本发明涉及一种用于畜牧养殖场空气处理的甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂，属于微生物技术领域。
背景技术：
在世界范围内，由病原菌导致的畜禽流行病害和普通常发性病害是造成养殖业损失的主要原因之一。而且现代化规模化饲养的畜禽多在封闭的圈舍内饲养，其排泄物、分泌物所含的病原菌造成空气臭气和病原体污染，诱发畜禽群发性疾病的频发，半个世纪以来，人们主要采用化学消毒剂对这类病害进行防治和臭气治理，但效果甚微。另一方面很多化学消毒剂都具有高毒、高残留、难降解和二次污染等特性，随着这些化学消毒剂长期不合理的使用，环境污染日趋严重，人及牲畜的健康也受到了极大的威胁。此外，由于耐药病菌的不断出现，化学消毒剂的防治效率逐渐下降。使用量和使用频率的不断增加，使化学消毒剂的残留量逐渐递增，对人畜安全构成了更大的危害。
近年来，随着各种禽畜类流感疫情的出现，逐渐出现了禽畜类流感病毒变异后向人类传播的趋势，且最容易传播的途径--空气传播，目前仍然没有较好的灭菌预防途径。
臭气是指所有刺激人体嗅觉器官、引起不愉快以及损坏生活环境的气体物质。常见的臭气污染物有氨、硫化氢、甲硫醇等。这些臭气污染是养殖场仅次于病原菌污染的第二大危害。目前尚缺乏高效安全的生物除臭剂，特别是甲硫醇臭气没有有效的治理方法，而甲基营养型芽孢杆菌正好可以利用这些臭气作为自身生长的营养物质进行吸收和转化降解。
甲基营养型芽孢杆菌lw-6(bacillusmethylotrophilus)是一种能够利用一碳甲基化合物作为碳源和能源进行生长的革兰氏阳性细菌。一碳化合物是分子中只含一个碳原子的化合物，如一氧化碳、二氧化碳、甲烷、甲醇等，这种细菌能够将自然界取之不尽的一碳化合物变为菌体蛋白质和植物营养及有机质，其代谢产物具有丰富的多样性和益生特点、而且该益生菌具有对外界环境因子的多抗逆性和无污染无毒害等优点，近年来被越来越多的运用于农业、医学、环保等领域。因此深入研发甲基营养型芽孢杆菌lw-6具有划时代的实际意义。
此外，甲基营养型芽孢杆菌lw-6菌体在生长过程中产生的抗菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的不足，提供一种用于畜牧养殖场空气处理的甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂。该菌液是在特定活化、发酵条件下制备得到，且制备的该除臭防疫剂含有的甲基营养型芽孢杆菌lw-6活菌数高，且抗逆性强，在畜禽场使用过程中效果稳定。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种甲基营养型芽孢杆菌lw-6菌液制备,并用于畜禽场空气的微生物除臭防疫剂，采用如下方法制备：
(1)将甲基营养型芽孢杆菌试管斜面接种于平板进行菌落活化和扩增、将扩增好的菌落平板接种于液体培养基中进行活化培养至92小时，制得活化菌群液体；
(2)将步骤(1)制得的活化菌群液体按体积百分比8％接种于液体发酵培养基中，32℃下，发酵培养120小时，制得甲基营养型芽孢杆菌发酵菌液上述甲基营养型芽孢杆菌发酵液的芽孢活孢子总量达到100亿/ml以上。(3)将步骤(2)制得的甲基营养型芽孢杆菌lw-6发酵菌液在超滤浓缩和多层过滤的条件下，制得含菌量≥100亿/ml的甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中的甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂，其特征在于，所述步骤(1)中的甲基营养型芽孢杆菌lw-6(bacillusmethylotrophilus)，保藏单位为：cgmcc—中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所；保藏编号为：cgmccno.6793；保存时间：2012年11月07日，且检测结果为存活。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中的甲基营养型芽孢杆菌除臭防疫剂，其特征在于，所述步骤(1)中的液体培养基组分如下，均为重量百分比：葡萄糖0.5％，酵母浸粉0.9％，蛋白胨0.9％，氯化钠1.1％，ph7.2。根据本发明优选的，所述步骤(1)中的活化培养条件甲基营养型芽孢杆菌除臭防疫剂，其特征在于，所述步骤(1)中的活化培养条件为：将斜面保存的菌种接种于液体培养基中，32℃，185转/分振荡培养92小时，即为活化菌体。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中甲基营养型芽孢杆菌除臭防疫剂，其特征在于，所述步骤(2)中液体发酵培养基组分如下，均为重量百分比：葡萄糖1.2％，氯化钠0.9％，碳酸铵0.4％，蛋白胨1.5％，酵母浸粉1.3％，磷酸二氢钾0.5％，水余量，ph7.2。
上述甲基营养型芽孢杆菌畜禽场用微生物空气除臭防疫剂在畜禽场空气处理中的应用。
上述应用，步骤如下：
上述应用，步骤如下：
将甲基营养型芽孢杆菌除臭防疫剂按质量比1:80的比例与水混合均匀，按照每平方米15毫升喷施量，喷施于畜禽养殖棚内，喷雾次数为3次即可。
有益效果
1.本发明所述的一种用于畜牧养殖场空气处理的甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂是首次做为液体喷雾剂应用于畜禽养殖场中，该菌对营养要求低，抗逆性强，生长繁殖快，喷雾到环境后可快速生长和定植，并代谢产生多种抗菌物质及各种酶类等，从而对致病菌产生拮抗、抑制或杀灭作用，从而达到消毒、除臭、净化、防疫的养殖环境中的空气处理的目的，并且其具有对人畜安全，环境污染少，防治对象针对性强等特点，并且无副作用，效果好，因而可以减少使用目前国内外一直采用的化学除臭防疫剂。
2.本发明通过将甲基营养型芽孢杆菌lw-6在特定条件下活化、发酵、以及进行特定的超滤浓缩和多层过滤后，制成芽孢数量100亿/ml以上的液体喷剂，从而确保微生物活力稳定；解决了甲基营养型芽孢杆菌lw-6菌体易在运输、贮存及使用中失去活性，效果降低的问题，并且使用方便，除臭防疫效果理想。
3.本发明所述的甲基营养型芽孢杆菌lw-6微生物空气除臭防疫剂首次做为液体喷雾剂应用于畜禽养殖场中，由于该菌对营养要求低，抗逆性强，生长繁殖快，喷雾到环境后可快速生长和定植，并代谢产生多种抗菌物质及各种酶类等，从而对致病菌产生拮抗、抑制或杀灭作用，从而达到消毒、除臭、净化、防疫的养殖环境中的空气处理的目的，并且其具有对人畜安全，环境污染少，防治对象针对性强等特点，并且无副作用，效果好，因而可以减少使用目前国内外一直采用的化学除臭防疫剂。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。
实施例1中的甲基营养型芽孢杆菌保藏登记号为：cgmccno.6793，保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的甲基营养型芽孢杆菌。
实施例1：
1将甲基营养型芽孢杆菌试管斜面接种于特定培养基的平板进行菌落活化和扩增、将扩增好的菌落平板接种于特定液体培养基中进行活化培养92小时，制得活化菌群液体；
2活化菌群液体按体积百分比8％接种于特定配方的液体发酵培养基中，在32℃下，发酵培养120小时，制得甲基营养型芽孢杆菌发酵菌液。
3甲基营养型芽孢杆菌发酵菌液进行特定条件的超滤浓缩和多层过滤，制得含菌量≥100亿/ml的甲基营养型芽孢杆菌除臭防疫剂。
其中,所述步骤1液体培养基组分如下，均为重量百分比：
葡萄糖0.5％，酵母浸粉0.9％，蛋白胨0.9％，氯化钠1.1％，ph7.2。
步骤1中的活化培养条件为：将斜面保存的菌种接种于液体培养基中，32℃条件下，185转/分振荡培养92小时，即为活化菌体。
所述步骤2中液体发酵培养基组分如下，均为重量百分比：葡萄糖1.2％，氯化钠0.9％，碳酸铵0.4％，蛋白胨1.5％，酵母浸粉1.3％，磷酸二氢钾0.5％，水余量，ph7.2。
实施例2:
取实施例1制得的甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂，按质量比1:80的比例与水混合均匀，按照每平方米15毫升的喷施量，喷施于畜禽养殖棚内,喷雾3次。
在雏鸡进棚前，先在棚内不同位置(四个角落及中间位置)分别放置不同菌的5个平皿，10分钟后盖好，取出，然后对棚内进行喷施除臭防疫剂，待8小时后再以同样方式放入不同平皿，10分钟后取出，放入32℃恒温培养箱培养48小时，分别计数消毒前与消毒后菌数。计算抑菌率，结果如下：鸡金黄色葡萄球菌72％、鸡大肠杆菌65％、鸡白痢沙门氏菌82％、禽多杀性巴氏杆菌63％。
实施例3:
本实施例用于考察甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂的除臭能力。
将本发明的实施例1和2制得的甲基营养型芽孢杆菌lw-6除臭防疫剂,按质量比1:80的比例与水混合均匀，按照每平方米15毫升的喷施量，喷施于畜禽养殖棚内.随机从养殖场取鸡粪，各取20公斤，放入三个试验箱，每隔12小时进行喷洒甲基营养型芽孢杆菌除臭防疫剂，48h后检测氨气、甲硫醇和硫化氢浓度。
经检测，此实施例的甲基营养型芽孢杆菌除臭防疫剂的除臭结果如下表：