒸干后获得粗品，将获得的粗品按顺序采用水、乙醇、pe:ea＝20：1打浆，抽滤得到产物。优选的，所述步骤(3)中磷酰化反应中使用的溶剂为二氯甲烷(dcm)或四氢呋喃(thf)，所述磷酰化反应中使用的催化剂为三乙胺或吡啶。优选的，所述步骤(4)化合物ⅳ与三甲胺反应的温度为30℃～60℃，反应时间为7-10h。优选的，所述步骤(4)中还包括纯化步骤，所述纯化步骤包括抽滤，将抽滤获得的滤饼用乙腈打浆。本发明的有益效果在于：(1)本发明采用简单的化合物ⅰ为起始原料，经过酯化、醚的脱保护、磷酰化反应以及水解反应得到化合物ⅴ即双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱，反应中化合物的手性不发生变化，收率高，总收率可达y＝85.6％*83.3％*80.1％*85.7％＝49％；(2)本发明不涉及昂贵试剂的使用，降低了成本；(3)本发明的合成工艺涉及的操作简便，条件易控，易于工业化生产。附图说明图1为现有技术中双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成路线一；图2为现有技术中双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成路线二；图3为本发明双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成路线图。具体实施方式以下将结合说明书附图和实施例对本发明做进一步详细说明。下述实施例中所用的试验材料和试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例中未注明具体技术或条件者，均可以按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。实施例1化合物ⅱ：2,4-十八烷二烯酸-3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙二酯的合成将4g化合物ⅰ3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙二醇与溶于40ml二氯甲烷(dcm)中，加入13.21g2,4-十八烷二烯酸，再加入2.30g的4-二甲氨基吡啶(dmap)和7.78g二环己基碳二亚胺(dcc)，体系逐渐变得浑浊，反应温度为15℃，薄层色谱(tlc)监测反应进度(乙酸乙酯：石油醚＝5：1)，反应9h。抽滤除去不溶物后，抽滤的母液用1mhcl洗涤，分层，dcm层水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干得无色油状物。过柱纯化得化合物ⅱ11.9g，收率为11.9/(4*737.12/212.25)＝85.6％。其中，化合物ⅱ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.60(dd,j＝30.2,18.9hz,1h),6.95(td,j＝15.1,12.6hz,2h),6.50(ddt,j＝30.2,8.6,1.9hz,1h),5.72(dt,j＝30.2,12.4hz,1h),5.48(tt,j＝13.5,10.8hz,1h),5.32(d,j＝30.2hz,1h),4.56(dd,j＝24.9,13.6hz,1h),4.46(s,1h),4.18(dd,j＝24.8,13.6hz,1h),3.79(s,1h),3.71(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),3.39(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),2.11-1.89(m,2h),1.41–1.15(m,23h),0.96–0.80(m,3h).实施例2化合物ⅱ：2,4-十八烷二烯酸-3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙二酯的合成将4g化合物ⅰ3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙二醇溶于40mldcm中，加入13.21g2,4-十八烷二烯酸，再加入2.30g的dmap和7.23g1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci)，体系逐渐变得浑浊，反应温度为15℃，薄层色谱(tlc)监测反应进度(乙酸乙酯：石油醚＝5：1)，反应9h。抽滤除去不溶物。抽滤的母液用1mhcl洗涤，分层，dcm层水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干得无色油状物。过柱纯化得化合物ⅱ11.3g，收率为11.3/(4*737.12/212.25)＝81.2％。其中，化合物ⅱ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.60(dd,j＝30.2,18.9hz,1h),6.95(td,j＝15.1,12.6hz,2h),6.50(ddt,j＝30.2,8.6,1.9hz,1h),5.72(dt,j＝30.2,12.4hz,1h),5.48(tt,j＝13.5,10.8hz,1h),5.32(d,j＝30.2hz,1h),4.56(dd,j＝24.9,13.6hz,1h),4.46(s,1h),4.18(dd,j＝24.8,13.6hz,1h),3.79(s,1h),3.71(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),3.39(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),2.11-1.89(m,2h),1.41–1.15(m,23h),0.96–0.80(m,3h).实施例3化合物ⅱ：2,4-十八烷二烯酸-3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙二酯的合成将4g化合物ⅰ3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙二醇溶于40mldcm中，加入13.21g2,4-十八烷二烯酸，再加入2.30g的dmap和9.72gdcc，体系逐渐变得浑浊，反应温度为30℃，薄层色谱(tlc)监测反应进度(乙酸乙酯：石油醚＝5：1)，反应7h。抽滤除去不溶物。抽滤的母液用1mhcl洗涤，分层，dcm层水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干得无色油状物。过柱纯化得化合物ⅱ11.8g，收率为11.8/(4*737.12/212.25)＝84.9％。其中，化合物ⅱ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.60(dd,j＝30.2,18.9hz,1h),6.95(td,j＝15.1,12.6hz,2h),6.50(ddt,j＝30.2,8.6,1.9hz,1h),5.72(dt,j＝30.2,12.4hz,1h),5.48(tt,j＝13.5,10.8hz,1h),5.32(d,j＝30.2hz,1h),4.56(dd,j＝24.9,13.6hz,1h),4.46(s,1h),4.18(dd,j＝24.8,13.6hz,1h),3.79(s,1h),3.71(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),3.39(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),2.11-1.89(m,2h),1.41–1.15(m,23h),0.96–0.80(m,3h).实施例4化合物ⅲ：2,4-十八烷二烯酸-3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙三醇的合成将10g化合物ⅱ溶于50mldcm中，加入3.08gddq，再加入2ml的水，反应温度为10℃，反应3h后，将产物用亚硫酸钠水溶液洗涤，干燥，蒸干，获得的粗品先后用水、乙醇、聚乙烯：乙酸乙酯(pe:ea)＝20：1打浆，抽滤，得白色固体6.46g，收率为6.46/(10*616.97/737.12)＝76.9％。其中，化合物ⅲ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.41–7.21(m,1h),6.19(dd,j＝7.2,3.2hz,1h),5.83(dd,j＝15.3,9.9hz,1h),5.23–5.09(m,1h),4.41(d,j＝5.1hz,1h),3.80(d,j＝4.6hz,1h),2.19(dd,j＝11.9,6.8hz,1h),1.51–1.39(m,1h),1.29(d,j＝7.9hz,8h),0.90(t,j＝6.9hz,1h).实施例5化合物ⅲ：2,4-十八烷二烯酸-3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙三醇的合成将10g化合物ⅱ溶于50mldcm中，加入3.70gddq，再加入2ml的水，反应温度为10℃，反应3h。将产物用亚硫酸钠水溶液洗涤，干燥，蒸干，获得的粗品先后用水、乙醇、pe:ea＝20：1打浆，抽滤，得白色固体7.0g，收率为7.0/(10*616.97/737.12)＝83.3％。其中，化合物ⅲ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.41–7.21(m,1h),6.19(dd,j＝7.2,3.2hz,1h),5.83(dd,j＝15.3,9.9hz,1h),5.23–5.09(m,1h),4.41(d,j＝5.1hz,1h),3.80(d,j＝4.6hz,1h),2.19(dd,j＝11.9,6.8hz,1h),1.51–1.39(m,1h),1.29(d,j＝7.9hz,8h),0.90(t,j＝6.9hz,1h).实施例6化合物ⅲ：2,4-十八烷二烯酸-3-(4-甲氧基苯甲基氧基)-1,2-丙三醇的合成将10g化合物ⅱ溶于50mldcm中，加入4.62gddq，再加入2ml的水，反应温度为10℃，反应3h。将产物用亚硫酸钠水溶液洗涤，干燥，蒸干；获得的粗品先后用水、乙醇、pe:ea＝20：1打浆，抽滤，得白色固体6.57g，收率为6.57/(10*616.97/737.12)＝78.2％。其中，化合物ⅲ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.41–7.21(m,1h),6.19(dd,j＝7.2,3.2hz,1h),5.83(dd,j＝15.3,9.9hz,1h),5.23–5.09(m,1h),4.41(d,j＝5.1hz,1h),3.80(d,j＝4.6hz,1h),2.19(dd,j＝11.9,6.8hz,1h),1.51–1.39(m,1h),1.29(d,j＝7.9hz,8h),0.90(t,j＝6.9hz,1h).实施例7化合物ⅳ：双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷酸溴乙酯的合成在配有磁力搅拌的50ml三颈瓶中，将5g(mol)化合物ⅲ溶于20ml干燥的thf中，加入1.64g三乙胺。冰水浴下滴加3.92gb-溴乙基磷酰二氯。15℃反应2h。取样tlc检测，原料反应结束后，加入15ml饱和碳酸氢钠溶液，使化合物形成钠盐，搅拌过夜。隔天取样tlc检测，产物生成后，用1mhcl洗涤，萃取，分液，水相用dcm萃取，合并有机相。饱和氯化钠溶液洗涤，加入无水硫酸钠室温干燥10min，蒸干，硅胶柱层析得到5.28g无色油状物，收率为5.28/(5*802.89/616.97)＝78.8％。其中，化合物ⅲ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.55(dd,j＝30.2,12.3hz,1h),6.47(ddt,j＝41.0,30.2,1.8hz,1h),5.80–5.57(m,2h),5.35(s,1h),5.29(s,1h),4.70–4.46(m,2h),4.38(ddd,j＝25.3,17.0,8.4hz,1h),4.24–4.05(m,1h),3.74(t,j＝14.8hz,1h),2.08–1.95(m,2h),1.37–1.18(m,23h),0.96–0.83(m,3h).实施例8化合物ⅳ：双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷酸溴乙酯的合成在配有磁力搅拌的50ml三颈瓶中，将5g化合物ⅲ溶于20ml的干燥的thf中，加入1.28g吡啶。冰水浴下滴加3.92gb-溴乙基磷酰二氯。15℃反应2h，取样tlc检测，原料反应结束后，加入15ml饱和碳酸氢钠溶液，使化合物形成钠盐，搅拌过夜。隔天取样tlc检测，产物生成后，用1mhcl洗涤，萃取，分液，水相用dcm萃取，合并有机相。饱和氯化钠溶液洗涤，加入无水硫酸钠室温干燥10min，蒸干，硅胶柱层析得到5.17g无色油状物，收率为5.17/(5*802.89/616.97)＝77.3％。其中，化合物ⅳ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.55(dd,j＝30.2,12.3hz,1h),6.47(ddt,j＝41.0,30.2,1.8hz,1h),5.80–5.57(m,2h),5.35(s,1h),5.29(s,1h),4.70–4.46(m,2h),4.38(ddd,j＝25.3,17.0,8.4hz,1h),4.24–4.05(m,1h),3.74(t,j＝14.8hz,1h),2.08–1.95(m,2h),1.37–1.18(m,23h),0.96–0.83(m,3h).实施例9化合物ⅳ：双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷酸溴乙酯的合成在配有磁力搅拌的50ml三颈瓶中，将5g化合物ⅲ溶于20ml的dcm中，加入1.28g吡啶。冰水浴下滴加3.92gb-溴乙基磷酰二氯。15℃反应2h。取样tlc检测，原料反应结束后，加入15ml饱和碳酸氢钠溶液，使化合物形成钠盐，搅拌过夜。隔天取样tlc检测，产物生成后，用1mhcl洗涤，萃取，分液，水相用dcm萃取，合并有机相。饱和氯化钠溶液洗涤，加入无水硫酸钠室温干燥10min，蒸干，硅胶柱层析得到5.36g无色油状物，收率为5.36/(5*802.89/616.97)＝80.1％。其中，化合物ⅳ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.55(dd,j＝30.2,12.3hz,1h),6.47(ddt,j＝41.0,30.2,1.8hz,1h),5.80–5.57(m,2h),5.35(s,1h),5.29(s,1h),4.70–4.46(m,2h),4.38(ddd,j＝25.3,17.0,8.4hz,1h),4.24–4.05(m,1h),3.74(t,j＝14.8hz,1h),2.08–1.95(m,2h),1.37–1.18(m,23h),0.96–0.83(m,3h).实施例10化合物ⅴ：双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成将5g化合物ⅳ转移至压力瓶中，向体系中通入过量干燥的三甲胺气体，密封压力瓶，30℃下反应10h后，抽滤，滤饼用乙腈打浆，得到白色蜡状固体4.01g，收率为4.01/(5*802.89/616.97)＝82.1％。其中，化合物ⅳ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.60(dd,j＝30.2,18.9hz,1h),6.95(td,j＝15.1,12.6hz,2h),6.50(ddt,j＝30.2,8.6,1.9hz,1h),5.72(dt,j＝30.2,12.4hz,1h),5.48(tt,j＝13.5,10.8hz,1h),5.32(d,j＝30.2hz,1h),4.56(dd,j＝24.9,13.6hz,1h),4.46(s,1h),4.18(dd,j＝24.8,13.6hz,1h),3.79(s,1h),3.71(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),3.39(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),2.11–1.89(m,2h),1.41–1.15(m,23h),0.96–0.80(m,3h).实施例11化合物ⅴ：双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成将5g化合物ⅳ转移至压力瓶中，向体系中通入过量干燥的三甲胺气体，密封压力瓶，40℃下反应8h后，抽滤，滤饼用乙腈打浆，得到白色蜡状固体4.17g，收率为4.17/(5*782.10/802.89)＝85.7％。其中，化合物ⅳ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.60(dd,j＝30.2,18.9hz,1h),6.95(td,j＝15.1,12.6hz,2h),6.50(ddt,j＝30.2,8.6,1.9hz,1h),5.72(dt,j＝30.2,12.4hz,1h),5.48(tt,j＝13.5,10.8hz,1h),5.32(d,j＝30.2hz,1h),4.56(dd,j＝24.9,13.6hz,1h),4.46(s,1h),4.18(dd,j＝24.8,13.6hz,1h),3.79(s,1h),3.71(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),3.39(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),2.11–1.89(m,2h),1.41–1.15(m,23h),0.96–0.80(m,3h).实施例12化合物ⅴ：双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成将5g化合物ⅳ转移至压力瓶中，向体系中通入过量干燥的三甲胺气体，密封压力瓶，60℃下反应8h后，抽滤，滤饼用乙腈打浆，得到白色蜡状固体4.10g，收率为4.10/(5*782.10/802.89)＝84.2％。其中，化合物ⅳ的核磁共振数据如下所示，根据氢原子的归属确定化合物结构：1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.60(dd,j＝30.2,18.9hz,1h),6.95(td,j＝15.1,12.6hz,2h),6.50(ddt,j＝30.2,8.6,1.9hz,1h),5.72(dt,j＝30.2,12.4hz,1h),5.48(tt,j＝13.5,10.8hz,1h),5.32(d,j＝30.2hz,1h),4.56(dd,j＝24.9,13.6hz,1h),4.46(s,1h),4.18(dd,j＝24.8,13.6hz,1h),3.79(s,1h),3.71(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),3.39(dd,j＝24.7,10.8hz,1h),2.11–1.89(m,2h),1.41–1.15(m,23h),0.96–0.80(m,3h).综上所述，合成工艺中的参数为最佳，酯化反应中，2,4-十八烷二烯酸不可以低于2.0，否则会产生单酯化的副产物，降低产率；倘若过量加入，则不仅要除去未反应的2,4-十八烷二烯酸，还会导致成本升高；脱保护反应中室温即可达到反应条件，提高反应温度可以缩短反应时间；膦酰化反应中使用有机碱吡啶的产率更高，三乙胺作为无机碱，产率稍低；水解反应中，三甲胺是过量的，由于其为气体，所以要保证反应的密闭性，并可使用ph试纸来判断三甲胺是否足够。本发明的双(十八碳-2,4-二烯酰基)磷脂酰胆碱的合成方法具有成本低、产率高、易于工业化生产的优点。以上仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，与本发明构思无实质性差异的各种工艺方案均在本发明的保护范围内。当前第1页12当前第1页12