功能化的孔板、其制备和使用方法与流程

文档序号:25541886发布日期:2021-06-18 20:38阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种孔板,所述孔板包含表面,所述表面具有第一区域,所述第一区域是呈递反应性部分的共价功能化的区域或呈递活化部分的共价功能化的区域,其中所述反应性部分为叠氮基部分、生物素部分或链霉亲和素部分,且所述活化部分是淋巴细胞活化部分。

2.根据权利要求1所述的孔板,其中所述第一区域的面积为0.5mm2至50mm2

3.根据权利要求1所述的孔板,其中所述第一区域的尺寸为0.5mm至4.0mm。

4.根据权利要求1所述的孔板,其中所述第一区域是大致圆形的,并且具有0.5mm至4.0mm的直径。

5.根据权利要求1所述的孔板,其中所述孔板的表面还包括第二区域,所述第二区域是包含表面封闭配体的共价修饰的区域,其中所述第二区域围绕所述第一区域。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的孔板,其中所述孔板的表面包含玻璃或聚苯乙烯。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的孔板,其中所述孔板的表面包含聚丙烯、聚碳酸酯、聚乙烯、环烯烃共聚物或三聚氰胺。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的孔板,其中所述第一区域的各个反应性部分或活化部分的密度为至少50/um2

9.根据权利要求1至5中任一项所述的孔板,其中所述第一区域包含经由连接基共价连接至表面的各个反应性部分或活化部分,所述连接基具有5至20个主链原子、10至40个主链原子或15至50个主链原子,所述主链原子选自碳、硅、氮和氧。

10.根据权利要求1至5中任一项所述的孔板,其中所述反应性部分是链霉亲和素,并且链霉亲和素官能团共价附接到所述孔板的表面的第一区域。

11.根据权利要求1至5中任一项所述的孔板,其中所述反应性部分是链霉亲和素,并且链霉亲和素官能团非共价附接到生物素部分,该生物素部分自身共价附接到所述孔板的表面的第一区域。

12.根据权利要求1至5中任一项所述的孔板,其中所述第一区域是呈递活化部分的共价功能化的区域,其包含多个特异性结合的主活化分子配体和多个特异性结合的共活化分子配体。

13.根据权利要求12所述的孔板,其中所述表面的第一区域上的所述主活化分子配体与所述共活化分子配体的比率为1:5至2:1或1:2至1:1。

14.根据权利要求12所述的孔板,其中所述多个特异性结合的主活化分子配体中的每个配体包含被配置为与t细胞的t细胞受体(tcr)结合的主要组织相容性复合体(mhc)分子。

15.根据权利要求14所述的孔板,其中所述mhc分子包含i类mhc蛋白质序列和β微球蛋白蛋白质序列。

16.根据权利要求14所述的孔板,其中所述多个特异性结合的主活化分子配体中的每个配体包含还包括抗原肽的mhc分子。

17.根据权利要求16所述的孔板,其中所述抗原肽是肿瘤相关的抗原、病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原或原生动物抗原。

18.根据权利要求17所述的孔板,其中所述抗原肽是肿瘤相关的抗原,并且任选地,其中所述肿瘤相关的抗原是slc45a2、tcl1、vcx3a、mart1或nyeso1。

19.根据权利要求14所述的孔板,其中所述mhc分子通过c末端连接而与呈递活化部分的共价功能化的区域连接。

20.根据权利要求12所述的孔板,其中所述多个特异性结合的共活化分子配体中的每个配体包含t细胞受体(tcr)共活化分子或辅助tcr活化分子。

21.根据权利要求20所述的孔板,其中所述多个特异性结合的共活化分子配体中的tcr共活化分子与辅助tcr活化分子的比率为3:1至1:3。

22.根据权利要求20所述的孔板,其中所述tcr共活化分子包含cd28结合蛋白或其保留与cd28的结合能力的片段,并且任选地,其中cd28结合蛋白或其片段还包括位点特异性c末端生物素部分。

23.根据权利要求20所述的孔板,其中所述tcr共活化分子包含cd80分子或其片段,其中所述片段保留与cd28的结合活性。

24.根据权利要求20所述的孔板,其中所述tcr共活化分子包含抗cd28抗体或其片段,其中所述片段保留与cd28的结合活性。

25.根据权利要求20所述的孔板,其中所述辅助tcr活化分子包含cd2结合蛋白或其保留与cd2的结合活性的片段,并且任选地,其中所述cd2结合蛋白或其片段还包括位点特异性c末端生物素部分。

26.根据权利要求20所述的孔板,其中所述辅助tcr活化分子包括cd58分子或其片段,其中所述片段保留与cd2的结合活性。

27.根据权利要求20所述的孔板,其中所述辅助tcr活化分子包括抗cd2抗体或其片段,其中所述片段保留与cd2的结合活性。

28.根据权利要求12所述的孔板,其中所述多个特异性结合的主活化分子配体和所述多个特异性结合的共活化分子配体与所述孔板的呈递链霉亲和素的第一区域的链霉亲和素官能团特异性结合。

29.根据权利要求12所述的孔板,其中所述多个特异性结合的主活化分子配体在所述第一区域中的密度为至少1×102个分子/平方微米,并且任选地,在所述第一区域中的密度为1×102至1×105个分子/平方微米。

30.根据权利要求12所述的孔板,其中所述多个特异性结合的共活化分子配体在第一区域中的密度为至少1×102个分子/平方微米,并且任选地,在第一区域中的密度为1×103至1×105个分子/平方微米。

31.一种孔板,其中所述孔板的一个或多个孔中的每一个包含根据权利要求1至5中任一项所述的孔板的表面及其第一区域。

32.根据权利要求31所述的孔板,其中所述一个或多个孔中的每一个的第一区域位于相应的一个或多个孔的底部表面上。

33.根据权利要求32所述的孔板,其中每个第一区域的面积小于相应的一个或多个孔的底部表面的面积的约25%。

34.一种活化t淋巴细胞(t细胞)的方法,包括:

使多个t细胞与孔板表面的呈递抗原的共价功能化的区域接触,其中所述呈递抗原的共价功能化的区域包含:多个主活化分子配体,每个主活化分子配体包括被配置为与t细胞的t细胞受体(tcr)结合的主要的组织相容性(mhc)分子,其中所述多个主活化分子配体中的每一个均与所述表面连接;和多个共活化分子配体,每个共活化分子配体包括t细胞受体(tcr)共活化分子或辅助tcr活化分子,其中每个共活化分子配体均与所述表面连接;以及培养与所述表面的呈递抗原的共价功能化的区域接触的多个t细胞,从而将该多个t细胞的至少一部分转化为活化的t细胞。

35.根据权利要求34所述的方法,其中所述t细胞包含cd8+t细胞。

36.根据权利要求34所述的方法,其中所述呈递抗原的共价功能化的区域是根据权利要求12至30中任一项所述的孔板的表面的第一区域。

37.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述多个共活化分子配体包含tcr共活化分子和辅助tcr活化分子。

38.根据权利要求37所述的方法,其中所述多个共活化分子配体中的tcr共活化分子与辅助tcr活化分子的比率为3:1至1:3。

39.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述多个mhc分子中的每个分子包含i类mhc蛋白质序列、β微球蛋白蛋白质序列和抗原肽。

40.根据权利要求39所述的方法,其中所述抗原肽是肿瘤相关的抗原、病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原或原生动物抗原。

41.根据权利要求40所述的方法,其中所述抗原肽是肿瘤相关的抗原,并且任选地,其中所述肿瘤相关的抗原是slc45a2、tcl1、vcx3a、mart1或nyeso1。

42.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述t细胞受体(tcr)共活化分子包括cd28结合蛋白或其保留与cd28的结合能力的片段。

43.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述t细胞受体(tcr)共活化分子包括cd80分子或其片段,其中所述片段保留与cd28的结合活性;或者其中t细胞受体(tcr)共活化分子包括抗cd28抗体或其片段,其中所述片段保留与cd28的结合活性。

44.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述辅助tcr活化分子包括cd2结合蛋白或其保留与cd2的结合能力的片段。

45.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述辅助tcr活化分子包括cd58分子或其片段,其中所述片段保留与cd2的结合活性;或者其中辅助tcr活化分子包括抗cd2抗体或其片段,其中所述片段保留与cd2的结合活性。

46.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述多个特异性结合的主活化分子配体在所述表面的呈递抗原的共价功能化的区域中的密度为至少1×102个分子/平方微米,或者任选地,在所述表面的呈递抗原的共价功能化的区域中的密度为1×102到1×105个分子/平方微米。

47.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述多个特异性结合的共活化分子配体在所述表面的呈递抗原的共价功能化的区域中的密度为至少1×102个分子/平方微米,或者任选地,在所述表面的呈递抗原的共价功能化的区域中的密度为1×103到1×105个分子/平方微米。

48.根据权利要求34或35所述的方法,其中在所述表面的呈递抗原的共价功能化的区域中,所述主活化分子配体与所述共活化分子配体的比率为1:5至2:1,或者任选地为1:2至1:1。

49.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述多个共活化分子配体中的tcr共活化分子与辅助tcr活化分子的比率为3:1至1:3。

50.根据权利要求34或35所述的方法,其还包括使所述多个t细胞与多个刺激粘附的分子配体接触,并且任选地,其中所述多个刺激粘附的分子配体包括icam分子。

51.根据权利要求34或35所述的方法,其还包括使所述多个t细胞与多个生长刺激性分子配体接触。

52.根据权利要求72所述的方法,其中每个所述生长刺激性分子配体包括生长因子受体配体。

53.根据权利要求73所述的方法,其中所述生长因子受体配体包括il-21或其片段。

54.根据权利要求51所述的方法,其中在至少一天的第一培养期之后,进行与所述多种生长刺激性分子配体的接触。

55.根据权利要求34或35所述的方法,其中与呈递抗原的合成表面接触的培养进行约四天至约七天的时间。

56.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述活化的t细胞是cd45ro+和/或cd28阳性。

57.根据权利要求34或35所述的方法,其中所述呈递抗原的功能化的区域的面积小于所述孔板的孔的底部表面的面积的约25%。

58.一种活化淋巴细胞的方法,包括:

使多个淋巴细胞与孔板的表面上的呈递活化部分的共价功能化的区域接触,其中所述呈递活化部分的共价功能化的区域包含与所述表面连接的多个主活化分子配体;和与所述表面连接的多个共活化分子配体;以及培养所述多个淋巴细胞,从而将所述多个淋巴细胞的至少一部分转化为活化的淋巴细胞。

59.根据权利要求58所述的方法,其中所述淋巴细胞包含b细胞、t细胞或nk细胞。

60.根据权利要求58或59所述的方法,其中所述呈递活化部分的共价功能化的区域是根据权利要求1至13中任一项所述的孔板的表面的第一区域。

61.根据权利要求58或59所述的方法,其中所述呈递活化部分的功能化的区域的面积小于所述孔板的孔的底部表面的面积的25%。

62.一种用于制备孔板的试剂盒,所述孔板包含具有呈递活化部分的共价功能化的区域的表面,所述试剂盒包括:

包含表面的孔板,所述表面包含呈递反应性部分的共价功能化的区域,其中所述反应性部分为叠氮基部分、生物素部分或链霉亲和素部分;和

活化剂;和

任选地,表面功能化试剂。

63.根据权利要求62所述的试剂盒,其中所述试剂盒包含所述表面功能化试剂,并且其中所述表面功能化试剂是被配置为与所述反应性部分反应的含有生物素的试剂或含有链霉亲和素的试剂。

64.根据权利要求62或63所述的试剂盒,其中所述活化试剂包含主活化试剂,所述主活化试剂包含多个主要组织相容性复合体(mhc)分子或多个cd3结合分子,所述主要组织相容性复合体(mhc)分子被配置为与t细胞的t细胞受体结合,并且被配置为与链霉亲和素的结合位点结合。

65.根据权利要求64所述的试剂盒,其还包括包含多个共活化分子的共活化试剂,每个共活化分子被配置为与链霉亲和素的结合位点结合,并且其中每个所述共活化分子包含cd2结合分子或cd28结合分子。


技术总结
在生物科学和相关领域中,修饰与生物材料(例如生物分子和生物微物体)接触的设备、装置和材料的表面可能是有用的。本文描述了表面修饰和表面功能化试剂,其制备以及修饰孔板内的孔表面以便以可控和可再现的方式活化淋巴细胞(包括但不限于T淋巴细胞)的方法。

技术研发人员:P·J·比米勒;A·J·马斯楚安尼;R·D·小罗威;Y·布朗韦茨基
受保护的技术使用者:伯克利之光生命科技公司
技术研发日:2019.09.20
技术公布日:2021.06.18
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1