用于犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物组、试剂盒及方法与流程

文档序号:20875226发布日期:2020-05-26 16:24阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一组用于犬细粒棘球绦虫的lamp检测引物组,其包括:与犬细粒棘球绦虫的cox2基因序列结合的外侧引物对f3和b3,及与犬细粒棘球绦虫的cox2基因序列结合的内侧引物对fip和bip,其特征在于:所述f3和b3的核苷酸序列如seqidno.1和seqidno.2所示,所述fip和bip的核苷酸序列如seqidno.3和seqidno.4所示。

2.如权利要求1所述的用于犬细粒棘球绦虫的lamp检测引物在制备检测犬细粒棘球绦虫的lamp试剂盒或检测试剂中的应用。

3.含如权利要求1所述用于犬细粒棘球绦虫的lamp检测引物的检测试剂盒。

4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,其还包括:环介导等温扩增缓冲液、阳性对照、阴性对照和/或显色液。

5.如权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述环介导等温扩增缓冲液为包括有tris-hcl、kcl、(nh4)2so4、tween-20、mgso4、甜菜碱、脱氧核苷酸、bstdna聚合酶的水溶液;

所述显色液包括sybrgreeni和羟甲基萘酚蓝。

6.一种采用如权利要求1所述引物组的快速检测犬细粒棘球绦虫的lamp检测方法,是用所述的犬细粒棘球绦虫的lamp检测引物组对待测样品dna进行环介导等温扩增反应,检测扩增产物;所述环介导等温扩增反应的条件为:63℃、30~60分钟。

7.如权利要求6所述的lamp检测方法,其特征在于,其包括如下步骤:

s1、取犬粪便待检样本,提取dna;

s2、用所述的犬细粒棘球绦虫的lamp检测引物组对待测样品dna进行环介导等温扩增反应;

s3、结果判定:如果装有待检测样品的反应管仍为棕黄色无荧光液体,则说明待检样品中犬细粒棘球绦虫检测结果为阴性;

如果装有待检测样品的反应管有亮绿色可见荧光,则说明样品中犬细粒棘球绦虫检测结果为阳性。

8.如权利要求7所述的lamp检测方法,其特征在于,在步骤s2中,同时设置以含犬细粒棘球绦虫的dna为阳性对照和以水进行检测的阴性对照。

9.如权利要求7所述的lamp检测方法,其特征在于,在步骤s2中,所述环介导的等温扩增的扩增体系为在有23μl的lamp反应液的反应管中加入2μl所述dna;所述23μl的lamp反应液,包括有tris-hcl0.5μmol、kcl0.25μmol、(nh4)2so40.25μmol、tween-200.025μl、mgso40.2-20μmol、甜菜碱20μmol、4种脱氧核苷酸各0.035μmol、bstdna聚合酶16u,所述内侧引物对fip和bip各0.04-0.06μmol,所述外侧引物对f3和b3各0.004-0.008μmol。

10.如权利要求9所述的lamp检测方法,其特征在于,所述23μl的lamp反应液包括:tris-hcl0.5μmol、kcl0.25μmol、(nh4)2so40.25μmol、tween-200.025μl、mgso40.2μmol、甜菜碱20μmol、4种脱氧核苷酸各0.035μmol、bstdna聚合酶16u,所述内侧引物对fip和bip各0.04μmol,所述外侧引物对f3和b3各0.004μmol。


技术总结
本发明提供了用于犬细粒棘球绦虫的LAMP检测引物组、试剂盒及方法。该引物组包括:与犬细粒棘球绦虫的COX2基因序列结合的外侧引物对F3和B3,及与犬细粒棘球绦虫的COX2基因序列结合的内侧引物对FIP和BIP,用该引物组进行检测时,其检测方法具有灵敏度高、效率高、反应时间短、特异性高、操作简便、结果判定简单等优点,且广泛适用于基层。

技术研发人员:郑雪莹;邓柏林;吴文学;陈会玲;闫新博;宋彦军;张启龙;韦海涛;刘海莹
受保护的技术使用者:北京市动物疫病预防控制中心
技术研发日:2020.02.27
技术公布日:2020.05.26
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