新颖植物乳杆菌、乳酸菌组合物及其用以治疗或预防重金属相关疾病的用途的制作方法

本发明有关于一种微生物的第二用途，特别指一种新颖植物乳杆菌、乳酸菌组合物及其用以治疗或预防重金属相关疾病的用途。
背景技术：
：重金属污染指环境受到重金属或其化合物等物质污染，主要会是由工业排放物、交通工具排放废气、污水等人为原因所造成，而基于重金属具有不易移动及不易溶解的特性，因此，当个体长期或大量接触到环境中存在的金属污染物时，会造成慢性中毒的现象发生，目前对于人体健康伤害最大的重金属包含有铅、汞、砷、镉、铬。所谓铅中毒指人接触到铅或其化合物造成的中毒现象，其中，大多铅中毒的发生为通过吸入方式进入人体，例如机车废气、含有铅微粒的空气等，进入到人体内的铅会被小肠吸收而储存于体内；而儿童若接触到含铅的物品时，铅会经由皮肤被吸收进入人体。基于铅不易于被人体排出体外，因此，若长时间接触会造成各器官的危害，尤其以神经系统及消化系统的影响最巨。举例来说，儿童若长期铅中毒会造成脑部损害、瘫痪等病症发生。由上可知，重金属及其化合物为人体健康的一大杀手，但是却无法避免于环境中接触到重金属及其化合物，因此，开发出一种能够有效排出人体内重金属的产品为当务之急。技术实现要素：本发明的主要目的在于提供一种新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003，其科学命名为：植物乳杆菌植物亚种(lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期为：2018年9月4日；保藏编号为：cgmccno.16417。该菌也于2017年12月15日，保藏于中国台湾新竹财团法人食品工业发展研究所，保藏编号：bcrc910809。本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003具有吸附金属的用途，亦即该新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003能够于体内或体外吸附金属或其化合物，以达到预防或/及治疗金属中毒或其相关并发症的功效。具体来说，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003具有清除铅或其化合物的能力。换言之，通过投予本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003或是含有本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003的组合物至一个体体内，或是将本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003或是含有本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003的组合物使用于环境当中，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003能附着于肠道细胞及皮肤细胞上，能够有效吸附重金属离子，降低生物体内或环境中的重金属含量，以达到预防或治疗重金属引发的相关疾病，例如中枢及周边神经系统损害、记忆力衰退和儿童智力递减、反社会行为、血红蛋白合成受损、肾功能受损、耳聋、失明、发育迟缓、性欲减退、发炎、自体免疫疾病等。因此，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003组合物能作为一外用组合物或一内用组合物的有效成分。其中，该外用组合物可为一喷剂。其中，该内用组合物可为一食品、一营养补充品、一添加剂等。在本发明所揭一实施例中，提供一种乳酸菌组合物，包含有一有效量的本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003。在另一具体实施例中，该乳酸菌组合物更包含有一乳酸乳杆菌(lactobacillusdelbrueckiisubsp.lactis)。具体来说，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003与该乳酸乳杆菌可以重量比1：1的比例混合而形成一组合物。更进一步来说，上述实施例中所揭乳酸菌组合物能够具有吸附重金属的用途，并且，能够依据本发明所属
技术领域：
的技术人员而被制备为一食品、一外用剂型等，应用于人体或是体外。上述实施例中所揭乳酸菌组合物具有治疗或/及预防重金属中毒的用途，亦即投予一有效量的乳酸菌组合物至一个体，能够吸附细胞内的重金属，以达到清除人体吸入的金属或其化合物的功效，进而预防或治疗重金属引发的疾病。附图说明图1为以电子显微镜观察本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003的结果。图2为本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003以16srdna鉴定的结果。图3为nbm-04-10-001菌株以16srdna鉴定的结果。图4为乳酸菌样品分别对于人类hacat细胞进行吸附试验的结果，上图为nbm-04-10-001菌株吸附试验的结果，下图为nbm-01-07-003菌株吸附试验的结果。图5为乳酸菌样品分别对于人类caco-2细胞进行吸附试验的结果，上图为nbm-04-10-001菌株吸附试验的结果，下图为nbm-01-07-003菌株吸附试验的结果。图6为乳酸菌样品刺激hacat细胞分泌il-6的结果。图7为乳酸菌样品添加lps刺激hacat细胞分泌il-6的结果。图8为乳酸菌样品刺激hacat细胞分泌ifn-γ的结果。图9为乳酸菌样品添加lps刺激hacat细胞分泌ifn-γ的结果。图10为乳酸菌样品刺激hacat细胞分泌il-8的结果。图11为乳酸菌样品添加lps刺激hacat细胞分泌il-8的结果。图12为乳酸菌样品刺激caco-2细胞分泌il-8的结果。图13为乳酸菌样品添加lps刺激caco-2细胞分泌il-8的结果。图14为乳酸菌样品刺激小鼠巨噬细胞raw264.7分泌il-6的结果。图15为乳酸菌样品添加lps刺激小鼠巨噬细胞raw264.7分泌il-6的结果。图16为乳酸菌样品刺激小鼠巨噬细胞raw264.7分泌tnf-α的结果。图17为乳酸菌样品添加lps刺激小鼠巨噬细胞raw264.7分泌tnf-α的结果。图18以电子显微镜观察未经过重金属试验的菌体。图19以电子显微镜观察经过重金属试验的菌体。图20为第一组至第三组大鼠经不同处理后，其肝脏切片染色的结果。图21a为第一组大鼠的肝脏切片染色的结果。图21b为第二组大鼠的肝脏切片染色的结果。图21c为第三组大鼠的肝脏切片染色的结果。具体实施方式本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003(下称nbm-01-07-003)，其科学命名为：植物乳杆菌植物亚种(lactobacillusplantarumsubsp.plantarum)，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期为：2018年9月4日；保藏编号为：cgmccno.16417。同样于2017年12月15日，保藏于中国台湾新竹财团法人食品工业发展研究所，保藏编号为：bcrc910809。更进一步来说，请参阅图1，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003分离自婴儿粪便，为格兰氏阳性杆菌，不具触酶、氧化酶及运动性，不会产生内生孢子，在好氧或厌氧环境下皆会生长。新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003可在37℃下培养于mrs培养基中。新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003以16srdna鉴定结果如图2所示，即seqidno.1，经比对可知本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003接近lactobacillusplantarumsubsp.plantarum、lactobacillusplantarumsubsp.argentoratensis、lactobacillusplantarum及lactobacillusplantarumsubsp.fabifermentant，相似度为99％，亦即本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003为新颖菌株。本发明实例中所使用的乳酸乳杆菌(lactobacillusdelbrueckiisubsp.lactis)被命名为nbm-04-10-001(下称nbm-04-10-001)，其分离自发酵乳，为格兰氏阳性杆菌，不具触酶、氧化酶及运动性，不会产生内生孢子，在好氧或厌氧环境下皆会生长。请参阅图3，即seqidno.2，经过16srdna序列分析及api鉴定系统分析可知，本发明实例中所使用的nbm-04-10-001菌株为乳酸乳杆菌，为商业上可购得的微生物，购买自台湾财团法人食品工业研究所，菌株编号为atcc12315，故不需要进行寄存。以下，将通过若干实例并搭配图表，更进一步说明本发明的功效如后。实例一：乳酸菌吸附试验取24孔培养盘，每孔加入1ml细胞悬浮液，细胞浓度调至5×104cell/ml，均匀混合后放入37℃、5％二氧化碳培养箱培养隔夜，使细胞贴附生长。确认细胞完全贴附后，将旧培养基吸出，以磷酸盐缓冲液清洗后，加入900μl新鲜培养基与100μl以细胞培养基回溶的乳酸菌样品(107cfu/ml)，再放入37℃、5％二氧化碳培养箱培养2小时，而后将培养液吸出，再以磷酸盐缓冲液清洗后，每孔加入200μl的6～10％福马林作用30分钟，使菌体和细胞固定于孔盘中。移除福马林，以磷酸盐缓冲液清洗，再加入200μl结晶紫作用5分钟，进行染色，并以倒立式萤光显微镜观察计数细胞上乳酸菌数量。在本实例中，所使用的细胞为人类直肠癌细胞c2bbel细胞株(以下简称人类caco-2细胞株)及人类皮肤角质层细胞hacat细胞株(以下简称人类hacat细胞株)；培养基为dmem(dulbecco’smodifiedeaglemedium)培养基；乳酸菌为nbm-04-10-001、nbm-01-07-003。结果如下表一、表二及图4、图5所示。表一：人类hacat细胞株对于乳酸菌的吸附能力乳酸菌样品吸附个数nbm-04-10-001太多不可数nbm-01-07-00336.2±7.66表二：人类caco-2细胞株对于乳酸菌的吸附能力乳酸菌样品吸附个数nbm-04-10-00142.1±9.72nbm-01-07-00350.6±5.58由于先前文献指出乳酸菌在猪的鳞状上皮细胞附着15e个菌体以上时，则可认为该乳酸菌具有附着能力，因此，由表一、二及图4、图5的结果可知，本实例中所使用的乳酸菌样品分别对于人类hacat细胞及人类caco-2细胞株具有良好的附着力，其中，又以nbm-04-10-001对于人类hacat细胞的附着力较佳；nbm-01-07-003对于人类caco-2细胞株的附着力较佳。因此，由上述结果可知，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003对于肠道具有良好的附着能力，显示本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003能够在体内或体外中发挥功效。实例二：乳酸菌对于细胞的免疫试验将细胞培养至24孔培养盘，每孔加入一预定浓度的1ml细胞悬浮液，之后加入100μl乳酸菌菌液，菌数分别为109、108、107、106、105cfu/ml，或lta裂解液共同培养24小时，作用时间结束后收集其上清液，并以市售elisa套组进行分析。在本实例中，所用于测试的细胞及其浓度分别为：人类caco-2细胞，浓度调至1×105cell/ml；人类hacat细胞，浓度调至9×104cell/ml；小鼠巨噬细胞raw264.7，浓度调至2×105cell/ml。并且，使用的乳酸菌菌液来自于nbm-04-10-001、nbm-01-07-003，结果如图6至图17所示。由图6及图7的结果可知，人类hacat细胞无论是直接与各乳酸菌作用，或是与乳酸菌添加lps刺激后作用，nbm-04-10-001及nbm-01-07-003能在菌数为109或108cfu/ml时有效降低il-6的分泌量，显示本发明所揭nbm-01-07-003能降低刺激细胞产生免疫反应；由图8及图9的结果可知，109cfu/ml的nbm-04-10-001与人类hacat细胞共培养后，可以显著提升细胞ifn-γ分泌量，进而达到减少il-4表现量及诱发th1发炎反应的功效。由图10及图11的结果可知，109、108、107cfu/ml的lab-001或109、108、107、106、105cfu/ml的nbm-04-10-001与人类hacat细胞系能够显著降低细胞il-8的分泌量，降低发炎反应、血管新生的作用发生。而由图9及图10的结果可知，当nbm-04-10-001及nbm-01-07-003能在菌数为108、107、106cfu/ml时有效降低il-8的分泌量。更进一步地由图14至图15的结果可知，对于本身会分泌免疫因子的小鼠巨噬细胞raw264.7来说，nbm-04-10-001及nbm-01-07-003能够降低il-6的分泌量，并且，随着菌数增加，降低的效果越佳。由图16及图17的结果可知，无论小鼠巨噬细胞raw264.7是否有接受lps刺激，添加nbm-04-10-001及nbm-01-07-003能够降低tnf-α。实例三：铅吸附试验本实例以分别以铅吸附液与水、edta、nbm-04-10-001及nbm-01-07-003、市售优格粉、待测样本进行培养，培养后再以分光光度计测量吸光值，以换算出得到铅清除率，结果如下表三所示。表三：铅清除率清除率(％)清除率(％)清除率(％)平均清除率(％)sd值水0.00.00.00.00.0edta105.4110.6103.2106.43.8nbm-04-10-00175.586.280.080.65.4nbm-01-07-00388.191.091.190.01.7由表三的结果可知，本发明所揭nbm-04-10-001及nbm-01-07-003的乳酸菌确实能够有效地吸附铅，并达到清除铅的功效。实例四：体外试验取nbm-04-10-001菌株及nbm-01-07-003菌株，将该两菌株以重量比1：1的比例混合，形成混合菌粉。取0.1g混合菌粉回溶于1ml去离子水中，取1ml加入10ml1ppm的铅标准溶液中，在37℃反应1小时。将重金属悬浮液于12000rpm离心5分钟去除沉淀物(菌泥)取出上清液。将上清液以0.22μm滤膜过滤后并利用感应耦合电浆原子发射光谱仪(icp-oes)进行分析，显示混合菌粉清除10ml中1ppm的铅金属离子能力为:57.21±0.06％。由此可知，本发明所揭nbm-01-07-003菌株或是含有本发明所揭nbm-01-07-003菌株的组合物确实能够吸附铅溶液1ppm浓度中50％以上的铅金属离子。另将菌泥放置离心试管中进行冷冻干燥。观察的干燥菌泥菌相分别分为:控制组(未经过重金属吸附试验)及重金属试验组(已经过重金属吸附试验)，以观察菌体吸附重金属铅的变化。由此结果显示为吸附重金属的菌粉呈现紧密连结的现象(如图18)，而吸附重金属的菌粉，虽然菌体外型完整，但其表面附着破碎及破碎物质并产生粘稠物质，显示本发明所揭nbm-01-07-003菌株确实能够吸附且聚集重金属(如图19)。实例五：动物试验(一)取六周龄wistar雄性大鼠(购于乐斯科生物科技股份有限公司)，平均分配为3组，每组6只，其中，第一组为空白组；第二组为硝酸铅中毒组，硝酸铅剂量为1/50大鼠半致死剂量(ld50)：45mg/kg；第三组为混合菌粉组，投予剂量为45mg/kg的硝酸铅，混合菌粉剂量为20～21mg/kg/day，其中，混合菌粉中含有nbm-04-10-001菌株及nbm-01-07-003菌株，并且，该两株菌株以重量比1：1的比例混合，而混合菌粉于硝酸铅投予后两小时再经口喂食。实验过程中分别测量各组大鼠的体重变化，结果如表四所示，并且，每两周采血检测各组大鼠血液中铅含量，结果如表五所示，其中，nd表示血铅含量小于0.1ppb。而于实验结束后牺牲各组大鼠，对其肝脏、肾脏进行切片观察，结果如图20所示。由下表四的结果可知，第一组至第三组大鼠的摄食量无明显差异。由表五的结果可知，第二组大鼠的血铅含量持续为2.5～3.1ppb，而相较于第二组大鼠，于第三组中的各该大鼠血液中未为检测出铅，显示投予本发明所揭nbm-01-07-003菌株或是含有本发明所揭nbm-01-07-003菌株能够有效清除及吸附动物血液中重金属铅量。而由图20的结果可知，第一组大鼠的肝细胞紧密排列，且核仁明显、无细胞破损、肿胀、核溶解症状及空泡等情形存在；第二组大鼠的肝细胞孔隙明显变大，出现局部小范围的坏死细胞、核浓缩及溶解的现象，显示第二组大鼠的肝细胞受到铅影响而引起肝损伤；相较于第二组大鼠来说，被投予含有本发明所揭nbm-01-07-003菌株的组合物的大鼠，其肝细胞的受损情形明显降低，甚至相近于第一组大鼠的肝细胞，显示本发明所揭nbm-01-07-003菌株或是含有本发明所揭nbm-01-07-003菌株的组合物不仅能够清除组织中的铅，使铅不累积于组织或细胞内，并且能够减轻组织或细胞的氧化反应，逆转重金属对于器官造成的损害或病变。表四：各组大鼠体重及摄食量变化表五：各组大鼠的血铅含量实例六：动物实验(二)本实例的设计大致上与实例五相同，惟，不同在于将硝酸铅更换为硝酸砷，投予剂量为1mg/kg(1/40大鼠半致死剂量，ld50)。简单来说，本实例中将大鼠分为3组，其中，第一组为空白组；第二组为硝酸砷中毒组，硝酸砷剂量：1mg/kg；第三组为混合菌粉组，投予剂量为1mg/kg的硝酸砷，混合菌粉剂量为20～21mg/kg/day，其中，混合菌粉中含有nbm-04-10-001菌株及nbm-01-07-003菌株，并且，该两株菌株以重量比1：1的比例混合，而混合菌粉于硝酸铅投予后两小时再经口喂食。本实例试验时间为3周。试验第三周时，分别对每组大鼠进行眼窝采血，检测血液中砷的含量，结果如下表六所示。并于试验结束后牺牲各该组大鼠，分别取其肝脏，进行肝脏切片及染色，结果如图21所示。由表六及图21的结果可知，含有本发明所揭nbm-01-07-003菌株的组合物能够有效清除血液中的砷，并且，避免砷累积于肝脏中，使肝细胞不会被砷所破坏，如图21所示，投予含有本发明所揭nbm-01-07-003菌株的组合物能够使肝细胞排列紧密，不会发生细胞坏死、核浓缩及溶解的现象。由此显示本发明所揭nbm-01-07-003菌株或是含有本发明所揭nbm-01-07-003菌株的组合物能清除血液中的砷，使砷不会累积于肝脏或其他组织内，以达到避免器官受到重金属损害的功效。表六：各组大鼠的血砷变化量根据上述说明可证实，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003确实能够吸附于肠道细胞或皮肤细胞上，不仅能够降低个体的发炎现象、调节免疫反应，更能够有别于以往的乳酸菌，能够于体内或体外吸附铅、砷等重金属或含有重金属的组合物，以能够作为治疗或/及预防重金属引发相关疾病或并发症的组合物中的有效成分。更进一步来说，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003能够与其他乳酸菌相互配合，例如nbm-04-10-001，能够更为提升其吸附重金属的能力，达到更佳的清除效果，举例来说，本发明所揭新颖植物乳杆菌nbm-01-07-003与nbm-04-10-001能够依据一预定比例混合，例如1：1、2：1、3：1、1：2、1：3等。sequencelisting<110>原生生物医学股份有限公司<120>新颖植物乳杆菌、乳酸菌组合物及其用以治疗或预防重金属相关疾病的用途<160>2<170>patentinversion3.3<210>1<211>1506<212>dna<213>lactobacillusplantarum<400>1gacgaacgctggcggcgtgcctaatacatgcaagtcgaacgaactctggtattgattggt60gcttgcatcatgatttacatttgagtgagtggcgaactggtgagtaacacgtgggaaacc120tgcccagaagcgggggataacacctggaaacagatgctaataccgcataayaacttggac180cgcatggtccgagyttgaaagatggcttcggctatcacttttggatggtcccgcggcgta240ttagctagatggtggggtaacggctcaccatggcaatgatacgtagccgacctgagaggg300taatcggccacattgggactgagacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtaggga360atcttccacaatggacgaaagtctgatggagcaacgccgcgtgagtgaagaagggtttcg420gctcgtaaaactctgttgttaaagaagaacatatctgagagtaactgttcaggtattgac480ggtatttaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtg540gcaagcgttgtccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggttttttaagtctgat600gtgaaagccttcggctcaaccgaagaagtgcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaa660gaggacagtggaactccatgtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagt720ggcgaaggcggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagtatgggtagcaaac780aggattagataccctggtagtccataccgtaaacgatgaatgctaagtgttggagggttt840ccgcccttcagtgctgcagctaacgcattaagcattccgcctggggagtacggccgcaag900gctgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattc960gaagctacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatactatgcaaatctaagagattagac1020gttcccttcggggacatggatacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgaga1080tgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttattatcagttgccagcattaagttgg1140gcactctggtgagctgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatca1200tgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaacgagttgcgaactcgcgagagtaag1260ctaatctcttaaagccattctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagtc1320ggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtaca1380caccgcccgtcacaccatgagagtttgtaacacccaaagtcggtggggtaaccttttagg1440aaccagccgcctaaggtgggacagatgattagggtgaagtcgtaacaaggtagccgtagg1500agaacc1506<210>2<211>1516<212>dna<213>lactobacillusdelbrueckii<400>2gacgaacgctggcggcgtgcctaatacatgcaagtcgagcgagctgaattcaaagatycy60ttcgggrtgatttgttggaygctagcggcggatgggtgagtaacacgtgggcaatctgcc120ctaaagactgggataccacttggaaacaggtgctaataccggataacaacatgaatcgca180tgattcaagtttgaaaggcggcgcaagctgtcactttaggatgagcccgcggcgcattag240ctagttggtggggtaaaggcctaccaaggcaatgatgcgtagccgagttgagagactgat300cggccacattgggactgagacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatct360tccacaatggacgcaagtctgatggagcaacgccgcgtgagtgaagaaggtcttcggatc420gtaaagctctgttgttggtgaagaaggatagaggcagtaactggtctttatttgacggta480atcaaccagaaagtcacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaa540gcgttgtccggatttattgggcgtaaagcgagcgcaggcggaatgataagtctgatgtga600aagcccacggctcaaccgtggaactgcatcggaaactgtcattcttgagtgcagaagagg660agagtggaactccatgtgtagcggtggaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcg720aaggcggctctctggtctgcaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaacagga780ttagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgagcgctaggtgttggggactttccgg840tyctcagtgccgcagcaaacgcrttaagcgctccgcctggggagtacgaccgcaaggttg900aaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaag960caacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctgcgctacacctagagataggtggttc1020ccttcggggacgcagagacaggtggtgcatggctgtcgtcagctggtgtcgtgagatgtt1080gggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgtctttagttgccatcattaagttgggcac1140tctaragagactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcatcatgc1200cccttatgacctgggctacacacgtgctacaatgggcagtacaacgagaagcgaacccgc1260gagggtaagcggatctcttaaagctgctctcagttcggactgcaggctgcaactcgcctg1320cacgaagctggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttcccggg1380ccttgtacacaccgcccgtcacaccatggaagtctgcaatgcccaaagtcggtgrgataa1440cctttataggagtcagccgcctaaggcagggcagatgactggggtgaagtcgtaacaagg1500tagccgtaggagaacc1516当前第1页12