抑制YAP-TEAD结合的化合物和包含其为有效成分的癌的预防或治疗用药物组合物
本发明涉及抑制yes相关蛋白(yesassociatedprotein，yap)-转录增强缔合域(transcriptionalenhancerassociatedomain，tead)结合的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐以及包含其为有效成分的癌的预防或治疗用药物组合物。
背景技术：
迄今为止，开发出的最先进的抗癌药物主要是使用选择性抑制蛋白质功能的物质开发的，其中，这些蛋白质是对癌细胞的发育和生长至关重要的蛋白质。例如，在癌细胞的生长中起着非常重要的作用的许多受体酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，rtk)中，对表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，egfr)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，vgfr)等的抑制剂的开发，得到了非常令人鼓舞的临床结果。尽管如此，在癌细胞的发育和生长中仍有多种信号传导系统的参与，其中，还有许多尚未成功开发出抑制剂的情况。当开发出这种尚未开发出的、能够调节细胞信号传导系统的新型抑制剂时，有望提高对无法用现有的抗癌药进行治疗的患者的治疗效果。
已知“hippo信号传导(hipposignaling)”是癌细胞发育和生长的非常重要的信号传导系统，是一种在细胞中通过调节细胞周期来抑制细胞生长的信号传导途径(例如，p53途径(pathway)、腺瘤性结肠息肉病(adenomatouspolyposiscoli，apc)基因(gene)、ii型神经纤维瘤病(neurofibromatosistype2，nf2)基因(gene)等)，自1995年在果蝇中首次发现以来，其研究仍在进行中(genesdev,vol.9；pp.534-546)。hippo途径(hippopathway)，也称为“swh途径(salvador-warts-hippopathway)”，是可调节细胞增殖和细胞死亡并决定器官的大小的重要的信号传导途径和细胞增殖过程。
hippo途径在十年前被公布为是一种调节果蝇(drosophila)和小鼠(mouse)组织大小的信号传导系统以后，近期开始作为哺乳动物细胞(mammaliancell)中的一种强大的肿瘤抑制因子(tumorsuppressor)而兴起。hippo途径由mst1/2-lats1/2的激酶级联(kinasecascade)组成，并通过磷酸化作为癌基因(oncogene)yap/taz转录共激活因子(transcriptionalcoactivator)来进行抑制。当hippo途径被抑制时，yap/taz被激活并与tead转录调节因子结合，从而在包括细胞周期和生长、干细胞和再生医学的各种癌症的发育、转移、耐药性和复发中发挥重要作用。
即当hippo信号传导被激活时，哺乳动物不育系20样(mammaliansterile20-like，mst)激酶与sav1(萨尔瓦多家族含ww结构域蛋白1(salvadorfamilywwdomaincontainingprotein1))形成复合体，以磷酸化大肿瘤抑制因子(largetumorsuppressor，lats)激酶，而lats激酶和mob1辅因子(cofactor)磷酸化其下游目标，即yap。磷酸化的yap与14-3-3蛋白结合并在细胞质中降解。随着yap降解，与细胞核中tead家族(family)的结合被抑制。即当hippo途径被激活时，yap被抑制，并且与yap结合的基因表达也被抑制，从而限制了细胞和组织的生长。相反，hippo信号传导的失活使yap进入细胞核与转录因子tead形成复合物，并导致基因表达，从而通过分泌如结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor，ctgf)、富含半胱氨酸蛋白61(cystein-rich61，cry61)和成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor，fgf)等的生长因子，来促进细胞生长并抑制细胞凋亡(genesdev,vol.26；pp.1300-1305)。在癌细胞的发育和生长中，被认为正是yap蛋白进入细胞核并与转录因子tead蛋白结合形成转录结合物，从而通过产生过量的各种生长因子来促进癌细胞的增殖和生长，由此可知防止tead蛋白作为转录因子的功能被过度激活是非常重要的(cancerres.2007；67:9055-65)。例如，据报道，在前列腺癌(prostatecancer)中，高tead1过表达与患者预后不良有关(brjcancer2008；99:1849-58)，除此之外，还报道了其与几种人类癌症有关，例如，基底样乳腺癌(basal-likebreastcancer)、输卵管癌(fallopiantubecarcinoma)和生殖细胞肿瘤(germcelltumor)(plosone2012；7:e45498)。
hippo途径被认为是癌症治疗中非常重要的机制，因为其能够参与癌细胞和肿瘤的增殖以及对现有的一线治疗药物的化学疗法(chemotheraphy)的抗性表达。根据最近的研究，已经报道yap-tead的转录在肺癌的发展(lungcancerdevelop)和对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermalgrowthfactorreceptor-tyrosinekinaseinhibitor，egfr-tki)的抗性表达中起非常重要的作用(biochem.biophys.res.commun.vol.491(2017),pp.493-499；oncotargetvol.9(2018),pp.4637-4646)。
另外，有重要的研究报道称，基于yap-tead蛋白的转录目标中，存在一种在一种能调节癌症组织内的免疫环境的重要蛋白质，即程序性死亡配体1(programmeddeath-ligand1，pd-l1)(cancerres.2018mar15；78(6):1457-1470；oncotarget.2017dec9；8(70):114576-114587)。根据这些论文的研究结果报道，yap-tead以及taz-tead转录复合体在pd-l1的过表达中起着核心作用，在癌症患者中，pd-l1是癌症细胞用作免疫逃逸机制的最重要蛋白质之一。除此之外，还有许多关于hippo信号转导的免疫调节的报道。例如，最近已报道其为调节cd8+树突状细胞(dendriticcells)功能的重要信号途径(signalpathway)(nature2018,jun,558(7708))。cd8+树突状细胞(dendriticcells)是已知的树突状细胞中的在抗肿瘤免疫中起重要作用的细胞，并且实验证实，当hippo信号传导失活时，抗肿瘤免疫性显着降低。另外，据报道，当由于人类肺癌细胞中糖酵解作用(glycolysis)的增加而使乳酸(lactate)增加时，taz-tead的转录被激活，导致pd-l1和g蛋白偶联受体81(gprotein-coupledreceptor81，gpr81)的表达显著增加(oncogene2017oct19；36)。这是说明大多数癌症组织中的代谢变化是不可避免的过程且与由此引起的免疫功能的下降有着密切关联的重要研究结果，并且，可以看出基于tead蛋白的转录在这一过程中非常重要。最后，有重要报告称，yap-tead蛋白会增加treg细胞(regulatorytcell)，而上述treg细胞是癌症组织中免疫逃逸机制的关键要素(cancerdiscovry2018,jun15)。
根据这样的各种报道，可以看出tead蛋白是一种在癌组织的免疫逃逸机制中起着非常重要的作用的转录因子。
对于tead蛋白在上述癌细胞的发育、生长和免疫逃逸机制中的重要作用，临床上也已证明了其是非常重要的。在临床上，已经报道yap-tead和taz-tead转录蛋白与癌症的发生和预后相关，对癌症患者的临床标本进行分析的结果表明，hippo途径的主要因子，即yes相关蛋白(yesassociatedprotein，yap)、具有pdz结合序列的转录共激活因子(transcriptionalcoactivatorwithpdz-bindingmotif，taz)、转录增强缔合域(transcriptionalenhancerassociatedomain，tead)过表达，并且它们的表达水平和癌症患者的生存期具有统计学意义(sci.rep.vol.8(2018),271.；oncotargetvol.9(2018),pp.4637-4646)。
因此，需要开发在癌症的发育中起核心作用的hippo途径中可直接抑制yap-tead结合的抑制剂，并且，可预料能由此开发出治疗效果好、毒性低的抗癌药物(trendsinbiochem.sci.2017,42,862-872.；int.j.ofmol.sci.2016,17,138)。
技术实现要素：
发明要解决的问题
因此，本发明人发现特定结构的化合物可直接抑制tead蛋白，并从而完成了本发明，上述tead蛋白是hippo信号转导的最重要的转录因子，且已知hippo信号转导是对于癌细胞的发育和生长非常重要的信号系统。
本发明的一目的在于，提供抑制yap-tead结合的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐。
本发明的另一目的在于，提供癌的预防或治疗用药物组合物，其包含上述抑制yap-tead结合的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
本发明的又一目的在于，提供yap/taz-tead抑制剂组合物，其包含上述化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其盐作为有效成分。
本发明的又一目的在于，提供癌的预防或改善用保健功能性食品组合物，其包含上述化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
用于解决问题的手段
为实现上述目的，提供有效抑制yap-tead结合的以下述化学式1表示的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐。
[化学式1]
(在上述化学式1中，
ra为氢或-l-r3；
r1为氢或-(ch2)n-r；
r为c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、羟基、c1-c10烷基羰氧基、c6-c20芳基羰氧基、氰基、卤素基、硝基、c1-c10烷基硫基(alkylsulfanyl)、c6-c20芳基硫基(arylsulfanyl)、硫基(sulfanyl)、-nra1ra2、c1-c10烷氧基c1-c10烷基、c6-c20芳氧基c1-c10烷基、c1-c10烷氧基c1-c10烷氧基、c1-c10烷氧基c1-c10烷氧基c1-c10烷基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、磺基(sulfo)、c6-c20芳基、c3-c20环烷基、氨甲酰基、c1-c10烷基氨基羰基、c6-c20芳基氨基羰基、氨磺酰基、c1-c10烷基氨基磺酰基、c6-c20芳基氨基磺酰基、c1-c10烷基羰基、c6-c20芳基羰基、c1-c10烷氧基羰基、c6-c20芳氧基羰基、羧基、甲酰基、c2-c20杂芳基或c3-c20杂环烷基，其中，上述r的芳基、杂芳基和杂环烷基进一步被选自由c1-c10烷基、卤素基、硝基、氰基、羟基、c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、c1-c10烷基硫基、卤代c1-c10烷基硫基、c6-c20芳基硫基、二c1-c10烷基氨基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、c3-c20环烷基、羧基、磺基、甲酰基、氨甲酰基、氨磺酰基、氨基、c1-c10烷基羰基、c6-c20芳基羰基、c1-c10烷氧基羰基、c6-c20芳氧基羰基、c1-c10烷基羰氧基、c6-c20芳基羰氧基、c2-c20杂芳基和c3-c20杂环烷基构成的组中的一种以上的取代基取代；
ra1和ra2各自独立地为氢、c1-c10烷基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、磺基、c6-c20芳基、c3-c20环烷基或氨磺酰基；
n为1至10的整数；
r2为氢、c1-c10烷基、c1-c10烷氧基c1-c10烷基、c3-c20环烷基、c3-c20环烷基氧基c1-c10烷基、c6-c20芳基或c6-c20芳氧基c1-c10烷基；
x为ch或n；
z为-ch2-或-co-；
l为-so2-、-so2-l’-、-nhco-、-conh-、c1-c10亚烷基或-co-；
l’为-nh-或
la为c1-c10亚烷基；
n1为1至3的整数；
m1为0或1的整数；
但是，(i)当x为ch时，l为-so2-nh-，
(ii)当l为c1-c10亚烷基时，排除r3为c1-c10烷基、c1-c10烷氧基或c6-c20芳氧基的情况；
r3为c1-c10烷基、c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、c3-c20杂环烷基、c6-c20芳基或c2-c20杂芳基，上述r3的杂环烷基、芳基和杂芳基进一步被选自由c1-c10烷基、卤素基、卤代c1-c10烷基、硝基、氰基、c1-c10烷基羰基氨基、c6-c20芳基羰基氨基、氨基、c1-c10烷氧基、卤代c1-c10烷氧基、c1-c10烷氧基c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、羟基、c1-c10烷基羰基、卤代c1-c10烷基羰基、c6-c20芳基羰基、c1-c10烷氧基羰基、c6-c20芳氧基羰基、羧基、甲酰基、硫基(sulfanyl)、c1-c10烷基硫基、c6-c20芳基硫基、二c1-c10烷基氨基c1-c10烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、磺基、氨甲酰基、c1-c10烷基氨基羰基、c6-c20芳基氨基羰基、氨磺酰基、c1-c10烷基氨基磺酰基、c6-c20芳基氨基磺酰基、c6-c20芳基、c2-c20杂芳基、c1-c10烷基羰氧基、c6-c20芳基羰氧基和c3-c20杂环烷基构成的组中的一种以上的取代基取代；
r4为卤素基、卤代c1-c10烷基、氰基、c1-c10烷基、c6-c20芳基、c2-c20杂芳基、c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、c2-c20杂芳氧基、卤代c1-c10烷氧基、羟基、氨基或氨基c1-c10烷基；
d为0至5的整数，d为2以上的整数时，r4彼此相同或不同；
a和b各自独立地为0、1或2的整数，a+b为1、2或3的整数；
上述杂芳基和杂环烷基包含选自氮、氧和硫的一种以上的杂原子。)
另外，本发明提供一种癌的预防或治疗用药物组合物，其包含上述化学式1的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
另外，提供一种yap/taz-tead抑制剂组合物，其包含上述化学式1的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
另外，提供一种癌的预防或改善用保健功能性食品组合物，其包含上述化学式1的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
发明效果
本发明的化学式1的化合物能够在已知是癌细胞发育和生长的非常重要的信号系统的hippo途径中有效地抑制yap-tead结合，从而能够显著地抑制癌细胞的增殖和生长，且对正常细胞毒性低。因此，本发明的化学式1的化合物可有效地用作治疗或预防癌症的药物组合物的有效成分。
附图说明
图1是示出aom/dss模型中各组中发生的大肠癌的大小和数量的图(各组实验动物数＝3)[起始点(initialpoint)＝药物处理之前的大肠癌的个数]。
图2是示出aom/dss模型中药物处理期间的体重变化。
图3是示出通过aom/dss模型中肠组织的facs分析测量treg细胞(cell)变化程度的结果。
具体实施方式
在下文中，将更详细地描述本发明。如果此时使用的技术术语和科学术语中没有其他定义，则它们具有本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的含义，并且在以下描述中将省略可能不必要地混淆本发明的主旨的已知功能和配置的描述。
在本说明书中使用的以下术语定义如下，但是它们仅是示例性的，并不意图限制本发明、申请或用途。
在本说明书的术语“取代基(substituent)”、“基(radical)”、“基团(group)”、“部分(moiety)”和“片段(fragment)”可以互换使用。
在本说明书的术语“ca-cb”指“碳原子数为a以上且b以下”。
在本说明书的术语“烷基”是指仅由碳和氢原子组成的一价直链或支链的饱和烃基。上述烷基可具有1至10个碳原子，或1至6个碳原子，或1至4个碳原子。上述烷基的例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等，但不限于这些。
在本说明书的术语“环烷基”是由一个以上的环组成的一价饱和或不饱和碳环基，但其不是芳族的。上述环烷基可以是单环，或可以是稠合、螺环或桥连双环体系。上述环烷基可具有3至20个，优选3至10个，更优选3至7个碳原子。具体地，单环环烷基环在环中含有3至10个碳原子，优选3至7个碳原子。双环环烷基环在环中含有7至17个碳原子，优选7至12个碳原子。优选的双环环烷基环包括4-、5-、6-或7-元环与5-、6-或7-元环稠合的环。环烷基的具体例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“芳基”是通过除去一个氢而从芳族烃衍生的有机基团，并且各环中适当地包含4至7个，优选包含5或6个环原子的单个或稠合环，且包括多个芳基通过单键连接的形式。具体例子包括苯基、萘基、联苯、蒽基、茚基、芴基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“杂芳基”是指包括1-4个选自n、o和s的杂原子作为芳族环骨架原子且剩余的芳族环骨架原子是碳的芳基，包括单环或稠环系统，并且也可能部分饱和。另外，本说明书中的杂芳基包括一个以上的杂芳基通过单键连接的形式。上述杂芳基的例子包括吡咯、喹啉、异喹啉、吡啶、嘧啶、恶唑、噻唑、吡唑、噻二唑、三唑、咪唑、苯并咪唑、异恶唑、苯并异恶唑、噻吩、苯并噻吩、呋喃、苯并呋喃、咪唑并噻唑、苯并噻二唑、苯并恶二唑等的芳香族杂环的一价自由基，但不限于这些。
本说明书中的术语“杂环烷基”是含有1至4个选自n、o和s的杂原子的非芳香族杂环的一价基团，上述非芳香族杂环包括饱和或不饱和的单环、多环或螺环形式，可以通过杂原子或碳原子键合，根据情况，非芳香族杂环基中的氮、碳、氧或硫原子可以以各种氧化态被氧化。另外，根据情况，非芳族杂环基中的氮原子可以被季铵化。这种杂环烷基的例子可包括氮丙啶、吡咯烷、吡咯烷酮、氮杂环丁烷、哌啶、四氢吡啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩、2,3-二氢苯并呋喃、苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯、3,4-二氢-2h-色烯、萘-2(1h)-酮、2h-色烯-2-酮、2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英、苯并[d]恶唑-2(3h)-酮、嘧啶-2,4(1h,3h)-二酮、喹唑啉-2,4(1h,3h)-二酮、苯并[cd]吲哚-2(1h)-酮、3-氮杂双环[3.1.0]己烷、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷、2-氮杂螺[4.4]壬烷等的非芳香族杂环的一价自由基。
本说明书中的术语“烷氧基”是-o-烷基，可具有1至10个碳原子，优选1至6个碳原子，更优选1至4个碳原子。其中，“烷基”如上所定义。具体例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“芳氧基”是指-o-芳基，其中“芳基”如上所定义。这种芳氧基的例子包括苯氧基等，但不限于此。
本说明书中的术语“卤代”或“卤素基”是指卤基元素，例如，包括氟代、氯代、溴代和碘代。
本说明书中的术语“卤代烷基”或“卤代烷氧基”是指各自其中一个以上的氢原子被卤素基原子取代的烷基或烷氧基，其中烷基和卤素如上所定义。例如，卤代烷基可举出氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、二氟乙基、全氟乙基等，卤代烷氧基可举出氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氟乙氧基、二氟乙氧基、全氟乙氧基等。
本说明书中的术语“羟基”指-oh，“氨基”指-nh2，“硝基”指-no2，“氰基”指-cn，“羧基”指-cooh，“甲酰基”指-coh，“硫基(或硫基)”指-sh，“磺基”指-so3h，“氨磺酰基”指-so2nh2，“氨甲酰基”指-conh2。
本说明书中的术语“烷基硫基”是指-s-烷基基团，其中“烷基”如上所定义。这种烷基硫基的例子包括甲基硫基、乙基硫基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“芳基硫基”是指-s-芳基基团，其中“芳基”如上所定义。这种芳基硫基的例子包括苯硫基、萘硫基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“烷基磺酰基”是指-so2-烷基基团，其中“烷基”如上所定义。这种烷基磺酰基的例子包括甲基磺酰基、乙基磺酰基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“烷基氨基”是指一个或两个烷基取代的氨基，并且具体例子包括甲基氨基(-nhme)、二甲基氨基(-nme2)、乙基氨基(-nhet)和二乙基氨基(-net2)等，但不限于这些。
本说明书中的术语“芳基氨基”是指一个或两个芳基取代的氨基，并且具体例子包括苯基氨基(-nhph)、二苯基氨基(-nph2)等，但不限于这些。
本说明书中的术语“烷基羰基”是指-c(＝o)烷基基团，其中“烷基”如上所定义。这种烷基羰基的例子包括甲基羰基、乙基羰基、异丙基羰基、丙基羰基、丁基羰基、异丁基羰基、叔丁基羰基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“烷氧基羰基”是指-c(＝o)烷氧基基团，其中“烷氧基”如上所定义。这种烷氧基羰基的例子包括甲氧羰基、乙氧羰基、异丙氧羰基、丙氧羰基、丁氧羰基、异丁氧羰基、叔丁氧羰基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“烷基羰氧基”是指-oc(＝o)烷基基团，其中“烷基”如上所定义。这种烷基羰氧基的例子包括甲基羰氧基、乙基羰氧基、异丙基羰氧基、丙基羰氧基、丁基羰氧基、异丁基羰氧基、叔丁基羰氧基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“烷氧基羰氧基”是指-oc(＝o)烷氧基基团，其中“烷氧基”如上所定义。这种烷氧基羰氧基的例子包括甲氧基羰氧基、乙氧基羰氧基、异丙氧基羰氧基、丙氧基羰氧基、丁氧基羰氧基、异丁氧基羰氧基、叔丁氧基羰氧基等，但不限于这些。
本说明书中的术语“芳基烷基”、“羟基烷基”、“烷氧基烷基”、“氨基烷基”或“(烷基芳基)烷基”是指被至少一个r取代的烷基，即-(烷基)-r，r是如上所定义的芳基、羟基、烷氧基、氨基或烷基芳基，其中烷基、芳基、羟基、烷氧基、氨基或烷基芳基如上所定义。
本说明书中的术语“烷氧基烷氧基”或“羟基烷氧基”是指被至少一个r取代的烷氧基，即-o-(烷基)-r，r是如上所定义的烷氧基或羟基，其中烷基、烷氧基或羟基如上所定义。
本说明书中的术语“药学上可接受的”是对暴露于上述组合物的细胞或人无毒的性质，指适于用作药物制剂，通常被认为用于该用途时可安全使用，并且，表示已被国家监管机构正式批准用于此用途，或已在《韩国药典》或《美国药典》中列出。
本说明书中的术语“药学上可接受的盐”是指对患者相对无毒且无害的浓度下，由该盐引起的副作用不会降低本发明化合物本身的有益功效的本发明的化合物的所有有机或无机加成盐。
本说明书中的术语“癌症”指特征在于细胞增殖不受控制或失调、细胞分化减少、具有侵袭周围组织的不恰当的能力和/或在异位部位建立新的生长能力的细胞障碍。
本说明书中的术语“预防”是指通过施用本发明的组合物来抑制或延迟癌症疾病的发生、扩散和复发的所有行为。
本说明书中的术语“治疗”是指通过施用本发明的组合物来改善或治愈癌症症状的所有行为。
本说明书中的术语“改善”是指通过施用本发明的组合物来至少降低与根据给药所治疗的病症有关的参数(例如症状的程)度的所有行为。
本说明书中的术语“个体”是指已经发病或可能发病为癌症疾病的包括人类的所有动物。上述动物不仅可以为人类，还可以是需要治疗相似的症状的如牛、马、绵羊、猪、山羊、骆驼、羚羊、狗、猫等的哺乳动物，但不限于此。另外，在本发明中，个体可排除人类，但不限于此。
本说明书中的术语“给药”是指通过任何合适的方法将本发明的组合物引入个体，并且本发明的组合物的给药途径可以通过口服或肠胃外的各种途径来给药，只要可以到达目标组织即可。
本说明书中的术语“药学有效量”是指足以以适用于医学治疗的合理的受益/风险比来治疗疾病并且不会引起副作用的量。
本说明书中的术语“食品”是指肉类、香肠、面包、巧克力、糖果、小吃、饼干、比萨、拉面、其他面类、口香糖、包括冰淇淋的乳制品、各种汤、饮料、茶、能量饮料、酒精饮料、维生素复合剂、保健功能性食品和保健食品，以及所有通常意义上的所有食品。
本说明书中的术语“保健功能性食品”是指使用保健功能性食品相关法律第6727号的、具有对人体有用的功能的原料或成分制造和加工的食品，“功能性”是指为了获得有益于健康目的的作用(例如，对人体结构和功能调节营养素或生理学作用)而摄取。
本发明提供以下述化学式1表示的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐：
[化学式1]
(在上述化学式1中，
ra为氢或-l-r3；
r1为氢或-(ch2)n-r；
r为c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、羟基、c1-c10烷基羰氧基、c6-c20芳基羰氧基、氰基、卤素基、硝基、c1-c10烷基硫基、c6-c20芳基硫基、硫基、-nra1ra2、c1-c10烷氧基c1-c10烷基、c6-c20芳氧基c1-c10烷基、c1-c10烷氧基c1-c10烷氧基、c1-c10烷氧基c1-c10烷氧基c1-c10烷基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、磺基、c6-c20芳基、c3-c20环烷基、氨甲酰基、c1-c10烷基氨基羰基、c6-c20芳基氨基羰基、氨磺酰基、c1-c10烷基氨基磺酰基、c6-c20芳基氨基磺酰基、c1-c10烷基羰基、c6-c20芳基羰基、c1-c10烷氧基羰基、c6-c20芳氧基羰基、羧基、甲酰基、c2-c20杂芳基或c3-c20杂环烷基，上述r的芳基、杂芳基和杂环烷基进一步被选自由c1-c10烷基、卤素基、硝基、氰基、羟基、c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、c1-c10烷基硫基、卤代c1-c10烷基硫基、c6-c20芳基硫基、二c1-c10烷基氨基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、c3-c20环烷基、羧基、磺基、甲酰基、氨甲酰基、氨磺酰基、氨基、c1-c10烷基羰基、c6-c20芳基羰基、c1-c10烷氧基羰基、c6-c20芳氧基羰基、c1-c10烷基羰氧基、c6-c20芳基羰氧基、c2-c20杂芳基和c3-c20杂环烷基构成的组中的一种以上的取代基取代；
ra1和ra2各自独立地为氢、c1-c10烷基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、磺基、c6-c20芳基、c3-c20环烷基或氨磺酰基；
n为1至10的整数；
r2为氢、c1-c10烷基、c1-c10烷氧基c1-c10烷基、c3-c20环烷基、c3-c20环烷基氧基c1-c10烷基、c6-c20芳基或c6-c20芳氧基c1-c10烷基；
x为ch或n；
z为-ch2-或-co-；
l为-so2-、-so2-l’-、-nhco-、-conh-、c1-c10亚烷基或-co-；
l’为-nh-或
la为c1-c10亚烷基；
n1为1至3的整数；
m1为0或1的整数；
但是，(i)当x为ch时，l为-so2-nh-，
(ii)当l为c1-c10亚烷基时，排除r3为c1-c10烷基、c1-c10烷氧基或c6-c20芳氧基的情况；
r3为c1-c10烷基、c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、c3-c20杂环烷基、c6-c20芳基或c2-c20杂芳基，上述r3的杂环烷基、芳基和杂芳基进一步被选自由c1-c10烷基、卤素基、卤代c1-c10烷基、硝基、氰基、c1-c10烷基羰基氨基、c6-c20芳基羰基氨基、氨基、c1-c10烷氧基、卤代c1-c10烷氧基、c1-c10烷氧基c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、羟基、c1-c10烷基羰基、卤代c1-c10烷基羰基、c6-c20芳基羰基、c1-c10烷氧基羰基、c6-c20芳氧基羰基、羧基、甲酰基、硫基、c1-c10烷基硫基、c6-c20芳基硫基、二c1-c10烷基氨基c1-c10烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、c1-c10烷基c6-c20芳基磺酰基、c6-c20芳基c1-c10烷基磺酰基、磺基、氨甲酰基、c1-c10烷基氨基羰基、c6-c20芳基氨基羰基、氨磺酰基、c1-c10烷基氨基磺酰基、c6-c20芳基氨基磺酰基、c6-c20芳基、c2-c20杂芳基、c1-c10烷基羰氧基、c6-c20芳基羰氧基和c3-c20杂环烷基构成的组中的一种以上的取代基取代；
r4为卤素基、卤代c1-c10烷基、氰基、c1-c10烷基、c6-c20芳基、c2-c20杂芳基、c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、c2-c20杂芳氧基、卤代c1-c10烷氧基、羟基、氨基或氨基c1-c10烷基；
d为0至5的整数，d为2以上的整数时，r4彼此相同或不同；
a和b各自独立地为0、1或2的整数，a+b为1、2或3的整数；
上述杂芳基和杂环烷基包含选自氮、氧和硫的一种以上的杂原子。)
在一实施例中，上述化学式1的化合物可以以下述化学式2表示。
[化学式2]
(在上述化学式2中，r1、r2、x、z、l、r3、r4、a、b和d与在上述化学式1中的定义相同。)
本发明的上述化学式1的化合物，优选地，化学式2的化合物可直接抑制tead蛋白，上述tead蛋白是hippo信号转导的最重要的转录因子，且已知hippo信号转导是对于癌细胞的发育和生长非常重要的信号系统。即上述化学式1的化合物，优选地，化学式2的化合物在hippo途径中表现出对yap-tead结合的抑制活性，因此可用作由tap-tead结合介导的疾病，即癌症的治疗剂和预防剂。即上述化学式1的化合物，优选地，化学式2的化合物与yap竞争性地结合于tead，以抑制yap-tead的相互作用，从而激活hippo途径并控制癌细胞的生长。另外，本发明的化学式1的化合物对正常细胞表现出低毒性。
在一实施例的上述化学式2中，上述a+b可为1或2的整数。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为1或2的整数，b可为0。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为0的整数，b可为1。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为1的整数，b可为1。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为0的整数，b可为2。
具体地，上述化学式1的化合物可以为以下述化学式3、化学式4、化学式5、化学式6或化学式7表示的化合物。
[化学式3]
[化学式4]
[化学式5]
[化学式6]
[化学式7]
(在上述化学式3至7中，r1、r2、z、l、r3、r4和d与在上述化学式2中的定义相同。)
在一实施例的上述化学式2中，上述x为ch，a为0，b为2，l为-so2-nh-。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为ch，a为1，b为1，l为-so2-nh-。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为ch，a为2，b为0，l为-so2-nh-。
具体地，上述化学式2的化合物可以为以下述化学式8、化学式9或化学式10表示的化合物。
[化学式8]
[化学式9]
[化学式10]
(在上述化学式8至10中，r1、r2、r3、r4和d与在上述化学式2中的定义相同。)
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为1，b为0，z为-ch2-，l为-so2-。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为1，b为0，z为-co-，l为-so2-或c1-c5亚烷基。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为0，b为1，z为-ch2-，l为-so2-。
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为2，b为0，l为-so2-、-co-、-nhco-、
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为1，b为1，l为-so2-、
在一实施例的上述化学式2中，上述x为n，a为0，b为2，l为-so2-、
具体地，上述化学式3的化合物可以为以下述化学式11、化学式12或化学式13表示的化合物。
[化学式11]
[化学式12]
[化学式13]
(在上述化学式11至13中，r1、r2、r3、r4和d与在上述化学式2中的定义相同；
r3a为c3-c20杂环烷基、c6-c20芳基或c2-c20杂芳基，上述r3a的杂环烷基、芳基和杂芳基进一步被选自由c1-c10烷基、卤素基、卤代c1-c10烷基、硝基、氰基、c1-c10烷基羰基氨基、c6-c20芳基羰基氨基、氨基、c1-c10烷氧基、卤代c1-c10烷氧基、c1-c10烷氧基c1-c10烷氧基、c6-c20芳氧基、羟基、c1-c10烷基羰基、卤代c1-c10烷基羰基、c6-c20芳基羰基、羧基、甲酰基、硫基、c1-c10烷基硫基、c6-c20芳基硫基、二c1-c10烷基氨基c1-c10烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c10烷基磺酰基、c6-c20芳基磺酰基、磺基、氨甲酰基、c1-c10烷基氨基羰基、c6-c20芳基氨基羰基、氨磺酰基、c1-c10烷基氨基磺酰基、c6-c20芳基氨基磺酰基、c6-c20芳基、c2-c20杂芳基和c3-c20杂环烷基构成的组中的一种以上的取代基取代。)
具体地，上述化学式4的化合物可以为以下述化学式14表示的化合物。
[化学式14]
(在上述化学式14中，r1、r2、r3、r4和d与在上述化学式2中的定义相同。)
具体地，上述化学式5的化合物可以为以下述化学式15、化学式16、化学式17、化学式18或化学式19表示的化合物。
[化学式15]
[化学式16]
[化学式17]
[化学式18]
[化学式19]
(在上述化学式15至19中，r1、r2、r3、r4和d与在上述化学式2中的定义相同；
la为c1-c5亚烷基。)
具体地，上述化学式6的化合物可以为以下述化学式20、化学式21或化学式22表示的化合物。
[化学式20]
[化学式21]
[化学式22]
(在上述化学式20至22中，r1、r2、r3、r4和d与在上述化学式2中的定义相同；
la为c1-c5亚烷基。)
具体地，上述化学式7的化合物可以为以下述化学式23、化学式24或化学式25表示的化合物。
[化学式23]
[化学式24]
[化学式25]
(在上述化学式23至25中，r1、r2、r3、r4和d与在上述化学式2中的定义相同；
la为c1-c5亚烷基。)
在一实施例的上述化学式8至25的化合物中，
r1为氢或-(ch2)n-r；
r为c1-c6烷氧基、c6-c12芳氧基、羟基、氰基、卤素基、硝基、c1-c6烷基硫基、c6-c12芳基硫基、硫基、-nra1ra2、c1-c6烷氧基c1-c6烷基、c6-c12芳氧基c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧基c1-c6烷氧基c1-c6烷基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、c1-c6烷基c6-c12芳基磺酰基、c6-c12芳基c1-c6烷基磺酰基、磺基、c6-c12芳基、c1-c6烷氧基羰基、c6-c12芳氧基羰基、羧基、甲酰基、c2-c12杂芳基或c3-c12杂环烷基，上述r的芳基、杂芳基和杂环烷基进一步被选自由c1-c6烷基、卤素基、硝基、氰基、羟基、c1-c6烷氧基、c6-c12芳氧基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、c1-c6烷基c6-c12芳基磺酰基、c6-c12芳基c1-c6烷基磺酰基、羧基、磺基、甲酰基、氨甲酰基、氨磺酰基和氨基构成的组中的一种以上的取代基取代；
ra1和ra2各自独立地为氢、c1-c6烷基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、c1-c6烷基c6-c12芳基磺酰基、c6-c12芳基c1-c6烷基磺酰基、磺基或氨磺酰基；
n为1至5的整数；
r2为氢、c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6烷基或c6-c12芳氧基c1-c6烷基；
r3为c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c6-c12芳氧基、c3-c12杂环烷基、c6-c12芳基或c2-c12杂芳基；
r3a为c3-c12杂环烷基、c6-c12芳基或c2-c12杂芳基；
上述r3和r3a的杂环烷基、芳基和杂芳基进一步被选自由c1-c6烷基、卤素基、卤代c1-c6烷基、硝基、氰基、c1-c6烷基羰基氨基、c6-c12芳基羰基氨基、氨基、c1-c6烷氧基、卤代c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧基c1-c6烷氧基、c6-c12芳氧基、羟基、c1-c6烷基羰基、卤代c1-c6烷基羰基、c6-c12芳基羰基、羧基、甲酰基、硫基、c1-c6烷基硫基、c6-c12芳基硫基、二c1-c6烷基氨基c1-c6烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、磺基、氨甲酰基、c1-c6烷基氨基羰基、c6-c12芳基氨基羰基、氨磺酰基、c1-c6烷基氨基磺酰基、c6-c12芳基氨基磺酰基、c6-c12芳基、c2-c12杂芳基和c3-c12杂环烷基构成的组中的一种以上的取代基取代；
la为c1-c5亚烷基；
r4为卤素基、卤代c1-c6烷基、氰基、c1-c6烷基、c6-c12芳基、c2-c12杂芳基、c1-c6烷氧基、c6-c12芳氧基、c2-c12杂芳氧基、卤代c1-c6烷氧基、羟基、氨基或氨基c1-c6烷基；
d为0至5的整数，d为2以上的整数时，r4彼此相同或不同。
在一实施例中，上述化学式2的化合物优选为选自上述化学式8至25中的化合物。
在一实施例的上述化合物中，上述r1为氢或-(ch2)n-r；
r为c1-c6烷氧基、羟基、氰基、卤素基、c1-c6烷基硫基、-nra1ra2、c1-c6烷氧基c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧基c1-c6烷氧基c1-c6烷基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、c6-c12芳基、c1-c6烷氧基羰基、c6-c12芳氧基羰基、c2-c12杂芳基或c3-c12杂环烷基，上述r的芳基、杂芳基和杂环烷基进一步被选自由c1-c6烷基、卤素基、硝基、氰基、羟基、c1-c6烷氧基、c6-c12芳氧基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、c1-c6烷基c6-c12芳基磺酰基、c6-c12芳基c1-c6烷基磺酰基、羧基、磺基和甲酰基构成的组中的一种以上的取代基取代；
ra1和ra2各自独立地为c1-c6烷基、c1-c6烷基磺酰基或c6-c12芳基磺酰基；
n为1至3的整数；
r2为氢或c1-c6烷氧基c1-c6烷基；
r3为c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c3-c12杂环烷基、c6-c12芳基或c2-c12杂芳基；
r3a为c3-c12杂环烷基、c6-c12芳基或c2-c12杂芳基；
上述r3和r3a的杂环烷基、芳基和杂芳基进一步被选自由c1-c6烷基、卤素基、卤代c1-c6烷基、硝基、氰基、c1-c6烷基羰基氨基、c6-c12芳基羰基氨基、氨基、c1-c6烷氧基、卤代c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧基c1-c6烷氧基、羟基、c1-c6烷基羰基、卤代c1-c6烷基羰基、c6-c12芳基羰基、羧基、甲酰基、硫基、c1-c6烷基硫基、c6-c12芳基硫基、二c1-c6烷基氨基c1-c6烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、磺基、氨甲酰基、氨磺酰基、c6-c12芳基、c2-c12杂芳基和c3-c12杂环烷基构成的组中的一种以上的取代基取代；
r4为卤素基、卤代c1-c6烷基、氰基、c1-c6烷基、c6-c12芳基、c2-c12杂芳基、c1-c6烷氧基、c6-c12芳氧基、c2-c12杂芳氧基、卤代c1-c6烷氧基、羟基、氨基或氨基c1-c6烷基；
d为0至5的整数，d为2以上的整数时，r4彼此相同或不同。
在一实施例的上述化合物中，上述r1为氢。
在一实施例的上述化合物中，优选地，上述r1为-(ch2)n-or11、-(ch2)n-oh、-(ch2)n-cn、-(ch2)n-x1、-(ch2)n-sr12、-(ch2)n-nr13r14、-(ch2)n-nr13-so2r15、-(ch2)n-l1-or11、-(ch2)n-so2r16或-(ch2)n-c(＝o)or17，或者选自以下结构。
(上述r11为c1-c4烷基或c1-c4烷氧基c1-c4烷基；
x1为卤素基；
r12至r14各自独立地为c1-c4烷基；
r15、r16、r17和r20各自独立地为c1-c4烷基或c6-c12芳基；
l1为c1-c4亚烷基；
r18和r19各自独立地为c1-c4烷基、卤素基、硝基、氰基、羟基、c1-c4烷氧基、c6-c12芳氧基、羧基、磺基或甲酰基；
r’为氢或c1-c4烷基；
q为ch2、nh、o或s；
n为1至3的整数；
p为0至5的整数，当p为2以上的整数时，r18彼此相同或不同；
q为0至4的整数，当q为2以上的整数时，r19彼此相同或不同。)
更优选地，上述r1可选自下述结构。
在一实施例的上述化合物中，上述r3为c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、c3-c12杂环烷基、c6-c12芳基或c2-c12杂芳基，上述r3的杂环烷基、芳基和杂芳基进一步被选自由c1-c6烷基、卤素基、卤代c1-c6烷基、硝基、c1-c6烷基羰基氨基、氨基、c1-c6烷氧基、卤代c1-c6烷氧基、c1-c6烷氧基c1-c6烷氧基、羟基、卤代c1-c6烷基羰基、羧基、二c1-c6烷基氨基c1-c6烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c6烷基磺酰基、c6-c12芳基和c2-c12杂芳基构成的组中的一种以上的取代基取代。
在一实施例的上述化合物中，上述r2为氢或c1-c4烷氧基c1-c4烷基；
r3为c1-c4烷基、c1-c4烷氧基或选自下述结构；
r21至r26各自独立地为c1-c4烷基、卤素基、卤代c1-c4烷基、硝基、氰基、c1-c4烷基羰基氨基、c6-c12芳基羰基氨基、氨基、c1-c4烷氧基、卤代c1-c4烷氧基、c1-c4烷氧基c1-c4烷氧基、羟基、c1-c4烷基羰基、卤代c1-c4烷基羰基、c6-c12芳基羰基、羧基、甲酰基、硫基、c1-c4烷基硫基、c6-c12芳基硫基、二c1-c4烷基氨基c1-c4烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c4烷基磺酰基、c6-c12芳基磺酰基、磺基、氨甲酰基、氨磺酰基、c6-c12芳基、c2-c12杂芳基或c3-c12杂环烷基；
y1和y2各自独立地为nr”、o或s；
z为-(cr27r28)x-；
r27和r28各自独立地为氢、c1-c4烷基或卤素基；
x为1至3的整数；
t为ch2或o；
r”为氢或c1-c4烷基；
r为0至3的整数，当r为2以上的整数时，r21彼此相同或不同；s为0至2的整数，当s为2的整数时，r22彼此相同或不同；t为0至4的整数，当t为2以上的整数时，r23彼此相同或不同；u为0至5的整数，当u为2以上的整数时，r24彼此相同或不同；v为0至6的整数，当v为2以上的整数时，r25彼此相同或不同；w为0至7的整数，当w为2以上的整数时，r26彼此相同或不同；
r4为卤素基、卤代c1-c4烷基、氰基、c1-c4烷基、ar1、het1、c1-c4烷氧基、-o-ar1、-o-het1、卤代c1-c4烷氧基、羟基、氨基或氨基c1-c4烷基；
ar1为苯基、联苯基或萘基；
het1为吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、异吲哚基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基或苯并三唑基；
d为0至3的整数，当d为2以上的整数时，r4彼此相同或不同。
在一实施例的上述化合物中，优选地，上述r4为卤素基、卤代c1-c4烷基或c1-c4烷氧基。
在一实施例的上述化合物中，上述r3为c1-c4烷基、c1-c4烷氧基或选自下述结构。
(以上，r21至r26各自独立地为c1-c4烷基、卤素基、卤代c1-c4烷基、硝基、c1-c4烷基羰基氨基、氨基、c1-c4烷氧基、卤代c1-c4烷氧基、c1-c4烷氧基c1-c4烷氧基、羟基、卤代c1-c4烷基羰基、羧基、二c1-c4烷基氨基c1-c4烷氧基、二羟基氨基硫基、c1-c4烷基磺酰基、c6-c12芳基或c2-c12杂芳基；
z为-(cr27r28)x-；
r27和r28各自独立地为氢、c1-c4烷基或卤素基；
x为1至3的整数；
r”为氢或c1-c4烷基；
r为0至3的整数，当r为2以上的整数时，r21彼此相同或不同；s为0至2的整数，当s为2的整数时，r22彼此相同或不同；t为0至4的整数，当t为2以上的整数时，r23彼此相同或不同；u为0至5的整数，当u为2以上的整数时，r24彼此相同或不同；v为0至6的整数，当v为2以上的整数时，r25彼此相同或不同；w为0至7的整数，当w为2以上的整数时，r26彼此相同或不同。)
更具体地，上述r3为甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或丁氧基，或者选自下述结构。
更具体地，上述r4为溴、氟、氯、三氟甲基、氰基、甲基、乙基、丙基、丁基、ar1、het1、c1-c4烷氧基、-o-ar1、o-het1、三氟甲氧基、羟基、氨基、氨甲基、氨乙基或氨丙基；ar1为苯基、联苯基或萘基；het1为吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基(quinolinyl)、异喹啉基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、异吲哚基、吲唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基或苯并三唑基；d为0至3的整数，当d为2以上的整数时，r4彼此相同或不同。
在一实施例中，上述化学式1的化合物可以以下述化学式26表示。
[化学式26]
(在上述化学式26中，r1、r2、x、z、r4、a、b和d与在上述化学式1中的定义相同。)
在一实施例的化学式26的化合物中，上述x为n，a为2，b可为0。
在一实施例的化学式26的化合物中，上述x为n，a为1，b可为1。
在一实施例的化学式26的化合物中，上述x为n，a为0，b可为2。
具体地，上述化学式26的化合物可以为以下述化学式27、化学式28或化学式29表示的化合物。
[化学式27]
[化学式28]
[化学式29]
(在上述化学式27至29中，r1、r2、r4和d与在上述化学式1中的定义相同。)
一实施例的上述化合物，更优选地，可选自下述化合物组，但不限于此。
取决于取代基的类型，上述化学式1的化合物可以通过各种已知的方法制备，并且对于本领域技术人员显而易见的是，可以通过使用本领域中已知的方法或通过适当地改变来进行制备。
为增进体内吸收或增加溶解度，本发明的化合物可以制备成前药、水合物、溶剂化物和药学上可接受的盐的形式来使用，因此本发明的范畴不仅包括上述化学式1的化合物，还包括其前药、其水合物、其溶剂化物或其盐的形式。
本发明的化合物可以以药学上可接受的盐的形式使用，并且药学上可接受的盐是根据本领域常规方法制备的盐，其制备方法是本领域技术人员已知的。具体而言，上述药学上可接受的盐包括但不限于衍生自药学上或生理上可接受的以下游离酸(freeacid)和碱的盐。
本发明化合物的药学上可接受的盐是指根据本领域常规方法制备的盐，并且此类制备方法是本领域技术人员已知的。具体地，药学上可接受的盐包括但不限于衍生自药学上或生理上可接受的以下无机酸和有机酸以及碱的盐。
酸加成盐可通过常规方法制备，例如通过将本发明的化合物溶于过量的酸水溶液中，并使用与水混溶的有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮或乙腈来进行沉淀。可以加热相同摩尔量的化合物和水中的酸或醇(例如，乙二醇单甲醚(glycolmonomethylether))，然后将上述混合物蒸发至干燥，或将沉淀的盐抽滤。此时，可以将有机酸和无机酸用作游离酸，作为无机酸可使用盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、酒石酸等，作为有机酸可使用甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸(maleicacid)、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸(fumaricacid)、扁桃酸、丙酸(propionicacid)、柠檬酸(citricacid)、乳酸(lacticacid)、乙醇酸(glycollicacid)、葡萄糖酸(gluconicacid)、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸(glutaricacid)、葡萄糖醛酸(glucuronicacid)、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸、香草酸、氢碘酸(hydroiodicacid)等，但不限于这些。
另外，可以使用碱制备药学上可接受的金属盐。碱金属盐或碱土金属盐例如可通过将本发明的化合物溶解于过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，过滤未溶解的本发明的化合物盐后，对滤液进行蒸发干燥而获得。这时，作为金属盐特别适合制备钠盐，钾盐或钙盐，但不限于此。另外，相应的银盐可以通过使碱金属或碱土金属盐与适当的银盐(例如，硝酸银)反应而获得。
除非另外指出，否则本发明化合物的药学上可接受的盐包括可存在于上述化学式1的化合物中的酸性或碱性基团的盐。例如，药学上可接受的盐可包括羟基的钠、钙和钾盐等，氨基的其他药学上可接受的盐包括氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(甲磺酸酯(mesylate))和对甲苯磺酸盐(甲苯磺酸酯(tosylates))等，并且可以通过本领域已知的盐的制备方法来制备。
本发明的化合物的水合物是指包含通过非共价分子间力(non-covalentintermolecularforce)结合的化学计量(stoichiometric)或非化学计量(non-stoichiometric)的水的本发明的化合物或其盐。
本发明的化合物的溶剂化物是指包含通过非共价分子间力结合的化学计量或非化学计量的溶剂的本发明的化合物或其盐。相关的优选溶剂有挥发性、无毒性溶剂。
本发明的化合物可以以在人或动物体内降解而提供本发明的化合(作为有效成分)的前药的形式给药。前药可用于改变和/或改善母体化合物的物理和/或药代动力学特性，并且可以在母体化合物以包含可被诱导形成前药的合适基团或取代基时形成。
假如，某种化合物(前药(prodrug))在体内分解并生成本发明的化合物或其盐时，那么这种化合物也包括在本发明的范围内。除非另有说明，本文所用术语“前药(prodrug)”是指活性化合物，特别是指为提供本发明的化合物而能够在生物条件(体内或体外)下被水解、氧化、能够进行其他反应的本发明的化合物。前药的例子包括含可生物水解的部分的可通过生物水解来生成本发明的化合物的化合物，可生物水解的部分例如可以是可生物水解(biohydrolyzable)的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯(carbamates)、可生物水解的碳酸盐、可生物水解的酰脲(ureides)以及可生物水解的磷酸盐类似物，但不限于这些具体例子。具有羧基官能团的化合物的前药优选为羧酸的低级烷基酯。羧酸酯通常通过将分子中存在的羧酸的一部分酯化而形成。前药可以使用众所周知的方法轻松制备，如在伯格的药物化学和药物发现第六版(burger'smedicinalchemistryanddrugdiscovery6thed.)(donaldj.abrahamed.,2001,wiley)和前药的设计与应用(designandapplicationofprodrugs)(h.bundgaarded.,1985,harwoodacademicpublishersgmfh)中所记载的方法。
另外，本发明提供癌的预防或治疗用药物组合物，其包含上述化学式1的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
其中，上述化学式1的化合物的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐，优选化学式2的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐，通过在hippo途径中表现出yap-tead结合抑制活性来预防或治疗癌症。即上述化学式1的化合物(优选化学式2的化合物)与yap竞争性地结合于tead，以抑制yap-tead的相互作用，从而激活hippo途径并有效地控制癌细胞的生长。
在一实施例的药物组合物中，上述癌为肺癌、大肠癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、血液癌、白血病、骨髓性白血病、淋巴瘤、宫颈癌(cervicalcarcinoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、成胶质细胞瘤(glioblastoma)、黑素瘤(melanoma)、胰腺癌、胃癌、肝癌、肾癌、胆囊癌、胆道癌、食道癌、卵巢癌、甲状腺癌、皮肤癌或神经母细胞瘤(neuroblastoma)，优选为大肠癌、结肠癌或直肠癌。
在一实施例中，上述药物组合物除上述有效成分之外还包含常规的无毒的药学上可接收的载体、赋形剂或稀释剂，以剂型化成药学领域中的常规制剂，即口服给药制剂或肠胃外给药制剂。
上述药学上可接收的载体、赋形剂或稀释剂可举出乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁或矿物油等。
本发明的药物组合物可按照使用目的以常规的方法剂型化成多种形式来使用，如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和气雾剂等的口服剂型，无菌注射液的注射剂等，可以口服给药或通过各种途径给药，包括静脉内、腹腔内、皮下、直肠、局部给药等。
另外，本发明的药物组合物还可包含填充剂、抗凝剂、润滑剂、湿润剂、香料、乳化剂、防腐剂等。
用于口服的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，并且这种固体制剂在上述组合物中混合至少一种以上的赋形剂来剂型化，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等。另外，除简单的赋形剂外，还可使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石。
作为口服液体制剂可以例举出悬浮液、内服溶液剂、油剂、糖浆等，除了通常使用的作为简单稀释剂的水、液体石蜡外，还可以包括各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂等。
肠胃外给药的制剂包括无菌水溶剂、非水性溶剂、混悬剂、油剂、冻干制剂和栓剂。非水性溶剂、混悬剂可使用丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)、可注射酯(例如，油酸乙酯)等。作为栓剂的主剂，可以使用半合成脂肪酸酯、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂酸甘油酯、甘油明胶等。另一方面，注射剂可包含常规添加剂，例如增溶剂、等渗剂、混悬剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂等。
本发明的药物组合物可以被灭菌或进一步包含佐剂，佐剂例如可以是防腐剂、稳定剂、增稠剂、水合剂或乳化促进剂、用于控制渗透压的盐和/或缓冲剂等，且还可包括其他治疗上有用的物质，可以根据常规方法如溶解、分散和胶凝化来实现制剂化。
本发明的药物组合物以药学有效量进行给药，并且本发明的药物组合物可以作为单独的治疗剂给药或与其他治疗剂组合给药，并且可以与常规药物按顺序依次给药或同时给药，可以单次或多次给药。考虑到所有上述因素，重要的是能够在没有副作用的基础上以最小量获得最大效果的量进行给药，并且这可以由本领域技术人员容易地确定。
具体地，本发明组合物中化合物的有效量可以根据患者的年龄、性别和体重而不同，并且通常每kg体重施用1至100mg，优选每天或隔天施用5至60mg，或每天分为1至3次来进行给药。然而，由于给药量可以根据给药途径、疾病的严重程度、性别、体重、年龄等而增加或减少，因此上述给药量不以任何方式限制本发明的范围。
另外，本发明提供癌症疾病的预防或治疗方法，包括向已经发病或可能发病为癌症疾病的个体施用上述药物组合物的步骤。
本发明的药物组合物以药学有效剂量施用。
本领域技术人员可根据包括患者的性别、年龄、体重、健康状况、疾病类型、严重程度、药物活性、对药物的敏感性、给药方法、给药时间、给药途径和排泄率、治疗时间、组合或同时使用的药物的因素以及医学领域中众所周知的其他因素容易地确定有效剂量水平。本发明的药物组合物可以作为单独的治疗剂给药或与其他治疗剂组合给药，并且可以与常规药物按照顺序依次给药或同时给药，可以单次或多次给药。考虑到所有上述因素，重要的是在没有副作用的基础上以最小量获得最大效果的量进行给药，并且这可以由本领域技术人员容易地确定。
对本发明的药物组合物的给药途径和给药方式没有特别限制，可以采用任何给药途径和给药方式，只要包含上述组合物的组合物可以达到期望的部位即可。具体地，可以通过口服或肠胃外给药的各种途径施用上述组合物，并且给药途径的非限制性示例包括口腔、直肠、局部、静脉内、腹腔内、肌肉内、动脉内、经皮、鼻腔内或吸入等。
另外，本发明的癌症预防或治疗方法可以与手术、放射疗法、激素疗法、化学疗法以及使用生物反应调节剂的方法并用。
另外，本发明提供yap/taz-tead抑制剂组合物，其作为活性成分包含有效量的以上述化学式1表示的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐。
另外，本发明提供癌的预防或改善用保健功能性食品组合物，其作为活性成分包含有效量的以上述化学式1表示的化合物、其前药、其水合物、其溶剂化物或其药学上可接受的盐。
上述保健功能性食品组合物可以以粉末、颗粒、片剂、胶囊剂、糖浆剂或饮料的形式提供，上述保健功能性食品除了作为活性成分的上述化学式1的化合物以外还与其他食品或食品添加剂一起使用，并且可以根据常规方法适当使用。有效成分的混合量可以根据使用目的(例如预防、健康或治疗)来适当确定。
包含在上述保健功能性食品组合物中的上述化学式1的化合物可以以药物组合物的有效剂量为基准来使用，但是在出于健康和卫生目的或出于健康调节目的而需要长期摄入的情况下，可以低于上述范围，并且由于有效成分在安全性方面没有任何问题，因此当然也可以以高于上述范围的量使用。
上述保健功能性食品组合物可剂型化成多种剂型，如肉类、香肠、面包、巧克力、糖果、小吃、饼干、比萨、拉面、其他面类、口香糖、包括冰淇淋的乳制品、各种汤、饮料、茶、功能饮料、酒精饮料、维生素复合剂。
以下，将通过优选实施例更详细地描述本发明。然而，这仅作为本发明的一个示例而提出，其在任何意义上都不会限制本发明的权利范围，并且本发明的范围仅根据的权利要求书来定义。
制备例a
以可从试剂公司购买的苯并[cd]吲哚-2(1h)-酮(benzo[cd]indol-2(1h)-one)为起始物质，经硝化(nitration)反应得到中间体a-1，经n-烷基化(n-alkylation)后得到中间体b-1-1，之后通过硝基(nitro)的还原反应，获得胺(amine)中间体，即c-1-1，并通过将其与叔丁氧羰基(boc)保护的哌啶羧酸(piperidinecarboxylicacid)化合物d-1-1进行酰胺化偶联(amidecoupling)而获得中间体e-1-1。随后，使在boc脱保护(boc-deprotection)之后获得的胺(amine)f-1-1与磺酰基氯化合物进行磺酰化(sulfonylation)反应，以获得最终化合物g-1-1。
各反应的一般方法如下。
步骤1：化合物a-1的合成
将苯并[cd]吲哚-2(1h)-酮(benzo[cd]indol-2(1h)-one)(10g，59.1mmol)溶于乙酸(45ml)中，并在10℃下搅拌。缓慢加入硝酸(nitricacid)(60％，5.88ml，76.8mmol)，然后在50℃下搅拌24小时。将上述反应混合物冷却至室温后，加入水，过滤，并用水洗涤，以获得黄土色固体化合物a-1(12.6g，100％)。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.41(s,1h),8.89(d,j＝8.4hz,1h),8.63(d,j＝8.1hz,1h),8.18(d,j＝6.9hz,1h),8.07(dd,j＝8.5,7.0hz,1h),7.13(d,j＝8.0hz,1h)
步骤2：化合物b-1-1的合成
将在上述步骤1中制备的化合物a-1(5.24g，24.5mmol)溶解在dmf(20ml)中，并在0℃下搅拌。添加k2co3(6.76g，48.9mmol)和1-溴-3-甲氧基丙烷(1-bromo-3-methoxypropane)(3.01ml，26.9mmol)，将温度升至50℃，并搅拌24小时。将上述反应混合物冷却至室温后，加入水，过滤，并用水洗涤以获得黄土色固体化合物b-1-1(6.99g，100％)。
步骤3：化合物c-1-1的合成
将在步骤2中制备的化合物b-1-1(3.63g，12.7mmol)溶解在甲醇/乙酸乙酯(1/1v/v，40ml)中，然后加入10％钯/碳(palladium10％oncarbon)(363mg)。在氢气下搅拌24小时。使用硅藻土(celite)过滤上述反应混合物，并减压浓缩，以获得红色固体化合物c-1-1(90％～100％)。
步骤4：化合物d-1-1的合成
将哌啶羧酸(piperidinecarboxylicacid)(803mg，6.22mmol)溶于二恶烷/水(2/1v/v，15ml)中，并在搅拌下加入naoh(274mg，6.84mmol)，然后在0℃下搅拌。加入boc酸酐(bocanhydride)(1.57ml，6.84mmol)，在室温下搅拌24小时后，减压下浓缩，剩下少量溶剂，并冷却至0℃。用1mhcl酸化(acidify)，将ph调节至2，然后用乙酸乙酯(10mlx3)萃取。将获得的有机层用mgso4干燥后，减压浓缩，以获得白色固体化合物d-1-1(1.42g，100％)。
步骤5：化合物e-1-1的合成
将在上述步骤4中制备的化合物d-1-1(111mg，0.482mmol)溶解在dmf(4ml)中，并在0℃下搅拌。加入diea(252μl，1.45mmol)和hatu(367mg，0.965mmol)，并搅拌1小时。将上述步骤3中制备的化合物c-1-1(124mg，0.482mmol)溶解在dmf(2ml)中，缓慢加入到上述反应混合物中，然后加热至60℃并搅拌24小时。通过加水终止反应后，将其用乙酸乙酯(5ml×3)萃取，用无水na2so4干燥，并通过快速色谱法(flashchromatography)纯化，得到黄色固体化合物e-1-1(40％～77％)。
步骤6：化合物f-1-1的合成
将在上述步骤5中制备的化合物e-1-1(170mg，0.364mmol)溶于ch2cl2(5ml)中，并在0℃下搅拌。加入三氟乙酸(278μl，3.64mmol)后，在室温下搅拌。反应完成后，用饱和(sat.)nahco3碱化(basify)至ph8后，用chcl3(10mlx3)萃取，用无水na2so4干燥，并通过快速色谱法(flashchromatography)纯化，得到黄色固体化合物f-1-1(78％～97％)。
步骤7：化合物g-1-1的合成
将在上述步骤6中制备的化合物f-1-1(17.8mg，0.0484mmol)溶解在chcl3(2ml)中，然后在0℃下搅拌。加入三乙胺(10μl，0.0727mmol)和化合物ar-磺酰基-cl(ar-sulfonyl-cl)(1.2eq)，然后在室温下搅拌12小时。减压浓缩上述反应混合物以除去溶剂，然后通过快速色谱法(flashchromatography)纯化，得到黄色固体化合物g-1-1(20％～99％)。
制备例b
与制备例a不同，首先对哌啶酸(piperidineacid)进行磺酰化(sulfonylation)以获得中间体d-1-2，然后通过与胺(amine)中间体c-1-2酰胺偶联(amidecoupling)合成最终化合物g-1-2。
步骤1：化合物d-1-2的合成
将哌啶羧酸(piperidinecarboxylicacid)(1g，7.74mmol)溶解在thf/h2o＝1/1(v/v)(100ml)中，在0℃下搅拌的同时添加na2co3(17ml，17.0mmol)并搅拌30分钟后，加入化合物ar-磺酰基-cl(ar-sulfonyl-cl)(1.2eq)并搅拌12小时。将上述反应混合物用乙醚(ether)(150mlx2)萃取，并将khso4固体(solid)添加至获得的水层中以将ph调节至3，然后用乙酸乙酯(15mlx3)萃取。将获得的有机层用无水na2so4干燥，然后减压浓缩，以获得化合物d-1-2(100％)。
步骤2：化合物g-1-2的合成
将步骤1中制备的化合物d-1-2(1eq)溶解在mecn中，然后在0℃下搅拌的同时添加3-甲基吡啶(3-picoline)(2.2eq)和甲基磺酰氯(methanesulfonylchloride)(1.2eq)，并搅拌1小时。将化合物c-1-2(1.2eq)溶解于mecn中，缓慢加入，并在室温下搅拌24小时。减压浓缩上述反应混合物以除去溶剂，然后通过快速色谱法(flashchromatography)纯化，得到黄色固体化合物g-1-2(20％～70％)。
制备例c
步骤1：化合物c-1-5的合成
除了使用化合物a-1代替上述制备例a的步骤3的化合物b-1-1以外，以与上述制备例a的步骤3相同的方式进行反应，获得化合物c-1-5。
步骤2：化合物g-1-4的合成
除了使用化合物c-1-5代替上述制备例b的步骤2的化合物c-1-2且使用化合物d-1-3代替上述制备例b的步骤2的化合物d-1-2以外，以与上述制备例b的步骤2相同的方式进行反应，获得化合物g-1-4。
步骤3：化合物g-1-5的合成
将3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧)丙醇(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-propanol)(39mg，0.204mmol)和pph3(54mg，0.204mmol)溶解在thf(1ml)中，并在0℃下搅拌。将化合物g-1-4(30mg，0.0679mmol)溶解在thf(1ml)中并添加，然后在相同温度下搅拌15分钟。添加diad(40μl，0.204mmol)后，将温度升至70℃并搅拌12小时。减压浓缩上述反应混合物以除去溶剂，并通过快速色谱法(flashchromatography)纯化，得到黄色液体化合物g-1-5。
步骤4：化合物45的合成
将化合物g-1-5(67mg，0.109mmol)溶解在thf(2ml)中，在0℃下搅拌，并添加tbaf(1.0m，328μl，0.328mmol)，然后在室温下搅拌。减压浓缩上述反应混合物以除去溶剂，并通过快速色谱法(flashchromatography)纯化，得到为黄色固体的化合物45(5.7mg，17％)。
[实施例1至169]
根据上述制备例a至c的方法制备了下表1的化合物1至169，并将所制备的化合物1至169的鉴定数据示于下表2中。
[表1]
[表2]
<实验例1>yap-tead结合抑制效果检测
使用先前在文献[cancers2018,10(5),140]中报道的能够测量yap-tead的抑制程度的荧光素酶检测法(luciferaseassay)来测量yap-tead的体外结合抑制率。
hek293t细胞(cell)购自美国模式培养物保藏所(americantypeculturecollection)，并在含有10％fbs、l-谷氨酰胺(l-glutamine)和青霉素/链霉素(peniciline/streptomyci)的dmem培养基(media)中培养。将该hek293t细胞(cell)以1×105的密度接种(seed)在24孔板(24wellplate)中，并用聚乙烯亚胺(polyethyleneamine)(10μg/ml)包被(coating)。根据制造商的说明书，使用脂质体2000试剂(lipofectamine2000reagent)(生命科技有限公司(lifetechnologies,inc.))将这些细胞(cell)用作为tead荧光素酶报告基因质粒(teadluciferasereporterplasmind)的8xgtiic-荧光素酶(8xgtiic-luciferase)(addgene参考号(reference)34615)和作为对照β-半乳糖苷酶质粒的cmv-β-gal(controlβ-galactosidaseplasmid)进行转染(transfection)。之后，将本发明的化合物以10μm的浓度处理24小时，使用报告基因裂解缓冲液(reporterlysisbuffer)(promega，法国)裂解(lysis)细胞(cell)，并用密特拉lb940酶标仪(mithraslb940platereader)读取萤光素酶活性(luciferaseactivity)，用β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)标准化(normalize)。其结果显示在下表3中。
[表3]
从上述表3的结果可知，本发明的化合物在10μm的浓度下显示出50％以上的抑制率，确认了由于本发明化合物的结构特点，可有效地抑制由于抑制yap-tead结合引起的tead依赖性转录(tead-dependenttranscription)。因此，本发明的化合物可以通过抑制cyr61、ctgf和pd-l1等的表达而表现出抗癌活性，上述cyr61、ctgf和pd-l1等是tead依赖性转录(tead-dependenttranscription)的主要靶基因(gene)中，在癌变过程中起重要作用的基因。
<实验例2>通过mtt法(mttassay)检测抗癌活性
通过胰蛋白酶-edta(trypsin-edta)处理可商购的大肠癌细胞系(cellline)ht-29并培养后，接种在96孔板(96wellplate)中。恒温处理24小时后，将各细胞用候选化合物(本发明的化合物)处理，以使最终浓度为0-2μm。将处理的细胞再培养72小时，并通过atp检测方法(atpdetectionmethod)(
为了确认本发明的化合物的抗癌效果，通过上述方法对大肠癌细胞系ht29细胞增殖分析(proliferationassay)，所得ic50值示于下表4中。
[表4]
根据上述表4的结果，本发明化合物的ic50值为45.4μm以下，具体的ic50为2.2至45.4μm，并且证实了本发明的化合物通过抑制yap-tead结合而抑制了大肠癌细胞系ht29细胞(cell)的细胞增殖。
<实验例3>利用aom/dss原位同源小鼠模型(orthotopicsyngenicmousemodel)的抗癌活性评价实验
为了在大肠中测量存在免疫状态下的抗癌作用，使用先前已知的aom/dss模型检测了抗癌活性(j.vis.exp.(67),e410010.3791/4100,细胞死亡与疾病(celldeath&dis).2018,9,153.)。
使b6小鼠(mouse)在动物室内适应1周，然后以10mg/kg的基准在腹腔内注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane，aom)注射剂。一周后，供给2.5％葡聚糖硫酸钠(dextransulfatesodium，dss)水溶液，共供给一周后，在2周时间内通过用新鲜水进行替换供水
图1中示出了观察根据本发明化合物的给药的肿瘤大小和数目的结果，由此确认了，对于肿瘤尺寸的增加程度而言，与不给药的情况相比，给予本发明化合物时在大小和数量上显著降低。另外，上述实验期间所有个体均观察到正常的体重增加，并且实验后的尸检结果未在各组织和器官中观察到特殊情况。
另外，为了确认本发明化合物的潜在毒性，在整个药物处理过程中测量了体重，结果示于图2中。与未用dss处理的组相比，仅用dss处理的组的体重降低，但是未观察到通过给予本发明的化合物而引起的额外的体重减轻。
另外，进行了facs分析，以确认在癌症组织的免疫抑制中起重要作用的treg细胞的比例。方法如下，切除肠组织中的癌组织，使用胶原酶(collagenase)将其制成单个细胞(singlecell)，然后对cd4、fop3标记进行抗体染色后，进行facs分析，结果如图3所示。
已知在肿瘤微环境(tumormicroenvironment)中的免疫抑制中起重要作用的treg细胞在aom/dss诱导的大肠癌组织中显著增加。然而，确认了在腹腔内给药3周时间的本发明的化合物17的组中的treg细胞减少。因此，可知本发明的化合物在大肠癌癌变过程中通过减少由treg的过表达引起的免疫抑制来增加免疫抗癌活性。
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