1.细菌鉴定方法,其特征在于,具有以下的工序(1)~(3):
工序(1),使用下述第一反应体系进行逆转录反应,得到含有合成的cdna及逆转录用引物的反应混合物,所述第一反应体系含有:所述逆转录用引物,其用于制备包含用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列的cdna;从试样中的细菌中提取的rna;及具有rna依赖型dna聚合酶活性的酶;
工序(2),使用下述第二反应体系实施pcr,所述第二反应体系含有:所述反应混合物;引物对,其用于合成包含所述用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列的双链dna;及具有dna依赖型dna聚合酶活性的酶,其中,第二反应体系中,由所述反应混合物供给的所述逆转录用引物的浓度为0.08nm以上且20nm以下;及
工序(3),从pcr后的所述第二反应体系中,检测包含所述用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列的双链dna的生成。
2.如权利要求1所述的细菌鉴定方法,其特征在于,在不同的反应容器内、或者在相同的反应容器内依次实施所述工序(1)及(2)。
3.如权利要求1或2所述的细菌鉴定方法,其特征在于,所述用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列为细菌的16srdna所包含的碱基序列,所述rna包含所述试样中的细菌的16srrna。
4.如权利要求3所述的细菌鉴定方法,其特征在于,所述逆转录用引物包含序列号1的碱基序列。
5.如权利要求3或4所述的细菌鉴定方法,其特征在于,所述引物对为选自由以下的(a组)~(c组)组成的组中的至少1对引物对,
(a组)
·引物对1a:包含序列号2的碱基序列的正向引物和包含序列号3的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对2a:包含序列号4的碱基序列的正向引物和包含序列号5的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对3a:包含序列号6的碱基序列的正向引物和包含序列号7的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对4a:包含序列号8的碱基序列的正向引物和包含序列号9的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对5a:包含序列号10的碱基序列的正向引物和包含序列号11的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对6a:包含序列号12的碱基序列的正向引物和包含序列号13的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对7a:包含序列号14的碱基序列的正向引物和包含序列号15的碱基序列的反向引物的组合;
(b组)对所述(a组)的各引物对中的一条或两条引物的碱基序列的一部分在不损害作为引物的功能的范围内添加、缺失或取代1个或2个碱基而得到的引物对;及
(c组)包含与所述(a组)或(b组)的各引物对中的一条或两条引物的碱基序列对应的互补序列的引物对。
6.如权利要求1至5中任一项所述的细菌鉴定方法,其特征在于,所述工序(3)中,测定生成的双链dna的tm值,将得到的tm值与预先测得的包含用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列的双链dna的tm值、或者由它们二次得到的数据进行比较,从而鉴定所述试样中的细菌。
7.如权利要求1至6中任一项所述的细菌鉴定方法,其特征在于,在所述工序(1)之后,将所述反应混合物单独地直接用于所述工序(2),或者将所述反应混合物进行稀释而用于所述工序(2)。
8.试剂盒,其用于通过pcr来鉴定试样中的细菌,所述pcr将通过从所述试样中的细菌中提取的rna的逆转录反应得到的反应混合物中含有的cdna作为模板,所述试剂盒的特征在于,具有下述(a)至(c):
(a)用于制备用于所述逆转录反应的第一反应体系的逆转录用引物,所述引物用于制备包含用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列的cdna;
(b)用于制备用于所述pcr的第二反应体系的引物对,所述引物对用于合成包含所述用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列的双链dna;及
(c)具有rna依赖型dna聚合酶活性的酶,
所述第二反应体系含有通过所述逆转录反应得到的反应混合物,所述逆转录用引物的量以介由所述反应混合物被供给至所述第二反应体系时的逆转录用引物的浓度成为0.08nm以上且20nm以下的方式进行了调节。
9.如权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,还具有记载有所述逆转录反应和所述pcr的步骤的操作说明书。
10.如权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述操作说明书中记载了步骤以使得所述第二反应体系中含有的所述逆转录用引物的浓度成为0.08nm以上且20nm以下。
11.如权利要求8至10中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述用于对鉴定对象细菌进行鉴定的碱基序列为细菌的16srdna所包含的碱基序列,所述rna包含所述试样中的细菌的16srrna。
12.如权利要求11所述的试剂盒,其特征在于,所述逆转录用引物包含序列号1的碱基序列。
13.如权利要求11或12所述的试剂盒,其特征在于,所述引物对为选自由以下的(a组)~(c组)组成的组中的至少1对引物对,
(a组)
·引物对1a:包含序列号2的碱基序列的正向引物和包含序列号3的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对2a:包含序列号4的碱基序列的正向引物和包含序列号5的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对3a:包含序列号6的碱基序列的正向引物和包含序列号7的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对4a:包含序列号8的碱基序列的正向引物和包含序列号9的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对5a:包含序列号10的碱基序列的正向引物和包含序列号11的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对6a:包含序列号12的碱基序列的正向引物和包含序列号13的碱基序列的反向引物的组合;
·引物对7a:包含序列号14的碱基序列的正向引物和包含序列号15的碱基序列的反向引物的组合;
(b组)对所述(a组)的各引物对中的一条或两条引物的碱基序列的一部分在不损害作为引物的功能的范围内添加、缺失或取代1个或2个碱基而得到的引物对;及
(c组)包含与所述(a组)或(b组)的各引物对中的一条或两条引物的碱基序列对应的互补序列的引物对。