一种抗肿瘤化合物及其合成方法与应用与流程
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种抗肿瘤化合物及其合成方法与应用。
背景技术：
恶性肿瘤是威胁人类健康的头号疾病，位居人类疾病三大主要死亡原因只首，占所有疾病死因的四分之一，且发病人数和死亡人数逐年升高。肿瘤的发生是由遗传因素、机体内环境和体外环境等诸多因素相互作用所致，其分子机制涉及基因组学、表观遗传学和基因表达调控等的异常变化，是一个多因素、多步骤、错综复杂的过程。
其中，多发性骨髓瘤(mm)作为血液系统常见的恶性肿瘤，以骨髓内恶性浆细胞无限克隆性增殖和分泌单株免疫球蛋白为特征，临床上常伴有贫血、溶骨性骨病、肾损害和瘤细胞髓外浸润所致损害。自2003年首个蛋白酶体抑制剂“硼替佐米”经fda获批以来，蛋白酶体抑制剂被广泛用于多发性骨髓瘤的治疗，二代蛋白酶体抑制剂“卡非佐米”和三代蛋白酶体抑制剂“伊沙佐米”也分别于2012年和2015年被fda批准上市。但几乎所有多发性骨髓瘤患者经蛋白酶体抑制剂治疗后均会出现严重的耐药性而导致复发，至今仍不可治愈，因而临床迫切需要新型靶向药物的研发以克服耐药性。此外，蛋白酶体抑制剂导致的心脏毒性、血小板减少、神经病变等毒副作用也越来越引起关注，因而在开发新型靶向药物的同时，探索切实有效的联合用药方案，以提升药物治疗效果同时减少药物使用剂量，从而降低毒副作用，缓减耐药性的出现也亟待解决。
而乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发生于乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，临床特征主要有乳腺于块、皮肤改变、腋窝淋巴结肿等。“紫杉醇”、“曲妥珠单抗”、“拉帕替尼”等药物的开发解决了乳腺癌的治疗困境。但三阴性乳腺癌(癌组织免疫组织化学检查结果为雌激素受体(er)、孕激素受体(pr)和原癌基因her-2均为阴性的乳腺癌，占所有乳腺癌病理类型的10.0％～20.8％)是乳腺癌中预后最差的类型，目前还没有靶向药物上市，也没有特有的治疗指南，因而临床迫切需要新型靶向药物的研发，并探索切实有效的联合用药方案。
酶是一类催化生物体内其它分子磷酸化的蛋白，通过调控下游底物磷酸化程度调控细胞周期、信号传导、细胞自噬、生长发育等一系列重要的生理过程。
人体内一共有超过500种激酶，其中一类新颖的激酶便是cmgc家族中的双特异性蛋白激酶dyrk家族。dyrk家族在进化具有保守性，总计含有dyrk1a、dyrk1b、dyrk2、dyrk3、dyrk4等5个成员，它们对自身的酪氨酸和外源底物的丝氨酸/苏氨酸片段均具有磷酸化活性，并于细胞增殖和凋亡诱导中发挥关键作用。最近有研究表明，人体26s蛋白酶体rpt3亚基上的关键位点thr25的磷酸化是肿瘤细胞通过其细胞周期的必要条件，而dyrk2是磷酸化该位点的主要激酶。因此，dyrk2是肿瘤治疗的潜在新颖靶点。
对dyrk家族成员的选择性抑制剂报道集中于dyrk1a，而针对dyrk2的报道数量较少，其活性、选择性也都较差。究其原因，dyrk家族成员同源性很高，尤其在atp结合口袋附近，成员的口袋内仅有数个疏水氨基酸不同。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明第一目的是提供一种抗肿瘤化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，该化合物或其药学上可接受的盐对蛋白激酶dyrk2展现出很好的抑制活性，具有理想的抗肿瘤效果。具体的，
所述化合物具有通式i或通式ii所示结构：
在所述通式i中，r1代表氢、酰基、磺酰基、可被取代的苯、可被取代的吡啶、可被取代的呋喃、可被取代的噻吩或者末端可被氨基、氰基、酰胺基或含杂原子环中的一种或几种取代的c1-c12的直链或支链烷基；优选r1代表末端可被氨基、氰基、酰胺基或含n杂环取代的c1-c4的直链烷基；进一步优选r1代表丙氨基、boc-丙氨基、乙酰丙氨基、乙酰丁氨基、丙腈基、丁腈基或选自如下端基为含n杂环的侧链中的任一种：4-n环己胺、4-甲基哌啶、(s)-3-甲基吡咯烷、(r)-3-甲基吡咯烷、3-甲基氮杂环丁烷、1-(4-甲基哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮、4-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯磺酰氟、n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁基)丙烯酰胺、n-(5-(4-甲基哌啶-1-基)-5-氧代戊基)丙烯酰胺、(2-甲酰基-5-(3-(4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)苯基)硼酸、(2-甲酰基-4-(3-(4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)苯基)硼酸；
r2、r3彼此独立地代表氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、苯基或苄基；优选地，r2、r3中任意一个代表甲基或苄基，另一个代表甲基、异丙基或苄基；更优选地，r2、r3中任意一个代表甲基，另一个代表甲基、异丙基或苄基；最优选地，r2、r3均代表甲基；
r4代表氢、羧基、酯基、酰胺基，或者末端可被卤素、甲基、乙基、羟基、氨基、氰基、胍基中的一种或几种取代的c1-c3的直链烷基；优选地，r4代表氢、羧基、酯基、酰胺基或者可被卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、胍基中的一种或几种取代的甲基；进一步优选地，r4代表氢、羧基、羟甲基、氨甲基、二氟甲基、胍基甲基、二甲基取代的羟基甲基；
在所述通式ii中，r5代表氢、酰基、磺酰基、可被取代的苯、可被取代的吡啶、可被取代的呋喃、可被取代的噻吩或者末端可被氨基、氰基、酰胺基、含n杂环中的一种或几种取代的c1-c12的直链或支链烷基；优选r5代表末端可被氨基、氰基、酰胺基、含n杂环中的一种或几种取代的c1-c4的直链烷基；进一步优选r5代表丙氨基、boc-丙氨基、乙酰丙氨基、乙酰丁氨基、丙腈基、丁腈基或选自如下端基为含n杂环的侧链中的任一种：4-n环己胺、4-甲基哌啶、(s)-3-甲基吡咯烷、(r)-3-甲基吡咯烷、3-甲基氮杂环丁烷；最优选地，r5代表4-甲基哌啶；r6代表氢、羧基、酯基、酰胺基或者末端可被卤素、甲基、乙基、羟基、氨基、氰基、胍基中的一种或几种取代的c1-c3的直链烷基；优选地，r6代表氢、羧基、酯基、酰胺基或者可被卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、胍基中的一种或几种取代的甲基；进一步优选地，r6代表氢、羧基、羟甲基、氨甲基、二氟甲基、胍基甲基、二甲基取代的羟基甲基；最优选的，r6代表羟甲基。
作为一种优选方案，在通式i中，r1代表氢、酰基、磺酰基、可被取代的苯、吡啶、呋喃、噻吩等芳基、末端可被氨基、氰基、酰胺基、含杂原子环取代的c1-c12的直链或支链烷基时，r2、r3彼此独立地代表氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、苯基或苄基，r4代表氢、羧基、酯基、酰胺基，或者可在末端被卤素、甲基、乙基、羟基、氨基、氰基、胍基取代的c1-c3的直链烷基；
作为一种优选方案，在通式i中，r1代表末端可被氨基、氰基、酰胺基或含杂原子环取代的c1-c4的直链烷基，r2、r3彼此独立地代表甲基、异丙基、苄基；r4代表氢、羧基、酯基或者末端可被卤素、甲基、羟基、氨基、胍基中的一种或几种取代的甲基。作为优选，通式i化合物选自如下结构的化合物：
作为一种优选方案，在通式ii中，r5代表末端可被氨基、氰基、酰胺基或含n杂环中的一种或几种取代的c1-c4的直链烷基；r6代表氢、羧基、酯基、酰胺基或者可被卤素、甲基、羟基、氨基、氰基、胍基中的一种或几种取代的甲基；
作为最优选方案，在通式ii中，r5代表4-甲基哌啶，r6代表氢或羟甲基。
作为优选，通式ii化合物选自如下结构的化合物：
基于dyrk2的抑制剂吖啶，本发明对其进行多轮化学衍生，最终优化得到了两类32个类似物，目前最佳化合物对dyrk2表现出了较高活性与选择性，其ic50为0.009μm，对其他dyrk家族成员均有选择性；对同家族dyrk1a选择性近300倍，并在细胞水平和动物水平初步验证了其肿瘤抑制活性。本发明的吖啶类dyrk2抑制剂小分子可能为预防或治疗蛋白酶体相关性肿瘤开辟了新的途径。
本发明同时提供了上述化合物在药学上可接受的盐，此处“药学上可接受的盐”包括但不仅限于无机酸盐，选自比如，盐酸盐、磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐；也包括有机盐，选自例如三氟乙酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、链烷酸盐比如乙酸盐和hooc-(ch2)n-cooh的盐，其中n选自0到4。类似地，药学中可接受的阳离子的例子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。
优选所述药学上可接受的盐为三氟乙酸盐；尤其优选所述化合物具有式i-22所示结构时，其药学上可接受的盐为三氟乙酸盐。
在本发明涉及的化合物结构基础上，在通式i中r1、通式ii中r5的氨基，被酰基保护基(如乙酰基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、邻硝基苯磺酰基、叔丁氧羰基、n-苄氧羰基等)保护时，和/或，通式i中r4、通式ii中r6的的羟基被苄基、对甲氧基苄基、酰基保护基(同上)、醚类保护基(四氢吡喃、甲氧基甲基醚等)、硅醚类保护基(三甲基硅基、三异丙基硅基、叔丁基二苯基硅基等)保护时，此类化合物也属于在本发明化合物基础上容易得到的衍生物。
本发明第二目的在于提供所述的抗肿瘤化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体的合成方法，通式i化合物的合成路线如下：
当r4代表氢时，由化合物4经过至少一步侧链引入反应制得化合物ia；
当r4代表羧基、酯基、酰胺基或者末端可被卤素、甲基、乙基、羟基、氨基、氰基、胍基中的一种或几种取代的c1-c3的直链烷基时，由化合物4’经过至少一步侧链引入反应制得化合物ib。
作为一种优选方案，当通式i化合物具有如ia1所示结构时，合成路线如下：
其中，r1的限定如前文所述；优选通式ia1化合物的结构如式i-1～i-6或i-12～i-17所示；
所述合成方法包括以下具体步骤：
(i)化合物4与硫氢化钠进行硫醇化反应后，所得产物再与相应的侧链化合物进行取代反应引入侧链，得到化合物ia1；
优选地，当r1代表4-n环己胺或4-甲基哌啶时，所述侧链化合物分带有保护基，在进行取代反应引入侧链后，所得产物再进行脱保护，得到所述化合物ia1；
在一些实施方式中，当所述通式i化合物具有如式i-12～i-17所示结构时，还可以通过下述合成路线合成：
其中，r1代表1-(4-甲基哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮、4-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯磺酰氟、n(4-(4-甲基哌嗪-1-基-4-氧代丁基)丙烯酰胺、n-(5-(4-甲基哌啶-1-基)-5-氧代戊基)丙烯酰胺、(2-甲酰基-5-(3-(4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)苯基)硼酸或(2-甲酰基-4-(3-(4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)苯基)硼酸；
所述合成方法包括以下具体步骤：
(i)由化合物i-6经至少一步酰胺化或烷基化反应，得化合物i-12～i-17。
当所述通式i化合物具有如通式ia2所示结构时，合成路线如下：
其中，r1、r3的限定如前文所述；优选通式ia2化合物的结构如式i-7～i-10、i-18或i-19所示；
所述合成方法包括以下具体步骤：
(i)化合物4经三溴化硼脱保护反应，得化合物5；
(ii)所述化合物5经烷基化反应，得化合物6；
(iii)所述化合物6与硫氢化钠进行硫醇化反应，所得产物与相应的带有保护基的侧链化合物进行取代反应引入侧链后，再进行脱保护反应，得到化合物ia2；
在一些实施方式中，当所述通式i化合物具有如式i-18或i-19所示结构时，还可以采用下述合成路线合成：
其中，r1代表1-(4-甲基哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮或4-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯磺酰氟；
所述合成方法包括以下具体步骤：
(i)由化合物i-9经至少一步酰胺化或烷基化反应，得化合物i-18、i-19。
当所述通式i化合物具有如式i-11所示结构时，合成路线如下：所述合成方法包括以下
具体步骤：
(i)化合物4经三溴化硼脱保护反应，得化合物7；
(ii)所述化合物7与苄溴反应，得化合物8；
(iii)所述化合物8与硫氢化钠进行硫醇化反应，所得产物与相应的带有保护基的侧链化合物进行烷基化反应后，在含有三氟乙酸的二氯甲烷溶液中进行脱boc保护，得到化合物i-11；
当通式i化合物具有如式ib1所示结构时，合成路线如下：
其中，r1的限定如前文所述；r4代表羧基、酯基、酰胺基或者末端可被卤素、甲基、乙基、羟基、氨基、氰基、胍基中的一种或几种取代的c1-c3的直链烷基；优选通式ib1化合物的结构如式i-20～i-30所示；
所述合成方法包括以下具体步骤：
(i)化合物4’用草酸氯处理后在甲醇中甲酯化得化合物12；所述化合物12经过至少一步一锅法硫醇化烷基化，和/或一步官能团转化，和/或一步脱保护反应，得化合物ib1。
作为优选，所述化合物4的合成路线如下：
包括以下具体步骤：
(i)化合物1、2经铜催化偶联得化合物3；
(ii)所述化合物3在三氯氧磷中回流环化芳香化，得所述化合物4。
作为优选，所述化合物4’的合成路线如下：
包括以下具体步骤：
(i)化合物1’、2’在铜、氧化亚铜的催化下偶联反应得到化合物3’；
(ii)所述化合物3’在三氯氧磷中环化芳香化，得所述得化合物4’。
作为优选，当所述通式ii化合物具有式ii-1所示结构时，其合成路线如下：
所述合成方法包括以下具体步骤：
(i)化合物22与化合物23在碱性条件下进行杂环合成反应，得化合物24；
(ii)所述化合物24在三氯氧磷中环化芳香化，得化合物25；
(iii)所述化合物25与硫氢化钠进行硫醇化反应，所得产物与相应的带有保护基的侧链化合物进行烷基化反应后，再进行脱保护，即得化合物ii-1；
当所述通式ii化合物具有式ii-2所示结构时，其合成路线如下：
所述合成方法包括以下具体步骤：
(i)化合物22与化合物23’反应，得化合物24’；
(ii)所述化合物24’在三氯氧磷中环化芳香化，得化合物25’；
(iii)所述化合物25’经硫氢化钠硫醇化，一锅法进行烷基化，得化合物26’；
(iv)所述化合物26’经二异丙基氢化铝还原后脱保护，即得化合物ii-2。
作为优选，本发明中所述的保护基为boc-保护基。在一些实施方式中，所得产物与相应的带有boc-保护基的侧链化合物进行烷基化反应后，在含有三氟乙酸的二氯甲烷溶液中进行脱boc保护，得到相应的化合物。
本发明中所定义的“药学上可接受的盐”包括化合物的盐，以及化合物的立体异构体的盐，比如对映异构体的盐，和/或非对映异构体的盐。
如果本文中所述的化合物以常规的成盐形式得到，所属领域技术人员会识别各种合成方法，所述合成方法不需过度的实验就可以用于制备无毒的药学可接受的加成盐。
本发明描述的化合物可以是不对称的(例如，具有一个或多个立体中心)。除非另有说明，否则所有立体异构体，例如对映异构体和非对映异构体都是预期的。含有不对称取代的碳原子的本发明化合物可以以旋光或外消旋形式分离。关于如何由光学活性原料制备光学活性形式的方法是本领域已知的，例如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。
在一些实例中，4-n环己胺指的是
在一些实例中，4-甲基哌啶基指的是
在一些实例中(s)-3-甲基吡咯烷指的是
在一些实例中，(r)-3-甲基吡咯烷指的是
在一些实例中，3-甲基氮杂环丁烷指的是
在一些实例中，1-(4-甲基哌啶-1-基)丙-2-烯-1-酮指的是
在一些实例中，4-((4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯磺酰氟指的是
在一些实例中，n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-氧代丁基)丙烯酰胺指的是
在一些实例中，n-(5-(4-甲基哌啶-1-基)-5-氧代戊基)丙烯酰胺指的是
在一些实例中，2-甲酰基-5-(3-(4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)苯基)硼酸指的是
在一些实例中，(2-甲酰基-4-(3-(4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙氧基)苯基)硼酸指的是
本发明第三目的在于提供一种药物组合物，含有所述的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体中的一种或几种，和至少一种药用稀释剂、载体或赋形剂。
作为优选，所述的药物组合物还包含可以用于治疗肿瘤的第二治疗剂；
所述第二治疗剂优选为蛋白酶体抑制剂和/或天然抗癌药物；
所述蛋白酶体抑制剂优选为硼替佐米、卡非佐米、伊沙佐米中的一种或几种；
所述天然抗癌药物优选为紫杉醇。
本发明第四目的在于提供所述的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体在制备肿瘤治疗药物中的应用。
优选将所述的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体作为dyrk2抑制剂，抑制人体26s蛋白酶体的活性；
优选所述的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体通过阻断肿瘤细胞的细胞周期进行作用；
所述肿瘤包括血液肿瘤及实体肿瘤；优选所述血液肿瘤为多发性骨髓瘤(包括对蛋白酶体抑制剂“万珂”耐药的多发性骨髓瘤)、白血病、慢性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、华氏巨球血症中的一种或几种；优选所述实体肿瘤为乳腺癌。
本发明中的化合物与蛋白酶体抑制剂的联用效果比目前临床常用的治疗方案(如蛋白酶体抑制剂与肾上腺皮质激素地塞米松联用，蛋白酶体抑制剂与免疫调节剂沙利度胺联用等)更好。
将上述化合物及其衍生物、药学上可接受的盐用于肿瘤的治疗和缓解时，普遍表现出理想的应用效果。
应用时，将有效量的上述化合物及其药学上可接受的盐或立体异构体施予患者，以治疗、缓解或预防上述疾病，具体的形式可采用已知的多种手段，本发明对此不作特别限定。
此处“治疗”或者“缓解”指的是施用本文公开的至少一种化合物和/或其至少一种衍生物和/或至少一种药学可接受的盐给确认需要其的受试者，例如，所述受试者患有肿瘤。
此处“有效量”指的是本文公开的至少一种化合物和/或其至少一种衍生物，和/或至少一种药学可接受的盐的以下量，所述量可在受试者中有效“治疗”(如上所定义)疾病或机能紊乱。
本发明有益效果至少包括：
(1)本发明所提供的化合物对蛋白酶体调节激酶dyrk2展现出很好的抑制活性，进而通过抑制蛋白酶体达成抗肿瘤活性。
(2)本发明的合成方法采用化学全合成路线，这种汇聚式的合成路线可应用于类似结构化合物及相关衍生物的化学合成，为新型抗肿瘤药物开辟了广阔的发展空间。
附图说明
图1为细胞水平检测化合物对蛋白酶体的抑制活性；
图2为细胞水平检测化合物与临床一线抗肿瘤药物的联用疗效。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明公开的化合物或其药学上可接受的盐，可由市售的起始原料与本发明公开的内容一起合成。下面的方案描述了一些本发明公开的化合物的制备方法。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例1化合物i-1、i-2、i-3、i-4的合成
按照以下步骤合成i-1：
(1)化合物3的合成：
向商业可得的原料1(9.26g，40mmol)、2(6.90g，56mmol)中加入cu(0..73g，11mmol)、cu2o(0.82g，5.7mmol)、碳酸钾(7.74g，56mmol)、dmf100ml，于80℃搅拌反应过夜。将反应液冷却至室温，向其中加入2m稀盐酸至体系变为酸性，有大量固体析出。将析出的固体抽滤，水洗，干燥，即得化合物3(4.02g，37％)，无需纯化直接参加后续反应。
(2)化合物4的合成：
将化合物3(2.58g，9.45mmol)置于封管中，于氩气保护下加入三氯氧磷30ml，于130℃反应8h。反应完毕后将反应液稍微冷却，倒入冰上并充分搅拌，有大量黄色固体析出。将析出的固体抽滤，水洗，干燥，即得化合物4(1.65g，quant.)，无需纯化直接参加后续反应。
(3)化合物i-1的合成：
于氩气保护下，向化合物4(50mg，0.183mmol)与67％硫氢化钠水合物(22.9mg，0.274mmol)中加入dmf5ml，于50℃下反应2h。随后向其中加入n-boc-3-氨基丙基溴(60.9mg，0.274mmol)与碳酸钾(50.5mg，0.365mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝90/10)得到化合物i-1(47.4mg，61％)。
化合物i-1的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(d,j＝9.3hz,2h),7.94(s,2h),7.42(d,j＝9.3hz,2h),4.04(s,6h),3.20(d,j＝5.9hz,2h),2.95(t,j＝7.2hz,2h),1.70–1.61(m,2h),1.39(s,9h)
本实施例还合成化合物i-2，具体步骤和反应条件与上述i-1的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-2的合成用的溴化物是n-(3-溴丙基)乙酰胺，以下为化合物i-2的表征信息：
化合物i-2的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(d,j＝9.4hz,2h),7.94(d,j＝2.7hz,2h),7.42(dd,j＝9.4,2.8hz,2h),4.04(s,6h),3.30(dd,j＝13.2,6.7hz,2h),2.96(t,j＝7.3hz,2h),1.88(s,3h),1.69–1.59(m,2h).
本实施例还合成化合物i-3，具体步骤和反应条件与上述i-1的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-3的合成用的溴化物是n-(4-溴丁基)乙酰胺，以下为化合物i-3的表征信息：
化合物i-3的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(d,j＝9.3hz,2h),7.95(d,j＝2.7hz,2h),7.42(dd,j＝9.3,2.7hz,2h),4.04(s,6h),3.15(dd,j＝13.1,6.7hz,2h),2.94(t,j＝7.1hz,2h),1.86(s,3h),1.59(m,2h),1.49(m,2h).
本实施例还合成化合物i-4，具体步骤和反应条件与上述i-1的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-4的合成用溴化物是4-溴丁腈，以下为化合物i-4的表征信息：
化合物i-4的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(d,j＝9.4hz,2h),7.89(d,j＝2.7hz,2h),7.43(dd,j＝9.4,2.8hz,2h),4.04(s,6h),3.07(t,j＝7.0hz,2h),2.47(t,j＝7.0hz,2h),1.82–1.72(m,2h)。
实施例2化合物i-5、i-6的合成
按照以下步骤合成i-5：
于氩气保护下，向化合物4(50mg，0.183mmol)与67％硫氢化钠水合物(22.9mg，0.274mmol)中加入干燥的dmf5ml，于50℃下反应2h。随后向其中加入4-溴哌啶-1-甲酸叔丁酯(72.4mg，0.274mmol)与碳酸钾(50.5mg，0.365mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。将所得粗产物置入含有5％三氟乙酸的二氯甲烷溶液2ml中，室温反应2h至无原料剩余，减压旋干溶剂。用在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-5(15.1mg，23％)
化合物i-5的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.05(d,j＝9.4hz,2h),8.00(d,j＝2.7hz,2h),7.49(dd,j＝9.4,2.8hz,2h),4.05(s,6h),3.36-3.33(m,1h),2.99(d,j＝6.8hz,2h),2.85(td,j＝12.8,2.9hz,2h),2.13(d,j＝16.5hz,2h),1.70-1.65(m,2h).
本实施例还合成化合物i-6，具体步骤和反应条件与上述i-5的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-6的合成用溴化物是1-boc-4-溴甲基哌啶，以下为化合物i-6的表征信息：
化合物i-6的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.24(d,j＝9.4hz,2h),8.17(d,j＝2.3hz,2h),7.85(dd,j＝9.4,2.4hz,2h),4.14(s,6h),3.75-3.68(m,1h),3.39(d,j＝13.3hz,2h),3.01(t,j＝10.9hz,2h),2.18–2.09(m,2h),2.05–2.01(m,2h),1.37–1.32(m,2h).
实施例3化合物i-7、i-8、i-9、i-10、i-11的合成
按照以下步骤合成i-10：
(1)化合物5、7的合成：
将化合物5(1.65g,6.05mmol)的干燥的二氯甲烷200ml悬浊液中缓慢加入使用三溴化硼30ml，于0℃下反应2h。向反应体系中加入甲醇猝灭反应，减压旋干溶剂。将粗产物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/甲醇＝92/8)，得产物5(0.22g，14％)和已报道化合物7(0.80g,56％)，同时回收0.70g原料。
化合物5的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.08(dd,j＝9.4,4.8hz,2h),7.64(dd,j＝7.6,4.4hz,4h),4.07(s,3h).
(2)化合物6的合成：
于氩气保护下，向化合物2(94.5mg，0.364mmol)、碳酸钾(75.4mg,0.546mmol)氧化银(126.5mg,0.546mmol)加入干燥的干燥dmf10ml.后加入64.5μl苄溴，于40℃下反应2h至无原料剩余。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝90/10)，得到化合物6(126.9mg，quant.)。
化合物6的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.08(dd,j＝9.3,7.6hz,2h),7.60(d,j＝2.6hz,1h),7.54(d,j＝7.1hz,2h),7.51–7.35(m,6h),5.27(s,2h),4.02(s,3h).
(3)化合物6a的合成：
于氩气保护下，向化合物8a(52.2mg，0.364mmol)与70％硫氢化钠水合物(13.15mg，0.164mmol)中加入dmf5ml，于50℃下反应2h。随后向其中加入n-boc-3-氨基丙基溴(53.3mg，0.224mmol)与碳酸钾(30.9mg，0.224mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶闪柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物6a，直接投入下步反应。
(4)化合物i-7的合成:
将化合物6a置入含有5％三氟乙酸的二氯甲烷溶液2ml中，室温反应2h至无原料剩余，减压旋干溶剂。用在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-7(8.6mg，9.6％)
化合物i-7的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.13(dd,j＝12.1,9.4hz,2h),8.01(dd,j＝8.5,2.6hz,2h),7.76(ddd,j＝35.9,9.4,2.6hz,2h),7.60-7.34(m,5h),5.42(s,2h),4.08(s,3h),3.00(t,j＝7.6hz,2h),2.85(t,j＝7.6hz,2h),1.70(quint,j＝7.6hz,2h).
本实施例还合成化合物i-8，具体步骤和反应条件与上述i-7的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-8的合成用的溴化物是4-溴哌啶-1-甲酸叔丁酯，以下为化合物i-8的表征信息：
化合物i-8的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.01(dd,j＝14.3,9.4hz,2h),7.90(d,j＝2.4hz,2h),7.55(m,3h),7.49–7.42(m,3h),7.38(m,1h),5.38(s,2h),4.03(s,3h),3.28(d,j＝13.1hz,2h),3.21–3.12(m,1h),2.83(t,j＝10.8hz,2h),1.88(d,j＝11.5hz,2h),1.72(td,j＝14.4,3.7hz,2h).
本实施例还合成化合物i-9，具体步骤和反应条件与上述i-7的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-9的合成用的溴化物是1-boc-4-溴甲基哌啶，以下为化合物i-9的表征信息：
化合物i-9的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.04–7.91(m,2h),7.83(s,2h),7.53(dd,j＝20.5,8.0hz,3h),7.47–7.32(m,4h),5.34(s,2h),4.00(s,3h),3.21(d,j＝12.5hz,2h),2.71-2.69(m,3h),1.95(d,j＝12.5hz,2h),1.35(dd,j＝30.8,18.6hz,4h).
本实施例还合成化合物i-10，具体步骤和反应条件与上述i-7的合成相同，区别仅在于在中间体5烷基化时替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-10的合成用的溴化物是异丙基溴，以下为化合物i-10的表征信息：
化合物i-10的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.15(dd,j＝9.4,3.6hz,2h),8.06(t,j＝3.0hz,2h),7.71(td,j＝9.3,2.6hz,2h),4.98–4.92(m,1h),4.09(s,3h),3.36(d,j＝12.9hz,2h),3.11(d,j＝6.8hz,2h),2.88(t,j＝11.9hz,2h),2.12(d,j＝14.0hz,2h),1.79–1.69(m,1h),1.54-1.41(m,2h),1.51(s,3h),1.49(s,3h).
本实施例还合成化合物i-11，具体步骤和反应条件与上述i-9的合成相同，区别仅在于初始原料不同，具体为：化合物i-11的合成用原料是化合物7，以下为化合物i-11的表征信息：
化合物i-11的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.09(d,j＝9.4hz,2h),7.85(d,j＝2.5hz,2h),7.73(dd,j＝9.4,2.6hz,2h),7.43(ddd,j＝28.6,28.0,7.3hz,10h),5.37(s,4h),3.22(d,j＝12.8hz,2h),2.73–2.62(m,4h),1.75(d,j＝13.6hz,2h),1.41–1.31(m,1h),1.25(dt,j＝21.6,7.6hz,2h).
实施例4化合物i-12、i-13、i-18、i-19的合成
按照以下步骤合成i-12：
(1)化合物i-12的合成：
将化合物i-6的盐酸盐(4.4mg,0.012mmol)的干燥的二氯甲烷1ml溶液中缓慢加入1.8μl丙烯酰溴、4.5μl三乙胺，室温下反应1.5h。减压旋干溶剂，将粗产物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝70/30)，得产物i-12(2.2mg，44％)。
化合物i-12的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(d,j＝9.3hz,2h),7.91(s,2h),7.42(d,j＝9.3hz,2h),6.53(dd,j＝16.8,10.6hz,1h),6.24(d,j＝16.8hz,1h),5.65(d,j＝10.5hz,1h),4.64(d,j＝12.3hz,1h),4.02(s,6h),3.94(d,j＝12.7hz,1h),2.91(t,j＝12.4hz,1h),2.83(d,j＝6.7hz,2h),2.52(t,j＝12.5hz,1h),1.94(dd,j＝46.4,12.4hz,2h),1.57(d,j＝3.7hz,1h),1.33–1.12(m,3h).
(2)化合物i-13的合成：
将化合物i-6的盐酸盐(86mg,0.213mmol)、4-(溴甲基)苯磺酰氟(107.5mg，0.425mmol)的干燥的乙腈溶液10ml中缓慢加入0.12ml二异丙基胺，80℃下反应5h。减压旋干溶剂，将粗产物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝90/10～50/50)，得产物i-13(22mg，19％)。
化合物i-13的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(d,j＝9.4hz,2h),7.95(d,j＝2.8hz,2h),7.93(d,j＝8.5hz,2h),7.56(d,j＝8.2hz,2h),7.42(dd,j＝9.3,2.8hz,2h),4.02(s,6h),3.53(s,2h),2.84(d,j＝5.6hz,2h),2.78(d,j＝11.3hz,2h),1.94-1.86(m,4h),1.70(brs,1h),1.35-1.31(m,2h).
其中，化合物4-(溴甲基)苯磺酰氟可由如下方法合成：
将商业可得的对甲基苯磺酰氟(250mg，1.43mmol)、n-溴代琥珀酰亚胺(306mg，1.72mmol)、过氧化二苯甲酰(17.4mg，0.072mmol)溶于4ml干燥的乙酸乙酯中，在微波下80℃反应1h。待体系冷却，减压旋干溶剂，将粗产物用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:2)得到4-(溴甲基)苯磺酰氟(136mg，37％)。
化合物4-(溴甲基)苯磺酰氟的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.00(d,j＝8.4hz,2h),7.65(d,j＝8.3hz,2h),4.52(s,2h).
本实施例还合成化合物i-18，具体步骤和反应条件与上述i-12的合成相同，区别仅在于替换了相应的原料，具体为：化合物i-18的合成用的原料是1-9，以下为化合物i-1的表征信息：
化合物i-18的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(dd,j＝12.1,9.4hz,2h),7.93(dd,j＝13.2,2.7hz,2h),7.56–7.49(m,3h),7.46–7.33(m,4h),6.52(dd,j＝16.8,10.6hz,1h),6.24(dd,j＝16.8,1.9hz,1h),5.65(dd,j＝10.6,1.9hz,1h),5.32(s,2h),4.60(d,j＝12.7hz,1h),4.02(s,3h),3.90(d,j＝12.8hz,1h),2.87(t,j＝12.9hz,1h),2.65(dd,j＝6.8,1.8hz,2h),2.49(t,j＝12.1hz,1h),1.85(dd,j＝36.0,12.1hz,2h),1.52-1.46(m,1h),1.23–1.06(m,2h).
本实施例还合成化合物i-19，具体步骤和反应条件与上述i-13的合成相同，区别仅在于替换了相应的原料，具体为：化合物i-19的合成用的原料是1-9，以下为化合物i-19的表征信息：
化合物i-19的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.10(dd,j＝11.1,9.4hz,2h),8.00–7.88(m,4h),7.58–7.47(m,5h),7.45–7.32(m,4h),5.30(s,2h),4.00(s,3h),3.51(s,2h),3.48(s,1h),2.75(d,j＝10.9hz,2h),2.68(d,j＝5.2hz,2h),2.16(s,1h),1.92–1.73(m,5h).
实施例5化合物i-14、i-15的合成
按照以下步骤合成i-14：
(1)化合物i-14的合成:
将已知化合物4-丙烯酰氨基丁酸(50mg，0.318mmol)溶于5ml干燥的dmf中，加入hatu(132mg，0.347mmol)、三乙胺0.12ml，室温反应40min；之后加入i-6的盐酸盐(117.2mg，0.289mmol)，室温反应过夜。加入二氯甲烷稀释，饱和食盐水洗两次，合并有机相后，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-14(22.1mg，15％)化合物i-14的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.09(d,j＝9.3hz,2h),7.91(d,j＝2.2hz,2h),7.41(dd,j＝9.3,2.4hz,2h),6.54(brs,1h),6.22(d,j＝16.8hz,1h),6.06(dd,j＝17.0,10.2hz,1h),5.58(d,j＝10.1hz,1h),4.57(d,j＝13.1hz,1h),4.02(s,6h),3.77(t,j＝13.2hz,1h),3.35(q,j＝5.6hz,2h),2.85(t,j＝12.4hz1h),2.82(d,j＝6.7hz,2h),2.43(t,j＝12.4hz1h),2.37(t,j＝6.6hz,2h),1.89–1.81(m,4h),1.52-1.46(m,1h),1.22–1.07(m,2h).
本实施例还合成化合物i-15，具体步骤和反应条件与上述i-14的合成相同，区别仅在于替换了相应的羧酸，具体为：化合物i-15的合成用的羧酸是5-丙烯酰胺基戊酸，以下为化合物i-15的表征信息：
化合物i-15的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.09(d,j＝9.4hz,2h),7.91(d,j＝2.7hz,2h),7.42(dd,j＝9.4,2.8hz,2h),6.30(brs,1h),6.25(dd,j＝17.0,1.5hz,1h),6.09(dd,j＝17.0,10.2hz,1h),5.60(dd,j＝10.2,1.5hz,1h),4.58(d,j＝13.4hz,1h),4.02(s,6h),3.78(d,j＝13.6hz,1h),3.31(q,j＝6.3hz,2h),2.85(t,j＝12.4hz1h),2.83(d,j＝6.8hz,2h),2.43(td,j＝12.9,2.5hz,1h),2.31(t,j＝7.0hz,2h),1.98-1.86(m,4h),1.60–1.50(m,3h),1.23-1.08(m,2h).
实施例6化合物i-16、i-17的合成
按照以下步骤合成i-16：
(1)化合物10的合成:
将2-溴-5-羟基苯甲醛(1.32g，6.57mmol)溶于13ml0.5m氢氧化钠溶液中，加热至沸腾；向沸腾的溶液中滴加商业可得的化合物9(1.00g，6.57mmol)的0.5m氢氧化钠溶液13ml，回流反应3h。将反应体系冷至室温，用盐酸中和至酸性，析出大量固体。过滤除去固体，加入正戊烷稀释，水洗2次，合并有机相后，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干溶剂。将粗产物用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得化合物10(0.21g，12％)
化合物10的表征信息具体为：1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.31(s,1h),7.54(d,j＝8.8hz,1h),7.43(d,j＝3.2hz,1h),7.04(dd,j＝8.8,3.2hz,1h),4.29(t,j＝6.1hz,2h),2.87(t,j＝6.1hz,2h).
(2)化合物11的合成:
将化合物10(40.0mg，0.147mmol)溶于2ml干燥的二氯甲烷中，加入18.6μl草酰氯和一滴dmf，室温反应2h。减压旋干溶剂，将粗产物直接加入1-6的盐酸盐(58mg，0.144mmol)中，加入2ml干燥的二氯甲烷、44μl三乙胺，室温反应3h。加入二氯甲烷稀释，饱和食盐水洗两次，合并有机相后，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干溶剂。用快速硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得化合物11(69mg，77％)直接投入下一步反应。
(3)化合物i-16的合成:
在氩气保护下，将化合物11(31.4mg，0.051mmol)、频哪醇联硼酸酯(25.6mg，0.102mmol)、dppf二氯化钯(3.7mg，0.005mmol)、醋酸钾(14.8mg，0.153mmol)溶于1ml干燥的1,4二氧六环中，于100℃反应2h。减压旋干溶剂，将粗产物置入2m盐酸的甲醇溶液中，于70℃反应过夜。减压旋干溶剂，在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-16(2.8mg，9.4％)化合物i-16的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.85(s,1h),8.63(d,j＝9.4hz,2h),8.16(d,j＝8.4hz,1h),7.97(d,j＝2.6hz,2h),7.72(dd,j＝9.5,2.6hz,2h),7.40(d,j＝2.6hz,1h),7.16(dd,j＝8.3,2.6hz,1h),4.68(d,j＝12.9hz,1h),4.44–4.38(m,2h),4.08(s,6h),3.91(d,j＝15.2hz,1h),3.00-2.95(m,3h),2.84(t,j＝6.6hz,2h),2.51(t,j＝12.9hz,1h),2.03–1.88(m,2h),1.70-1.60(m,1h),1.24-1.18(m,2h).
本实施例还合成化合物i-17，具体步骤和反应条件与上述i-16的合成相同，区别仅在于替换了相应的苯甲醛，具体为：化合物i-17的合成用的是2-溴-4-羟基苯甲醛，以下为化合物i-17的表征信息：
化合物i-17的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.74(d,j＝5.9hz,1h),8.64(d,j＝9.4hz,2h),7.97(d,j＝2.5hz,2h),7.84(d,j＝8.5hz,1h),7.74(d,j＝2.6hz,1h),7.71(dd,j＝9.4,2.6hz,2h),7.11(dd,j＝8.5,2.7hz,1h),4.68(d,j＝13.3hz,1h),4.44(dd,j＝12.2,6.2hz,2h),4.07(s,6h),3.93(d,j＝12.6hz,1h),3.00-2.96(m,3h),2.84(dd,j＝12.4,6.3hz,2h),2.51(t,j＝12.9hz,1h),2.02-1.88(d,j＝13.1hz,1h),1.90(d,j＝12.4hz,1h),1.70-1.60(m,1h),1.28-1.22(m,4h).
实施例7化合物i-20、i-21、i-22、i-23、i-24的合成
按照以下步骤合成i-23：
(1)化合物3’的合成：
向商业可得的原料1’(2.00g，8.66mmol)、2’(1.59g，9.52mmol)中加入cu(0.11g，1.73mmol)、cu2o(0.12g，0.87mmol)、碳酸钾(3.59g，25.97mmol)、dmf15ml，于80℃搅拌反应过夜。将反应液冷却至室温，向其中加入2m稀盐酸至体系变为酸性，有大量固体析出。将析出的固体抽滤，水洗，干燥，即得化合物3(2.00g，73％)，无需纯化直接参加后续反应。
(2)化合物4’的合成：
将化合物3’(1.00g，3.16mmol)置于封管中，于氩气保护下加入三氯氧磷10ml，于130℃反应8h。反应完毕后将反应液稍微冷却，倒入冰上并充分搅拌，有大量黄色固体析出。将析出的固体抽滤，水洗，干燥，即得化合物4(1.00g，95％)，无需纯化直接参加后续反应。
(3)化合物12的合成：
向化合物4’(0.89g，2.67mmol)的干燥的二氯甲烷10ml悬浊液中滴加草酰氯0.40ml，之后补加1滴dmf，体系放出大量气泡；室温反应0.5h至体系成棕黑色溶液。向其中加入干燥的甲醇淬灭2h，加三乙胺调至中性。加入二氯甲烷稀释，饱和食盐水洗两次，合并有机相后，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得化合物12(0.74g,80％)。
化合物12的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.12(d,j＝9.3hz,1h),7.70(s,1h),7.64(s,1h),7.46(s,1h),7.42(d,j＝9.4hz,1h),4.09(s,3h),4.03(s,6h).
(4)化合物13的合成：
向化合物12(0.38g，1.16mmol)与70％硫氢化钠水合物(0.10g，1.21mmol)中加入干燥的dmf10ml，于50℃下反应2h。随后向其中加入1-boc-4-溴甲基哌啶(0.64g，2.31mmol)与碳酸钾(0.40g，2.89mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物13(0.38g，63％)。
化合物13的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13(d,j＝9.4hz,1h),8.08(d,j＝2.0hz,1h),7.89(s,1h),7.68(d,j＝1.9hz,1h),7.41(dd,j＝9.4,1.9hz,1h),4.09(s,3h),4.02(s,6h),2.78(d,j＝6.7hz,2h),2.55(t,j＝12.2hz,2h),1.82(brs,2h),1.45-1.35(m,3h),1.43(s,9h),1.20-1.09(m,2h)
(5)化合物14的合成：
将化合物13(348mg，0.661mmol)溶于10ml干燥的二氯甲烷中，向其中加入1.5m二异丙基氢化铝3.1ml，室温反应2h。加入饱和酒石酸氢钾溶液猝灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝80/20)得到化合物14(180mg，55％)。
化合物14的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(d,j＝9.3hz,1h),7.88(s,1h),7.81(s,1h),7.39(d,j＝9.3hz,1h),7.27(s,1h),5.41(s,1h),5.21(s,2h),4.02(s,3h),4.00(s,3h)2.79(d,j＝6.7hz,2h),2.57(t,j＝11.7hz,2h),1.84(brs,2h),1.47-1.25(m,3h),1.43(s,9h),1.20-1.09(m,2h).
(6)化合物i-20的合成：
将化合物14(24.2mg，0.048mmol)溶于5ml含5％三氟乙酸的二氯甲烷中，室温反应2h，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-20的三氟乙酸盐(11.2mg，45％)化合物i-20的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.09(d,j＝9.4hz,1h),7.76(d,j＝2.2hz,1h),7.71(d,j＝2.2hz,1h),7.54(d,j＝1.1hz,1h),7.50(dd,j＝9.4,2.5hz,1h),5.23(s,2h),4.04(s,3h),4.03(s,3h),3.33–3.30(m,2h),2.95(d,j＝6.7hz,2h),2.83(td,j＝12.8,1.6hz,2h),2.07-1.99(m,2h),1.66–1.55(m,1h),1.51–1.40(m,2h).
本实施例还合成化合物i-21，具体步骤和反应条件与上述i-20的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-21的合成用的是n-boc-3-氨基丙基溴，以下为化合物i-21的表征信息：
化合物i-21的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.13(d,j＝9.4hz,1h),7.94(d,j＝26.6hz,2h),7.58–7.54(m,1h),7.50(dd,j＝9.4,2.7hz,1h),5.31(s,2h),4.05(s,3h),4.05(s,3h),3.09(t,j＝7.4hz,2h),2.95–2.88(t,j＝7.4hz,2h),1.79–1.70(m,2h).
本实施例还合成化合物i-22，具体步骤和反应条件与上述i-20的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-22的合成用的是n-boc-3(s)-溴甲基吡咯烷，以下为化合物i-22的表征信息：
化合物i-22的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.11(d,j＝9.4hz,1h),7.81(s,1h),7.75(s,1h),7.57(s,1h),7.51(d,j＝9.4hz,1h),5.27(s,2h),4.07(s,3h),4.07(s,3h),3.36–3.27(m,2h),3.19–3.05(m,3h),2.96(dd,j＝11.4,8.3hz,1h),2.25(hept,j＝7.6hz,1h),2.17–2.05(m,1h),1.80–1.70(m,1h).
本实施例还合成化合物i-23，具体步骤和反应条件与上述i-20的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-23的合成用的是n-boc-3(r)-溴甲基吡咯烷，以下为化合物i-23的表征信息：
化合物i-23的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.14(d,j＝9.3hz,1h),7.96(s,1h),7.89(s,1h),7.58(s,1h),7.53–7.48(m,1h),5.32(s,2h),4.06(s,6h),3.35–3.26(m,2h),3.20–3.08(m,3h),2.97–2.92(m,1h),2.26(hept,j＝7.6hz,1h),2.17–2.07(m,1h),1.80–1.71(m,1h).
本实施例还合成化合物i-24，具体步骤和反应条件与上述i-20的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-24的合成用的是1-boc-3-(溴甲基)氮杂环丁烷，以下为化合物i-24的表征信息：
化合物i-24的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.07(d,j＝9.4hz,1h),7.80(d,j＝2.2hz,1h),7.73(d,j＝2.1hz,1h),7.53(s,1h),7.46(dd,j＝9.3,2.2hz,1h),5.28(s,2h),4.04(s,3h),4.03(s,3h),3.82(t,j＝9.7hz,2h),3.69–3.62(m,2h),3.26(d,j＝7.9hz,2h),2.71–2.58(m,1h).
实施例8化合物i-25的合成
按照以下步骤合成i-28：
将化合物13(42mg，0.080mmol)溶于2ml四氢呋喃中，向其中加入1m氢氧化锂的水溶液0.4ml，于40℃下反应20h。冷却至室温，向体系中加入10％三氟乙酸的二氯甲烷溶液5ml，室温反应6h。减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-25的三氟乙酸盐(21.6mg，51％)。
化合物i-25的表征信息具体为：
1hnmr(600mhz,meod)δ8.39(d,j＝2.8hz,1h),8.23(d,j＝2.7hz,1h),8.12(d,j＝9.3hz,1h),7.97(d,j＝2.5hz,1h),7.62(dd,j＝9.3,2.6hz,1h),4.09(s,3h),4.07(s,3h),3.36-3.33(m,2h),3.02(d,j＝6.8hz,2h),2.89–2.82(m,2h),2.11(d,j＝14.0hz,2h),1.70–1.64(m,1h),1.50–1.41(m,2h).
实施例9化合物i-26的合成
按照以下步骤合成i-29：
(1)化合物15的合成：
将20.4μl草酰氯溶解于1ml干燥的四氢呋喃中，冷却至-78℃，向体系中缓慢加入25.6μl二甲亚砜，于-78℃下反应30min，随后将化合物14(60mg，0.12mmol)的1ml四氢呋喃溶液加入体系中，继续于-78℃下反应1h，之后加入三乙胺0.10ml，缓慢回至室温反应2h。减压旋干溶剂，用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物15(56mg，94％)。
化合物15的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.54(s,1h),8.19(d,j＝2.9hz,1h),8.09(d,j＝9.3hz,1h),7.98(d,j＝2.9hz,1h),7.86(d,j＝2.6hz,1h),7.44(dd,j＝9.4,2.7hz,1h),4.10-3.98(m,2h),4.04(s,3h),4.03(s,3h),2.80(d,j＝6.8hz,2h),2.58(t,j＝12.2hz,2h),1.83(m,2h),1.52–1.44(m,1h),1.43(s,9h),1.23-1.08(m,2h).
(2)化合物16的合成：
氩气保护下，向化合物15(55mg，0.11mmol)、乙酸铵(85mg，1.11mmol)、氰基硼氢化钠(6.9mg，0.11mmol)活化后的4a分子筛60mg中加入干燥甲醇3ml，于-5℃反应过夜。过滤除去固体，加入二氯甲烷稀释，饱和食盐水洗两次，合并有机相后，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/甲醇＝95/5)得化合物16(25mg,46％)。
化合物16的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.54(d,j＝2.6hz,1h),7.52(d,j＝2.5hz,1h),7.30(d,j＝9.3hz,1h),7.08(d,j＝2.3hz,1h),6.90(dd,j＝9.3,2.6hz,1h),4.86(s,2h),4.06–3.95(m,2h),4.04(s,3h),3.96(s,3h),2.62(d,j＝6.7hz,2h),2.52(t,j＝12.0hz,2h),1.85-1.70(m,2h),1.41(s,9h),1.35-1.30(m,1h),1.18-1.04(m,2h).
(3)化合物i-26的合成：
将化合物16(13.5mg，0.027mmol)溶于2ml含5％三氟乙酸的二氯甲烷中，室温反应2h，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-26的三氟乙酸盐(6.3mg，45％)。
化合物i-26的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ7.55(dd,j＝18.2,2.6hz,2h),7.47(d,j＝9.3hz,1h),7.17(d,j＝2.5hz,1h),6.95(dd,j＝9.3,2.7hz,1h),4.14–4.07(m,3h),4.02(s,3h),2.86–2.72(m,4h),2.07–1.98(m,3h),1.57–1.31(m,4h).
实施例10化合物i-27的合成
按照以下步骤合成i-27：
(1)化合物17的合成：
将化合物12(40mg，0.12mmol)溶于5ml干燥的二氯甲烷，冷却至-70℃，1m二异丙基氢化铝0.28ml，于-70℃下反应过夜。加入饱和酒石酸氢钾溶液猝灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝90/10)得到化合物17(31mg，84％)。
化合物17的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.00(d,j＝9.3hz,1h),7.44–7.34(m,3h),7.27(s,1h),5.28(brs,1h),5.19(s,2h),4.02(s,3h),4.00(s,3h).
(2)化合物18的合成：
向化合物17(30mg，0.10mmol)、戴斯-马丁氧化剂(60mg，0.14mmol)溶于3ml干燥的二氯甲烷，室温下反应2h。加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。于氩气保护下，讲粗产物在塑料容器中溶于2ml干燥的二氯甲烷，加入0.1ml二乙胺基三氟化硫，室温反应过夜。加入碳酸氢钠溶于淬灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到化合物18(7.4mg，23％)。
化合物18的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.08(d,j＝9.3hz,1h),7.91(t,j＝55.4hz,1h),7.76–7.73(m,1h),7.59(d,j＝2.6hz,1h),7.48–7.41(m,2h),4.05(s,3h),4.03(s,3h).
(3)化合物19的合成：
向化合物18(7.4mg，0.023mmol)与70％硫氢化钠水合物(1.9mg，0.034mmol)中加入干燥的dmf2ml，于60℃下反应过夜。随后向其中加入1-boc-4-溴甲基哌啶(12.7mg，0.0461mmol)与碳酸钾(15.8mg，0.114mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到化合物19(5.3mg，45％)。
化合物19的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(d,j＝9.4hz,1h),8.06(d,j＝2.7hz,1h),7.95(t,j＝55.2hz,1h),7.91(d,j＝2.7hz,1h),7.77–7.74(m,1h),7.43(dd,j＝9.4,2.8hz,1h),4.07-4.00(m,2h),4.05(s,3h),4.03(s,3h),2.81(d,j＝6.8hz,2h),2.58(t,j＝12.4hz,2h),1.82(d,j＝11.7hz,2h),1.44(s,9h),1.42–1.41(m,1h),1.20-1.14(m,2h).
(4)化合物i-27的合成：
将化合物19(5.3mg，0.010mmol)溶于2ml含5％三氟乙酸的二氯甲烷中，室温反应2h，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-27的三氟乙酸盐(3.8mg，70％)。
化合物i-27的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.08(d,j＝6.3hz,1h),7.93(d,j＝2.8hz,1h),7.89(t,j＝59.6hz,1h)7.89(d,j＝4.1hz,1h),7.68(dd,j＝2.8,1.4hz,1h),7.47(dd,j＝9.4,2.8hz,1h),4.09-4.05(m,2h),4.06(s,3h),4.04(s,3h),2.96(d,j＝6.7hz,2h),2.90–2.78(m,2h),2.11(d,j＝14.4hz,2h),1.68–58(m,1h)，1.52–1.43(m,2h).
实施例11化合物i-28的合成
按照以下步骤合成i-28：
(1)化合物13’的合成：
向化合物12(0.10g，0.30mmol)与70％硫氢化钠水合物(0.02g，0.45mmol)中加入干燥的dmf5ml，于50℃下反应1h。随后向其中加n-boc-3(fs)-溴甲基吡咯烷70μl与碳酸钾(0.12g，0.90mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物13’(0.12g，77％)。
化合物13’的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.13(d,j＝9.4hz,1h),8.08(s,1h),7.88(s,1h),7.68(s,1h),7.42(d,j＝8.8hz,1h),4.10(s,3h),4.04(s,6h),3.63-3.29(m,2h),3.27–2.80(m,4h),2.06(brs,1h),1.91(brs,1h),1.61(brs,1h),1.43(s,9h)。
(2)化合物14’的合成：
将化合物13’(118mg，0.23mmol)溶于5ml干燥的二氯甲烷中，向其中加入1m二异丙基氢化铝0.53ml，室温反应过夜。加入饱和酒石酸氢钾溶液猝灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝80/20)得到化合物14’(76mg，68％)。
化合物14’的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.06(d,j＝9.3hz,1h),7.92(d,j＝2.6hz,1h),7.85(d,j＝2.3hz,1h),7.43(dd,j＝9.3,2.5hz,1h),7.29(s,1h),5.37(s,1h),5.22(s,2h),4.05(s,3h),4.03(s,3h),3.63-3.34(m,2h),3.27–2.84(m,4h),2.15-2.06(m,1h),2.01–1.92(m,1h),1.69-1.61(m,1h),1.43(s,9h).
(3)化合物20的合成：
向化合物14’(13mg，0.027mmol)、三苯基膦(10.6mg，0.040mmol)、n-溴代琥珀酰亚胺(7.2mg，0.040mmol)加入1ml干燥的四氢呋喃，室温反应30min，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(纯二氯甲烷)得到化合物20(9.6mg，65％)。
化合物20的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.16(d,j＝9.3hz,1h),7.94(s,1h),7.91(s,1h),7.59(s,1h),7.43(d,j＝9.2hz,1h),5.31(d,j＝8.9hz,2h),4.05(s,3h),4.03(s,3h),3.64–3.33(m,2h),3.30–2.84(m,4h),2.12(brs,1h),2.01–1.92(m,1h),1.67-1.60(m,1h),1.43(s,9h).
(4)化合物i-28的合成：
氩气保护下，向化合物20(5.5mg，10.0μmol)、n,n'-二-boc-胍(3.1mg，12.1μmol)、碳酸钾(1.7mg，12.1μmol)中加入1ml干燥的dmf，于50℃下反应2.5h。减压旋干溶剂，将粗产物溶于4ml含5％三氟乙酸的二氯甲烷中，室温反应2h，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-28的三氟乙酸盐(2.0mg，27％)。
化合物i-28的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.11(d,j＝9.4hz,1h),7.96(d,j＝2.7hz,1h),7.94(d,j＝2.7hz,1h),7.52–7.48(m,2h),5.04(s,2h),4.07(s,3h),4.06(s,3h),3.39–3.32(m,2h),3.19–2.98(m,4h),2.28(hept,j＝7.6hz,1h),2.20–2.09(m,1h),1.83–1.73(m,1h).
实施例12化合物i-29、i-30的合成
按照以下步骤合成i-29：
(1)化合物21的合成：
氩气保护下，将化合物12(0.20g，0.60mmol)溶于10ml干燥的四氢呋喃中，冷却至-78℃。随后向其中滴加3m甲基格式试剂1ml，于-78℃将反应2h。加入氯化铵淬灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物21(0.16g，81％)。
化合物21的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(s,1h),8.03(d,j＝9.3hz,1h),7.48(d,j＝2.6hz,1h),7.45–7.40(m,2h),7.37(d,j＝2.7hz,1h),4.03(s,3h),4.02(s,3h),1.81(s,6h).
(2)化合物i-29的合成：
氩气保护下，向化合物21(0.022g，0.066mmol)与67％硫氢化钠水合物(8.3mg，0.099mmol)溶于5ml干燥dmf中，于50℃下反应2h。随后向其中加入1-boc-4-溴甲基哌啶(27.7mg，0.099mmol)与碳酸钾(18.3mg，0.133mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。将粗产物溶于4ml含5％三氟乙酸的二氯甲烷中，室温反应2h，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物i-29的三氟乙酸盐(18.4mg，51％)。
化合物i-29的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.08(m,1h),7.95–7.88(m,2h),7.61–7.55(m,2h),4.06(s,3h),4.05(s,3h),3.36(d,j＝12.8hz,2h),3.03(d,j＝6.6hz,2h),2.87(t,j＝11.9hz,2h),2.10(d,j＝13.9hz,2h),1.83(s,6h),1.73-1.63(m,1h),1.55–1.42(m,2h).
本实施例还合成化合物i-30，具体步骤和反应条件与上述i-29的合成相同，区别仅在于替换了相应的溴化物，具体为：化合物i-30的合成用的是n-boc-3(s)-溴甲基吡咯烷，以下为化合物i-30的表征信息：
化合物i-30的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ8.06(d,j＝9.4hz,1h),7.90(dd,j＝4.0,2.8hz,2h),7.57–7.53(m,2h),4.07(s,3h),4.06(s,3h),3.40–3.27(m,2h),3.22–3.09(m,3h),3.01-2.94(m,1h),2.35–2.25(m,1h),2.20–2.09(m,1h),1.80–1.70(m,1h).
实施例13化合物ii-1的合成
按照以下步骤合成ii-1：
(1)化合物24的合成：
氩气保护下，在-78℃下将已知化合物22(1.04g，5.02mmol)的4ml四氢呋喃溶液滴加至50ml叔丁醇钾(0.79g，7.02mmol)的thf溶液中，随后向体系内缓慢滴加商业可得的化合物23(0.83g，5.02mmol)的4ml四氢呋喃溶液。滴加完毕后，于-78℃下反应0.5h，随后缓慢回温反应过夜。加入氯化铵淬灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(纯二氯甲烷)得到化合物24(0.29g，18％)。
化合物24的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.39(s,1h),7.17–7.11(m,2h),6.91–6.83(m,2h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),3.77(s,3h),2.57(s,3h).
(2)化合物25的合成：
于封管内，向化合物24(198mg，0.61mmol)加入5ml三氯氧磷，于130℃下反应过夜。反应完毕后将反应液稍微冷却，倒入冰上并充分搅拌使三氯氧磷完全水解。加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，饱和食盐水洗2次，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(纯二氯甲烷)得到化合物25(74mg，41％)。
化合物25的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(d,j＝9.2hz,1h),7.55(d,j＝2.8hz,1h),7.40(dd,j＝9.2,2.8hz,1h),4.01(s,3h),2.88(s,3h).
(3)化合物26的合成：
氩气保护下，向化合物25(0.020g，0.067mmol)与70％硫氢化钠水合物(10.8mg，0.135mmol)溶于5ml干燥dmf中，于50℃下反应2h。随后向其中加入1-boc-4-溴甲基哌啶(37.5mg，0.135mmol)与碳酸钾(27.9mg，0.202mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物26(14.9mg，45％)。
化合物26的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.94(d,j＝9.2hz,1h),7.85(d,j＝2.8hz,1h),7.38(dd,j＝9.2,2.8hz,1h),4.12–4.01(m,2h),4.00(s,3h),3.47(d,j＝6.9hz,2h),2.84(s,3h),2.61(t,j＝12.7hz,2h),1.86(d,j＝13.1hz,2h),1.65–1.57(m,1h),1.44(s,9h),1.23–1.14(m,2h).
(4)化合物ii-1的合成：
化合物26(14.9mg，0.030mmol)溶于4ml含5％三氟乙酸的二氯甲烷中，室温反应2h，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物ii-1的三氟乙酸盐(14.7mg，96％)。
化合物ii-1的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ7.85(d,j＝9.2hz,1h),7.81(d,j＝2.7hz,1h),7.40(dd,j＝9.2,2.8hz,1h),3.97(s,3h),3.62(d,j＝6.9hz,2h),3.37–3.32(m,2h),2.87(s,3h),2.91–2.80(m,2h),2.12(d,j＝13.8hz,2h),1.82-1.70(m,1h),1.54–1.42(m,2h).
实施例14化合物ii-2的合成
按照以下步骤合成ii-2：
(1)化合物24’的合成：
氩气保护下，在-60℃下将已知化合物22(150mg，0.73mmol)的1ml四氢呋喃溶液滴加至8ml叔丁醇钾(112mg，0.92mmol)的thf溶液中，随后向体系内缓慢滴加已知化合物23’(150mg，0.66mmol)的1ml四氢呋喃溶液。滴加完毕后，于-60℃下反应1.5h，随后缓慢回温反应过夜。加入氯化铵淬灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(纯二氯甲烷)得到化合物24’(69.2mg，28％)。
化合物24’的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.61(s,1h),7.58–7.50(m,2h),7.11(dd,j＝9.0,3.2hz,1h),4.49(q,j＝7.1hz,2h),3.97(s,3h),3.83(s,3h),2.64(s,3h),1.42(t,j＝7.1hz,3h).
(2)化合物25’的合成：
于封管内，向化合物24’(50mg，0.14mmol)加入1ml三氯氧磷，于130℃下反应过夜。反应完毕后将反应液稍微冷却，倒入冰上并充分搅拌使三氯氧磷完全水解。加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，饱和食盐水洗2次，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶闪柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物25’(15mg，32％)。
化合物25’的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.69(s,2h),4.05(s,3h),4.02(s,3h),2.88(s,3h).
(3)化合物26’的合成：
氩气保护下，向化合物25’(15mg，0.042mmol)与70％硫氢化钠水合物(6.7mg，0.084mmol)溶于2ml干燥dmf中，于50℃下反应2h。随后向其中加入1-boc-4-溴甲基哌啶(29.3mg，0.105mmol)与碳酸钾(17.4mg，0.126mmol)，室温反应过夜。将反应液减压旋干，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷/乙酸乙酯＝95/5)得到化合物26’(16.2mg，70％)。
化合物26’的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(d,j＝2.9hz,1h),7.65(d,j＝2.8hz,1h),4.04(s,3h),4.04-4.01(m,2h),4.00(s,3h),3.44(d,j＝6.9hz,2h),2.84(s,3h),2.58(t,j＝12.6hz,2h),1.82(d,j＝12.9hz,2h),1.61–1.52(m,1h),1.44(s,9h),1.23-1.13(m,2h).
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.02(d,j＝2.9hz,1h),7.65(d,j＝2.9hz,1h),4.05(s,3h),4.14-3.96(m,2h),4.04(s,3h),4.00(s,3h),3.45(d,j＝6.9hz,2h),2.84(s,3h),2.58(t,j＝12.4hz,2h),1.82(d,j＝12.3hz,2h),1.57–1.50(m,1h),1.44(s,9h),1.24–1.11(m,2h).
(4)化合物ii-2的合成：
将化合物26’(16mg，0.029mmol)溶于1ml干燥的二氯甲烷，冷却至-60℃，向加入1m二异丙基氢化铝87μl，之后缓慢回至室温反应4h。加入饱和酒石酸氢钾溶液猝灭反应，加入二氯甲烷稀释，水/二氯甲烷分液，将有机相分离，用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂。将粗产物溶于4ml含5％三氟乙酸的二氯甲烷中，室温反应2h，减压旋干溶剂。在waters自动纯化lc/ms系统(acquityuplcbehc1817μm2.1x50mm色谱柱)上通过hplc/ms纯化，得到化合物ii-2的三氟乙酸盐(5.3mg，34％)。
化合物ii-2的表征信息具体为：
1hnmr(400mhz,meod)δ7.78(d,j＝2.8hz,1h),7.53(d,j＝2.7hz,1h),5.20(s,2h),3.98(s,3h),3.57(d,j＝6.9hz,2h),3.34(s,2h),2.88(s,3h),2.86–2.80(m,2h),2.15–2.08(m,2h),1.78–1.69(m,1h),1.55–1.41(m,2h).
实验例i：细胞水平检测化合物的抗肿瘤活性
1640完全培养基：取500ml1640液体培养基(gibco公司)、55ml胎牛血清(gibco公司)、5ml青链霉素，充分混合，经0.22μm孔径无菌滤膜过滤灭菌。
dmem完全培养基：取500mldmem液体培养基(gibco公司)、55ml胎牛血清(gibco公司)、5ml青链霉素，充分混合，经0.22μm孔径无菌滤膜过滤灭菌。
一、肿瘤细胞培养
1、将复苏的多发性骨髓瘤细胞和白血病细胞接种至10ml1640完全培养基，乳腺癌细胞接种至10mldmem完全培养基在含5％co2的37℃培养箱中培养。
2、细胞密度达80％-90％时进行细胞传代。
二、抗肿瘤活性测试
1、将培养的肿瘤细胞接种至96孔板上，密度为1000细胞/孔，每孔90μldmem/1640完全培养基，贴壁细胞培养12h以待细胞贴壁生长；
2、以无菌dmso为溶剂将化合物配制为50mm的母液，然后用dmem/1640完全培养基依次稀释得到浓度为10mm、100μm、10μm、1μm、…、10-2μm的稀释液。分别采用以下化合物：化合物i-1,i-2,…,i-30,ii-1,ii-2。
3、将不同浓度化合物按十分之一的比例加入96孔板，然后混匀放入培养箱中培养48h；
4、最后，用
ic50值，即一定浓度的某种化合物诱导肿瘤细胞凋亡50％，该浓度称为50％抑制浓度。
试验结果表明该类化合物其潜在的类似物对血液肿瘤细胞和实体肿瘤细胞有较强的抑制活性。
表1：化合物对人多发性骨髓瘤细胞系和人乳腺癌细胞系的活性检测结果(ic50值,μm)
表2：化合物对不同肿瘤细胞系的活性检测结果(ic50值,μm)
实验例ii：化合物的抗肿瘤机理
dyrk(dual-specificitytyrosine-phosphorylation-regulatedkinase)家族是属于cmgc家族的丝/苏氨酸蛋白激酶，共包括5个家族成员：dyrk1a,1b,2,3,4。dyrk家族与细胞生长、增殖和分化密切相关。其中，dyrk2是磷酸化26s蛋白酶体rpt3亚基的25位苏氨酸(rpt3-thr25)而促进s/g2期细胞进程的主要激酶，并且这一磷酸化过程的缺失将会显著抑制肿瘤的发生发展。因此dyrk2是重要的新型抗肿瘤靶点。
1.分子水平检测化合物对dyrk2激酶的抑制活性及对相似激酶的选择性
通过同位素定量试验在分子水平模拟dyrk2催化磷酸化底物的过程来检测化合物对dyrk2的抑制活性及对相似激酶的选择性。
实验组测试化合物2.5μl(0.00001—100μm最终浓度)与22.5μl的50mmtris-hcl，ph值7.5,5mmmgcl2,10μmatp(dyrk2-10μmatp,dyrk3-5μmatp,dyrk1a-25μmatp,dyrkib-50μmatp，haspin-150μmatp),微量的放射性标记32p-atp(50nm,perkinelmer)，10nmdyrk2(dyrk3,dyrk1a，dyrk1b及haspin均为10nm),dyrk2，dyrk3,dyrk1a和dyrk1b与150μmbiotin-woodtide肽底物(biotin-kkisgrlspimteq-nh2)在37℃反应10分钟后加入30mmedta终止反应，haspin与200μmh3(1-21)肽底物(biotin-artkqtarkstggkaprkqla-nh2)在37℃反应10分钟后加入30mmedta终止反应。随后吸出15μl反应混合液加至p81磷酸纤维素滤纸(whatman)上。将p81磷酸纤维素滤纸放入0.75％磷酸溶液中清洗三次共10分钟除去未反应的32p-atp，然后将p81磷酸纤维素滤纸放入95％乙醇溶液中清洗以便风干。将干燥后的p81磷酸纤维素滤纸放入专用管中并使用microbeta液体闪烁仪(perkinelmer)定量测定32p的含量，阳性对照组加入2.5μlbuffer代替化合物，阴性对照组不加肽底物。用graphpadprism7软件处理数据，拟合出抑制曲线并得到ic50值。结果见表3和表4。
ic50值，即一定浓度的某种化合物抑制激酶50％的活性，该浓度称为50％抑制浓度。
试验结果表明化合物i-6，i-20,i-22和i-29及其潜在的类似物对dyrk2激酶有很强的抑制活性，并在相似激酶中有较好的选择性，进而影响蛋白酶体活性、细胞周期等众多生物学过程，从而发挥抗肿瘤作用。
表3：不同化合物对dyrk2和dyrk1a的抑制活性
表4:高活性化合物在相似激酶中的选择性检测结果(ic50值,nm)
2.细胞水平检测化合物对蛋白酶体的抑制活性
细胞水平构建读取蛋白酶体活性高低的试验体系，运用蛋白酶体水解胰凝乳蛋白酶样蛋白酶的活性，通过llvy-r110底物作为蛋白酶体活性的荧光指示剂(蛋白酶体对llvy-r110的切割产生强绿色荧光r110)来检测化合物对蛋白酶体的抑制活性。
1、将培养的人多发性骨髓瘤细胞和人乳腺癌细胞接种至384孔板上，密度为100000细胞/孔，每孔20μldmem/1640完全培养基，贴壁细胞培养12h以待细胞贴壁生长；
2、以无菌dmso为溶剂将化合物配制为50mm的母液，然后用dmem/1640完全培养基稀释得到浓度为50μm的稀释液；
3、将化合物按五分之一的比例加入384孔板，然后混匀放入培养箱中孵育1h；
4、最后，用amplite荧光法蛋白酶体20s活性检测试剂盒检测蛋白酶体的活性：每孔中加入25μl蛋白酶体测定加载溶液，培养箱内孵育过夜，使其产生稳定的荧光信号，并记录信号值。结果见图1。
试验结果表明该类化合物其潜在的类似物对肿瘤细胞的蛋白酶体有明显的抑制作用，从而发挥抗肿瘤作用。
实验例iii：细胞水平检测化合物与临床一线抗肿瘤药物的联用疗效
1、将培养的肿瘤细胞接种至96孔板上，密度为1000细胞/孔，每孔90μldmem/1640完全培养基，贴壁细胞培养12h以待细胞贴壁生长；
2、以无菌dmso为溶剂将化合物配制为50mm的母液，然后用dmem/1640完全培养基稀释得到相应浓度的稀释液；
2、以无菌dmso为溶剂将临床一线抗肿瘤药物硼替佐米、卡非佐米、伊沙佐米、地塞米松、沙利度胺和紫杉醇配制为50mm的母液，然后用dmem/1640完全培养基稀释得到相应浓度的稀释液；
3、将不同浓度化合物和临床一线抗肿瘤药物依次根据图2中所列浓度组合按十分之一的比例加入96孔板，然后混匀放入培养箱中培养48h；
4、最后，用
ci值，即联合指数。ci值小于1表明药物联用具有协同作用；ci值等于1表明药物联用具有叠加作用；ci值大于1表明药物联用具有拮抗作用。
试验结果表明该类化合物其潜在的类似物与临床一线抗肿瘤药物联用具有明显的协同效果，且联用效果比目前临床常用的治疗方案(蛋白酶体抑制剂与肾上腺皮质激素地塞米松联用，蛋白酶体抑制剂与免疫调节剂沙利度胺等联用)更好。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
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