1.一种用于检测甘薯腐烂茎线虫的rpa引物,其特征在于:所述rpa引物的序列如下:
上游引物dd-rpaf3:5’-ctgtctctttggcctagcacgtgtttcttgtg-3’;
下游引物:dd-rpar3:5’-gttagtttcttttcctccgcttactgatatgc-3’。
2.一种用于检测甘薯腐烂茎线虫的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中采用权利要求1中的rpa引物,具体序列如下:
上游引物dd-rpaf3:5’-ctgtctctttggcctagcacgtgtttcttgtg-3’;
下游引物dd-rpar3:5’-gttagtttcttttcctccgcttactgatatgc-3’。
3.根据权利要求2所述的一种用于检测甘薯腐烂茎线虫的rpa试剂盒,其特征在于:所述试剂盒的反应体系的组成如下:
反应缓冲液29.5μl,浓度均为10μm的上游引物dd-rpaf3和下游引物dd-rpar3各2.4μl,待测dna模板1μl,rpa冻干酶粉5mg,280mm的醋酸镁溶液2.5μl,ddh2o12.2μl。
4.一种用于检测甘薯腐烂茎线虫的检测方法,其特征在于:
包括以下步骤:
步骤(1)、提取待测样品中的dna;
步骤(2)、以步骤(1)提取的dna作为待检测dna模板,采用权利要求1所述的rpa引物进行rpa扩增反应,制得rpa扩增产物;
步骤(3)、分析rpa扩增产物,取出rpa扩增产物5μl,用10g/l琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果,在230bp处出现扩增条带的为甘薯腐烂茎线虫,反之则否。
5.根据权利要求4所述的一种用于甘薯腐烂茎线虫的检测方法,其特征在于:步骤(2)中rpa扩增反应所用的体系如下:
反应缓冲液29.5μl,浓度均为10μm的上游引物dd-rpaf3和下游引物dd-rpar3各2.4μl,待测dna模板1μl,rpa冻干酶粉5mg,280mm的醋酸镁溶液2.5μl,ddh2o12.2μl。
6.根据权利要求4所述的一种用于甘薯腐烂茎线虫的检测方法,其特征在于:rpa扩增反应的条件如下:38℃反应30分钟,随后冰上终止反应。
7.根据权利要求4-6任意一项所述的一种用于甘薯腐烂茎线虫的检测方法,其特征在于:步骤(3)中分析rpa扩增产物的方法为:利用琼脂糖凝胶电泳技术分析。