本发明涉及药物化学领域，具体涉及二氢蝶啶酮-磺酰胺类衍生物及其药学上可接受的盐、其制备方法及其应用。
背景技术：
恶性肿瘤是威胁我国人民群众健康的头号重大疾病。国家癌症中心数据显示，目前我国每分钟就有7.5人被确诊患癌。因此，抗肿瘤药物及其相关靶点抑制剂的研究具有重要的临床意义和社会价值。
brd(bromodomain)，又称溴结构域蛋白，是一类能够特异性识别乙酰化赖氨酸残基的保守蛋白结构域，其对染色质组装和基因转录起着关键的调控作用。多项研究证明brd是高度可适配的药物靶点，作用于brd的小分子抑制剂在肿瘤治疗中有广阔的前景。
brd4是溴结构域蛋白家族中的一员，其生物功能研究最为广泛和深入。brd4不仅可以识别启动子区域，还可以识别基因间和基因内的区域，与基因表达有关。brd4蛋白在生理状态下执行转录调节功能，调节正常的细胞进程；而在异常状态下，它们募集各种蛋白质到染色质和转录位点，调节与基因表达密切相关的基因如c-myc和bcl-2的转录。以brd4在细胞间期以正性转录延伸因子(positivetranscriptionelongationfactor，p-tefb)依赖性方式募集蛋白质，并通过与rna聚合酶ⅱ偶联来调节转录过程，从而促进疾病相关的基因异常表达。
大量研究表明brd4蛋白与肿瘤的发生发展具有密切关系，如brd4的bromodomain编码区与nut(睾丸中的核蛋白)基因染色质异位形成brd-nut融合型原癌基因可导致中线癌；抑制黑色素瘤中的brd4表达可明显减慢黑色素瘤细胞的生长；抑制恶性外周神经鞘膜瘤细胞中的brd4表达，可导致该肿瘤细胞的死亡；抑制brd4可抑制肝癌细胞的增殖；通过干扰brd4与癌基因myc的结合，在多种造血系统肿瘤，如aml、burkitt淋巴瘤、多发性骨髓瘤及b细胞急性淋巴性白血病的模型中，可直接导致癌基因myc的沉默。溴结构域蛋白可调控炎症基因表达的组蛋白乙酰化依赖性染色质复合物的组装并调节炎症基因的转录。研究表明brd4可以充当nf-kb的转录共激活因子而促进炎症的发生。在心血管疾病领域，brd4也被发现心肌细胞肥大过程中起到病理基因反式激活的关键共激活剂作用，在心力衰竭中扮演着重要的角色；brd4小分子抑制剂jq1可能成为潜在的治疗心力衰竭的药物，改善心脏功能。
溴结构域蛋白家族在抗炎、抗肿瘤方面的潜在价值引起了全球各大制药公司和高校、科研机构的高度关注，brd4也成为相关领域内的重要靶标。以brd4为靶标，寻找其高活性、高选择性的小分子抑制剂成为当前治疗肿瘤、炎症、心血管疾病、艾滋病等疾病研究热点，具有广阔的开发应用前景。
目前，以jq1为代表的多种brd4小分子抑制剂已被报道，其相关化合物otx-015、i-bet762、ten-010、cpi-0610、rvx-208等已进入临床阶段研究，用于急性白血病、其它血液恶性肿瘤、晚期实体瘤、胶质母细胞瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、中线癌、乳腺癌、冠心病、动脉硬化、非小细胞肺癌等等肿瘤及恶性疾病的治疗。然而，目前进入临床阶段研究的brd4小分子抑制剂并不多，迫切需要寻找更多的新型、高效的brd4抑制剂，为肿瘤等疾病的治疗提供新选择。
申请人曾于中国发明专利cn109503586a中报道了一类新型的二氢蝶啶酮类brd4蛋白抑制剂，其具有腙键的结构特征，对brd4蛋白抑制活性可达ic500.24μm。为进一步提高brd4抑制剂的活性，提供抗肿瘤药物的新的选择，申请人对该类化合物做了进一步研究。
技术实现要素：
本发明针对现有技术存在的问题，提供一种二氢蝶啶酮-磺酰胺类衍生物及其制备方法和应用，为在抑制含溴结构域蛋白brd4方面的抗肿瘤药物研发提供新的选择。
本发明采用的技术方案如下：
一种二氢蝶啶酮-磺酰胺类衍生物，其结构如通式(i)所示：
其中，r1为饱和烃基、芳基或杂环基；
所述饱和烃基为1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基、3-6个碳原子的环状饱和烃基、连接有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的3-6个碳原子的环状饱和烃基；
所述芳基为纯粹的以及被1、2或3个第一取代基取代的苯基、苄基、萘基中的任意一种；
所述杂环基为纯粹的以及被1、2或3个第一取代基取代的哌啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、吲哚基，吗啉基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哌嗪基、取代哌嗪基、吡嗪基、哒嗪基中的任意一种；
r2为氢、烷氧基、芳氧基或杂环基；
所述烷氧基中的烷基为1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基、3-6个碳原子的环状饱和烃基、或连接有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的3-6个碳原子的环状饱和烃基，且其中各碳原子任选被氧取代；
所述芳氧基中的芳基为纯粹的以及被1、2或3个第一取代基取代的苯基、苄基、萘基中的任意一种；
所述杂环基为纯粹的以及被1、2或3个第一取代基取代的哌啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、吲哚基，吗啉基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哌嗪基、取代哌嗪基、吡嗪基、哒嗪基中的任意一种；
所述第一取代基独立地选自卤素、卤代烷基、烷基、氰基、羟基、硝基、巯基、烷氧基、烷硫基、芳烷基、二芳基烷基；
r3为杂烷基、芳基、杂环基；
所述杂烷基为各碳原子任选被氧原子或氮原子取代的1-8个碳原子的直链或支链的饱和烃基，3-8个碳原子的环状饱和烃基，或连接有1-8个碳原子的直链或支链饱和烃基的3-8个碳原子的环状饱和烃基；
所述芳基为纯粹的或被1、2或3个第二取代基取代的苯基、苄基、萘基中的任意一种；
所述杂环基为纯粹的或被1、2或3个第二取代基取代的哌啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、吗啉基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哌嗪基、取代哌嗪基、吡嗪基、哒嗪基、喹啉基、喹喔啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻吩基、苯并异噻吩基、苯并呋喃基、苯并二氧六环基、苯并二氧戊环基中的任意一种；
所述第二取代基独立地选自卤素、卤代烷基、烷基、氰基、羟基、巯基、氨基、硝基、烷氧基、烷硫基、芳烷基、二芳基烷基、四氢吡咯基、吗啉基、烷氧吗啉基、哌嗪基、哌啶基、烷氨基哌啶基。
优选地，所述r1为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、苄基、萘基、噻吩基，呋喃基，苯丙烯基，吲哚基，吡咯基、吡啶基中的任意一种；
所述r2为氢、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基、苯氧基、苄氧基、甲胺基、乙胺基、丙胺基、异丙胺基、环丙胺基、取代环丙胺基、哌啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吲哚基，吗啉基、哌嗪基、取代哌嗪基、吡嗪基、哒嗪基中的任意一种；
所述r3为甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，环丙基，环丁基，环戊基，环己基，苯基，苄基，萘基，吲哚基，吡啶基，含杂原子的烷基，甲基和/或卤素单取代、二取代的环丙基，甲基单取代的苯基，叔丁基单取代的苯基，卤素单取代的苯基，羟基和甲氧基二取代的苯基，卤素二取代的苯基，二甲氧基取代的苯基，羟基和卤素二取代的苯基，卤素和硝基二取代的苯基，乙氧基和羟基二取代的苯基，二乙氨基和羟基二取代的苯基，乙腈单取代的苯基，萘基，吲哚基，羟基单取代的萘基，吡啶基，甲基单取代的吡啶基，甲氧基单取代的吡啶基，氨基单取代的吡啶基，卤素单取代的吡啶基，卤素二取代的吡啶基，硝基单取代的吡啶基，卤素三取代的吡啶基。
进一步优选地，所述r1为环戊基、苄基；
所述r2为氢、乙氧基、吗啉基、苯氧基、杂原子取代苯氧基；
所述r3为氢原子、苄基、甲氧基取代的苄基、卤素取代的苯基、苯基、甲氧基取代的苯基、卤素取代的苯基、噻吩取代的亚甲基、环戊基、环己基、环丙基、甲基、乙基、丙基、异丙基、二甲基、丁基、二乙基、戊基、羟基丙基、羟基乙基、氧代丁基、己基、甲基哌嗪基、
其具体结构如式1至35所示：
二氢蝶啶酮-磺酰胺类衍生物的药学上可接受的盐为其与下列酸形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硼酸盐、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、苯磺酸、柠檬酸、乳酸、丙酮酸、酒石酸、乙酸、马来酸、琥珀酸、杏仁酸、富马酸、水杨酸或苯基乙酸；本发明中所述二氢蝶啶酮-磺酰胺类衍生物作为碱性化合物，可方便地在溶剂(常见有机溶剂或含水溶剂)中通过加入上述化合物与前述酸反应得到所对应的盐，其为本领域内常见和常规的酸碱反应，具体方法不再赘述。
本发明提供了二氢蝶啶酮-磺酰胺类衍生物的制备方法，包括如下步骤：
a.以邻硝基氟苯36为原料，80-120℃下和氯磺酸搅拌反应5-12小时，所述邻硝基氟苯36与氯磺酸的摩尔比为1:1-40；反应完成后将体系缓慢滴加至冰水中淬灭多余的氯磺酸，用萃取剂萃取反应体系三次，合并后用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，分液，有机相干燥，旋干，即得中间体37。所述萃取剂可以是乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷。产率80％。
b.在有机碱存在下，0-10℃下，将中间体37和相应的胺类化合物以摩尔比1:1-2搅拌反应，tlc检测反应完成后，经过柱层析得到中间体38。所述有机碱可以是三乙胺、吡啶、三乙烯二胺、n-甲基吗啉、叔丁醇钾、叔丁醇钠或丁基锂。所述相应的胺类化合物为所述取代基r3所对应的胺类化合物。产率60％。
c.将中间体38溶于有机溶剂中，加入相应的试剂，在10-100℃下搅拌，所述中间体38与所述相应的试剂的摩尔比为1:1-5；反应完成后，弱酸洗，乙酸乙酯萃取水相三次，合并有机相，干燥，旋干后得到中间体39。所述有机溶剂可以是二甲基亚砜或n,n-二甲基甲酰胺。所述相应的试剂为所述取代基r2所对应的化合物。产率50-80％。
d.将中间体39溶于溶剂中，加入催化量的钯碳催化剂，氢气气氛下，加热至20-80℃，搅拌4到8小时，tlc检测反应完成后后滤除钯碳，滤液旋干得到中间体40。所述有机溶剂可以是四氢呋喃、乙醚、甲醇、乙醇或乙酸。产率50-90％。
e.将化合物41溶于甲醇中，冰浴下滴加二氯亚砜，回流反应，所述化合物41与二氯亚砜的摩尔比为1:1-10；反应结束后，将反应体系减压浓缩，析出产物，过滤后即得产物42，粗品不经纯化进行下步反应。产率约90％。
f.将中间体42溶于氯仿、二氯甲烷或二氯乙烷中，加入相应的羰基化合物，冰浴下加入适量的碱性化合物和还原剂，0-30℃下搅拌至原料消失。反应结束后淬灭反应，经萃取，有机相合并后干燥、过滤、浓缩即得中间体43，可不经纯化直接进行下步反应。产率70％。所述相应的羰基化合物为取代基r1所对应的化合物；所述碱性化合物可以是na2co3、k2co3、csco3、naoac或koac；所述还原剂可以是nabh4、kbh4、nabh(oac)3或nabh3cn；所述中间体42与所述相应的羰基化合物的摩尔比为1:1-2，所述中间体42与所述碱性化合物摩尔比为1:1至1:3，所述中间体42与所述还原剂的摩尔比为1:0.25-10；
g.将中间体43溶于氯仿、二氯甲烷或二氯乙烷中，冰浴下加入2,4-二氯-5-硝基嘧啶及所述碱性化合物，0-30℃下搅拌至原料消失。反应结束后减压浓缩除去溶剂，经稀释、洗涤，有机层干燥后，硅胶柱层析分离得中间体44。产率85％。所述碱性化合物可以是na2co3、k2co3、csco3、naoac、koac；
所述中间体43、2,4-二氯-5-硝基嘧啶及所述碱性化合物的摩尔比为1:1-3:1-3；
h.将中间体44溶于乙酸中并加热至50-70℃，加入还原铁粉，搅拌反应，升温至100℃-110℃继续反应。反应结束后，过滤，洗涤残渣，滤液浓缩后柱层析分离得中间体45。产率约60％；
所述中间体44与还原铁粉的摩尔比为1:2-20；
i.将中间体45加入至无水dmf中，冰浴下加入碘甲烷(相对于中间体45为1.3当量)及nah(相对于中间体45为1.3当量)，0-30℃下搅拌反应，反应结束后淬灭反应体系，经萃取，有机相水洗、干燥、浓缩得中间体46，无需提纯可直接用于下步反应。产率90％；
j.以摩尔比为1:0.5-1式40和式46所示化合物为原料，溶解于有机溶剂中，加入相对于化合物40的2-10倍当量(以hcl含量计)的质量分数为20-38％的盐酸，于60-120℃加热反应24-72小时；反应完成后，旋干溶剂，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，浓缩，柱层析得到最终产物1-35。产率53-78％；
所述有机溶剂可以是甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、1,4-二氧六环的单一溶剂或混合溶剂。
上述二氢蝶啶酮-磺酰胺类衍生物作为brd4蛋白抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用，用于预防或治疗brd4介导的各种实质性器官肿瘤，包括但不限于胃癌、食管癌、肝癌、肾癌、肺癌、前列腺癌、血癌、淋巴瘤等。
本发明的目标化合物的总收率可达15％–22％(以原料41计算)，通过活性实验证实本发明所述具有二氢蝶啶酮结构的新型化合物具有很好的brd4蛋白抑制效果，可以抑制肿瘤细胞增殖，尤其是针对胃癌细胞，部分化合物的抑制活性达到或优于阳性对照化合物jq1。本发明将为brd4抑制剂、肿瘤等疾病的治疗提供新的药物选择。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本发明，这些实施例仅用于说明本发明并非限制本发明的范围。
以下实施例中，对化合物的结构的确定是通过核磁共振(nmr)和高分辨率质谱(hrms)确定的。所用核磁共振仪为瑞典brukerdpx-400型超导核磁共振仪，四甲基硅烷(tms)为内标；所用高分辨质谱为waters-micromass公司q-tof质谱仪。
下面以化合物29合成所需的中间体40a和46a的制备过程为例，来说明中间体40和46的合成过程。
中间体37的合成
将氯磺酸(2.48g,21.26mmol)和2-氟硝基苯(1.00g,7.09mmol)加入圆底烧瓶中，升温至100℃，搅拌12h，tlc检测反应完成后，将反应体系降至室温，将体系溶液慢慢滴加至冰水中淬灭多余的氯磺酸，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取反应体系三次，合并有机相，有机相用饱和碳酸氢钠溶液(30ml)洗涤，分液后，有机相除水后旋干即为产物。产率80％，浅黄色油状液体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.93–8.67(m,1h),8.44–8.24(m,1h),7.62(t,j＝9.3hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ160.34,157.59,140.66,140.61,133.98,133.88,126.17,126.16,120.85,120.62.
中间体38a的合成
将中间体37(100mg,0.417mmol)加入圆底烧瓶中，加入10ml无水thf溶解，冰浴下降温10min，再加入环丙胺(23.83mg,0.417mmol)和三乙胺(105.49mg,1.04mmol)，冰浴下搅拌20min，tlc检测反应完成后旋干溶剂，乙酸乙酯(20ml)和饱和食盐水(20ml)稀释体系，调ph至7左右,分液，水相弃去，旋干有机相，使用硅胶柱层析(石油醚pe/乙酸乙酯ea＝4:1)纯化得到产物，收率60％。浅黄色固体，熔点:143-144℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.84(d,j＝2.2hz,1h),8.59(s,1h),8.02–7.89(m,1h),7.50(d,j＝9.2hz,1h),2.75–2.66(m,1h),1.11–1.01(m,2h),0.79–0.72(m,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ149.93,133.80,129.29,116.58,24.91,8.05.hr-ms(esi):calcd.c9h9fn2o4s,[m+h]+m/z:409.2352,found:409.2351.
中间体39a的合成
将中间体38a(50mg,0.19mmol)和苯酚(21.70mg,0.228mmol)加入圆底烧瓶中，加入8ml二甲基亚砜作溶剂，升温至100℃，搅拌4-5h，tlc检测反应完成后，加入乙酸乙酯(15ml)稀释反应体系，使用饱和食盐水(10ml×3)洗涤，分液，弃水相，取有机相，有机相干燥后旋干即为产物。收率78％。白色固体，熔点:153-154℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.55(s,1h),8.30(d,j＝2.3hz,1h),7.99–7.84(m,1h),7.55(d,j＝9.2hz,1h),7.46–7.38(m,2h),7.34(t,j＝7.3hz,1h),7.15–7.06(m,2h),2.83–2.65(m,1h),0.99–0.88(m,2h),0.76–0.67(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ148.96,148.88,133.72,130.45,130.09,127.74,127.55,122.18,119.67,117.16,25.07,7.50.hr-ms(esi):calcd.c15h14n2o5s,[m+h]+m/z:335.0696,found:335.0695.
中间体40a的合成
取中间体39a(50mg，0.15mmol，1eq.)加入圆底烧瓶中，加入10ml四氢呋喃作溶剂，加入催化量的钯碳，氢气气氛下，加热至50℃，搅拌6-8h，tlc检测反应完成后后滤除钯碳，滤液旋干得到中间体40a。收率80％，浅黄色固体，熔点:156-157℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32–7.24(m,3h),7.24–7.19(m,1h),7.12(d,j＝2.1hz,1h),7.05–6.93(m,3h),4.52(s,1h),3.27(s,2h),2.52–2.43(m,1h),0.85–0.78(m,2h),0.60–0.53(m,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ149.94,144.19,132.54,129.44,126.76,123.11,122.61,122.56,116.11,110.64,24.92,7.38.hr-ms(esi):calcd.c15h16n2o3s,[m+h]+m/z:305.0955,found:305.0956.
中间体42的合成
将2-氨基丁酸(1.00g，1.0eq.)加入50ml茄形瓶中，加入无水甲醇15ml，0℃下缓慢加入socl2(2.31g，2.0eq.)，加热回流1.5小时后，tlc显示反应完成。将挥发物蒸发后得到白色固体，用et2o研磨固体，抽滤后得到中间体42的粗产品可不经纯化直接进行下步反应，收率90％。白色固体，熔点:120-122℃.1hnmr(400mhz,d2o)δ4.04(t,j＝6.2hz,1h),3.76(s,3h),1.99–1.82(m,2h),0.97–0.87(m,3h).13cnmr(101mhz,d2o)δ170.79,53.99,53.46,23.21,8.42.hr-ms(esi):calcd.c5h12clno2,[m+h]+m/z:118.0863,found:118.0867.
中间体43a的合成
中间体42(1.00g，1.0eq.)和环戊酮(548mg，1.0eq.)冰浴10分钟，加入naoac(547mg，1.0eq.)和nabh(oac)3(2.07g，1.5eq.)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。tlc显示反应结束后，向反应体系中加入饱和的nahco3溶液淬灭反应，然后用ch2cl2(20ml×2)萃取水层，将有机层合并，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩，得到中间体43a，收率65％。无色油状液体.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ3.63(s,3h),3.10(t,j＝6.6hz,1h),2.98–2.84(m,1h),1.80(s,1h),1.67–1.54(m,4h),1.54–1.48(m,2h),1.47–1.39(m,2h),1.32–1.21(m,2h),0.84(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ175.71,60.88,57.32,51.19,33.17,32.10,26.25,23.38,23.33,10.21.hr-ms(esi):calcd.c10h19no2,[m+h]+m/z:186.1494,found:186.1495.
中间体44a的合成
将中间体43a(1.00g，1.0eq.)加入丙酮15ml，冰浴10分钟后加入2,4-二氯-5-硝基嘧啶(1.05g，1.0eq.)，再加入k2co3(750mg，1.0eq.)，室温下搅拌过夜。反应完成后除去溶剂，用乙酸乙酯溶解残余物，并用水洗涤，收集有机层，用无水硫酸钠干燥后，用硅胶快速柱色谱(pe/ea＝10:1)纯化得到中间体44a，产率89％。黄色固体，熔点:110-111℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.84(s,1h),4.29–4.14(m,1h),3.64(s,3h),3.52–3.48(m,1h),2.28–2.15(m,1h),2.04–1.90(m,2h),1.85–1.77(m,2h),1.72–1.61(m,3h),1.51–1.35(m,2h),0.94(t,j＝7.8hz,3h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ164.21,151.73,151.14,137.83,119.27,61.06,59.38,28.30,28.28,26.36,23.88,23.86,8.33.hr-ms(esi):calcd.c14h19cln4o4,[m+na]+m/z:365.0993,found:365.0992.
中间体45a的合成
将中间体44a(1.00g，1.0eq.)加入冰醋酸20ml，加热至70℃，在5分钟内分批加入铁粉(325mg，2.0eq.)。将反应物在70℃下搅拌1小时，然后升温至100℃反应4-5小时，反应完成后，将混合物用硅藻土过滤，用适当甲醇冲洗洗涤滤渣，蒸除挥发物后，用快速柱色谱(pe/ea＝1.5:1)纯化得到中间体45a，产率50％。黄色固体，熔点:180-182℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.85(s,1h),7.57(s,1h),4.30–4.20(m,1h),4.18–4.04(m,1h),2.00–1.76(m,7h),1.76–1.65(m,1h),1.62–1.42(m,2h),0.92–0.68(m,3h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ164.21,151.73,151.14,137.83,119.27,61.06,59.38,28.30,28.28,26.36,23.88,23.86,8.33.hr-ms(esi):calcd.c13h17cln4o,[m+na]+m/z:303.0989,found:303.0975.
中间体46a的合成
将中间体45a(1.00g，1.0eq.)加入无水dmf，冰浴10分钟后，加入碘甲烷(657mg，1.3eq.)，和质量百分含量为60％的nah(185mg，1.3eq.)室温下搅拌3小时，反应完成后，用冰水淬灭反应体系，用etoac提取产物，有机层用水洗涤两次，用无水硫酸钠干燥后旋干得到中间体46a无需纯化直接投下一步，产率90％。黄色固体，熔点:182-183℃.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.87(s,1h),4.39–4.31(m,1h),4.17(p,j＝8.3hz,1h),3.24(s,3h),1.97–1.77(m,7h),1.74–1.65(m,1h),1.61–1.48(m,2h),0.74(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(101mhz,dmso)δ163.16,152.13,151.53,138.49,121.24,60.76,59.32,28.38,28.33,27.91,26.61,23.85,23.81,8.48.hr-ms(esi):calcd.c14h19cln4o,[m+h]+m/z:295.1325,found:295.1322.
其余化合物对应的中间体40和46的合成过程与上述化合物29所对应的中间体40a和46a合成过程的主要差别就在于取代基r1、r2、r3所对应的原料的差别，除了原料更换外，本领域技术人员参照上述方案进行常规调整即可得到其余化合物对应的中间体40和46的合成过程，具体合成过程在此不再赘述，下面将原料列举如下表一：
表一化合物1至35中取代基r1、r2、r3所对应的原料
实施例29：化合物29的合成
化合物1-35的制备方法相同，以化合物29的制备方法为例。
以无水乙醇和1,4-二氧六环作溶剂，将上述制备得到的40a和46a按照摩尔比1:1溶解于溶剂中，并加入2.5当量(相对于40a)的浓盐酸，加热回流48h，反应完成后，旋干溶剂，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，浓缩，柱层析得到最终产物29。收率76％，浅黄色固体，熔点:146-147℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.52(s,1h),8.44(s,1h),7.87(s,1h),7.83(d,j＝8.0hz,1h),7.77(d,j＝1.8hz,1h),7.44–7.31(m,5h),7.27(d,j＝7.2hz,2h),5.48(d,j＝15.3hz,1h),4.36(d,j＝15.3hz,1h),4.09(t,j＝4.8hz,1h),3.28(s,3h),2.07(s,1h),1.86–1.74(m,2h),0.75(t,j＝7.3hz,3h),0.46–0.39(m,2h),0.37(s,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.53,155.03,151.23,141.69,140.49,138.56,136.87,129.06,128.55,127.80,127.36,121.28,118.12,116.02,114.95,60.33,46.94,27.75,24.24,24.09,8.62,5.14,5.10.hr-ms(esi):calcd.c25h28n6o3s,[m+h]+m/z:493.2017,found:493.2016.
实施例1：化合物1的合成
方法同实施例29。收率63％，浅黄色固体，熔点:179-180℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.45(s,1h),8.04(t,j＝6.3hz,1h),7.87–7.80(m,2h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),7.32–7.21(m,6h),4.62–4.51(m,1h),4.23–4.17(m,1h),3.99(d,j＝6.3hz,2h),3.25(s,3h),2.03(d,j＝6.2hz,1h),1.93(d,j＝6.4hz,1h),1.71(d,j＝10.8hz,5h),1.64–1.55(m,3h),0.78(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.92,151.58,141.88,140.90,138.53,137.81,129.11,128.17,127.50,127.07,121.30,117.82,115.73,115.60,58.84,57.42,46.15,28.94,28.74,27.78,26.46,23.06,22.66,9.05.hr-ms(esi):calcd.c27h32n6o3s,[m+h]+m/z:521.2335,found:521.2334.
实施例2：化合物2的合成
方法同实施例29。收率63％，浅黄色固体，熔点:155-156℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.22(s,1h),9.40(s,1h),8.44(s,1h),7.82(s,1h),7.78(d,j＝9.5hz,1h),7.37(t,j＝8.0hz,1h),7.25–7.18(m,3h),7.10(d,j＝7.6hz,2h),7.00(t,j＝7.3hz,1h),4.60–4.48(m,1h),4.24–4.18(m,1h),3.25(s,3h),2.03(d,j＝5.9hz,1h),1.91(d,j＝9.3hz,1h),1.78–1.65(m,5h),1.65–1.55(m,3h),0.78(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.84,154.80,151.57,141.86,139.93,138.42,137.88,129.11,129.02,123.77,121.66,119.80,117.86,115.79,58.83,57.40,28.93,28.71,27.78,26.46,23.05,22.64,9.04.hr-ms(esi):calcd.c26h30n6o3s,[m+h]+m/z:507.2178,found:507.2179.
实施例3：化合物3的合成
方法同实施例29。收率65％，浅黄色固体，熔点:145-146℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.81(s,1h),9.35(s,1h),8.32(t,j＝1.9hz,1h),7.80(s,1h),7.78–7.74(m,1h),7.35(t,j＝8.0hz,1h),7.17(d,j＝7.7hz,1h),7.01–6.95(m,2h),6.81–6.75(m,2h),4.56–4.45(m,1h),4.23–4.12(m,1h),3.64(d,j＝7.4hz,3h),3.22(d,j＝9.3hz,3h),2.06–1.96(m,1h),1.94–1.87(m,1h),1.79–1.65(m,5h),1.64–1.52(m,3h),0.76(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.84,156.36,154.81,151.56,141.76,139.89,138.40,130.30,128.95,123.32,121.51,117.98,115.84,115.76,114.16,58.87,57.41,55.07,28.92,28.72,27.76,26.45,23.06,22.66,9.03.hr-ms(esi):calcd.c27h32n6o4s,[m+h]+m/z:537.2284,found:537.2285.
实施例4：化合物4的合成
方法同实施例29。收率61％，浅黄色固体，熔点:147-148℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.39(s,1h),8.44(s,1h),8.03(t,j＝6.3hz,1h),7.84(d,j＝8.5hz,2h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),7.32–7.21(m,6h),4.61–4.52(m,1h),4.22–4.16(m,1h),3.99(d,j＝6.3hz,2h),3.25(s,3h),2.03(d,j＝6.2hz,1h),1.98–1.90(m,1h),1.71(d,j＝10.9hz,5h),1.66–1.56(m,3h),0.78(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.84,154.93,151.59,141.88,140.91,138.52,137.80,129.10,128.16,127.49,127.07,121.31,117.83,115.74,115.62,58.87,57.44,46.16,28.95,28.75,27.78,26.46,23.07,22.67,9.04.hr-ms(esi):calcd.c27h31brn6o3s,[m+h]+m/z:599.1440,found:599.1440.
实施例5：化合物5的合成
方法同实施例29。收率68％，浅黄色固体，熔点:157-158℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.43(s,1h),8.07(t,j＝6.3hz,1h),7.88–7.79(m,2h),7.42(t,j＝8.0hz,1h),7.32–7.24(m,3h),4.57(d,j＝7.4hz,1h),4.23–4.16(m,1h),3.98(d,j＝6.2hz,2h),3.25(s,3h),2.06–1.99(m,1h),1.92(s,1h),1.72(s,5h),1.65–1.54(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.90,151.57,141.87,140.86,138.53,134.04,129.52,129.43,129.11,128.11,125.03,121.29,117.79,115.72,115.56,114.99,114.78,58.83,57.40,54.88,45.38,28.93,28.72,27.78,26.45,23.05,22.64.hr-ms(esi):calcd.c27h31fn6o3s,[m+h]+m/z:539.2240,found:539.2239.
实施例6：化合物6的合成
方法同实施例29。收率63％，浅黄色固体，熔点:178-179℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),8.43(s,1h),7.95(t,j＝6.2hz,1h),7.84(d,j＝10.2hz,2h),7.43(t,j＝7.9hz,1h),7.29(d,j＝7.7hz,1h),7.16(d,j＝8.3hz,2h),6.83(d,j＝8.4hz,2h),4.66–4.49(m,1h),4.26–4.14(m,1h),3.92(d,j＝6.1hz,2h),3.71(s,3h),3.25(s,3h),2.03(s,1h),1.93(s,1h),1.73(s,5h),1.66–1.55(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.82,158.39,154.92,151.57,141.85,140.94,138.54,129.59,129.07,128.86,121.23,117.82,115.71,115.61,113.56,58.84,57.41,55.00,45.69,28.94,28.73,27.77,26.45,23.06,22.66,9.04.hr-ms(esi):calcd.c28h34n6o4s,[m+h]+m/z:551.2440,found:551.2441.
实施例7：化合物7的合成
方法同实施例29。收率67％，浅黄色固体，熔点:191-192℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.54(s,1h),7.95–7.84(m,4h),7.66(d,j＝8.9hz,2h),7.19(t,j＝7.9hz,1h),6.84–6.76(m,3h),4.48–4.40(m,1h),4.26–4.21(m,1h),3.93(d,j＝6.3hz,2h),3.69(s,3h),3.26(s,3h),2.09–2.01(m,1h),1.93(d,j＝8.7hz,1h),1.85–1.72(m,5h),1.67–1.57(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.90,159.15,154.62,151.53,144.88,139.36,138.32,131.06,129.21,127.38,119.65,117.10,116.03,112.89,112.65,59.27,57.96,54.90,46.03,28.77,28.36,27.76,26.47,22.87,22.53,8.93.hr-ms(esi):calcd.c28h34n6o4s,[m+h]+m/z:551.2440,found:551.2441.
实施例8：化合物8的合成
方法同实施例29。收率74％，浅黄色固体，熔点:167-168℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.44(s,1h),7.93–7.78(m,3h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),7.29(t,j＝7.7hz,2h),7.21(t,j＝7.7hz,1h),6.95–6.81(m,2h),4.64–4.49(m,1h),4.23–4.17(m,1h),3.95(d,j＝6.1hz,2h),3.69(s,3h),3.25(s,3h),2.02(s,1h),1.92(s,1h),1.72(s,5h),1.64–1.52(m,3h),0.78(t,j＝7.3hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.82,156.32,154.93,151.57,141.80,140.83,138.55,129.06,128.35,128.19,125.28,121.25,119.99,117.85,115.70,115.64,110.29,58.82,57.40,55.13,28.93,28.73,27.77,26.46,23.05,22.64,9.05.hr-ms(esi):calcd.c28h34n6o4s,[m+h]+m/z:551.244,found:551.244.
实施例9：化合物9的合成
方法同实施例29。收率61％，浅黄色固体，熔点:178-179℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.45(d,j＝1.8hz,1h),8.16(t,j＝6.2hz,1h),7.84(d,j＝8.0hz,2h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),7.41–7.38(m,1h),7.29(d,j＝7.8hz,1h),6.94–6.90(m,2h),4.63–4.53(m,1h),4.22–4.14(m,3h),3.25(s,3h),2.04(d,j＝5.8hz,1h),1.97–1.90(m,1h),1.78–1.67(m,5h),1.66–1.57(m,3h),0.78(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.91,151.58,141.89,140.86,140.73,138.54,129.13,126.64,125.83,125.55,121.38,117.85,115.74,115.57,58.84,57.42,41.42,28.95,28.76,27.78,26.46,23.08,22.67,9.05.hr-ms(esi):calcd.c25h30n6o3s2,[m+h]+m/z:,found:527.1898.
实施例10：化合物10的合成
方法同实施例29。收率60％，浅黄色固体，熔点:156-157℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.46(s,1h),8.34(s,1h),7.96(d,j＝9.6hz,1h),7.86(s,1h),7.51(t,j＝8.0hz,1h),7.20(d,j＝8.3hz,1h),4.59–4.52(m,1h),4.22–4.18(m,1h),3.65–3.62(m,4h),3.25(s,3h),2.89–2.85(m,4h),2.03(d,j＝7.9hz,1h),1.92(s,1h),1.73(d,j＝11.4hz,5h),1.65–1.57(m,3h),0.78(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.84,154.82,151.59,142.17,138.50,134.53,129.29,122.22,118.92,116.19,115.88,65.25,58.82,57.42,45.93,28.92,28.70,27.81,26.45,23.09,22.69,9.05.hr-ms(esi):calcd.c24h32n6o4s,[m+h]+m/z:501.2284,found:501.2285.
实施例11：化合物11的合成
方法同实施例29。收率68％，浅黄色固体，熔点:156-157℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.39(s,1h),8.42(d,j＝1.8hz,1h),7.84(s,1h),7.80(d,j＝8.2hz,1h),7.53(d,j＝7.4hz,1h),7.42(t,j＝8.0hz,1h),7.30(d,j＝7.7hz,1h),4.57(d,j＝7.8hz,1h),4.23–4.18(m,1h),3.25(s,3h),2.94(s,1h),2.04(d,j＝5.0hz,1h),1.97–1.90(m,1h),1.79–1.69(m,5h),1.65–1.55(m,7h),1.44(d,j＝10.8hz,1h),1.17–1.04(m,5h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.93,151.58,142.51,141.70,138.50,129.01,121.07,117.71,115.70,115.42,58.87,57.43,52.10,33.22,28.94,28.74,27.77,26.45,24.84,24.45,23.08,22.68,9.03.hr-ms(esi):calcd.c26h36n6o3s,[m+h]+m/z:513.2648,found:513.2649.
实施例12：化合物12的合成
方法同实施例29。收率78％，浅黄色固体，熔点:151-152℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.45(s,1h),8.35(s,1h),7.92(d,j＝8.2hz,1h),7.86(s,1h),7.47(t,j＝8.0hz,1h),7.18(d,j＝7.6hz,1h),4.65–4.51(m,1h),4.23–4.16(m,1h),3.25(s,3h),2.94–2.83(m,4h),2.03(d,j＝7.4hz,1h),1.96–1.89(m,1h),1.81–1.66(m,5h),1.65–1.51(m,7h),1.36(s,2h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.82,154.87,151.59,142.08,138.57,135.69,129.14,121.80,118.70,115.92,115.82,58.75,57.36,46.61,28.94,28.75,27.80,26.46,24.67,23.08,22.85,22.67,9.06.hr-ms(esi):calcd.c25h34n6o3s,[m+h]+m/z:499.2491,found:499.2492.
实施例13：化合物13的合成
方法同实施例29。收率73％，浅黄色固体，熔点:158-159℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),8.42(s,1h),7.84(s,1h),7.80(d,j＝8.5hz,1h),7.59(d,j＝7.2hz,1h),7.42(t,j＝7.9hz,1h),7.29(d,j＝7.8hz,1h),4.62–4.50(m,1h),4.24–4.18(m,1h),3.25(s,3h),2.91(d,j＝6.7hz,1h),2.60(d,j＝11.2hz,2h),2.07(s,4h),1.92(d,j＝9.7hz,1h),1.83–1.68(m,7h),1.65–1.51(m,5h),1.37(d,j＝9.5hz,2h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.92,151.59,142.26,141.75,138.50,129.08,121.17,117.71,115.72,115.39,58.86,57.42,53.91,50.17,45.71,32.25,28.94,28.75,27.77,26.46,23.08,22.67,9.05.hr-ms(esi):calcd.c26h37n7o3s,[m+h]+m/z:528.2757,found:528.2758.
实施例14：化合物14的合成
方法同实施例29。收率53％，浅黄色固体，熔点:166-167℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),8.41(s,1h),7.82(d,j＝12.7hz,2h),7.53(d,j＝7.1hz,1h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),7.29(d,j＝7.8hz,1h),4.63–4.50(m,1h),4.26–4.13(m,1h),3.45–3.39(m,1h),3.25(s,3h),2.03(d,j＝6.3hz,1h),1.98–1.89(m,1h),1.82–1.67(m,5h),1.66–1.50(m,7h),1.43–1.22(m,5h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.93,151.58,141.78,141.73,138.51,129.01,121.16,117.91,115.72,58.87,57.43,54.47,32.40,28.93,28.72,27.77,26.45,23.07,22.79,22.67,9.04.hr-ms(esi):calcd.c25h34n6o3s,[m+h]+m/z:499.2491,found:499.2493.
实施例15：化合物15的合成
方法同实施例29。收率63％，浅黄色固体，熔点:178-179℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.44(s,1h),7.89–7.83(m,2h),7.81(d,j＝2.3hz,1h),7.45(t,j＝8.0hz,1h),7.30(d,j＝7.8hz,1h),4.63–4.48(m,1h),4.25–4.16(m,1h),3.25(s,3h),2.16–2.09(m,1h),2.08–2.01(m,1h),1.98–1.89(m,1h),1.81–1.68(m,5h),1.67–1.56(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h),0.51–0.45(m,2h),0.44–0.37(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.85,154.92,151.59,141.80,140.52,138.47,128.99,121.40,118.12,115.97,115.74,58.90,57.46,28.92,28.72,27.78,26.45,24.11,23.08,22.69,9.03,5.15.hr-ms(esi):calcd.c23h30n6o3s,[m+h]+m/z:471.2178,found:471.2177.
实施例16：化合物16的合成
方法同实施例29。收率68％，浅黄色固体，熔点:158-159℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.50(s,1h),7.96–7.80(m,3h),7.64(d,j＝8.8hz,2h),7.41(d,j＝7.6hz,1h),4.49–4.36(m,1h),4.26–4.19(m,1h),3.25(s,3h),2.03(d,j＝10.9hz,1h),1.92(s,1h),1.75(d,j＝15.1hz,5h),1.67–1.54(m,3h),0.95(d,j＝6.6hz,3h),0.77(t,j＝7.5hz,3h),0.37–0.28(m,1h),0.25–0.17(m,1h),0.14–0.07(m,1h),-0.02–-0.09(m,1h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.90,154.62,151.52,144.58,138.33,132.64,127.23,117.01,115.98,59.34,58.02,53.02,28.74,28.35,27.76,26.45,22.86,22.54,20.98,17.47,8.91,3.23,2.70.hr-ms(esi):calcd.c25h34n6o3s,[m+h]+m/z:499.2486,found:499.2487.
实施例17：化合物17的合成
方法同实施例29。收率67％，浅黄色固体，熔点:167-168℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.39(s,1h),8.42(s,1h),7.84(s,1h),7.80(d,j＝8.2hz,1h),7.41(t,j＝7.9hz,1h),7.33(d,j＝7.8hz,1h),7.24(s,2h),4.62–4.49(m,1h),4.23–4.15(m,1h),3.25(s,3h),2.04(d,j＝9.6hz,1h),1.97–1.88(m,1h),1.81–1.55(m,8h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.97,151.57,144.37,141.62,138.51,128.80,120.82,117.32,115.66,114.74,58.87,57.42,28.93,28.70,27.77,26.46,23.02,22.62,9.05.hr-ms(esi):calcd.c20h26n6o3s,[m+h]+m/z:431.1865,found:431.1865.
实施例18：化合物18的合成
方法同实施例29。收率63％，浅黄色固体，熔点:156-1597℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.42(s,1h),8.41(s,1h),7.84(d,j＝6.8hz,2h),7.44(t,j＝7.9hz,1h),7.32(d,j＝5.0hz,1h),7.25(d,j＝7.7hz,1h),4.64–4.47(m,1h),4.24–4.15(m,1h),3.25(s,3h),2.43(d,j＝4.9hz,3h),2.03(s,1h),1.92(d,j＝7.0hz,1h),1.73(s,5h),1.65–1.55(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.91,151.57,141.90,139.48,138.53,129.08,121.34,117.92,115.77,115.73,58.84,57.41,28.93,28.73,27.78,26.46,23.07,22.67,9.04.hr-ms(esi):calcd.c21h28n6o3s,[m+h]+m/z:445.2022,found:445.2021.
实施例19：化合物19的合成
方法同实施例29。收率67％，浅黄色固体，熔点:165-166℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.41(t,j＝1.8hz,1h),7.88–7.80(m,2h),7.48–7.41(m,2h),7.27(d,j＝7.7hz,1h),4.62–4.51(m,1h),4.25–4.16(m,1h),3.25(s,3h),2.83–2.77(m,2h),2.04(d,j＝6.1hz,1h),1.97–1.90(m,1h),1.80–1.68(m,5h),1.66–1.58(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.82,154.92,151.57,141.84,140.77,138.52,129.07,121.23,117.80,115.71,115.62,58.85,57.41,28.93,28.71,27.78,26.45,23.06,22.66,14.74,9.04.hr-ms(esi):calcd.c22h30n6o3s,[m+h]+m/z:459.2178,found:459.2179.
实施例20：化合物20的合成
方法同实施例29。收率65％，浅黄色固体，熔点:166-167℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.45(s,1h),8.36(s,1h),7.95(d,j＝8.1hz,1h),7.86(s,1h),7.49(t,j＝8.0hz,1h),7.21(d,j＝7.7hz,1h),4.62–4.52(m,1h),4.24–4.17(m,1h),3.26(s,3h),2.62(s,6h),2.04(d,j＝7.4hz,1h),1.98–1.89(m,1h),1.81–1.68(m,5h),1.67–1.56(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.86,151.59,142.10,138.52,134.84,129.17,121.86,118.82,116.08,115.83,58.79,57.39,37.62,28.92,28.72,27.79,26.45,23.08,22.68,9.04.hr-ms(esi):calcd.c22h30n6o3s,[m+h]+m/z:459.2178,found:459.2179.
实施例21：化合物21的合成
方法同实施例29。收率65％，浅黄色固体，熔点:156-156℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.54(s,1h),7.94(s,1h),7.91(s,1h),7.86(s,1h),7.62(d,j＝8.9hz,2h),7.18(q,j＝5.0hz,1h),4.49–4.40(m,1h),4.27–4.21(m,1h),3.25(s,3h),2.38(d,j＝5.1hz,3h),2.04(d,j＝16.9hz,1h),1.92(s,1h),1.86–1.71(m,5h),1.67–1.57(m,3h),0.77(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.93,151.57,142.08,141.75,138.50,129.03,121.09,117.79,115.71,115.55,58.88,57.43,45.22,28.93,28.71,27.77,26.44,23.20,23.17,23.07,22.68,9.04.hr-ms(esi):calcd.c23h32n6o3s,[m+h]+m/z:473.2335,found:473.2335.
实施例22：化合物22的合成
方法同实施例29。收率64％，浅黄色固体，熔点:145-146℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.40(s,1h),7.89–7.77(m,2h),7.50–7.40(m,2h),7.27(d,j＝7.7hz,1h),4.67–4.46(m,1h),4.25–4.16(m,1h),3.25(s,3h),2.77–2.66(m,2h),2.09–2.01(m,1h),1.97–1.89(m,1h),1.80–1.67(m,5h),1.66–1.55(m,3h),1.42–1.35(m,2h),0.83–0.76(m,6h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.92,151.57,141.81,140.86,138.52,129.06,121.20,117.78,115.71,115.60,58.84,57.41,44.42,28.93,28.72,27.77,26.45,23.06,22.66,22.39,11.14,9.04.hr-ms(esi):calcd.c23h32n6o3s,[m+h]+m/z:473.2335,found:473.2334.
实施例23：化合物23的合成
方法同实施例29。收率73％，浅黄色固体，熔点:158-159℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.41(s,1h),7.89(d,j＝8.3hz,1h),7.86(s,1h),7.43(t,j＝8.0hz,1h),7.24(d,j＝7.7hz,1h),4.65–4.49(m,1h),4.24–4.14(m,1h),3.25(s,3h),3.16(q,j＝7.1hz,4h),2.03(d,j＝6.6hz,1h),1.98–1.89(m,1h),1.83–1.67(m,5h),1.67–1.54(m,3h),1.05(t,j＝7.1hz,6h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.87,151.60,142.09,139.93,138.52,129.20,121.42,117.99,115.80,115.33,58.78,57.38,41.82,28.94,28.74,27.80,26.45,23.09,22.68,14.06,9.05.hr-ms(esi):calcd.c24h34n6o3s,[m+h]+m/z:487.2491,found:487.2492.
实施例24：化合物24的合成
方法同实施例29。收率57％，浅黄色固体，熔点:145-146℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),8.40(s,1h),7.83(d,j＝11.7hz,2h),7.48–7.38(m,2h),7.27(d,j＝7.7hz,1h),4.64–4.47(m,1h),4.27–4.14(m,1h),3.25(s,3h),2.78–2.70(m,2h),2.08–2.00(m,1h),1.98–1.88(m,1h),1.81–1.66(m,5h),1.66–1.54(m,3h),1.39–1.31(m,2h),1.27–1.21(m,2h),0.83–0.75(m,6h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.82,154.92,151.57,141.81,140.82,138.53,129.06,121.20,117.78,115.71,115.60,58.84,57.41,42.25,31.05,28.93,28.73,27.77,26.45,23.07,22.66,19.21,13.44,9.04.hr-ms(esi):calcd.c24h34n6o3s,[m+h]+m/z:487.2491,found:487.2489.
实施例25：化合物25的合成
方法同实施例29。收率63％，浅黄色固体，熔点:154-155℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.41(s,1h),7.84(d,j＝7.8hz,2h),7.49–7.38(m,2h),7.27(d,j＝7.8hz,1h),4.63–4.50(m,1h),4.42(t,j＝5.0hz,1h),4.25–4.16(m,1h),3.39–3.36(m,2h),3.26(s,3h),2.85–2.78(m,2h),2.10–2.01(m,1h),1.98–1.90(m,1h),1.79–1.67(m,5h),1.67–1.58(m,3h),1.57–1.51(m,2h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.92,151.57,141.83,140.67,138.51,129.07,121.22,117.81,115.72,115.65,58.85,58.12,57.41,32.34,28.94,28.71,27.77,26.45,23.07,22.66,9.04.hr-ms(esi):calcd.c23h32n6o4s,[m+h]+m/z:489.2284,found:489.2284.
实施例26：化合物26的合成
方法同实施例29。收率53％，浅黄色固体，熔点:178-179℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.41(t,j＝1.8hz,1h),7.87–7.81(m,2h),7.50–7.41(m,2h),7.31–7.26(m,1h),4.68(t,j＝5.6hz,1h),4.60–4.51(m,1h),4.23–4.16(m,1h),3.39(d,j＝6.4hz,2h),3.25(s,3h),2.84–2.78(m,2h),2.08–2.01(m,1h),1.97–1.90(m,1h),1.78–1.67(m,5h),1.66–1.56(m,3h),0.78(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.91,151.57,141.83,140.76,138.53,129.08,121.25,117.82,115.71,115.58,59.89,58.84,57.41,45.09,28.94,28.72,27.78,26.45,23.07,22.67,9.05.hr-ms(esi):calcd.c22h30n6o4s,[m+h]+m/z:475.2127,found:475.2126.
实施例27：化合物27的合成
方法同实施例29。收率60％，浅黄色固体，熔点:176-177℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),8.40(s,1h),7.83(d,j＝10.5hz,2h),7.59(t,j＝5.7hz,1h),7.43(t,j＝7.9hz,1h),7.28(d,j＝7.8hz,1h),4.56(s,1h),4.20(d,j＝4.3hz,1h),3.25(s,3h),3.17(s,3h),2.91(d,j＝5.7hz,3h),2.10–1.99(m,1h),1.98–1.89(m,1h),1.84–1.66(m,5h),1.62(d,j＝6.8hz,3h),0.78(t,j＝7.3hz,3h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.92,151.57,141.82,140.83,138.54,129.07,121.27,117.80,115.72,115.55,70.50,58.85,57.84,57.41,42.16,28.93,28.72,27.78,26.45,23.07,22.67,9.05.hr-ms(esi):calcd.c23h32n6o4s,[m+h]+m/z:449.2284,found:449.2285.
实施例28：化合物28的合成
方法同实施例29。收率70％，浅黄色固体，熔点:156-157℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.41(s,1h),7.92–7.74(m,2h),7.43(t,j＝7.9hz,2h),7.26(d,j＝7.3hz,1h),4.56(s,1h),4.20(d,j＝4.5hz,1h),3.25(s,3h),2.80–2.69(m,2h),2.03(s,1h),1.93(s,1h),1.78–1.58(m,7h),1.34(d,j＝6.3hz,2h),1.18(d,j＝7.6hz,7h),0.87–0.71(m,6h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.83,154.94,151.57,141.82,140.88,138.53,129.03,121.19,117.78,115.70,115.59,58.84,57.41,42.56,30.72,28.94,28.89,28.74,27.77,26.45,25.68,23.07,22.67,21.92,13.78,9.03.hr-ms(esi):calcd.c26h38n6o3s,[m+h]+m/z:515.2804,found:515.2803.
实施例30：化合物30的合成
方法同实施例29。收率73％，浅黄色固体，熔点:156-157℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.21–8.06(m,2h),7.78(s,1h),7.39–7.27(m,4h),7.05–6.99(m,3h),6.63(s,1h),4.48–4.37(m,1h),4.18–4.11(m,1h),3.23(s,3h),2.45(s,1h),1.91–1.78(m,2h),1.71–1.52(m,6h),1.51–1.39(m,2h),0.77(q,j＝7.2hz,5h),0.53–0.45(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.72,155.81,151.55,149.40,146.47,138.82,129.78,126.95,125.79,124.72,122.08,121.82,119.25,115.48,110.25,58.99,57.42,28.86,28.70,27.77,26.41,24.54,23.07,22.70,9.04,6.80.hr-ms(esi):calcd.c29h34n6o4s,[m+h]+m/z:563.2435,found:563.2437.
实施例31：化合物31的合成
方法同实施例29。收率63％，浅黄色固体，熔点:178-179℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.53–8.45(m,1h),8.22(d,j＝2.5hz,1h),8.18–8.09(m,2h),7.79(s,1h),7.56–7.49(m,1h),7.48–7.40(m,1h),7.36–7.29(m,1h),7.04(d,j＝8.7hz,1h),6.72(s,1h),4.48–4.36(m,1h),4.19–4.09(m,1h),3.23(s,3h),2.47(s,1h),1.92–1.77(m,2h),1.72–1.54(m,6h),1.50–1.39(m,2h),0.83–0.71(m,5h),0.55–0.44(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ162.73,155.78,151.56,148.04,146.79,146.23,143.53,138.83,130.04,125.93,124.89,124.71,121.80,118.15,115.54,110.33,58.96,57.40,28.87,28.69,27.77,26.41,24.53,23.08,22.69,9.05,6.79.hr-ms(esi):calcd.c28h33n7o4s,[m+h]+m/z:564.2388,found:564.2388.
实施例32：化合物32的合成
方法同实施例29。收率53％。浅黄色固体，熔点:181-182℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),8.42(d,j＝1.8hz,1h),7.93(s,1h),7.86–7.81(m,2h),7.42(t,j＝8.0hz,1h),7.27(d,j＝7.8hz,1h),4.62–4.49(m,1h),4.24–4.16(m,1h),3.25(s,3h),2.04(d,j＝6.1hz,1h),1.97–1.90(m,1h),1.80–1.68(m,5h),1.65–1.56(m,3h),1.08(s,3h),0.78(t,j＝7.5hz,3h),0.63(t,j＝5.1hz,2h),0.36(q,j＝4.3hz,2h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ162.84,154.92,143.07,141.72,138.47,128.95,121.17,118.00,115.74,115.69,58.93,57.47,30.76,28.91,28.71,27.78,26.44,23.89,23.08,22.70,12.96,9.04.hr-ms(esi):calcd.c24h32n6o3s,[m+h]+m/z:485.2330,found:485.2331
实施例33：化合物33的合成
方法同实施例29。收率62％。浅黄色固体，熔点:167-168℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.62(s,1h),8.44(s,1h),7.89(s,1h),7.84(d,j＝8.1hz,1h),7.46(t,j＝8.0hz,1h),7.42–7.25(m,5h),7.17(d,j＝7.7hz,1h),5.50(d,j＝15.3hz,1h),4.39(d,j＝15.4hz,1h),4.06(t,j＝4.8hz,1h),3.53(d,j＝3.7hz,4h),3.28(s,3h),2.84–2.66(m,4h),1.89–1.74(m,2h),0.74(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ162.46,154.95,151.23,142.08,138.73,136.79,134.51,129.33,128.60,127.78,127.43,122.11,118.97,115.94,114.90,65.17,60.22,46.82,45.80,27.76,24.18,8.55.hr-ms(esi):calcd.c26h30n6o4s,[m+h]+m/z:523.2122,found:523.2121.
实施例34：化合物34的合成
方法同实施例29。收率78％。浅黄色固体，熔点:158-159℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.11(s,1h),8.07(d,j＝2.2hz,1h),7.78(s,1h),7.49–7.41(m,1h),7.09(d,j＝8.7hz,1h),6.50(s,1h),4.42–4.33(m,1h),4.18–4.13(m,1h),3.98(q,j＝7.1hz,2h),3.23(s,3h),2.45(s,1h),1.91–1.85(m,1h),1.82–1.77(m,1h),1.73–1.64(m,3h),1.61–1.54(m,3h),1.52–1.45(m,2h),1.17(t,j＝7.1hz,3h),0.82–0.71(m,6h),0.56–0.44(m,2h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ162.73,155.92,151.52,146.20,125.81,124.50,124.02,121.84,120.60,115.40,110.56,66.09,59.29,57.69,28.77,28.60,27.75,26.39,24.56,23.10,22.76,14.48,9.00,6.82.hr-ms(esi):calcd.c25h34n6o4s,[m+h]+m/z:515.2435,found:515.2436.
实施例35：化合物35的合成
方法同实施例29。收率64％。浅黄色固体，熔点:149-150℃。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.07(s,1h),7.76(d,j＝2.1hz,1h),7.73(s,1h),7.37–7.27(m,1h),7.10(d,j＝8.6hz,1h),6.32(s,1h),4.33–4.21(m,1h),4.18–4.09(m,1h),3.64–3.59(m,4h),3.22(s,3h),2.80(d,j＝4.1hz,4h),2.44(s,1h),1.85–1.64(m,5h),1.60–1.50(m,3h),1.49–1.37(m,2h),0.80–0.72(m,5h),0.55–0.41(m,2h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ162.77,156.28,151.55,146.59,138.74,125.60,124.73,123.56,119.63,115.28,110.39,65.27,59.74,58.05,45.89,28.65,28.46,27.73,26.32,24.53,23.10,22.84,8.96,6.84.hr-ms(esi):calcd.c27h37n7o4s,[m+h]+m/z:556.2701,found:556.2702.
brd4蛋白抑制活性测试
1.实验方法
htrf结合了荧光共振能量转移fret和时间分辨荧光trf两种技术，将fret的均相实验方式和trf的低背景特点融合在一起，具有操作简单、灵敏度高、通量大、实验数据稳定可靠的特点。以anti-gst-cryptate(eu3+cryptateconjugatedmousemonoclonalantibodyanti-glutathiones-transferase)(cisbio，61gstklb)作为能量供体，streptavidin-d2(d2-conjugatedstreptavidin)(cisbio，610sadlb)作为能量受体，在384孔板中分别加入1.6nmgst-brd4(bd1)，200nmbiotin-h4(吉尔生化)，0.125ng/μlanti-gst-cryptate(cisbio，61gstklb)，2.5ng/μlstreptavidin-d2(cisbio，610sadlb)，assaybuffer(50mmhepes,400mmkf,50mm氯化钠,bsa0.1％,tween200.1％，ph7.5)，待测化合物(即化合物1至35以及jq1)，使最终反应体系为20μl，室温反应30min，最后通过发射波长665nm时的信号值与620nm时信号值的比值判断两种生物分子相互作用的强度，当有抑制剂加入后，抑制剂可以与brd4的活性位点结合，从而抑制了brd4与底物的结合，抑制两个分子间的相互作用时，供体和受体由于距离较远不能进行能量转移，故发射波长出信号降低，从而可以评价抑制剂对brd4与组蛋白相互作用的抑制程度，从而测试本发明小分子化合物对brd4蛋白的抑制活性，数据处理用spss或graphpad计算ic50。实验结果见表二。
表二实施例1至35所制备的化合物的brd4蛋白抑制活性结果
注：jq1为阳性对照；
mtt法肿瘤细胞抑制活性测试
1.实验方法
将本发明部分化合物及阳性对照化合物jq1分别用1640培养基配置成浓度为50、25、12.5、6.26、3.125、1.56、0.78、0.39、0.19μm的浓度梯度的溶液，分别与胃癌细胞sgc7901、bgc823、mgc803、mkn45、白血病细胞thp1于96孔板中共培养5天，胃癌细胞每孔铺1000细胞，白血病细胞每孔铺5000细胞。化合物刺激胃癌细胞5天后，在细胞中加入mtt溶液，每孔20μl，培养箱中继续培养4小时，之后轻轻吸出原培养基，加150μldmso溶解，室温轻轻震荡10分钟，以保证结晶完全溶解；取出96孔板，酶标仪570nm测定每孔的吸光值。化合物刺激白血病细胞5天后，在细胞中加入mtt溶液，每孔20μl，培养箱中继续培养4小时，每孔加入100μl三联液，反应24小时,酶标仪570nm测定每孔的吸光值，根据吸光值计算细胞存活率及ic50，实验结果见表三。
表三本发明部分化合物体外抗肿瘤活性
注：jq1为阳性对照；sgc7901、bgc823、mgc803、mkn45为胃癌细胞，thp1为白血病细胞
以上测试结果表明，实施例1至35所提供的化合物具有很好的brd4蛋白抑制效果及很好的肿瘤细胞抑制效果，部分化合物对brd4蛋白的抑制效果达到或优于已进入临床阶段的化合物，如otx-015(ic50240nm)、cpi-0610(ic50120nm)、ft-010(ic50100nm)、rvx-208(ic50510nm)。部分化合物对胃癌细胞的抑制活性达到或优于阳性对照化合物jq1。
最后所应说明的是：上述实施例仅用于说明而非限制本发明的技术方案，任何对本发明进行的等同替换及不脱离本发明精神和范围的修改或局部替换，其均应涵盖在本发明权利要求保护的范围之内。